1. Utiliser des pinces inversées pour ramasser une fenêtre (nitrure de silicium windows seront brisera en cas de chute).
2. Placer la fenêtre sur une lame de verre, côté plat vers le haut.
3. Respecter les petits morceaux de Scotch sur les côtés de la fenêtre et utilisez-les pour respecter les fenêtres vers le bas de la boîte de Pétri.
4. Stériliser les fenêtres de Pétri avec les rayons UV. Ceci peut être accompli avec le paramètre auto-crosslink sur une armoire UV-réticulation, suivie par l’irradiation UV supplémentaire sous la lampe UV dans la hotte à flux laminaire pendant environ 1 h.

2. les cellules sur les vitres de nitrure de silicium stérilisé de placage

1. Tenir le plat avec elle inclinée à un angle de 45°.
2. Ajouter des éléments multimédias en pipettant également, du côté du plat et soulager lentement l’angle d’inclinaison pour enrober la fenêtre avec les médias.
3. Ajouter des cellules à la boîte de Petri, de la même manière et incuber.
4. Observer les cellules occasionnellement à l’aide d’un microscope optique pour déterminer quand ils sont prêts à l’emploi.

3. la fixation et le séchage des cellules

1. Dans une hotte à flux laminaire, retirez le support en aspirant doucement tout en inclinant le plat tel que décrit ci-dessus.
2. Ajouter PBS, pipetage vers le côté du plat en le tenant à angle. Lentement, soulager l’angle d’inclinaison pour enrober la fenêtre avec du PBS.
3. Supprimer les PBS avec aspirant doucement.
4. Pipetage vers le côté du plat et en tenant à un angle, ajoutent 4 % PFA/PBS, pH 7 pour couvrir les cellules. Garder dans cette solution pendant 20 min à température ambiante.
5. Retirer le mélange PFA/PBS et jeter comme des matières dangereuses.
6. Ajouter PBS, pipetage comme décrit ci-dessus.
7. Répétez les étapes 3.5 et 3.6 deux fois.
8. Supprimer les PBS en aspirant doucement.
9. Ajouter des tuyaux de 20 mM, saccharose de 200 mM, pH 7.
10. Enlever le tuyaux/saccharose en aspirant doucement.
11. Répétez les étapes 2.8 et 2.9 deux fois.
12. Rapidement les bords de la tache et mise en retrait de la fenêtre avec un Kimwipe en arrière, puis définir la fenêtre sur une surface propre, comme un tapis de caoutchouc grille, sécher.

4. imagerie de Fluorescence des cellules de rayons x

1. Une fois que l’échantillon est sec, vérifiez la présence de cellules sur les fenêtres à l’aide d’un microscope optique.
2. Vernis à ongles permet de sécuriser les fenêtres à un titulaire en aluminium fournie par la source de rayonnement.
3. Insérez le support d’aluminium dans une monture cinématique et puis placez-le en position au point focal de l’optique dans le microscope à rayons x et à un angle d’environ 45° du faisceau de rayons x, monté sur les étapes de nanopositionnement échantillon.
4. Sortir de la zone d’instrument microscope à rayons x (habituellement une huche faite des murs de plomb) et ouvrir la trappe. Effectuer les étapes restantes à distance.
5. À l’aide d’une plaque de zone ou miroirs Kirkpatrick-Baez, concentrer le faisceau de rayons x monochromatique (habituellement 10 keV d’énergie) jusqu'à une taille de tache sub-micronique.
6. Utiliser les étapes d’échantillon de nanopositionnement et visualiser la position du faisceau de rayons x sur l’échantillon avec une caméra précalibré scintillateur en aval, déterminent la largeur appropriée et la hauteur du raster scan afin de capturer les données de l’échantillon.
7. Avec le détecteur de dérive de silicium dispersive en longueur d’onde à 90° pour le faisceau incident et environ 3 mm ou moins de l’échantillon, recueillir un spectre pour l’essai avec un temps de pause de 1 à 2 sec.
8. La visualisation du spectre pour l’essai, choisissez une durée appropriée pour l’analyse, pour fournir le signal sur bruit suffisant pour les éléments d’intérêt.
9. Choisissez une résolution appropriée pour l’analyse, ce qui n’est pas significativement plus petite que la taille de tache du faisceau sur l’échantillon, ni plus grand que les caractéristiques d’intérêt dans l’échantillon.
10. Programmer la numérisation dans le logiciel de numérisation et de recueillir l’image.