Nous remercions Daniel Veit pour l&#39;assistance technique et Pedro Gouveia à Electricidade Em Po (electricidadeempo.net) pour personnaliser le logiciel de suivi de nos demandes. Nous remercions aussi Tom Retzke de soutien pendant le processus de tournage. Cette étude a été soutenue par la Société Max Planck.

La construction et les détails techniques de Flywalk ont été décrites ailleurs 26 (en cas de problèmes d&#39;établir cette mise en place, de plus amples informations peuvent être obtenues à partir de MK). Ici nous nous concentrons sur des instructions détaillées sur la manipulation du paradigme qui aidera à obtenir des résultats fiables. 1. Fly Manutention <ol><li> Arrière vole en bas de cultures moyennes de densité sur un milieu alimentaire en vertu d&#39;un 27 h 12: légères 12 h: régime sombre à 23-25 ​​° C et 70% d&#39;humidité relative. À cette fin, permettre 20-30 adultes nouvellement émergé vole à reproduire dans un grand flacon alimentaire pendant 1 semaine, puis jetez-mouches adultes et attendre progéniture à émerger. </li><li> Recueillir 30-40 nouvellement écloses (âge &lt;24 h) les mouches adultes et de leur âge sur la nouvelle dans un flacon contenant le milieu de la nourriture 27 pendant 3-5 jours. </li><li> Vingt-quatre heures avant le début de l&#39;expérience comportementale: Transférer la totalité 30-40 recueillis antérieurement 3-5 d vieille (voir 2.2) vole vers un nouveau vial contenant un bouchon en mousse de caoutchouc humide ou un mouchoir en papier humide à l&#39;aide d&#39;un aspirateur. REMARQUE: Ne pas anesthésier les mouches utilisant le CO 2. </li></ol> 2. Préparation de la configuration Flywalk <ol><li> Utilisez bouteilles de 250 ml que les humidificateurs. Remplissez humidificateurs avec 100 ml d&#39;eau distillée. </li><li> Préparer flacons d&#39;odeurs. <ol><li> Préparer 10 -3 500 ul des dilutions de l&#39;acétate d&#39;éthyle pur odeurs, le butyrate d&#39;éthyle, l&#39;acétate d&#39;isopentyle et de 2,3-butanedione dans le solvant de l&#39;huile minérale. </li><li> Fixez les deux clapets anti-retour de la balle par l&#39;odeur du flacon. Notez que l&#39;enregistrement vannes permettent une circulation d&#39;air unidirectionnelle seulement. Par conséquent, la connexion clapets anti-retour de telle sorte que l&#39;air puisse entrer dans le flacon d&#39;un côté et le laisser sur l&#39;autre côté. </li><li> Retirer le couvercle d&#39;un tube de réaction PCR de 200 pi. Pipeter 100 ul de chaque dilution des odeurs dans un tube de réaction séparé et placer les tubes dans des flacons d&#39;odeurs distinctes. Aussi préparer un flacon d&#39;odeur ne contenant que le solvant oi minéralel. </li><li> Bien sceller les flacons d&#39;odeurs en les fermant à l&#39;aide des bouchons en acier inoxydable et joints en caoutchouc. </li><li> Connecter les 5 flacons d&#39;odeurs (4 odeurs contenant et 1 contenant de l&#39;huile minérale) au système de livraison de l&#39;odeur. Assurez-vous de les connecter dans le sens d&#39;écoulement droite. Une mauvaise connexion ne sera pas seulement de compromettre l&#39;expérience prévue, mais il peut aussi contaminer le système de livraison. </li></ol></li><li> Vérifiez pour des fuites en scellant la sortie de la chambre de mélange du dispositif de relance. Assurez-vous que tous les débits d&#39;air avant que le dispositif de relance maintenant tomber progressivement à zéro. Sinon, vérifier les fuites qui peuvent maintenant être identifiées par le sifflement de l&#39;air sortant du système. </li><li> Soigneusement transférer 15 mouches individuelles aux 15 tubes de verre individuels en utilisant un aspirateur et des tubes de verre à proximité des deux côtés avec les adaptateurs correspondants. Remarque: Parce que le système doit être fermé hermétiquement pour des expériences réussies, veiller à ce que les adaptateurs intègrent des tubes de verre hermétiquementet notent que des tubes de verre peuvent se briser lors de cette étape. Prenez soin d&#39;éviter les blessures en portant des gants et des lunettes de protection. </li><li> Raccorder les tubes de verre à la configuration Flywalk et, à partir de maintenant, attendez au moins 15 min avant de commencer l&#39;expérience pour permettre mouches habituent au nouvel environnement. </li><li> Après la fixation des tubes de verre: vérifiez la lecture des compteurs de débit en aval numériques sur ordinateur 1 si les 16 débits d&#39;air après les tubes de verre ajouter à la circulation de l&#39;air dans le système. Jetez également un coup sur l&#39;ordinateur 1, si l&#39;humidité est entre 60% et 80%. </li><li> Conception protocole de relance contrôler la séquence et le calendrier des stimuli d&#39;odeurs présentées aux mouches. Pour obtenir les données décrites par exemple, présents 4 odeurs et le contrôle (de l&#39;huile minérale) isolés et tous ternaire possible et les mélanges quaternaires des odeurs simultanément pour 40 fois chacun. Définir la durée d&#39;impulsion de 500 ms à un intervalle de 90 secondes interstimulus et aléatoire séquence de relance. </li><li> Allumez le lisource de lutte (LED-cluster; λ = 630). Assurez-vous de fournir assez de lumière pour le suivi efficace sans augmenter la température à l&#39;intérieur des tubes de verre. </li><li> Mettre en place une région d&#39;intérêt du système de suivi de piste en faisant glisser une trame à travers la zone à surveiller de manière à ce que les 15 tubes de verre sont incluses et environ 5 mm des bords des tubes sont