En appliquant directement de l’insecticide sur l’insecte plutôt que par contact avec la surface, il y a une variation minime de l’exposition aux insecticides, ce qui nous permet de mesurer plus précisément le profil de sensibilité des populations de moustiques. Le principal avantage de cette technique est qu’elle nous permet de calculer les doses létales relativisées en masse d’un insecticide plutôt que les concentrations létales, ce qui améliore considérablement les comparaisons de rapports de résistance. Veillez à bien entreposer les insecticides, évitez de contaminer vos outils et assurez-vous que les pièces de la seringue sont en bon état.
Cela vous aidera à obtenir des résultats cohérents. Pour commencer, retirez les solutions insecticides nécessaires du congélateur. Vaporisez immédiatement la solution en vortex ou inversez-la cinq fois et placez-la dans un récipient résistant à la lumière à température ambiante pour laisser les insecticides se réchauffer à la température ambiante avant de les utiliser.
Posez cinq tubes de microcentrifugation de 0,5 millilitre d’acétone chacun. Remplissez complètement le barillet de la seringue avec de l’acétone du premier tube. Ensuite, expulsez l’acétone dans un conteneur à déchets en appuyant rapidement sur le piston et répétez quatre fois de plus pour effectuer un total de cinq lavages d’acétone à partir de la même aliquote d’acétone.
Ensuite, remplissez complètement le barillet de la seringue avec de l’air et expulsez l’air et les restes potentiels d’acétone dans le conteneur à déchets. Répétez deux autres fois pour effectuer trois lavages à l’air. Créez une poche d’air dans le barillet entre le piston de la seringue et le haut de l’aiguille en tirant le piston vers le haut d’environ cinq millimètres dans le canon.
Étiquetez les gobelets en plastique avec l’ID aléatoire pour l’évaluation de la mortalité à l’aveugle. À l’aide d’un aspirateur alimenté par aspiration par inhalation, aspirez le nombre souhaité de moustiques adultes âgés de trois à cinq jours. Placez la pointe de l’aspirateur dans le tube avec du coton enroulé autour de la pointe.
Expirez doucement et tapotez l’aspirateur pour transférer les moustiques dans un tube conique. Utilisez le coton pour boucher le tube lorsque la pointe de l’aspirateur est retirée, puis coiffer avec le couvercle. Abattre brièvement les moustiques dans les tubes en les plaçant pendant au moins 10 minutes à quatre degrés Celsius ou en les enterrant sous la glace dans un bac à glace.
Transférez les moustiques renversés dans la tente de manipulation des insectes. Basculez soigneusement les moustiques sur un plateau en plastique placé sur la glace et versez environ 50 moustiques à la fois pour vous assurer que chacun touche le plateau frais en dessous et reste renversé. Triez les moustiques par sexe en les ramassant doucement par les jambes ou les ailes avec une pince, puis en plaçant chaque sexe dans une tasse de maintien séparée et arrêtez-vous lorsque le nombre souhaité est atteint.
Lors du tri, enlevez tous les moustiques blessés ou très grands ou petits. Pour enregistrer le poids de la tasse à moustiques, placez une tasse vide avec une boîte de Petri comme couvercle sur la balance et tare la balance. Versez les moustiques dans le récipient et placez le couvercle sur le dessus.
Placez le récipient sur la balance et notez le poids final, ainsi que le nombre de moustiques. Replacez immédiatement la tasse de spécimens sur la glace pour les garder immobilisés jusqu’à ce que toutes les tasses du spécimen soient pesées. Divisez les moustiques préparés en cinq à 10 tasses distinctes placées sur de la glace, étiquetées avec des pièces d’identité aléatoires.
Utilisez une pince à épiler et un compteur portatif pour obtenir 20 à 25 moustiques par tasse. Pour trier les mouches des fruits, anesthésiez les mouches à l’aide de dioxyde de carbone pendant sept secondes. Versez les mouches sur un sac de glace enveloppé dans du papier de banc.
