This work was supported by SNF grants PPOOA-_119204 and PPOOP3_144918 to S.W.R. We thank E. Palmer and B.T.H. Hausmann for mice and technical expertise.

Dans cette publication de la vidéo et du protocole, toutes les procédures d&#39;animaux ont été effectuées conformément au protocole de l&#39;animal approuvé par l&#39;autorité cantonale de Bâle-Ville, Suisse. Effectuer toutes les procédures dans des conditions stériles là où c&#39;est possible. 1. Préparation de chirurgie <ol><li> Autoclave tous les instruments chirurgicaux et gaze avant de l&#39;utiliser. </li><li> Chauffer le coussin chaud et organiser instruments chirurgicaux sur la table (Table des Matières / Méthodes). </li><li> Ouvrez les bandages bande de doigt. Appliquez de la vaseline sur le pavé de la plaie avec un coton-tige (assurez-vous que la gaze est entièrement recouvert). </li><li> Peser les souris et administrer l&#39;analgésie buprénorphine 0,05 mg / kg de poids corporel. Remarque: ce sera une analgésie immédiatement après la transplantation. </li></ol> 2. Préparation de la Queue-peau pour la transplantation <ol><li> Euthanasier souris donneuses (par exemple, IA BM12) par asphyxie au CO2 et disinfect les queues avec une solution de désinfection avant l&#39;excision. </li><li> Placez la queue avec la bande noire sur un tableau en plastique propre et couper longitudinalement tout au long de la ligne médiane, une incision superficielle impliquant que la couche de la peau. </li><li> Retirez la peau de la queue en utilisant une pince de préhension. </li><li> Mettez la queue-peau dans une boîte de culture de 10 cm de cellule remplie avec 10 ml de HBSS. </li></ol> 3. Procédure chirurgicale <ol><li> Anesthésier les souris receveuses (par exemple, des souris C57BL / 6) par l&#39;inhalation d&#39;une solution d&#39;isofluorane à 3% dans une boîte à induction transparent. Remarque: Il faut 3-5 minutes pour la souris pour atteindre plan chirurgical anesthésie. Utilisez vétérinaire pommade sur les yeux pour prévenir la sécheresse tandis que sous anesthésie. </li><li> Placez la souris sur le tapis tiède et appliquer 1,5% isofluorane par un masque et des ânes bouche chaque réflexe animal par orteil pincement. </li><li> Raser le site dorsale des souris receveuses (par exemple, C57BL / 6) et enlever les poils de contamination en utilisant un sw de gaze secab. </li><li> Désinfecter rasé le site de transplantation avec une solution aseptique. </li><li> Pincer la peau avec des pinces dans le site milieu / droite du dos et utiliser des ciseaux courbes à faire une incision ronde d&#39;environ 1 x 0,6 cm. </li><li> En cas de saignement, puis nettoyer la plaie avec un coton-tige stérile. </li><li> Évaluer la taille de l&#39;incision et couper une greffe de la taille estimée de la queue-peau à l&#39;aide du scalpel. </li><li> Coupez les coins pour contourner la transplantation. </li><li> Chargez la greffe sur le scalpel, l&#39;excès de HBSS sec sur un coton-tige stérile et le placer dans le lit de la greffe de la souris receveuse. </li><li> Éviter le chevauchement des donateurs et de la peau de l&#39;hôte et appliquer l&#39;adhésif de tissu sur la zone de contact exclusivement. </li><li> Appliquer un enduit sans plis autour de la taille de la souris. </li><li> Appliquer un bandage non élastique adhésif pour fixer le plâtre à la souris (3 mm décalé). </li><li> Inciser avec les ciseaux environ 3 mm dans le site ventrale supérieure du bandage. Note: Ceci est pour éviter trapping des dents de la souris lors de la phase de récupération. </li><li> Retirer l&#39;anesthésie-bouche-masque et garder les souris transplantées sur le coussin chauffant jusqu&#39;à éveillé. </li><li> Retour souris transplantées dans leurs cages quand il est complètement rétabli et évaluer leur mobilité afin de s&#39;assurer que le bandage n&#39;est pas trop serré. </li><li> Stériliser l&#39;ensemble des instruments chirurgicaux avec l&#39;éthanol 70% avant de procéder à une intervention chirurgicale suivante. </li></ol> 4. Soins post-opératoires <ol><li> Ajouter le sirop contenant du paracétamol à l&#39;eau de boisson (4 mg / ml) et de l&#39;administrer pendant 7 jours. </li><li> Souris Retour à la salle de l&#39;animal une fois qu&#39;il a récupéré. </li><li> Suivre de près les souris des signes cliniques, y compris la dépression ou d&#39;autres changements de comportement (alimentaires ou immobilité), apparence anormale (manque de toilettage) ou la posture (horripilation ou posture recroquevillée) pour le moment le pansement est en place (1 semaine). </li></ol> 5. Bandage Removal (6-7 jours post-transplantation) <ol><li> Anesthetize les souris par inhalation d&#39;une solution isofluorane à 3% dans un caisson d&#39;aspiration transparente (voir ci-dessus). </li><li> Couper bandage en plâtre avec des ciseaux de l&#39;artère et retirez les. Remarque: éviter l&#39;étirement du site de transplantation. </li><li> Surveillance de la souris transplantées des signes cliniques (voir 4.3) et le score de rejet des greffes de peau (tableau 1). Remarque: Le système de pointage de greffe prend avantage des différentes textures de cheveux sur la queue-peau par rapport à la dorsale peau. L&#39;aspect de la greffe et le rejet est catégorisée en trois niveaux. Peau allogénique (CMH II correspondent pas, par exemple, IA BM12) greffes de souris C57BL / 6 immunocompétents sont généralement rejetés dans 12-15 jours post-greffe (propres données et 15-20). </li></ol>