exclus. </li><li> Mettre en place 14 lignes de séparation parallèles entre les tubes individuels dans le système de suivi en changeant leurs positions Y dans le script correspondant à garder individu vole identifiable tout au long de l&#39;expérience. Assurez-vous de les positionner de telle sorte qu&#39;il y ait toujours un tube de verre entre deux de ces lignes de séparation, car une seule mouche sera suivie entre un ensemble de deux lignes. </li><li> Assurez-vous de définir les paramètres de l&#39;appareil photo de manière à ce que les mouches sont suivis de façon fiable à travers les tubes de verre. Si les mouches sont perdus sur les bords de la région d&#39;intérêt, augmenter la luminosité ou le gain de poursuite software. Eviter les vibrations mécaniques du système de suivi. Suivre aide de logiciels commerciaux conformément au protocole du fabricant. </li><li> Début de l&#39;expérience en lançant le protocole de relance. Enregistrez flies&#39; XY coordonnées à 20 fps (images par seconde) et connectez-vous en combinaison avec l&#39;état de la vanne d&#39;odeur dans des fichiers texte. </li></ol> Analyse des données 3. REMARQUE: Les étapes suivantes dans l&#39;analyse des données sont automatisées utilisant des routines écrites personnalisées programmées dans R. Parce que ces étapes sont essentielles pour obtenir des résultats significatifs de l&#39;analyse sera néanmoins présenté d&#39;une manière étape-par-étape. Les données brutes pour l&#39;analyse sont .csv fichiers contenant des informations sur l&#39;état synchronisé de la soupape d&#39;odeur, nombre d&#39;impulsions dans l&#39;expérience et la mouche x 15 positions en cm sur un axe des temps commun pour cycle de stimulation d&#39;une odeur. Le code personnalisé pour l&#39;analyse des données peut être fourni sur demande. <ol><li> Ouvrir fichier .csv, trouver le temps-point de ouverture de la soupape signifié par un chaESN dans la colonne représentant l&#39;état de la vanne. </li><li> Calculer la fonction linéaire de la position de l&#39;odeur de la forme f (t) = S * t + i où t est le temps dans le cycle de stimulation, s est la vitesse du vent (ici 20 cm / sec) et l&#39;interception i peut être calculée selon le temps point l&#39;odeur pénètre dans les tubes à la position 0 (ouverture de la vanne, plus de retard). </li><li> Trouver le point de moment où l&#39;odeur et voler position x croisent pour chaque volée et régler ce temps-points à 0. Remarque: De cette façon, les positions de mouches sont alignés à chaque individual&#39;s rencontre avec l&#39;odeur. </li><li> Exclure les mouches assis sur les bords mêmes de la région d&#39;intérêt. </li><li> Calculer la vitesse à partir de X-positions en divisant le déplacement le long de l&#39;axe x par l&#39;intervalle de temps (100 ms) et répéter la procédure pour chaque cycle de stimulation. </li><li> Pour obtenir vitesse-temps des cours comme le montre la figure 2E calculer la vitesse moyenne du temps bien sûr pour chaque volée et l&#39;odeur et de ceux l&#39;évolution temporelle moyenne pour une odeur donnée. </li><li> Pour obtenir déplacement net, comme indiqué dans la figure 3C calculer le déplacement net dans les 4 secondes après l&#39;impulsion de l&#39;odeur pour chaque événement de suivi et après le déplacement net moyen par volée et l&#39;odeur. </li></ol> Procédure de nettoyage 4. <ol><li> Nettoyer le verre Tubes <ol><li> Retirer les mouches et les adaptateurs de tubes de verre et profiter des tubes de verre dans un détergent. </li><li> Rincer tubes de verre sous l&#39;eau distillée en cours d&#39;exécution et les sécher avec de l&#39;air sous pression. </li><li> Des tubes de verre à la chaleur à 200 ° C pendant 8 h. </li></ol></li><li> Système de livraison de l&#39;odeur propre <ol><li> Retirer tous les flacons d&#39;odeur et les tubes de la chambre de mélange centrale. </li><li> Retirer les adaptateurs de tubes de la chambre de mélange. </li><li> Chambre de mélange propre en le rinçant avec une solution de nettoyage de laboratoire et des solvants (par exemple l&#39;éthanol, l&#39;acétone). Effectuez ces étapes sous le capot de laboratoire. </li><li> Chambre de mélange à sec avec de l&#39;air sous pression et chauffer à 200 ° C pendant 8 heures. </li></ol></li><li> Nettoyer Odeur Flacons et clapets anti-retour <ol><li> Retirez le bouchon en acier (joint en caoutchouc de défausse) et clapets anti-retour à partir de flacons d&#39;odeurs et de tremper tous les composants dans une solution de nettoyage de laboratoire. </li><li> Soniquer composants dans un bain à ultrasons et les rincer avec de l&#39;eau distillée. </li><li> Nettoyez tous les composants sauf clapets avec de l&#39;éthanol et de l&#39;acétone. Effectuez ces étapes sous le capot de laboratoire. </li><li> Composants secs avec de l&#39;air sous pression et de la chaleur entre eux à 200 ° C pendant 8 heures. </li><li> Clapets de retenue propre à l&#39;intérieur en les rinçant avec de l&#39;acétone et de l&#39;éthanol en utilisant une seringue (considèrent sens de l&#39;écoulement). Effectuez ces étapes sous le capot de laboratoire portant des lunettes de laboratoire. Parce que l&#39;acétone attaque pièces en caoutchouc, immédiatement clapets secs en les rinçant avec de l&#39;air sous pression. </li><li> Éliminer les odeurs résiduelles en pulsant de l&#39;air dans les clapets pendant plusieurs jours. Utilisez un incubateur à 60 ° C et un air sec sur 1/1 sec air hors régime pour cette étape de nettoyage. </li></ol&gt; </li></ol>

