Une culture d’explantation de queue 3D pour étudier la segmentation des vertébrés chez le poisson zèbre

Explants de queue de poisson zèbre 3D exploitons la transparence des embryons de poisson zèbre dans toute son étendue lors du développement de la somite et de la segmentation des vertébrés. Remplissez un réservoir d’accouplement vide avec de l’eau du système de pêche. Nettoyez la passoire avec de l’eau du système.

Augmenter les barrières entre les couples d’accouplement. Déplacez sélectivement la paire de poissons dans le réservoir d’eau douce. Recueillir des embryons dans la passoire par transferts d’eau avec un réservoir vide.

Rincez les embryons collectés avec de l’eau du système de poisson et retournez-les sur une boîte de Pétri. Outils de dissection éthanol-glaçure. Faites deux couches de bandes sur les diapositives.

Couper les côtés horizontaux des chambres profondes. Coupes complètes de chambre avec des côtés verticaux. Décollez le ruban de la surface de la chambre.

Versez les milieux de culture cellulaire dans un tube. Mélanger le chlorure de calcium 2,8 concentration finale millimolaire. Ajouter une solution antibiotique.

Milieux aliquotes de dissection dans un tube séparé. Compléter le sérum fœtal bovin pour faire un milieu de culture tissulaire. Dé-corrinate les embryons avec des aiguilles.

Rincez les embryons dans un plat d’eau douce et collectez-les pour les explanter. Stabiliser l’embryon avec une aiguille et commencer à dé-yoking. Coupez les tissus restants.

Transférer les explants sur la lamelle de couverture. Aplatir le tissu et aspirer l’excès de média avec la pipette. Mettez la lame de couverture sur un milieu de croissance contenant une chambre coulissante.

Mettez le tissu explant sur une lingette de tissu. Appliquez de l’huile d’immersion sur l’objectif. Montez la chambre à lame au microscope.

Ajustez les canaux laser pour l’acquisition d’images. Vérifiez les limites de couche z de l’échantillon. Configurez l’imagerie temporelle et les couches z.

Le système d’explantation de la queue 3D maintient l’intégration cellulaire au bourgeon de la queue et à l’allongement excessif intacts comme des embryons entiers. Il est également possible d’arrêter l’allongement excessif en activant chimiquement la surface avec du collagène de type un. Le système d’explantations de queue de poisson zèbre 3D nous permet d’exploiter la transparence des embryons de poisson zèbre en nous permettant de prendre des images de microscopie à haute résolution et presque objectives.

En plus de cela, il nous permet de découpler l’excès d’élongation de la signalisation morphogène et également de contrôler les sources de signalisation morphogène avec des méthodes de dissection simples.