Tre esperimenti clinici hanno suggerito che il trapianto di microbiota fecale ha il potenziale terapeutico per un certo numero di malattie umane. Ulteriori studi meccanicistici aiuteranno a portare l'FMT dal banco al capezzale. Questo metodo adotta il gavage orale per il percorso di consegna, consentendo una consegna del volume più precisa e un rapido assorbimento.
Richiede solo competenze tecniche moderate. A dimostrare la procedura sarà Xioying Zhong, un ricercatore senior associato del nostro laboratorio. Inizia preparando asciugamani di carta sterili, pinze smussate e tubi conici da 50 millilitri.
Mettere alcuni tovaglioli di carta e pinze in sacchetti separati per autoclave e autoclavarli a 180 gradi Celsius a fuoco secco per 30 minuti. Pesare i tubi conici sterili e annotare il loro peso sui tubi. Accendi l'armadietto di biosicurezza nella stanza degli animali.
Prendi una gabbia per topi pulita autoclavata senza lettiera e mettila nell'armadio di biosicurezza. Rimuovere il coperchio e il portacibo e posizionarli all'interno dell'armadietto. Posizionare alcuni tovaglioli di carta sterili sul fondo della gabbia e riposizionare il rack di metallo sopra la gabbia.
Identificare i donatori fecali corrispondenti all'età e posizionare la gabbia del topo nell'armadietto di biosicurezza. Apri la gabbia e afferra delicatamente un topo donatore per la coda e posizionalo sulla rastrelliera metallica sopra la gabbia pulita. Posizionare il coperchio della gabbia sopra il rack e attendere che l'animale defechi.
Raccogliere i pellet fecali e metterli in un tubo conico sterile da 50 millilitri. Tirare i pellet per sesso. Pesare nuovamente il tubo e calcolare il peso dei pellet fecali.
Preparare una soluzione sterile aggiungendo una soluzione di glicerolo al 10% alla soluzione salina normale. Aggiungere 10 millilitri di questa soluzione al tubo conico per ogni grammo di pellet fecali. Omogeneizzare questa miscela a bassa velocità tre volte per 30 secondi utilizzando un omogeneizzatore da banco all'interno di una cappa aspirante per risospendere le feci.
Filtrare la sospensione fecale attraverso due strati di garza di cotone sterile. Conservare temporaneamente il filtrato in frigorifero per un massimo di sei ore o confezionarlo in flaconcini criogenici sterili e conservarlo in un congelatore a meno 80 gradi. Pulire accuratamente l'omogeneizzatore o il frullatore seguendo una procedura standard.
Scongelare la sospensione fecale congelata sul ghiaccio se si utilizzano campioni congelati. Mescolare la sospensione fecale scongelata mediante vortice. Trasferire la sospensione fecale fresca o scongelata in siringhe da un millilitro.
Pesare i topi e scegliere la giusta dimensione dell'ago gastrico e il volume massimo di dosaggio. Testare l'ago gastrico misurando la lunghezza dalla punta del naso del topo al fondo dello sterno. Riempire la siringa con glicerolo al 10% in sospensione salina o fecale e rimuovere le bolle d'aria all'interno della siringa e dell'ago.
Posizionare una gabbia per topi nell'armadio di biosicurezza. Rimuovere il coperchio della gabbia di plastica e lasciare il rack metallico in posizione. Aprire il rack di metallo con una mano.
Prendi un mouse per la coda e mettilo sul rack di metallo. Tieni il mouse per la coda con una mano e usa il pollice e il medio di un'altra mano per trattenere l'animale afferrando la pelle sopra le spalle. Estendi delicatamente la testa dell'animale all'indietro e tieni la testa in posizione con una mano.
Posizionare l'ago di gavage sulla parte superiore della lingua all'interno della bocca. Avanzare delicatamente lungo il pallet superiore fino a quando l'ago raggiunge l'esofago. Passare l'ago senza intoppi in un solo movimento.
Una volta che l'ago è posizionato correttamente e verificato, somministrare lentamente il materiale spingendo la siringa attaccata all'ago. Dopo la somministrazione, estrarre delicatamente l'ago. Segna il mouse e riportalo nella sua gabbia di casa.
Monitorare l'animale per cinque o 10 minuti cercando segni di respiro affannoso o angoscia. Monitorare nuovamente i topi tra 12 e 24 ore dopo il trapianto di microbiota fecale. Il test immunoenzimatico ha rivelato che il peptide natriuretico di tipo B era marcatamente elevato nel plasma di topi carenti di interleuchina 10.
Un trapianto di microbiota fecale sano di un donatore ha mitigato significativamente l'aumento dei livelli di peptide natriuretico di tipo B. L'ecocardiografia ha rilevato una significativa diminuzione della frazione di eiezione del ventricolo sinistro nei topi carenti di interleuchina 10 rispetto ai topi di tipo selvatico. La diminuzione è stata significativamente abrogata dal trapianto di microbiota fecale.
Questi risultati suggeriscono che il trapianto di microbiota fecale di donatore sano ha mitigato la compromissione cardiaca indotta dalla colite. Quando si tenta il protocollo, la scelta dell'ago gavage giusto è essenziale. I tubi di alimentazione in plastica flessibili potrebbero essere una scelta migliore per i principianti.
È anche importante praticare la manipolazione degli animali prima del gavage.