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Les auteurs déclarent qu&#39;ils ont aucun intérêt financier concurrentes.

Bien que le système Flywalk semble assez sophistiqué, à première vue, une fois mis en place et en cours d&#39;exécution, il est facile à utiliser et produit des résultats très robustes. Pour souligner la cohérence des résultats obtenus avec le dosage biologique, on peut dire que les résultats représentatifs présentés ici ont été obtenues presque 2 ans après que certains des résultats présentés dans une étude précédente 29 avec une configuration modifiée à l&#39;aide d&#39;un nouveau l...

L&#39;objectif primordial de toute recherche neuroethological est d&#39;établir un lien de causalité entre les états d&#39;activité de neurones individuels ou circuits neuronaux et le comportement d&#39;un organisme. Pour atteindre cet objectif de l&#39;activité neuronale et le comportement doit être surveillée dans des conditions identiques de relance et ces conditions de relance devrait idéalement être similaires à ceux du système nerveux sous surveillance évolué pour donner un sens. Particulièrement quand il vient à des essais biologiques du comportement, ces exigences ont historiquement prouvé très exigeant dans Drosophila melanogaster neuroéthologie olfactif. Une fois libéré de la source, des panaches d&#39;odeur éclatent rapidement, en filaments minces avec la diffusion turbulente causé par le mouvement de l&#39;air étant le principal déterminant de la distribution d&#39;odeur 1. En conséquence, un insecte naviguer vers une source d&#39;odeur subit une stimulation intermittente avec des paquets d&#39;odeurs avec des intervalles variables entrecoupées d&#39;air propre. Les deuxla marche et les insectes volants - y compris la drosophile - ont été démontrés à exploiter ce régime de stimulation intermittente pour la navigation par vent sur ​​la flambée rencontre panache et principalement déplaçant vent de travers en l&#39;absence d&#39;odeurs 2 - 5. Considérant que les procédures de stimulation dans des expériences physiologiques imiter largement celles d&#39;un insecte peut vivre dans son environnement naturel, soit en fournissant bouffées simples d&#39;odeurs entrecoupées de longues périodes de l&#39;air ou des séquences de stimulation dynamiques 6 - 11, de nombreux essais biologiques comportementaux utilisés dans Drosophila neuroéthologie tels que dosage de piège , arènes en plein champ ou T-labyrinthe reposent sur ​​odeur gradients 12 - 15. Toutefois, en raison des gradients odeurs, par définition, sont variables en fonction de la concentration distance de la source des odeurs, un comportement particulier peut pas être attribuée à une concentration d&#39;odeur précis en utilisant ces paradigmes. En outre, la pente deun gradient d&#39;odeur dépend de façon critique sur les propriétés physico-chimiques de la substance odorante. Un gradient d&#39;un composé très volatil sera moins profonde que celle créée par un composé moins volatile et donc plus difficiles à suivre pour un organisme comptant sur ​​la mesure des différences de concentration dans l&#39;espace comme les seuls moyens de navigation 16 - 20, ce qui peut conduire à une mauvaise interprétation des préférences olfactives notamment dans des essais de choix. Cet effet est également très préjudiciable lors d&#39;enquêtes sur les comportements vers des mélanges d&#39;odeurs car elle conduit à différents rapports de composants de mélange à chaque point de l&#39;espace et donc à nouveau interdit à une corrélation claire entre la physiologie et le comportement. Alors que des mouches du vinaigre ont tendance à se rassembler dans la fermentation de fruits, ils sont solitaires dans leur navigation vers les sources de nourriture et des sites de ponte. Néanmoins, plutôt que de tester les animaux individuels de nombreux paradigmes comportementaux utilisés chez la drosophile neuroetholoGY examiner le comportement de l&#39;odeur-guidée de cohortes de mouches et de l&#39;attraction est marqué comme la fraction de mouches qui choisissent l&#39;odeur sur une relance de contrôle. Ces expériences de cohorte ont grandement contribué à la compréhension de la mouche neuroéthologie et la plupart des observations faites par leur utilisation pourrait être confirmé dans des expériences unique mouche. Cependant, il a été