اقترحت ثلاث تجارب سريرية أن زرع الميكروبات البرازية يحمل الإمكانات العلاجية لعدد من الأمراض البشرية. ستساعد المزيد من الدراسات الميكانيكية في جلب FMT من مقاعد البدلاء إلى جانب السرير. تعتمد هذه الطريقة على gavage عن طريق الفم لطريق التسليم ، مما يسمح بتسليم حجم أكثر دقة وامتصاص سريع.
لا يتطلب سوى مهارات تقنية معتدلة. سيوضح الإجراء Xioying Zhong ، وهو باحث مشارك كبير من مختبرنا. ابدأ بإعداد مناشف ورقية معقمة وملقط حاد النهاية وأنابيب مخروطية سعة 50 ملليلتر.
ضع بعض المناشف الورقية والملقط في أكياس الأوتوكلاف المنفصلة وأوتوكلاف عليها عند 180 درجة مئوية في حرارة جافة لمدة 30 دقيقة. وزن الأنابيب المخروطية المعقمة وكتابة وزنها على الأنابيب. قم بتشغيل خزانة السلامة البيولوجية في غرفة الحيوان.
خذ قفص ماوس نظيف معقم بدون أي فراش وضعه في خزانة السلامة البيولوجية. قم بإزالة الغطاء ورف الطعام وضعهما داخل الخزانة. ضع بعض المناشف الورقية المعقمة في أسفل القفص ، وضع الرف المعدني مرة أخرى أعلى القفص.
تحديد المتبرعين بالبراز المتطابقين مع العمر ووضع قفص الماوس في خزانة السلامة الأحيائية. افتح القفص وأمسك بفأر مانح بلطف من الذيل وضعه على الرف المعدني أعلى القفص النظيف. ضع غطاء القفص أعلى الرف وانتظر حتى يتغوط الحيوان.
جمع الكريات البرازية ووضعها في أنبوب مخروطي معقم 50 ملليلتر. اسحب الكريات حسب الجنس. وزن الأنبوب مرة أخرى وحساب وزن الكريات البراز.
تحضير محلول معقم عن طريق إضافة محلول الجلسرين 10٪ إلى محلول ملحي طبيعي. أضف 10 ملليلتر من هذا المحلول إلى الأنبوب المخروطي لكل غرام من كريات البراز. قم بتجانس هذا الخليط بسرعة منخفضة ثلاث مرات لمدة 30 ثانية باستخدام مجانس على الطاولة داخل غطاء الدخان لإعادة تعليق البراز.
قم بتصفية التعليق البرازي من خلال طبقتين من الشاش القطني المعقم. قم بتخزين الترشيح مؤقتا في الثلاجة لمدة تصل إلى ست ساعات ، أو قم بتعبئته في قوارير مبردة معقمة وتخزينها في فريزر 80 درجة تحت الصفر. نظف المجانس أو الخلاط جيدا باتباع إجراء قياسي.
قم بإذابة تعليق البراز المجمد على الجليد إذا كنت تستخدم عينات مجمدة. امزج تعليق البراز المذاب عن طريق الدوامة. انقل تعليق البراز الطازج أو الذائب إلى محاقن ملليلتر واحدة.
وزن الفئران واختيار حجم إبرة gavage المناسب والحد الأقصى لحجم الجرعة. اختبر إبرة الجافاج عن طريق قياس الطول من طرف أنف الفأر إلى أسفل القص. املأ المحقنة بالجلسرين بنسبة 10٪ في تعليق ملحي أو برازي وقم بإزالة فقاعات الهواء داخل المحقنة والإبرة.
ضع قفصا ماوس واحدا في خزانة السلامة الأحيائية. قم بإزالة غطاء القفص البلاستيكي واترك الرف المعدني في مكانه. افتح الرف المعدني بيد واحدة.
أمسك بفأرة واحدة من الذيل وضعها على الرف المعدني. امسك الماوس من الذيل بيد واحدة واستخدم الإبهام والأصابع الوسطى ليد أخرى لكبح جماح الحيوان عن طريق الإمساك بالجلد على الكتفين. مد رأس الحيوان بلطف إلى الوراء وأمسك الرأس في مكانه بيد واحدة.
ضع إبرة الغافاج فوق اللسان داخل الفم. تقدم بلطف على طول البليت العلوي حتى تصل الإبرة إلى المريء. مرر الإبرة بسلاسة في حركة واحدة.
بمجرد وضع الإبرة والتحقق منها بشكل صحيح ، قم بإدارة المادة ببطء عن طريق دفع المحقنة المتصلة بالإبرة. بعد الجرعات ، اسحب الإبرة برفق. ضع علامة على الماوس وأعده إلى قفصه المنزلي.
راقب الحيوان لمدة خمس إلى 10 دقائق من خلال البحث عن علامات التنفس الشاق أو الضيق. راقب الفئران مرة أخرى بين 12 إلى 24 ساعة بعد زرع الميكروبات البرازية. كشفت المقايسة المناعية للإنزيم أن الببتيد الناتريوتريك من النوع B كان مرتفعا بشكل ملحوظ في بلازما الفئران الناقصة من الإنترلوكين 10.
خففت عملية زرع الميكروبات البرازية من متبرع صحي بشكل كبير من الزيادة في مستويات الببتيد الناتريوتريك من النوع B. كشف تخطيط صدى القلب عن انخفاض كبير في جزء طرد البطين الأيسر في الفئران الناقصة إنترلوكين 10 مقارنة بالفئران من النوع البري. تم إلغاء الانخفاض بشكل كبير عن طريق زرع الميكروبات البرازية.
تشير هذه النتائج إلى أن زرع الميكروبات البرازية من متبرع سليم خفف من التهاب القولون الناجم عن ضعف القلب. عند محاولة البروتوكول ، يعد اختيار إبرة gavage المناسبة أمرا ضروريا. يمكن أن تكون أنابيب التغذية البلاستيكية المرنة خيارا أفضل للمبتدئين.
من المهم أيضا ممارسة التعامل مع الحيوانات قبل gavage.