À l’aide d’un pinceau à pointe fine, séparez et comptez les mâles et les femelles. Utilisez le pinceau pour ramasser doucement les mouches choisies et placez-les dans une bouteille propre et vide. Après avoir choisi un nombre égal de mouches des fruits mâles et femelles, étiquetez les bouteilles de stock avec le nom de la souche et le total de la mouche des fruits.
Anesthésiez la bouteille de mouches des fruits en utilisant du dioxyde de carbone pendant sept secondes. Versez les mouches des fruits sur du papier de pesée et utilisez le papier comme entonnoir pour introduire les mouches dans un flacon goudronné étiqueté avec un id aléatoire.Après avoir placé le couvercle de la boîte de Petri sur le flacon de mouches des fruits, placez-le sur la balance. Notez le poids et le nombre combinés de spécimens sur la feuille de pointage.
Placez immédiatement le flacon de mouches des fruits dans un plateau de glace avec le couvercle toujours sur le dessus pour empêcher les mouches de s’échapper. Chargez la seringue avec la concentration d’insecticide appropriée, en commençant par la dose la moins concentrée et travaillez vers la dose la plus concentrée avec chaque groupe d’organismes. Basculez les spécimens sur du papier de pesage placé sur un plateau sur la glace.
Séparez les spécimens qui sont proches les uns des autres à l’aide d’un pinceau propre sans insecticide ou d’un coton-tige pour permettre un accès facile à chaque spécimen pour le dosage. À l’aide de la seringue, appliquez une gouttelette de solution insecticide sur le thorax ventral et l’abdomen pour les moustiques et le dos pour les mouches des fruits. Versez immédiatement les spécimens dans le gobelet en plastique étiqueté.
Couvrez la tasse avec un filet et un élastique. Notez un nombre de spécimens mis à jour sur la tasse si des spécimens ont été tués, endommagés ou échappés au cours de ce processus. Placez la tasse terminée dans un plateau de maintien.
Pour la première tasse, notez l’heure à laquelle le dosage est terminé. Répétez le dosage pour chaque tasse jusqu’à ce que tous les échantillons aient été dosés avec les concentrations d’insecticide appropriées, et notez l’heure de fin lorsque tous les échantillons ont été dosés. Fournir une solution de saccharose à 10% à chaque tasse via une boule de coton humide et stocker les moustiques et les mouches des fruits à la température et à l’humidité souhaitées.
Enregistrer la mortalité des échantillons 24 heures après le début de l’exposition à l’insecticide. Classez les moustiques comme vivants s’ils peuvent voler et se tenir debout et morts s’ils sont immobiles ou ataxiques, comme décrit par l’OMS. Suivez la même évaluation de la mortalité pour les mouches des fruits.
Après avoir effectué le bioessai, des données dose-réponse ont été obtenues avec deux souches de génotype Rockefeller et IICC pour le mâle et le femelle Aedes aegypti. La dose létale médiane relativisée en masse pour Rockefeller et IICC était de 0,008 et 0,336 nanogramme par milligramme, respectivement. Les résultats n’ont révélé aucune différence entre les courbes dose-réponse des moustiques femelles et mâles au sein de chaque souche.
Par conséquent, les données des deux sexes ont été combinées pour calculer les valeurs médianes de la dose létale. Étant donné que les intervalles de confiance à 95 % pour la dose létale médiane de ces deux souches ne se chevauchaient pas, ces valeurs ont été considérées comme significativement différentes. De plus, lors du calcul des rapports de résistance, la souche IICC était plus de 40 fois plus résistante que la souche Rockefeller sensible.
Des données dose-réponse pour la mouche des fruits, Drosophila melanogaster, souche Canton-S, ont également été obtenues, et la dose létale médiane relativisée en masse s’est avérée être de 0,213 nanogramme par milligramme. La cohérence est essentielle, en particulier lors de l’entreposage et de l’application de l’insecticide et de l’évaluation de la mortalité. De plus, faites attention lors de la manipulation de l’échantillon pour éviter les dommages ou la mort non induits par l’insecticide.
Avec cette méthode, nous pouvons maintenant déterminer avec précision la résistance technique d’une population de moustiques et comment les conditions environnementales ont un impact sur la résistance ou comment la résistance technique prédit la résistance pratique.