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S., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+basis+of+skin+allograft+rejection:+an+in+vivo+model+of+immune-mediated+tissue+destruction.">Cellular basis of skin allograft rejection: an in vivo model of immune-mediated tissue destruction.</a> Annual Review of Immunology. 10, 333-358 (1992).</li><li>Kingsley, C. I., Nadig, S. N., Wood, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+tolerance:+lessons+from+experimental+rodent+models.">Transplantation tolerance: lessons from experimental rodent models.</a> Transplant international : official journal of the European Society for Organ Transplantation. 20 (10), 828-841 (2007).</li><li>Larsen, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+acceptance+of+skin+and+cardiac+allografts+after+blocking+CD40+and+CD28+pathways.">Long-term acceptance of skin and cardiac allografts after blocking CD40 and CD28 pathways.</a> Nature. 381 (6581), 434-438 (1996).</li><li>Tomura, M., Nakatani, I., Murachi, M., Tai, X. G., Toyo-oka, K., Fujiwara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+allograft+responses+induced+by+interleukin-6,+which+selectively+modulates+interferon-gamma+but+not+interleukin-2+production.">Suppression of allograft responses induced by interleukin-6, which selectively modulates interferon-gamma but not interleukin-2 production.</a> Transplantation. 64 (5), 757-763 (1997).</li><li>Ring, G. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-gamma+is+necessary+for+initiating+the+acute+rejection+of+major+histocompatibility+complex+class+II-disparate+skin+allografts.">Interferon-gamma is necessary for initiating the acute rejection of major histocompatibility complex class II-disparate skin allografts.</a> Transplantation. 67 (10), 1362-1365 (1999).</li><li>Rosenberg, A. S., Finbloom, D. S., Maniero, T. G., Vander Meide, P. H., Singer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+prolongation+of+MHC+class+II+disparate+skin+allografts+by+in+vivo+administration+of+anti-IFN-gamma+monoclonal+antibody.">Specific prolongation of MHC class II disparate skin allografts by in vivo administration of anti-IFN-gamma monoclonal antibody.</a> Journal of immunology. 144 (12), 4648-4650 (1950).</li><li>Goes, N., Sims, T., Urmson, J., Vincent, D., Ramassar, V., Halloran, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disturbed+MHC+regulation+in+the+IFN-gamma+knockout+mouse.+Evidence+for+three+states+of+MHC+expression+with+distinct+roles+for+IFN-gamma.">Disturbed MHC regulation in the IFN-gamma knockout mouse. Evidence for three states of MHC expression with distinct roles for IFN-gamma.</a> Journal of immunology. 155 (10), 4559-4566 (1995).</li><li>Surquin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-4+deficiency+prevents+eosinophilic+rejection+and+uncovers+a+role+for+neutrophils+in+the+rejection+of+MHC+class+II+disparate+skin+grafts.">IL-4 deficiency prevents eosinophilic rejection and uncovers a role for neutrophils in the rejection of MHC class II disparate skin grafts.</a> Transplantation. 80 (10), 1485-1492 (2005).</li><li>Gaylo, A. E., Laux, K. S., Batzel, E. J., Berg, M. E., Field, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+rejection+of+MHC+class+II-disparate+skin+allografts+in+mice+treated+with+farnesyltransferase+inhibitors.">Delayed rejection of MHC class II-disparate skin allografts in mice treated with farnesyltransferase inhibitors.</a> Transplant immunology. 20 (3), 163-170 (2009).</li><li>Bose, A., Inoue, Y., Kokko, K. E., Lakkis, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+perforin+down-regulates+CD4+and+CD8+T+cell-mediated+immune+responses+to+a+transplanted+organ.">Cutting edge: perforin down-regulates CD4 and CD8 T cell-mediated immune responses to a transplanted organ.</a> Journal of immunology. 170 (4), 1611-1614 (2003).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