observé que les mouches peuvent influencer chaque décision other&#39;s 21 et dans les cas extrêmes, l&#39;évaluation d&#39;une odeur peut passer de l&#39;indifférence à l&#39;évitement selon la densité de la population 22. En outre, les résultats de ces types d&#39;expériences fournissent souvent uniquement le point de terminaison d&#39;une séquence de décisions comportementales plutôt que d&#39;observer ce qui fait à la volée tout en elle le fait, ce qui serait souhaitable lorsque l&#39;on tente de mettre en corrélation avec le comportement de l&#39;activité neuronale. Ces expériences de cohorte plutôt faible résolution sont contrastés par haute résolution méthodes seule mouche comme les arénas de vol captif et tapis roulants qui permettentpour une observation directe des réponses comportementales au moment où le stimulus est présenté 20,23,24. Néanmoins, les expériences de la cohorte sont toujours populaires, car ils sont très efficaces et fournissent des résultats robustes, même à comparable tailles bas-échantillons, car la variabilité inter-individuelle et inter-procès sont partiellement en moyenne en raison de l&#39;observation de populations sur des périodes de temps prolongées. Bien vol captif et tapis roulant offrent probablement la norme d&#39;or concernant la présentation du stimulus et résolution temporelle, les arènes utilisés sont conçus pour les animaux simples et il est donc temps pour obtenir des tailles d&#39;échantillon nécessaire pour une analyse statistique. Plusieurs autres approches ont été récemment mis au point qui permettent une acquisition efficace des données comportementales à haute résolution en combinaison avec un régime de relance bien défini. Ceux-ci comprennent sans surveillance suivi 3D de plusieurs mouches du vinaigre dans une soufflerie en combinaison avec un modèle 3D précise de l&#39;odeur panache 5 </sup&gt;, suivi de plusieurs mouches individuels dans les chambres de choix fournis avec les courants d&#39;air des deux côtés 25 et le paradigme Flywalk 26. Dans Flywalk, 15 mouches individuelles sont situées dans de petits tubes de verre et surveillés en permanence par une caméra de tête dans des conditions de lumière rouge. Les odeurs sont ajoutés à un courant d&#39;air continu de 20 cm / sec et voyagent à travers les tubes de verre à une vitesse constante. Le courant d&#39;air est humidifié par passage à travers flacons de 250 ml contenant de l&#39;eau distillée (humidificateurs) avant d&#39;entrer dans le système de distribution d&#39;odeur. Les positions de flies&#39; sont enregistrées dans une région carrée d&#39;intérêt (ROI) qui englobe la majeure partie de la longueur des tubes d&#39;odeurs (à l&#39;exclusion des bords extérieurs des tubes (environ 5 mm de chaque côté), où les mouches peuvent pas se déplacer plus haut ou vent arrière) à l&#39;époque de la présentation de l&#39;odeur (figure 1A, B). Aller identités sont maintenues constantes par le système de suivi tout au long de l&#39;expérience sur la base de leurs positions Y (ie leurs limites d&#39;tube de verre). Stimulation de l&#39;odeur est réalisé en utilisant un dispositif de stimulation multi-composant qui permet la présentation d&#39;un maximum de 8 et de toutes les odeurs simples mélanges de ceux-ci possibles 26,29 (figure 1B). Le cours d&#39;un essai est commandé par un ordinateur de régulation du système de délivrance et de collecte de l&#39;odeur température et d&#39;humidité de l&#39;information (ordinateur 1, la figure 1C). Cet ordinateur contrôle également un enregistreur de données (démarrage / arrêt de l&#39;enregistrement) sur un deuxième ordinateur qui permet de suivre en permanence les positions de voler à 20 images par seconde (2) informatiques. Fly positions, état ​​de la vanne d&#39;odeur (c.-à-point dans le temps de l&#39;ouverture de la vanne), l&#39;odeur ID, ​​la température et l&#39;humidité autour de cycles de stimulation de l&#39;odeur sont enregistrés sur l&#39;ordinateur 2. De cette façon, des informations sur l&#39;odeur et la mouche positions sont synchronisés et exportés au format .csv fichiers qui peut encore être traitées et analysées en utilisant les routines d&#39;analyse écrite sur mesure. En raisonl&#39;ensemble du système est contrôlé par ordinateur, sans intervention humaine est nécessaire au cours d&#39;une session expérimentale.

