Cette vidéo décrit les procédures étape par étape sur l’utilisation de biomembrane Force Probe, ou BFP pour mesurer la constante de ressort moléculaire. En force, le BFP a récemment émergé dans la surface de la cellule native ou dans l’analyse de spectroscopie de force dynamique SITU. L’objectif principal de cette technique est de mesurer la génétique de liaison à une seule molécule.
Cette procédure d’analyse de données est un message simple mais puissant et fournit des informations mécaniques, en particulier la force dynamique et l’inflammation de la membrane cellulaire exprimant les molécules. Au cours du cycle d’expérience BFP, le pari du microbiome de la sonde avec le globule rouge et l’homologation, la cellule cible et la liaison moléculaire du récepteur du ligand entre la sonde et la cible peut être considéré comme un système cérébral connecté en série. Selon la loi de Hooke, la réciproque de la constante de ressort totale d’un système de ressort connecté en série est égale à la somme de la constante de ressort inverse de chaque composant, comme le montre l’équation.
La constante de ressort des globules rouges est calculée en fonction du mouvement des événements, qui dépend de la radiale de la micropipette de la sonde dans l’orifice. Les globules rouges, la zone de contact circulaire entre les globules rouges et l’homologation et la pression d’aspiration de la micro-pipette. Les données routières BFP sont obtenues par un instrument virtuel de vue à gauche fait maison, qui contrôle le mouvement de la micro-pipette cible par un traducteur DE SON.
Un cycle tactile PFP complet se compose de cinq étapes. Approche.Impinge.Contact. Se rétracter et se dissocier. Au début, la position Robusto APICS est notée comme X est égal à 0 en noir deshine.
La cible est ensuite entraînée par une pièce ou un traducteur pour empiéter et comprimer le robusto pour provoquer un mouvement d’homologation négatif. Vous le notez comme X plus petit que zéro dans la ligne de tiret rouge. Dans l’étage de rétraction, le busto rouge se déplace de la position X plus petite que zéro vers la position X égale à zéro appelée phase de compression.
Si une liaison est formée entre le complexe de molécules du récepteur du ligand, le globule rouge serait encore plus différent d’une autre direction positive. Cette période X supérieure à zéro est appelée phase de traction de l’étape de rétraction. L’étape de rétraction est la partie la plus critique pour déterminer la constante de ressort de la molécule de liaison.
Collectez des données routières force versus temps à l’aide de la plateforme d’acquisition de données BSP. Chaque expérience enregistre généralement 50 à 200 cycles tactiles, Ouvrez le logiciel d’analyse de données PFP. Cliquez sur l’icône du dossier jaune et sélectionnez le fichier de données de ligne correspondant en double-cliquant dessus.
Nous sommes au programme. Cliquez ensuite sur les boutons fléchés haut et bas pour basculer entre les événements. Utilisation des critères d’exclusion des valeurs aberrantes pour filtrer les événements non valides.
Sélectionnez le type de données d’exportation qui est forcé au format d’heure et choisissez la plage d’état appropriée. Cliquez sur le bouton Exporter les données du tracé. Les données exportées sont enregistrées sous forme de fichier texte par défaut.
Ce fichier texte contient deux colonnes de données. C’est la première colonne représentant les papas de temps et la deuxième colonne représentant la force correspondante à chaque point temporel. Tracez la courbe force/temps à l’aide d’un tableur pour obtenir la courbe forcée versus déplacement.
Multipliez la valeur temporelle de chaque point de données par le mouvement Willow Steel PSO. Élilinez le premier point de données à zéro en soustrayant la plus petite valeur de déplacement de chaque point de données. Cette transformation horizontale n’affecte pas le calcul ultérieur de la constante de ressort.
Dans la courbe force/déplacement, deux groupes d’acteurs distincts étaient différents si la nouvelle pente de force peut être identifiée. Chacun représentant la phase de compression et la phase de style 10. Ajustez une ligne de régression à chaque groupe de données.
La ligne avec une pente plus raide représente la constante totale du ressort à une phase de compresseur notée K1. Et la ligne qui était la plus petite en haut représente la ligne à cette phase de style 10 désignée comme K2.As que j’ai mentionnée, la constante totale du ressort est la réciproque du fils de la constante de ressort de série de chaque composant. Pendant la phase de compression du mode battement-cellule, la liaison moléculaire n’est pas étirée, de sorte que la constante du ressort de liaison moléculaire n’est pas prise en considération. La constante de ressort de la cellule cible est décrite comme l’équation affichée où K1 représente la constante totale du ressort pendant la phase du compresseur.
Dans la phase de style 10 du mode beat to sell, la constante totale du printemps est la constante du soleil du printemps uverse de la liaison moléculaire des globules rouges. Et la cellule cible, utilisez l’équation affichée pour calculer la constante du ressort de liaison du moléculeur, qui K2 représente la constante totale du ressort. Vous lisez la phase des 10 arrêts.
En mode beat to beat, puisque la déformation B est négligeable, le terme qui décrit l’inverse de la constante de ressort de la cellule cible se rapproche de zéro, donc la constante totale de ressort dans la phase de compresseur est équivalente à la constante de ressort de globule rouge montrant l’équation suivante. Dans la phase de traction, la constante de ressort de la liaison moléculaire peut être calculée en soustrayant l’effet du globule rouge montrant l’équation suivante. Collecter les constantes de ressort de l’attitude d’intégration du vent latéral B, du complexe Beta 3, de la cellule K562 et du complexe d’intégration d’attitude de Febrifugine B Beta, calculer la moyenne et l’écart-type des constantes de ressort dérivées à l’échelle de Newton ou de nanomètres.
Maintenant, vous devriez avoir une meilleure compréhension des exigences pour mesurer et ressorter la constante à partir des données VFD. Les différences entre le mode beat to cell et le mode beat to beat doivent être remarquées. Différents services de présentation de molécules auront des défenses différentes à la mesure de la constante de ressort.
En conclusion, cette procédure étape par étape décrit comment effectuer une analyse de la constante de ressort moléculaire à l’aide de BFP. Nous prévoyons que des efforts futurs seront déployés pour automatiser et intégrer l’acquisition de données BFP et l’analyse DFS dans un seul programme de repos informatique. Rendre l’ensemble de l’analyse des données d’exploitation BFP plus convivial et plus élevé tout au long.
