Pour modéliser les maladies pulmonaires chez la souris, des agents expérimentaux sont souvent administrés par injection intratrachéale. Cette approche, cependant, ne peut pas cibler sélectivement un poumon, et la distribution peut être asymétrique entre les poumons. En cannulant un poumon individuel chez une souris anesthésiée, nous pouvons administrer unilatéralement des agents expérimentaux.
Avec la modification, cette approche peut être employée bilatéralement, améliorant la symétrie des dépôts entre les deux poumons. La préparation de cathéter comprenant le polissage, la légère angulation, et l’étiquetage est l’élément clé pour le succès. Bien sûr, la pratique de cette technique est également nécessaire.
Sumei Liao, assistant de recherche professionnel de mon laboratoire, démontrera la procédure. Après avoir confirmé un manque de réponse au pincement des orteils, suspendre une souris anesthésiée, de huit à dix semaines, C57-Black/6 des incisives sur une ligne de suture drapée dans une orientation supine. Fixez lâchement la souris avec deux à trois morceaux de crochet, et bouclez le ruban adhésif, en évitant la restriction de ventilation, et allumez un illuminateur à fibres optiques à diode électroluminescente.
Placez l’opérateur derrière la plate-forme, dorsale à la souris. Orientez le goulot d’oie de l’illuminateur à deux ou trois centimètres de la souris afin qu’il allume la zone larynx à travers la peau. À l’aide de forceps stériles dans la main dominante, tirez la langue hors de la cavité buccale.
Utilisez la main non dominante et le dépresseur stérile pour aplatir la racine de la langue pour exposer largement l’oropharynx. Après avoir libéré les forceps, utilisez la main dominante pour intuber le cathéter étendu dans la trachée par la cavité buccale. Confirmez le placement en observant si la bulle dans la seringue se déplace de haut en bas à chaque respiration.
Pour la cannulation lobar sélective du poumon droit distal, après intubation intratrachéale, faites pivoter la planche en plastique à 30 degrés et guidez le moyeu du cathéter en parallèle à la ligne médiane de la souris jusqu’à la profondeur appropriée basée sur le poids, comme indiqué dans le tableau. À l’aide d’une pointe de chargement de gel, livrer 20 microlitres de colorant bleu Evans de 0,3 % dans le cathéter, suivis d’un à deux aliquots de 100 microlitres d’air par goutteuse de verre. Retirez ensuite le cathéter et maintenez la souris en position pendant 30 secondes avant de placer l’animal sur une couverture chauffante, avec surveillance jusqu’à sa récupération complète.
Pour la cannulation lobar sélective du poumon gauche distal, après intubation intratracheal, faites pivoter la planche en plastique moins 74 degrés, et avancez doucement le cathéter dans le bronchus gauche de tronc principal tout en plaçant la pression modeste 90 degrés vers le bas et vers le bookend. Après avoir cannulé les segments inférieurs gauches de poumon, tournez la planche en plastique moins 30 degrés, et livrez 40 microlitres de colorant bleu d’Evans de 0,3%avec une pointe de gel-chargement. Ensuite, livrer un à deux aliquots de 100 à 300 microlitres d’air par l’intermédiaire d’un goutte-à-goutte en verre, et retirer le cathéter pour permettre à la souris de récupérer, comme démontré.
Pour l’administration pulmonaire entière droite, après intubation intratracheal, faites pivoter le conseil en plastique 30 degrés, et guidez le cathéter en parallèle à la ligne médiane de souris, atteignant aux profondeurs nécessaires pour la cannulation lobar détale droite. Confirmez l’apparence du signe tachypnée et faites pivoter la souris à moins 74 degrés pour permettre l’assistance par gravité pour la livraison de l’agent. Retirez le cathéter à une position qui correspond au décollage de la bronche du tronc principal droit et assurez-vous que le biseau du cathéter fait face vers le bas.
Livrer 30 microlitres de 0,3%Evans colorant bleu au poumon droit, suivie d’un à deux aliquots de 100 à 300 microlitres d’air. Ensuite, retirez le cathéter et laissez la souris récupérer. Pour l’administration pulmonaire entière gauche, après cannulation intratracheal, faites pivoter la planche en plastique moins 74 degrés, et avancez doucement le cathéter dans la bronche gauche de tronc principal tout en plaçant la pression modeste à la fois 90 degrés vers le bas et vers le serre-livres.
Confirmez le signe no tachypnea et faites pivoter la souris à 86 degrés pour permettre une assistance par gravité avec l’administration de l’agent. Retirer le cathéter vers la bronche du tronc principal gauche et faire pivoter le biseau du cathéter pour faire face vers le bas. Livrer 30 microlitres de colorant bleu Evans à 0,3 %, avec une pointe de chargement de gel vers le poumon gauche, suivi d’un à deux aliquots d’air de 100 à 300 microlitres.
Puis, retirez le cathéter, pour permettre à la souris de récupérer, comme démontré. La livraison bilatérale de FITC-dextran par administration intratracheal et symétrique intrabronchial mène à la fluorescence parenchymale asymétrique de FITC de poumon avec de plus grandes concentrations relatives notées dans le poumon gauche. Ceci suggère que la livraison asymétrique de poumon des agents expérimentaux après administration intratracheal n’est pas une conséquence de la présentation asymétrique de ces agents à chaque bronche de tronc principal mais que la livraison égale de tronc principal soit diluée par des différences dans le poids et la masse de poumon.
L’administration intrabronchique dose-ajustée améliore la symétrie de la livraison d’agent parenchymal de poumon. En dépit de cette correction, cependant, l’hétérogénéité persistante est toujours observée dans les différents lobes du poumon droit. 21 jours après des dommages fibrotic fibrotic intratracheal bleomycin-induits de poumon, l’inflammation est observée principalement dans le poumon gauche, avec moins de dommages notables dans le poumon droit.
Inversement, l’administration intrabronchiale de bleomycine dose-ajustée a comme conséquence une blessure légèrement diminuée au poumon gauche et une blessure accrue au poumon droit, avec la plus grande blessure évidente dans les lobes moyens et supérieurs. Pendant toute l’administration pulmonaire, n’oubliez pas de retirer le cathéter et de tendre le biseau du cathéter face vers le bas.