<table><tbody><tr><td>Flywalk setup</td><td>Custom</td><td></td><td>details available upon request</td></tr><tr><td>stimulus device</td><td>Custom</td><td></td><td>details available upon request</td></tr><tr><td>LED cluster</td><td>Custom</td><td></td><td>details available upon request</td></tr><tr><td>HD Pro Webcam C920</td><td>Logitech, Lausanne, Switzerland</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 Computers</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flywalk Reloaded v1.0 software</td><td>Electricidade Em P&amp;oacute; (electricidadeempo.net)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Labview 11.0 software</td><td>National Instruments, Austin, TX</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard fly food</td><td>Custom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard fly vials</td><td>Greiner bio-one GmbH, Frickenhausen, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Standard fly vials</td><td>Greiner bio-one GmbH, Frickenhausen, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>aspirator</td><td>Custom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>mineral oil</td><td>Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>odors</td><td>Sigma-Aldrich (www.sigmaaldrich.com)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>200 &amp;micro;l PCR reaction tubes</td><td>Biozym Scientific GmbH, Oldendorf, Germany</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

high-resolution quantification of odor-guided behavior in drosophila melanogaster using the flywalk paradigm

Dans leur milieu naturel, les insectes comme la mouche du vinaigre Drosophila melanogaster sont bombardés avec une énorme quantité de substances odorantes chimiquement distinctes. Pour compliquer encore les choses, les odeurs détectées par le système nerveux des insectes sont généralement pas de composés simples, mais les mélanges dont la composition et les ratios de concentration varier. Ceci conduit à une quantité presque infinie de différents stimuli olfactifs qui doivent être évaluées par le système nerveux. Pour comprendre quels aspects d&#39;une relance de l&#39;odeur de déterminer son évaluation par la mouche, il est donc souhaitable d&#39;examiner efficacement le comportement des odeurs guidé vers de nombreuses substances odorantes et mélanges d&#39;odeurs. Pour corréler directement le comportement de l&#39;activité neuronale, le comportement doit être quantifiée dans un délai comparable et dans des conditions identiques à celles de relance dans des expériences neurophysiologiques. Cependant, de nombreux essais biologiques olfactifs actuellement utilisés chez la drosophile neuroéthologie sont plutôt spécialisée soit vers l&#39;efficacité ou vers la résolution. Flywalk, un système de livraison de l&#39;odeur et de suivi automatisé, comble le fossé entre l&#39;efficacité et de la résolution. Il permet de déterminer exactement quand un paquet d&#39;odeur stimulé une mouche marchant librement, et de déterminer les animal&#39;s réaction comportementale dynamique.

