Trois expériences cliniques ont suggéré que la transplantation de microbiote fécal a le potentiel thérapeutique d’un certain nombre de maladies humaines. D’autres études mécanistes aideront à faire passer la FMT du laboratoire au chevet du patient. Cette méthode adopte le gavage oral pour la voie de livraison, permettant une livraison de volume plus précise et une absorption rapide.
Il ne nécessite que des compétences techniques modérées. Xioying Zhong, un associé de recherche principal de notre laboratoire, fera la démonstration de la procédure. Commencez par préparer des serviettes en papier stériles, des pinces à extrémité émoussée et des tubes coniques de 50 millilitres.
Placez des serviettes en papier et des pinces dans des sacs d’autoclave séparés et autoclavez-les à 180 degrés Celsius à la chaleur sèche pendant 30 minutes. Pesez les tubes coniques stériles et notez leur poids sur les tubes. Allumez l’armoire de biosécurité dans la salle animalière.
Prenez une cage à souris propre autoclavée sans litière et placez-la dans l’armoire de biosécurité. Retirez le couvercle et la grille à nourriture et placez-les à l’intérieur de l’armoire. Placez des serviettes en papier stériles au fond de la cage et replacez la grille métallique sur le dessus de la cage.
Identifiez les donneurs fécaux appariés selon l’âge et placez la cage de la souris dans l’enceinte de biosécurité. Ouvrez la cage et attrapez doucement une souris donneuse par la queue et placez-la sur le support métallique au-dessus de la cage propre. Placez le couvercle de la cage sur le dessus du support et attendez que l’animal défèque.
Recueillez les granulés fécaux et mettez-les dans un tube conique stérile de 50 millilitres. Tirez les granulés par sexe. Pesez à nouveau le tube et calculez le poids des granulés fécaux.
Préparez une solution stérile en ajoutant une solution de glycérol à 10% à une solution saline normale. Ajouter 10 millilitres de cette solution dans le tube conique pour chaque gramme de granulés fécaux. Homogénéiser ce mélange à basse vitesse trois fois pendant 30 secondes à l’aide d’un homogénéisateur de paillasse à l’intérieur d’une hotte pour remettre les matières fécales en suspension.
Filtrer la suspension fécale à travers deux couches de gaze de coton stérile. Conservez temporairement le filtrat au réfrigérateur jusqu’à six heures ou emballez-le dans des flacons cryogéniques stériles et conservez-le dans un congélateur à moins 80 degrés. Nettoyez soigneusement l’homogénéisateur ou le mélangeur en suivant une procédure standard.
Décongeler la suspension fécale congelée sur la glace si vous utilisez des échantillons congelés. Mélanger la suspension fécale décongelée par vortex. Transférer la suspension fécale fraîche ou décongelée dans des seringues d’un millilitre.
Pesez les souris et choisissez la bonne taille d’aiguille de gavage et le volume de dosage maximal. Testez l’aiguille de gavage en mesurant la longueur du bout du nez de la souris au bas du sternum. Remplissez la seringue avec 10% de glycérol dans une suspension saline ou fécale et éliminez les bulles d’air à l’intérieur de la seringue et de l’aiguille.
Placez une cage de souris dans l’enceinte de biosécurité. Retirez le couvercle de la cage en plastique et laissez le support métallique en place. Ouvrez le rack métallique d’une seule main.
Attrapez une souris par la queue et mettez-la sur le support en métal. Tenez la souris par la queue d’une main et utilisez le pouce et le majeur d’une autre main pour retenir l’animal en saisissant la peau par-dessus les épaules. Étendez doucement la tête de l’animal vers l’arrière et maintenez la tête en place d’une main.
Placez l’aiguille de gavage sur le dessus de la langue à l’intérieur de la bouche. Avancez doucement le long de la palette supérieure jusqu’à ce que l’aiguille atteigne l’œsophage. Passez l’aiguille en douceur en un seul mouvement.
Une fois que l’aiguille est correctement placée et vérifiée, administrez lentement le matériel en poussant la seringue attachée à l’aiguille. Après le dosage, retirez doucement l’aiguille. Marquez la souris et remettez-la dans sa cage d’origine.
Surveillez l’animal pendant cinq à 10 minutes en recherchant des signes de respiration laborieuse ou de détresse. Surveiller à nouveau les souris entre 12 et 24 heures après la transplantation du microbiote fécal. Le dosage immunoenzymatique a révélé que le peptide natriurétique de type B était nettement élevé dans le plasma de souris déficientes en interleukine 10.
Une transplantation de microbiote fécal de donneur sain a significativement atténué l’augmentation des taux de peptides natriurétiques de type B. L’échocardiographie a détecté une diminution significative de la fraction d’éjection du ventricule gauche chez les souris déficientes en interleukine 10 par rapport aux souris de type sauvage. La diminution a été significativement abrogée par la transplantation de microbiote fécal.
Ces résultats suggèrent que la transplantation de microbiote fécal en bonne santé a atténué l’insuffisance cardiaque induite par la colite. Lorsque vous essayez le protocole, il est essentiel de choisir la bonne aiguille de gavage. Les sondes d’alimentation en plastique flexible pourraient être un meilleur choix pour les débutants.
Il est également important de pratiquer la manipulation des animaux avant le gavage.