la transplantation de la peau est une méthode largement utilisée pour l&#39;étude de rejet et de la tolérance des lymphocytes T dépendant. Comme le modèle de transplantation de la peau a été établi, plusieurs adaptations et modifications ont été appliquées. Dans la procédure décrite, IA BM12 transplantation queue peau est réalisée en utilisant des gaz anesthésiques (de isofluorane). L&#39;utilisation de l&#39;anesthésie au gaz diminue le temps d&#39;exécution et la récupération des souris...

La transplantation d&#39;organes solides tels que la peau, le cœur et les reins est maintenant une procédure standard dans la pratique médicale dans le monde entier 1. Organes transplantés avec succès peuvent être rejetés par l&#39;activation du système immunitaire receveur, qui reconnaît les antigènes majeurs d&#39;histocompatibilité du donneur. Patients transplantés donc besoin d&#39;un traitement avec des médicaments immunosuppresseurs 2. Allogreffe de peau chez la souris a été créé par Medawar et ses collègues en 1955 et a été utile pour identifier les molécules ciblées plus tard décrit comme complexe majeur d&#39;histocompatibilité (CMH) de classe I et II. Depuis lors, le modèle de greffe de peau a été continuellement modifié et adapté pour étudier le rôle des sous-ensembles de lymphocytes T et de la pertinence de l&#39;intervention chimique et biologique dans la suppression du rejet de greffe 2-4. La peau de l&#39;oreille et du tronc sont plus difficiles à préparer et sont plus sensibles à l&#39;hypoxie et la nécrose de la peau queue 5; cependant,la procédure de transplantation est similaire. En outre, le suivi des greffes de peau de la queue est facile en raison de la texture des cheveux caractéristique de la peau. Cet article prévoit une procédure détaillée pour le CMH de classe II inadéquation transplantation queue peau qui permet l&#39;étude des différents aspects de CD4 + T à médiation cellulaire rejet d&#39;allogreffe et de tolérance chez les souris. La mutation à trois points naturel dans la molécule du CMH de classe II I-Ab (appelé IA BM12) 6-9 est suffisante pour induire le rejet des allogreffes de la peau chez des souris C57BL / 6 souris 8. La molécule d&#39;BM12 IA active les cellules T CD4 + avec divers récepteurs cellulaires αβ-T (TCR) des chaînes à partir de souris C57BL / 6, dont les lymphocytes T Vα2Vβ8-TCR spécifiques ont été identifiées, afin de générer une souris TCR transgéniques 10. Le transfert adoptif de lymphocytes T Vα2Vβ8-TcR-spécifiques a été utilisée pour établir un modèle de rejet dans C57B immunodéficientesL / 6 Rag2 - / - souris transplantées avec la peau IA BM12. Les différences génétiques entre donneur et receveur impact sur le résultat de l&#39;acceptation de la greffe et le rejet. Il existe différents types de greffes: autogreffes sont des greffes du destinataire individuel lui-même; syngrafts et allogreffes sont des greffes de personnes génétiquement identiques et sans lien génétique respectivement. Acceptation de différentes greffes d&#39;organes allogéniques a été démontrée par intervention chimique et biologique chez les patients et les modèles de souris 11,3,4. Dans une approche de base, anticorps anti-CD3-traité souris C57BL / 6 a montré une survie prolongée des IA BM12 queue-peau (données non publiées). L&#39;épuisement des CD4 + et T CD8 + avant la transplantation dans des souris receveuses abouti à l&#39;acceptation de CMH de classe I et II greffes incompatibles (Rev. en 12). Fait intéressant, le rejet des greffes de peau dépend de la présence de cellules CD4 + </sup&gt; Cellules T (Rev. en 12). Dans ce modèle, le ciblage des interactions spécifiques entre les différentes cellules du système immunitaire en bloquant les molécules de co-stimulation avec des anticorps ou avec suppression des cellules T régulatrices pourrait induire une tolérance (données non publiées). En effet, le blocage à la fois CD40 et CD28 conduit à long terme allogreffe de tolérance cutanée 13,14. Transplantation queue-peau est facile à réaliser et facile à contrôler par rapport à la transplantation