このビデオでは、バイオメンブレンフォースプローブ(BFP)を使用して分子ばね定数を測定する方法を段階的に説明します。力プローブでは、BFPは最近、ネイティブの細胞表面またはSITUダイナミックフォース分光分析で出現しました。この技術の主な目的は、単一分子結合遺伝学を測定することである。
このデータ分析手順は、単純だが強力なメッセージであり、機械的な情報、特に細胞膜発現分子の動的な力および炎症を提供する。BFP実験サイクル中、プローブマイクロバイオームは赤血球と検認物でベットし、標的細胞とリガンド受容体受容体とプローブと標的との間の分子結合は、一連の接続された脳系と考えることができる。フックの法則に基づいて、接続されたばね系のスプリングの全定数の逆数は、式が示すように、各単一成分の逆ばね定数の合計に等しくなります。
赤血球のばね定数は、オリフィス中のプローブマイクロピペットの放射状に依存する事象運動に基づいて計算される。赤血球とは、赤血球と検認とマイクロピペット吸引圧との間の円形接触領域である。BFP道路データは、パトランスレータによるターゲットマイクロピペットの動きを制御する自家製左ビュー仮想機器によって取得されます。
PFPの完全な接触周期は5つの段階から成っている。アプローチ.Impinge.Contact. 撤回し、解き直す。最初は、ロブスト APICS の位置が黒色のデシャインで 0 と等しいと示される応力は発生します。
ターゲットは、負の検認運動を引き起こすためにrobustoを衝突させ、圧縮するためにピースまたは翻訳者によって駆動されます。赤い破線では、ゼロより小さい X として注意してください。リトラクト段階では、赤いバスの頂点がXから0未満の位置から、圧縮相と呼ばれるゼロ位置に等しいXに戻ります。
リガンド受容体分子複合体との間に結合が形成される場合、赤血球は他の正方向とはさらに異なるだろう。このXはゼロより大きい周期を、引っ込みステージの引張フェーズと呼ぶ。リトラクトステージは、結合の分子のばね定数を決定する最も重要な部分です。
BSPデータ取得プラットフォームを使用して、フォース対タイムロードデータを収集します。各実験は、通常、50〜200のタッチサイクルを記録し、PFPデータ分析ソフトウェアを開きます。黄色のフォルダアイコンをクリックし、それらをダブルクリックして、対応する行データファイルを選択します。
私たちはプログラムに参加しています。次に、上下の矢印ボタンをクリックして、イベントを切り替えます。外れ値除外条件を使用して無効なイベントを除外する。
強制的に時間形式に設定されているエクスポート データ型を選択し、適切な状態の時間範囲を選択します。[印刷データのエクスポート] ボタンをクリックします。エクスポートされたデータは、デフォルトでテキストファイルとして保存されます。
このテキスト ファイルには、2 列のデータが含まれています。これは、時間パパを表す最初の列と、各時点で対応する力を表す2番目の列です。スプレッドシート ソフトウェアを使用してフォース対時間曲線をプロットし、強制対変位曲線を取得します。
各データポイントの時間値にウィロー鋼の PSO ムーブメントを掛けます。各データ ポイントから最小の変位値を差し引いて、最初のデータ ポイントをゼロにします。この水平変換は、後続のばね定数計算には影響しません。
力対変位曲線では、新しい力の傾きを識別できる場合、2つの異なるアクターグループが異なっていました。それぞれ圧縮相と 10 スタイルのフェーズを表します。回帰直線を各データ グループに適合します。
傾斜が急なラインは、K1 と表記されたコンプレッサフェーズでのスプリングの合計定数を表します。そして、最も小さい上にあった線は、私が言及した K2.As として示されるこの10スタイルの相の線を表し、総ばね定数は各成分の系列ばね定数の息子の逆数です。拍細胞モードの圧縮相の間、分子結合は伸ばされず、従って分子結合ばね定数は考慮されない。ターゲットセルのばね定数は、K1が圧縮相中の総ばね定数を表す式として記述される。
ビートの10スタイルのフェーズでは、売りモードで、総ばね定数は赤血球分子結合のuverseばね定数の太陽である。そして、標的細胞と、表示された式を用いて、分子結合ばね定数を計算し、K2は全ばね定数を表す。10 ストップ フェーズを読みます。
拍動モードでは、B変形が無視可能であるため、ターゲット細胞ばね定数の逆値を記述する用語はゼロに近づき、したがって圧縮機相における総ばね定数は、次式として示す赤血球ばね定数と同等である。引張相において、分子結合のばね定数は、次式として示す赤血球の効果を減算して算出できる。側風積分姿勢B、β3複合体、K562細胞及びフェブリフジン積分態度Bβ3複合体のばね定数を収集し、ニュートンまたはナノメートルスケールをピックして導出されたばね定数の平均と標準偏差を算出する。
これで、VFD データから一定の測定とスプリングの要件が何であるかをより深く理解する必要があります。ビート・ビト・セル・モードとビート・モードの違いは注目すべきです。異なる分子提示サービスは、ばね定数の尺度とは異なる防御を有するであろう。
結論として、このステップバイステップの手順は、BFPを使用して分子ばね定数分析を行う方法を説明しています。今後、BFPデータ取得とDFS解析を1つのコンピュータ・レスト・プログラムに自動化・統合する取り組みが行われると見ています。全体のBFP操作データ分析をよりユーザーフレンドリーで高い全体を実現します。
