Ce protocole décrit un grand modèle animal de don après mort circulatoire suivi d’une perfusion régionale normothermique thoraco-abdominale qui imite précisément la transplantation cardiaque clinique. Cela pourrait être utilisé pour évaluer les stratégies potentielles dans la recherche translationnelle. Le principal avantage de ce protocole est qu’il fournit un modèle préclinique approprié pour la transplantation cardiaque compte tenu des similitudes anatomiques et chirurgicales entre les porcs sangliers et les cœurs humains.
Commencez par utiliser un stylo cautérisé pour effectuer une incision médiane sur un animal anesthésié de la région médiane cervicale à la xiphoïde. Ensuite, divisez la graisse sous-cutanée, couche par couche, le long de la ligne médiane en utilisant l’électrocautérisation pour atteindre le péristernum. Après avoir coupé autour de l’encoche sternale, utilisez un doigt pour rétracter et balayer les tissus mous sous le sternum.
Ouvrez le sternum avec une scie à os, en veillant à ce que le sternum soit complètement divisé, tout en faisant attention à la veine située sous la partie supérieure de l’os sternal. Ensuite, cautériser le sternum ou appliquer de la cire d’os pour assurer une hémostase adéquate. Ensuite, à l’aide de l’électrocautérisation, disséquez et retirez le thymus en le soulevant du péricarde et cautériser les vaisseaux qui alimentent le thymus de l’aorte et de la veine cave supérieure pour prévenir les saignements.
Coupez soigneusement le péricarde ouvert avec cautérisation. Pendant la coupe, insérez les doigts sous le péricarde pour éviter les blessures au cœur. Ensuite, administrer 300 unités par kilogramme d’héparine par voie intraveineuse pour obtenir une anticoagulation systémique.
Si le test est disponible, assurez-vous que le temps de coagulation activé est supérieur à 300 secondes. Administrer un bolus de trois milligrammes par kilogramme de propofol par voie intraveineuse. Ensuite, arrêtez la ventilation mécanique et débranchez le tube endotrachéal.
Surveiller la pression artérielle et la saturation périphérique en oxygène. Lorsque la pression systolique est inférieure à 50 millimètres de mercure, commencez le temps d’ischémie chaude fonctionnelle. Établir un arrêt circulatoire en cas d’asystole et d’absence de pulsatilité artérielle.
Après l’arrêt des thérapies de maintien de la vie et la confirmation du décès, rétracter le ventricule droit vers le bas, l’artère pulmonaire à gauche et l’aorte à droite. Ensuite, disséquez soigneusement l’espace pulmonaire de l’aorte à l’aide de la cautérisation. Appliquez une grande pince croisée sur les vaisseaux supraaortiques pour éviter et exclure la perfusion cérébrale.
Ensuite, à l’aide de la pince de Metzenbaum et de l’angle droit, disséquez délicatement entre la veine cave supérieure et l’artère innominée et entre la veine cave inférieure et le péricarde. Et encerclez la veine cave supérieure et inférieure à l’aide d’un ruban ombilical ou d’une simple suture en soie zéro et fixez-les avec un garrot. À l’aide d’une suture 3-0, placez deux sutures concentriques à cordes de bourse sur l’adventice de l’aorte ascendante distale, en évitant les sutures de pleine épaisseur.
Ensuite, placez une suture à corde de la bourse sur l’oreillette droite avant de fixer toutes les sutures avec un garrot. Ensuite, configurez et amorcez le système de perfusion régionale normothermique. Ensuite, canulez l’aorte à l’aide d’une canule artérielle française de 17 à 21 et fixez-la en place en serrant le garrot, en maintenant la suture de la corde de la bourse.
Créez une incision de cinq millimètres au centre de la corde de la bourse sur l’oreillette droite et dilatez-la à l’aide d’un petit instrument incliné, comme un angle droit ou un bouton-pression. Couvrez l’incision avec un doigt pour éviter les saignements excessifs. Ensuite, utilisez une canule veineuse à double étage pour canuler l’oreillette droite.
Ensuite, fixez la canule en serrant les sutures de cordon de la bourse à l’aide d’un garrot. Connectez les canules à la ligne veineuse du circuit de perfusion régionale normothermique à l’aide d’un demi-connecteur à trois de plus de huit pouces, assurant une désaération complète pour éviter un sas dans le système. S’assurer qu’un minimum de 15 minutes s’est écoulé entre la déclaration du décès et le début de la perfusion régionale normotherme pour englober le temps nécessaire à la préparation de la pratique clinique, au drapage et à l’accès au cœur.
15 minutes après le début de l’ischémie chaude fonctionnelle, initier la perfusion régionale normothermique et ajuster les débits progressivement pour atteindre un indice de perfusion de 2,5 litres par minute et par mètre carré. Redémarrez la ventilation mécanique avec une fraction de 50% d’oxygène inspiré et six millilitres par kilogramme de volume courant. Lorsque les critères de sevrage sont remplis, arrêter la perfusion régionale normothermique.
Retirez la canule de l’oreillette droite et resserrez rapidement la suture de la corde de la bourse pour minimiser la perte de sang. Fixez la suture avec des nœuds. Suivez ensuite la même procédure pour retirer la canule aortique.
Analyser la fonction cardiaque par échocardiographie à l’aide d’une sonde transœsophagienne standard et d’une sonde transthoracique placée directement sur le cœur. Des résultats représentatifs de la fonction cardiaque ont démontré une baisse significative de la fonction cardiaque après un don après une mort circulatoire. Cependant, ces organes ont démontré une récupération fonctionnelle similaire après la transplantation par rapport aux cœurs transplantés conventionnellement.
Les mesures d’oxymétrie cérébrale au cours de la perfusion régionale normothermique avec les vaisseaux supraaortiques serrés ont confirmé l’absence de perfusion cérébrale adéquate, tandis que les mesures de compliance pulmonaire pendant la perfusion régionale normothermique et après le sevrage du support n’ont montré aucun changement significatif par rapport à la ligne de base. Le développement de cette technique a introduit l’importance d’évaluer la transplantabilité d’autres organes comme les poumons, les reins et le foie dans le contexte du don après mort circulatoire et perfusion régionale normothermique.