d&#39;autres organes. En outre, les greffes de peau de la queue sont faciles à préparer et sont moins sensibles à l&#39;ischémie que les autres tissus de la peau. Contrairement aux anesthésiques injectés, l&#39;utilisation de gaz anesthésique (de isofluorane) lors de la transplantation réduit à la fois la procédure et le temps de récupération de destinataire. Curling de la greffe de peau de la queue, ce qui peut conduire à une cicatrisation incomplète, le rejet de greffe, est empêchée par l&#39;application de colle pour tissus. En outre, le modèle de transplantation queue peau IA BM12 active exclusivement CD4 <sup&gt; + Cellules T dans les deux immunocompétents et des souris immunodéficientes (de la même origine génétique) de faciliter l&#39;interprétation des résultats. Ce protocole décrit un modèle de souris fiables, reproductibles et facilement contrôlé qui permet une intervention chimique et biologique. Le modèle est conçu pour enquêter sur le rejet et l&#39;induction de tolérance des greffes de peau queue.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="831">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:183px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:231px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine Standard solution</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cotton swab</td>
			<td style="width:183px;">Carl Roth GmbH</td>
			<td style="width:119px;">31025060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Dafalgan , UPSA</td>
			<td>Bristol Myers Squibb SA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hansaplast Finger Strips</td>
			<td>Beierdorf AG</td>
			<td style="width:119px;">REF.76861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Histoacryl Tissue adhesive</td>
			<td style="width:183px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;">REF.1050052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leukotape classic , 2cm x 10 m</td>
			<td>BSN Medical SAS</td>
			<td>REF.02204-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS, Phosphate-Buffered Saline, pH 7.4</td>
			<td style="width:183px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">10010015</td>
			<td>GIBCO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sterile gauze, 5 x 5cm, 8ply</td>
			<td>MaiMed GmbH</td>
			<td>21010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical instruments&#160;</td>
			<td style="width:183px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11003-12</td>
			<td>Narrow pattern forceps,&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;">14095-11</td>
			<td>Fine iris scissor curved,</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;">14094-11</td>
			<td>Fine iris scissor&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;">14010-15</td>
			<td>Mayo scissors,</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;">14080-11</td>
			<td>Artery scissors ball tip 11.5 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:119px;">11021-14</td>
			<td>Tissue forceps</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Surgical Blade No.20</td>
			<td style="width:183px;">Swann-Morton LTD</td>
			<td style="width:119px;">3006</td>
			<td>Carbon Steel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Surgical blade Handles</td>
			<td style="width:183px;">Swann-Morton LTD</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe, 1ml</td>
			<td style="width:183px;">ARTSANA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>disposable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Temgesic , Buprenorphine</td>
			<td style="width:183px;">ESSEX Chemie AG</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Tissue Culture dishes 10 cm, 60.1 cm2</td>
			<td style="width:183px;">TPP</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Vaseline</td>
			<td style="width:183px;">Vifor SA</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:299px;">Warm pad</td>
			<td style="width:183px;">Solis</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Type 223</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

