Le système permet aux chercheurs de construire facilement un système d’éclairage peu coûteux et polyvalent pour des expériences optogénétiques. Les avantages de cette technique incluent la possibilité de programmer la synchronisation de l’éclairage LED avec les longueurs d’onde disponibles qui couvrent le spectre visible proche IR, et que les LED peuvent être utilisées dans une variété de contextes Pour construire un circuit électrique, clipser la carte de circuit imprimé sur les mains secourables et insérer les fils de démarrage, en les connectant pour former les trous d’épingle A1 et A3 au sol, le fil de démarrage D2 dans le trou d’épingle D6, et l’alimentation plus les fils de démarrage numéro sept dans le trou d’épingle A7. Plier les bornes de 45 degrés et ajouter du flux.
Après la soudure, coupez le dos des fils. Insérez une extrémité du connecteur fil à fil femelle soudé dans le trou A5. Ensuite, connectez une extrémité de la résistance au trou A5.
Connectez l’autre extrémité du connecteur à la masse. Ensuite, connectez l’autre extrémité de la résistance à la terre et soudez la connexion. Pour le connecteur Arduino, sertirez les extrémités des connecteurs fil à fil et poussez les extrémités serties à travers le connecteur rectangulaire.
Pour configurer les LED, étamez un fil en chauffant par le bas tout en ajoutant de la soudure par le haut. Placez une quantité généreuse de soudure sur la grande pointe de soudure et utilisez la pointe pour chauffer la base LED au contact contenant le flux. Après quelques secondes, faites glisser individuellement la soudure sur chaque contact et fixez le fil noir sur la cathode à l’aide d’une pince à cheveux.
Placez une quantité généreuse de soudure sur la grande pointe de soudure et appuyez sur la pointe sur le fil jusqu’à ce que la soudure sur la base LED fonde. Maintenez le fil enfoncé et retirez le fer à souder tout en maintenant le fil en place. Placez une petite quantité de pâte à souder sur les tampons pour les connexions LED et utilisez des pinces pour placer la LED sur les pads.
Tenez le fil rouge préétamé sur l’anode et utilisez une pince à cheveux pour couper le fil. Ajoutez de la soudure à la grande pointe comme indiqué et appuyez sur la pointe sur la connexion jusqu’à ce que la soudure sur la base LED fond et que la pâte à souder fond et devienne argentée. Pour fabriquer les fils LED, placez un tube rétractable de 4,76 millimètres sur le fil coupé à la longueur et un tube rétractable de 3,18 millimètres sur le connecteur fil à fil.
Décaper et ajouter du flux aux extrémités du fil. Utilisez les mains secourables pour clipser le connecteur fil à fil et tournez l’extrémité du connecteur avec une extrémité de fil. Souder les matériaux ensemble et attacher l’autre fil à la configuration de la même manière et souder.
Ensuite, fixez les fils LED aux mains secourables avec du ruban adhésif sous la base LED. Ensuite, mélangez l’époxy selon les instructions du fabricant et étalez l’époxy sur le dessus de la LED soudée. À l’aide du foret à bêche, percez un trou de 1,5 centimètre dans le haut de la boîte sur laquelle la LED sera placée et utilisez un outil rotatif à grande vitesse pour faire une encoche d’un côté du trou afin de faire de la place pour le fil LED.
Collez un morceau de film d’intimité de 25 à 30 millimètres sur la boîte noire recouvrant le trou que la LED éclairera et collez la LED à l’extérieur de la boîte noire au-dessus du trou. Pour un système de contrôle à quatre LED, percez quatre trous de 0,83 centimètre espacés de 3,81 centimètres dans le couvercle de la boîte et utilisez un outil rotatif à grande vitesse pour couper un trou rectangulaire de 1,19 centimètre sur 1,90 centimètre dans le coin supérieur gauche. À l’aide d’un foret à bêche, percez un trou de 1,5 centimètre à l’arrière de la boîte et insérez un œillet dans le trou.
Pour les LED contrôlées par ordinateur, du papier de verre la zone où le microcontrôleur sera collé dans la boîte ainsi que la face inférieure du support du microcontrôleur. Enclenchez le microcontrôleur sur le support, puis époxy le support et la boîte ensemble avant de fixer le support dans la boîte noire. Placez ensuite du ruban adhésif double face sur le clip et fixez le clip à l’intérieur de la boîte.
Dans les échantillons transfectés pour exprimer le phytochrome B mais pas la phycocyanine bilin, les fuites augmentent à mesure que la quantité d’ADN rapporteur augmente. En outre, lorsque l’ensemble du commutateur du gène B du phytochrome, y compris le plasmide producteur du chromode la phycocyanine biline, est éclairé par une lumière rouge lointaine, l’expression de la luciférase augmente également avec les quantités croissantes de construction de rapporteur dans le mélange de transfection. De même, lorsque les cellules sensibles à la lumière sont éclairées par une lumière rouge, l’expression de la luciférase augmente également avec l’augmentation de la quantité de rapporteur.
En comparant les niveaux d’induction des cellules traitées à la lumière rouge aux cellules traitées à la lumière rouge lointaine, une légère diminution de l’activation du pli est constatée avec des quantités croissantes de rapporteur. Il est essentiel de suivre attentivement chaque étape lors de la construction du circuit électrique et de vérifier les numéros de sténopé ligne par ligne avant de souder chaque composant. Ce protocole peut être utilisé pour la stimulation optique de nombreux types d’échantillons ou d’outils optogénétiques utilisant une variété de longueurs d’onde et permet la programmation de programmes d’éclairage.
