Aujourd’hui, nous allons démontrer la technique de mesure transdermique de la filtration glomerular ou tGFR chez la souris. Il ya un certain nombre de caractéristiques de cette méthode que je pense sont dignes de mention. Tout d’abord, actuellement tGFR est le moyen le plus précis d’évaluer la fonction rénale chez la souris.
Deuxièmement, tGFR est effectué chez les souris conscientes et librement mobiles de sorte qu’il évite les complications de l’anesthésie. Troisièmement, une fois que vous avez maîtrisé la technique, il est raisonnable d’être en mesure d’effectuer des mesures de 30 à 40 tGFR en une seule journée. Enfin, les mesures tGFR peuvent être effectuées à plusieurs reprises chez une souris in vitro.
Ce que cela signifie, c’est que nous pouvons effectuer des mesures périodiques de la fonction rénale dans les milieux de maladies aiguës et chroniques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet aux chercheurs de mesurer le taux de filtration glomerulaire ou GFR chez des souris conscientes et librement mobiles avec une grande précision et sensibilité. Un à deux jours avant la mesure tGFR, après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des pieds, placez une souris anesthésiée en position couchée sur un coussin chauffant.
À l’aide d’un rasoir électrique, couper contre la direction de la croissance pour enlever la majeure partie de la fourrure d’un côté du dos de la souris du haut des pattes arrière jusqu’au cou et à travers les côtes. Utilisez un coton-tige pour appliquer une fine couche de crème depilation sur la peau exposée contre la direction de la croissance pour s’assurer que la crème est appliquée aussi près de la peau que possible et retirer la crème après une à trois minutes avec des cotons-tiges propres et de l’eau chaude. Le jour de l’intervention, couper un patch adhésif de six par trois centimètres à la taille de l’appareil GFR avant d’décoller l’arrière du patch et de coller l’appareil sur le côté adhésif du patch avec les diodes électroluminescentes placées immédiatement au-dessus de la fenêtre claire.
Ensuite, collez un petit morceau du patch à la batterie. Pour fixer le moniteur, avec la souris anesthésiée en position couchée, nettoyez la peau pré-rasée avec 70% d’éthanol et ajustez la largeur d’un morceau de ruban adhésif d’environ 12 centimètres en le déchirant dans le sens de la longueur. Placez le ruban sous la souris avec deux centimètres d’un côté de l’animal se pliant sur un bord du côté droit de la bande pour un placement facile et l’enlèvement après la mesure.
Ensuite, connectez la batterie à l’appareil, en enlevant le support de la batterie et en plaçant la batterie en toute sécurité sur l’appareil. L’appareil est prêt à l’emploi et l’acquisition de données commence lorsque les LED bleues commencent à clignoter. Retirez le support du patch sur l’appareil et placez l’appareil sur la peau rasée de sorte que la fenêtre exposant les LED est au-dessus des nervures sécurisant le côté droit de l’appareil avec du ruban adhésif.
Il est important d’assurer une fixation sécurisée de l’appareil sans restreindre la mobilité de la souris ou mettre trop de pression sur la peau. Ensuite, enroulez fermement le côté gauche de la bande autour de la souris et de l’appareil. Laissez l’appareil enregistrer une lecture de fond stable pendant trois minutes.
Entre-temps, réchauffer la queue avec un coussin pour la tête et charger une seringue à insuline avec le volume expérimental approprié de FITC-sinistrin pour l’injection arrondie aux 10 microlitres les plus proches. Administrer la FITC-sinistrin par voie intraveineuse dans un bolus lisse mais rapide. Il est important que l’utilisateur est à l’aise avec les injections IV car il est nécessaire d’administrer avec succès le FITC-sinistrin en un bolus plutôt que sur plusieurs tentatives qui se traduira par de multiples pics dans la courbe de dégagement.
Pour mesurer le tGFR, placez la souris dans sa propre cage avec surveillance jusqu’à la pleine récumbence et laissez le dégagement fitc-sinistrin être enregistré pendant 1,5 heure. À la fin de la période de mesure, placez la souris sur la grille sur le dessus de la cage et permettant à la souris de saisir les barres métalliques, tirez le ruban sous le ventre en un mouvement rapide et lisse. Retirez ensuite tout ruban de l’appareil et du patch de la peau en prenant soin que la batterie ne se déconnecte pas de l’appareil et ne retourne pas la souris dans sa cage.
Pour évaluer les données, déconnectez soigneusement la batterie et utilisez un câble USB pour connecter l’appareil à l’ordinateur. Ouvrez le logiciel de lecture et cliquez sur Connect, Read, Rename and Save. Ensuite, fermez le programme et le processus et évaluez les données dans le logiciel d’analyse en fonction des instructions du fabricant.
Tandis que fitc-sinistrin est rapidement dégagé de la circulation chez les souris en bonne santé, ce dégagement est considérablement retardé chez les souris avec des dommages rénaux aigus. Chez les souris ayant des lésions rénales aiguës très graves, il peut y avoir très peu ou pas de dégagement de la fluorescence FITC-sinistrin pendant toute la période de mesure de 90 minutes indiquant une absence complète de filtration glomerular. La mesure transdermique du GFR est peu invasive et peut donc être utilisée pour surveiller les changements de la fonction rénale chez les animaux individuels sur plusieurs points de temps.
En effet, dans cette expérience représentative, les mesures séquentielles ont démontré des changements dans la fonction rénale à zéro, un, deux, et quatre jours après des dommages de reperfusion d’ischémie. Dans ce modèle chronique de maladie rénale de souris, la relation inverse de la demi-vie fitc-sinistrin au GFR peut être directement corrélée à la fonction rénale altérée observée chez ces animaux. En effet, la demi-vie de FITC-sinistrin est étroitement corrélée avec l’évaluation histologique semi-quantitative des dommages tubulaires au-dessus de la gamme complète des mesures de GFR chez les souris non blessées et chez les souris avec différentes séverités des dommages aigus aigus induits par des dommages de réperfusion d’ischémie.
En revanche, la créatinine de sérum et l’azote d’urée de sang démontrent une corrélation positive mais plus faible avec le dégagement de FITC-sinistrin indiquant les mesures transcutanées de GFR fournissent une mesure plus fiable des dommages rénaux que la créatinine de sérum ou l’azote d’urée de sang. La mesure transdermique du GFR est une mesure plus sensible de la fonction rénale que les biomarqueurs traditionnels tels que la créatinine et le BUN. Ceci fournit une évaluation plus précise de l’efficacité des thérapies nouvelles pour la maladie rénale dans la recherche préclinique.
Les étapes les plus critiques de cette méthode sont l’attachement approprié de l’appareil au dos de la souris et l’administration iv réussie de FITC-sinistrin. Ces étapes sont essentielles pour obtenir une évaluation précise du GFR chez la souris.