Étant donné que les mouches sont autorisés à distribuer librement dans leurs tubes de verre entre les impulsions d&#39;odeur et l&#39;impulsion d&#39;odeur se déplace à travers les tubes de verre à une vitesse constante vol rencontrent l&#39;odeur à des moments différents en fonction de leur position-x au moment de la stimulation. En conséquence, les onsets des trajectoires au vent évoqués par une impulsion ms 500 d&#39;une jolie 10 -3 dilution de l&#39;acétate d&#39;éthyle sont décalées d&#39...

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High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Le Flywalk système de suivi automatisé est utilisé pour la haute résolution de quantification comportement d&#39;odeur guidé dans Drosophila melanogaster.

Haute résolution La quantification du comportement Odor-guidée dans<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Utilisation de la<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigm

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

high-resolution-quantification-odor-guided-behavior-drosophila

Research

JoVE Journal

Neuroscience

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

9.2K vues.  Max Planck Institute for Chemical Ecology.  Le Flywalk système de suivi automatisé est utilisé pour la haute résolution de quantification comportement d'odeur guidé dans Drosophila melanogaster. 

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High-resolution Measurement of Odor-Driven Behavior in Drosophila Larvae

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral paradigm, the experimenter usually assumes that the rapid diffusion of odorant molecules from the source leads to the creation of a stable gradient in the dish. To establish a quantitative correlation between sensory inputs and behavioral responses, it is necessary to achieve a more thorough characterization of the odorant stimulus conditions. In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

In this video article, we describe a new method allowing the construction of odorant gradients with stable and controllable geometries. We briefly illustrate how these gradients can be used to screen for olfactory defects (full and partial anosmia) and to study more subtle features of chemotaxis behavior.

Haute résolution de mesure du comportement Odor-Driven dans les larves de drosophile

Olfactory responses in Drosophila larvae have been traditionally studied in Petri dishes comprising a single peripheral odor source. In this behavioral ...

Recherche

Biologie

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory bulb1-5. Olfactory information in the external world is transmitted to the antennal lobe by olfactory sensory neurons (OSNs), which segregate to distinct regions of neuropil called glomeruli according to the specific olfactory receptor they express. Here, OSN axons synapse with both local interneurons (LNs), whose processes can innervate many different glomeruli, and projection neurons (PNs), which convey olfactory information to higher olfactory brain regions.
Optical imaging of the activity of OSNs, LNs and PNs in the antennal lobe - traditionally using synthetic calcium indicators (e.g. calcium green, FURA-2) or voltage-sensitive dyes (e.g. RH414) - has long been an important technique to understand how olfactory stimuli are represented as spatial and temporal patterns of glomerular activity in many species of insects6-10. Development of genetically-encoded neural activity reporters, such as the fluorescent calcium indicators G-CaMP11,12 and Cameleon13, the bioluminescent calcium indicator GFP-aequorin14,15, or a reporter of synaptic transmission, synapto-pHluorin16 has made the olfactory system of the fruitfly, Drosophila melanogaster, particularly accessible to neurophysiological imaging, complementing its comprehensively-described molecular, electrophysiological and neuroanatomical properties2,4,17. These reporters can be selectively expressed via binary transcriptional control systems (e.g. GAL4/UAS18, LexA/LexAop19,20, Q system21) in defined populations of neurons within the olfactory circuitry to dissect with high spatial and temporal resolution how odor-evoked neural activity is represented, modulated and transformed22-24.
Here we describe the preparation and analysis methods to measure odor-evoked responses in the Drosophila antennal lobe using G-CaMP25-27. The animal preparation is minimally invasive and can be adapted to imaging using wide-field fluorescence, confocal and two-photon microscopes.

Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe

We describe an established technique to measure and analyze odor-evoked calcium responses in the antennal lobe of living Drosophila melanogaster.

Imagerie de calcium des odeurs évoquées réponses dans le Drosophila Lobe antennaire

The antennal lobe is the primary olfactory center in the insect brain and represents the anatomical and functional equivalent of the vertebrate olfactory ...