transplantation of tail skin to study allogeneic cd4 t cell responses in mice

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and host T cells, to easily monitor the graft, and to adapt the system in order to answer different immunological questions. Medawar and colleagues established allogeneic tail-skin transplantation in mice in 1955. Since then, the skin transplantation model has been continuously modified and adapted to answer specific questions. The use of tail-skin renders this model easy to score for graft rejection, requires neither extensive preparation nor deep anesthesia, is applicable to animals of all genetic background, discourages ischemic necrosis, and permits chemical and biological intervention. 
In general, both CD4+ and CD8+ allogeneic T cells are responsible for the rejection of allografts since they recognize mismatched major histocompatibility antigens from different mouse strains. Several models have been described for activating allogeneic T cells in skin-transplanted mice. The identification of major histocompatibility complex (MHC) class I and II molecules in different mouse strains including C57BL/6 mice was an important step toward understanding and studying T cell-mediated alloresponses. In the tail-skin transplantation model described here, a three-point mutation (I-Abm12) in the antigen-presenting groove of the MHC-class II (I-Ab) molecule is sufficient to induce strong allogeneic CD4+ T cell activation in C57BL/6 mice. Skin grafts from I-Abm12 mice on C57BL/6 mice are rejected within 12-15 days, while syngeneic grafts are accepted for up to 100 days. The absence of T cells (CD3-/- and Rag2-/- mice) allows skin graft acceptance up to 100 days, which can be overcome by transferring 2 x 104 wild type or transgenic T cells. Adoptively transferred T cells proliferate and produce IFN-&#947; in I-Abm12-transplanted Rag2-/- mice.

Dans une première approche C57BL / 6 ont été transplantés avec IA allogreffes BM12 et IA b syngrafts. Après élimination de bandage, greffes signes manifestes de la cicatrisation sans fermeture de la zone de contact en souris C57BL / 6 (Figure 1A). Après élimination de bandage, CD4 + T inflammation à médiation cellulaire a conduit à l&#39;apparition de zones nécrotiques (taches rouges) et le rejet des IA allogreffes BM12 dans souris C57BL / 6 dans l...

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Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Tail-skin transplantation is a powerful model for studying T cell-dependent rejection and tolerance induction during allogeneic immune responses in mice. The advantages of this protocol are minor invasive surgery, and ease of monitoring with no need to sacrifice the recipient mouse.

Transplantation de queue peau d&#39;étudier allogéniques CD4 réponses des cellules T chez la souris

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

12.2K vues.  University of Basel and University Hospital Basel. Tail-skin transplantation is a powerful model for studying T cell-dependent rejection and tolerance induction during allogeneic immune responses in mice. The advantages of this protocol are minor invasive surgery, and ease of monitoring with no need to sacrifice the recipient mouse.