שלושה ניסויים קליניים הצביעו על כך שהשתלת מיקרוביוטה בצואה נושאת פוטנציאל טיפולי למספר מחלות אנושיות. מחקרים מכניסטיים נוספים יעזרו להביא את FMT מהספסל לצד המיטה. שיטה זו מאמצת את ההזנה האוראלית למסלול הלידה, ומאפשרת משלוח נפח מדויק יותר וספיגה מהירה.
זה דורש רק מיומנויות טכניות מתונות. מי שידגים את ההליך יהיה Xioying Zhong, עמית מחקר בכיר מהמעבדה שלנו. התחילו בהכנת מגבות נייר סטריליות, מלקחיים קהים וצינורות חרוטיים של 50 מיליליטר.
הניחו כמה מגבות נייר ומלקחיים בשקיות אוטוקלאב נפרדות והכניסו אותן ל-180 מעלות צלזיוס בחום יבש למשך 30 דקות. שוקלים את הצינורות החרוטיים הסטריליים ורושמים את משקלם על הצינורות. הפעל את ארון הבטיחות הביולוגית בחדר החיות.
קחו כלוב עכברים נקי ללא מצעים והניחו אותו בארון הבטיחות הביולוגית. הסירו את הכיסוי ואת מדף המזון והניחו אותם בתוך הארון. הניחו כמה מגבות נייר סטריליות בתחתית הכלוב, והניחו את מתלה המתכת בחזרה על גבי הכלוב.
זהה תורמי צואה תואמי גיל והנח את כלוב העכברים בארון הבטיחות הביולוגית. פתחו את הכלוב ותפסו בעדינות עכבר תורם בזנב והניחו אותו על מתלה המתכת שעל גבי הכלוב הנקי. הניחו את כיסוי הכלוב על גבי המדף והמתינו שהחיה תעשה את צרכיה.
לאסוף את כדורי צואה ולשים אותם צינור חרוטי סטרילי 50 מיליליטר. משוך את הכדורים לפי מין. שוקלים את הצינור שוב ומחשבים את משקל כדורי הצואה.
הכינו תמיסה סטרילית על ידי הוספת תמיסת 10% גליצרול לתמיסת מלח רגילה. הוסף 10 מיליליטר של תמיסה זו לצינור החרוטי עבור כל גרם של כדורי צואה. הומוגניות תערובת זו במהירות נמוכה שלוש פעמים במשך 30 שניות באמצעות הומוגנייזר ספסל בתוך מכסה אדים כדי להחיות את הצואה.
מסננים את תרחיף הצואה דרך שתי שכבות של גזה כותנה סטרילית. אחסנו את התסנין באופן זמני במקרר למשך עד שש שעות, או ארזו אותו בבקבוקונים קריוגניים סטריליים ואחסנו אותו במקפיא של מינוס 80 מעלות. נקו היטב את ההומוגנייזר או הבלנדר לאחר הליך סטנדרטי.
הפשירו את תרחיף הצואה הקפוא על הקרח אם משתמשים בדגימות קפואות. מערבבים את מתלי הצואה המופשרים על ידי מערבולת. מעבירים את תרחיף הצואה הטרי או ההפשרה למזרקי מיליליטר אחד.
שקלו את העכברים ובחרו את גודל מחט הגבאג' הנכון ואת נפח המינון המרבי. בדוק את מחט הגבייה על ידי מדידת האורך מקצה אפו של העכבר ועד לתחתית עצם החזה. מלאו את המזרק ב-10% גליצרול בתרחיף מלח או צואה והסירו בועות אוויר בתוך המזרק והמחט.
הניחו כלוב עכברים אחד בארון ה-biosafety. הסירו את כיסוי כלוב הפלסטיק והשאירו את מתלה המתכת במקומו. פתח את מתלה המתכת ביד אחת.
תפוס עכבר אחד בזנב והנח אותו על מתלה המתכת. החזק את העכבר ליד הזנב ביד אחת והשתמש באגודל ובאצבעות האמצעיות של יד אחרת כדי לרסן את החיה על ידי אחיזת העור מעל הכתפיים. הרחיבו בעדינות את ראש החיה לאחור והחזיקו את הראש במקומו ביד אחת.
מניחים את מחט הגבאג' על גבי הלשון בתוך הפה. מתקדמים בעדינות לאורך המשטח העליון עד שהמחט מגיעה לוושט. מעבירים את המחט בצורה חלקה בתנועה אחת.
לאחר שהמחט ממוקמת כראוי ומאומתת, נהל לאט את החומר על ידי דחיפת המזרק המחובר למחט. לאחר המינון, משכו בעדינות את המחט החוצה. סמן את העכבר והחזיר אותו לכלוב הביתי שלו.
עקוב אחר בעל החיים במשך חמש עד 10 דקות על ידי חיפוש סימנים של נשימה מאומצת או מצוקה. עקוב אחר העכברים שוב בין 12 ל -24 שעות לאחר השתלת מיקרוביוטה צואה. אנזים אימונואסאי גילה כי פפטיד נטריורטי מסוג B היה גבוה במידה ניכרת בפלזמה של אינטרלוקין 10 עכברים חסרים.
השתלת מיקרוביוטה צואתית של תורם בריא הפחיתה באופן משמעותי את העלייה ברמות הפפטידים הנטריורטיים מסוג B. אקוקרדיוגרפיה זיהתה ירידה משמעותית בחלק הפליטה של החדר השמאלי בעכברים הסובלים ממחסור באינטרלוקין 10 בהשוואה לעכברים מסוג בר. הירידה בוטלה באופן משמעותי על ידי השתלת מיקרוביוטה של צואה.
ממצאים אלה מצביעים על כך שהשתלת מיקרוביוטה של צואה מתורם בריא הפחיתה את הפגיעה בקוליטיס. כאשר מנסים את הפרוטוקול, בחירת מחט הגבייה הנכונה היא חיונית. צינורות הזנה גמישים מפלסטיק יכולים להיות בחירה טובה יותר למתחילים.
חשוב גם לתרגל טיפול בבעלי חיים לפני ההגייה.