Neurosciences

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field. Studying locomotor behavior in Drosophila melanogaster relies on the ability to be able to quantify changes in motion during or in response to a given task. For this reason, a high-resolution video tracking system, such as the one we describe in this paper, is a valuable tool for measuring locomotion in real-time. Our protocol involves the use of an initial air pulse to break the flies momentum, followed by a thirty second filming period in a square chamber. A tracking program is then used to calculate the instantaneous speed of each fly within the chamber in 10 msec increments. Analysis software then compiles this data, and outputs a variety of parameters such as average speed, max speed, time spent in motion, acceleration, etc. This protocol will discuss proper feeding and management of flies for behavioral tasks, handling flies without anesthetization or immobilization, setting up a controlled environment, and running the assay from start to finish.

The study of complex locomotor behavior in Drosophila melanogaster is dependent upon the ability to quantify changes in a given fly's movement. This article demonstrates how to do this using a high-resolution tracking system.

Suivi vidéo haute résolution de la locomotion chez les adultes Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Visually Mediated Odor Tracking During Flight in Drosophila

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual stabilization of upwind tracking directly aids in odor tracking. But do olfactory signals directly influence visual tracking behavior independently from wind cues? Additionally, recent advances in olfactory molecular genetics and neurophysiology have motivated novel quantitative behavioral analyses to assess the behavioral influence of (e.g.) genetically inactivating specific olfactory activation circuits. We modified a magnetic tether system originally devised for vision experiments by equipping the arena with narrow laminar flow odor plumes. Here we focus on experiments that can be performed after a fly is tethered and is able to navigate in the magnetic arena. We show how to acquire video images optimized for measuring body angle, how to judge stable odor tracking, and we illustrate two experiments to examine the influence of visual cues on odor tracking.

Here we describe how to optimize the acquired video image for an olfactory magnetic-tether (OMT) apparatus. We also describe two sample experimental protocols for studying visuo-olfactory fusion.

Visuellement Suivi Odeur Mediated Pendant le vol chez la drosophile

Flying insects use visual cues to stabilize their heading in a wind stream. Many animals additionally track odors carried in the wind. As such, visual ...

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster. In a light-tight box illuminated by red light that is invisible to fruit flies, a camera linked to custom data acquisition software monitors the position of six flies simultaneously. Each fly is confined to walk in individual arenas containing a food odor at the center. The testing arenas rest on a porous floor that functions to prevent odor accumulation. Latency to locate the odor source, a metric that reflects olfactory sensitivity under different physiological states, is determined by software analysis. Here, we discuss the critical mechanics of running this behavioral paradigm and cover specific issues regarding fly loading, odor contamination, assay temperature, data quality, and statistical analysis.

A Single-fly Assay for Foraging Behavior in Drosophila

In this video article, we describe an automated assay to measure the effect of hunger or satiety on olfactory dependent food search behavior in the adult fruit fly Drosophila melanogaster.

Une simple mouche Essai de comportement alimentaire dans<em&gt; Drosophila</em

For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

Detecting signals from the environment is essential for animals to ensure their survival. To this aim, they use environmental cues such as vision, mechanoreception, hearing, and chemoperception through taste, via direct contact or through olfaction, which represents the response to a volatile molecule acting at longer range. Volatile chemical molecules are very important signals for most animals in the detection of danger, a source of food, or to communicate between individuals. Drosophila melanogaster is one of the most common biological models for scientists to explore the cellular and molecular basis of olfaction. In order to highlight olfactory abilities of this small insect, we describe a modified choice protocol based on the Y-maze test classically used with mice. Data obtained with Y-mazes give valuable information to better understand how animals deal with their perpetually changing environment. We introduce a step-by-step protocol to study the impact of odorants on fly exploratory response using this Y-maze assay.

Testing Drosophila Olfaction with a Y-maze Assay

We present a choice test to reveal the influence of odorants on Drosophila behavior using a Y-maze assay.

Expérimentation<em&gt; Drosophila</em&gt; Olfaction avec un dosage labyrinthe en Y

