Le foie est un site principal de transplantation dans le cadre clinique de l’îlot humain. La transplantation d’îlots intrahépatiques de souris est techniquement difficile, et un pourcentage élevé de souris pourraient mourir de complications chirurgicales, en particulier de saignements. Dans cette étude, les deux méthodes que nous avons montrées pouvaient prévenir efficacement la mort de souris induite par les saignements.
Notre méthode peut être appliquée à la recherche sur le cancer du foie et d’autres maladies du foie en permettant l’injection de cellules cancéreuses, de cellules souches mésenchymateuses et d’hépatocytes directement dans le foie. Pour commencer, détachez une culture d’îlots humains avec un grattage doux. Utilisez une seringue de 1 centimètre cube pour ramasser 300 à 350 îlots dans des tubes stériles de microcentrifugation de 1,5 millilitre sur de la glace.
Lorsque tous les îlots ont été prélevés, centrifugez les tubes pendant 10 secondes pour sédimenter les cellules. Jetez tout sauf un petit volume de surnageant pour éviter la perte de granulés et remettez en suspension les îlots dans 200 microlitres HBSS contenant 5% de BSA. Chargez les îlots remis en suspension dans une seringue à insuline de 5 millilitres et tournez l’aiguille de la seringue pendant 1 minute pour laisser les îlots se déposer au niveau du piston.
Appuyez sur le piston pour éliminer les bulles, en gardant environ 100 à 150 microlitres de solution dans la seringue et inversez la seringue en tapotant doucement pour répartir uniformément les îlots. Après avoir confirmé un manque de réponse au réflexe de pédale, appliquez une pommade sur les yeux pour éviter le dessèchement. Rasez l’abdomen de la souris anesthésiée pour enlever la fourrure et désinfectez la zone chirurgicale avec trois lingettes alternées de 2% d’iode et 75% d’alcool.
Ensuite, faites une incision de 1 à 1,5 centimètre dans l’abdomen et ouvrez la cavité péritonéale. Placez un morceau de gaze stérile autour de l’incision et utilisez des pinces ou des pointes de coton pour transférer doucement l’intestin sur la gaze. Ils recouvrent ensuite l’intestin d’un morceau de gaze imbibée de solution saline et exposent la veine porte.
Pour arrêter les saignements induits par le transfert d’îlots à l’aide de mousse de gel, tenez l’aiguille avec le biseau tourné vers le bas et positionnez la pointe de l’aiguille avec l’ouverture parallèle à la paroi de la veine porte avant d’insérer l’aiguille dans la veine porte. Rétractez le piston pour aspirer 20 à 50 microlitres de sang dans la seringue pour le mélanger avec les îlots avant d’infuser les îlots dans la veine porte tout en appuyant et en rétractant à plusieurs reprises le piston. Lorsque tous les îlots ont été livrés, placez un morceau de mousse de gel d’environ 5 x 5 centimètres sur le site d’injection.
Utilisez une pointe en coton pour presser la mousse de gel vers le bas tout en retirant l’aiguille de la veine porte. Maintenez le gel en place pendant environ 2 minutes, en roulant la mousse de gel pour vous assurer qu’elle recouvre la veine porte. Une fois le saignement arrêté, ramenez doucement l’intestin dans la cavité péritonéale dans la position d’origine et injectez 500 microlitres de solution saline chaude dans la cavité abdominale.
Utilisez des sutures pour fermer les couches musculaires et cutanées. Ensuite, placez la souris dans une cage propre sur un coussin chauffant avec surveillance jusqu’à récupération complète de l’anesthésie, en administrant une analgésie toutes les 12 heures et en chauffant pendant 48 heures. Pour arrêter les saignements induits par le transfert d’îlots à l’aide d’un coussinet adipeux, après avoir exposé la veine porte comme démontré, utilisez deux pointes de coton pour maintenir la veine exposée sur les côtés gauche et droit et localiser le coussinet de tissu adipeux entre le duodénum et la veine porte.
Pénètrez dans le coussinet adipeux avec la pointe de l’aiguille avant de l’insérer dans la veine porte. Infuser les îlots dans la veine porte comme démontré. Lorsque tous les îlots ont été livrés, appuyez sur le tissu adipeux avec une pointe en coton pendant environ 1 minute tout en retirant l’aiguille de la veine.
Ensuite, retournez l’intestin dans la cavité abdominale et effectuez le reste des procédures de soins postchirurgicaux comme démontré. Les effets de la transplantation d’îlots dépendent de la dose, car une glycémie normale est observée 30 jours après la transplantation d’îlots syngéniques lorsque 500 îlots sont transférés, mais seule une normoglycémie transitoire est observée lorsque 250 îlots sont livrés, les souris revenant à l’hyperglycémie 10 jours après la greffe. Une augmentation du poids corporel est observée dans les deux groupes et des réponses identiques sont observées lorsque des îlots humains sont transplantés dans des souris NOD-SCID diabétiques, avec une normoglycémie observée lorsqu’un plus grand nombre d’équivalents d’îlots sont transplantés, mais pas un nombre plus petit.
La majorité des souris qui ont des saignements après le transfert meurent après la chirurgie, tandis que les souris sans saignement survivent. 28 jours après la transplantation, la coloration à l’insuline révèle une distribution uniforme de l’îlot humain dans tout le foie, principalement à proximité des vaisseaux sanguins. En plus de l’insuline, la filtration cellulaire de la fibrine et des cellules polymorphonucléaires est également observée dans les îlots humains transplantés.
La transplantation intrahépatique d’îlots générera un grand trou dans la veine porte qui peut provoquer des saignements. L’utilisation de nos deux procédures améliorées peut prévenir les saignements et réduire la mortalité après la transplantation d’îlots. Le modèle de transplantation d’îlots intraportail peut imiter la transplantation clinique d’îlots humains.
Nos procédures affinées peuvent conduire à des taux de survie plus élevés pour les receveurs, ce qui permet une étude plus approfondie de la fonction des îlots après la transplantation.