Detecting signals from the environment is essential for animals to ensure their survival. To this aim, they use environmental cues such as vision, ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Détermination de l&#39;activité locomotrice spontanée,<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an excellent model system for such investigations due to its complex behaviors, powerful genetic techniques, and compact nervous system. Laboratory behavioral assays have long been used with Drosophila to simulate properties of the natural environment and study the neural mechanisms underlying the corresponding behaviors (e.g. phototaxis, chemotaxis, sensory learning and memory)1-3. With the recent availability of large collections of transgenic Drosophila lines that label specific neural subsets, behavioral assays have taken on a prominent role to link neurons with behaviors4-11. Versatile and reproducible paradigms, together with the underlying computational routines for data analysis, are indispensable for rapid tests of candidate fly lines with various genotypes. Particularly useful are setups that are flexible in the number of animals tested, duration of experiments and nature of presented stimuli. The assay of choice should also generate reproducible data that is easy to acquire and analyze. Here, we present a detailed description of a system and protocol for assaying behavioral responses of Drosophila flies in a large four-field arena. The setup is used here to assay responses of flies to a single olfactory stimulus; however, the same setup may be modified to test multiple olfactory, visual or optogenetic stimuli, or a combination of these. The olfactometer setup records the activity of fly populations responding to odors, and computational analytical methods are applied to quantify fly behaviors. The collected data are analyzed to get a quick read-out of an experimental run, which is essential for efficient data collection and the optimization of experimental conditions.

Olfactory Behaviors Assayed by Computer Tracking Of Drosophila in a Four-quadrant Olfactometer

We describe here a behavioral setup and data analysis method for assaying olfactory responses of up to 100 vinegar flies (Drosophila melanogaster). This system may be used with single or multiple olfactory stimuli, and adaptable for optogenetic activation or silencing of neuronal subsets.

Comportements olfactifs dosées par Tracking Computer Of<em&gt; Drosophila</em&gt; Dans un Olfactométre quatre quadrants

A key challenge in neurobiology is to understand how neural circuits function to guide appropriate animal behaviors. Drosophila melanogaster is an ...

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a considerable amount of information has been generated regarding ORN responses to odorants, the role of specific ORNs in driving behavioral responses remains poorly understood. Complications in behavior analyses arise due to different volatilities of odorants that activate individual ORNs, multiple ORNs activated by single odorants, and the difficulty in replicating naturally observed temporal variations in olfactory stimuli using conventional odor-delivery methods in the laboratory. Here, we describe a protocol that analyzes Drosophila larval behavior in response to simultaneous optogenetic stimulation of its ORNs. The optogenetic technology used here allows for specificity of ORN activation and precise control of temporal patterns of ORN activation. Corresponding larval movement is tracked, digitally recorded, and analyzed using custom written software. By replacing odor stimuli with light stimuli, this method allows for a more precise control of individual ORN activation in order to study its impact on larval behavior. Our method could be further extended to study the impact of second-order projection neurons (PNs) as well as local neurons (LNs) on larval behavior. This method will thus enable a comprehensive dissection of olfactory circuit function and complement studies on how olfactory neuron activities translate in to behavior responses.

Tracking Drosophila Larval Behavior in Response to Optogenetic Stimulation of Olfactory Neurons

This protocol analyzes navigational behavior of Drosophila larva in response to simultaneous optogenetic stimulation of its olfactory neurons. Light of 630 nm wavelength is used to activate individual olfactory neurons expressing a red-shifted channel rhodopsin. Larval movement is simultaneously tracked, digitally recorded, and analyzed using custom-written software.

Analyser le comportement larves de drosophile en réponse à une Stimulation des neurones olfactifs Optogenetic

The ability of insects to navigate toward odor sources is based on the activities of their first-order olfactory receptor neurons (ORNs). While a ...

Tracking Freely Walking Flies: A Method to Assess Locomotion in Drosophila

Source: Sun, M. and Chen, L. L. <a href="https://www.jove.com/video/55602/" target="_blank">A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila</a>. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes how to track freely walking flies to assess their general locomotion ability. The featured protocol demonstrates the assay&#39;s setup and data analysis using video tracking software.

Traquer les mouches qui marchent librement : une méthode pour évaluer la locomotion chez la drosophile

Source: Sun, M. and Chen, L. L. A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).
This video describes how to ...

Haute résolution La quantification du comportement Odor-guidée dans

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Haute résolution de mesure du comportement Odor-Driven dans les larves de drosophile

Imagerie de calcium des odeurs évoquées réponses dans le Drosophila Lobe antennaire

Suivi vidéo haute résolution de la locomotion chez les adultes Drosophila melanogaster

Visuellement Suivi Odeur Mediated Pendant le vol chez la drosophile

Une simple mouche Essai de comportement alimentaire dans

Expérimentation

Détermination de l'activité locomotrice spontanée,

Comportements olfactifs dosées par Tracking Computer Of

Analyser le comportement larves de drosophile en réponse à une Stimulation des neurones olfactifs Optogenetic

Traquer les mouches qui marchent librement : une méthode pour évaluer la locomotion chez la drosophile