Toutes les procédures décrites sont réalisées en conformité avec les National Institutes of Health des lignes directrices pour le soin et l&#39;utilisation des animaux dans la recherche et tous les protocoles d&#39;animaux ont été approuvés par l&#39;Oregon Health &amp; Science University de protection des animaux et du Comité institutionnel d&#39;utilisation. 1. Préparation chirurgicale <ol><li> Peser la souris. La procédure décrite est réalisée sur des souris C57BL / 6 pesant entre 20 et 25 g. L&#39;anesthésie est induite dans une boîte à induction en utilisant 3-4% d&#39;isoflurane, et ensuite maintenu à l&#39;aide 1.5 à 2.5% d&#39;isoflurane dans l&#39;air / oxygène mélange. </li><li> Lubrifier les yeux et la position du dos des animaux sur un coussin chauffant. Immobiliser 4 extrémités avec du ruban. Les pattes arrière-peuvent être enregistrées dans une position neutre, toutefois, les pattes doivent être fixés au plus près de la paroi thoracique que possible pour permettre une pleine excursion de la paroi thoracique au cours des compressions thoraciques. </li><li> Lubrifier et placer une sonde de température rectale. La température est contrôlée à l&#39;aide d&#39;un coussin chauffant et lampe connectée à un contrôleur de température électronique (Digi-Sense, Cole Parmer, Vernon Hills IL), qui est fixé à maintenir 37,0 ° C. Parce qu&#39;il est possible qu&#39;un gradient de température au sein de l&#39;animal pourrait se développer pendant l&#39;état d&#39;absence de débit, il est important que la température sera mesurée et contrôlée à proximité de l&#39;organe d&#39;intérêt. </li><li> Intuber la trachée avec un 2,5 cm de calibre 22 en téflon cathéter (Insyte-W, BD, Franklin NJ) et la fin coupe distale d&#39;un introducteur coudé (Frova Introducteur, Cook Medical, Bloomington IN). D&#39;autres méthodes d&#39;intubation trachéale sont acceptables, cependant, l&#39;utilisation de l&#39;introducteur inclinée permet un positionnement correct de la nuque dans une position légèrement étendue, ce qui optimise l&#39;exposition chirurgicale pour le placement du cathéter intraveineux. Le cathéter endotrachéal est sécurisé par une boucle de suture à l&#39;incisive et maintenu avec une légère tension pour immobiliser la tête pendant les compressions thoraciques. </li><li> Ventiler mécaniquement la souris avec un ventilateur de rongeurs mis à 140 ul, 150 respirations / minute. Ce n&#39;est pas ajustée pour le poids que ce protocole est toujours effectué sur des animaux g 20-25. Ne pas trop approfondir l&#39;anesthésie. Ne pas régler le ventilateur pour faire pression de fin d&#39;expiration car cela altère la réanimation. </li><li> En utilisant une technique stérile et d&#39;un microscope opératoire, placez un pré-rincé PE-10 cathéter dans la veine jugulaire. Chaque côté peut être utilisé, mais l&#39;utilisation de la partie proche de l&#39;opérateur réduit les risques de délogement du cathéter lors de compressions thoraciques ou autres manipulations. 0,5% bupivicaïne, 0,1 mL est infitrated en bords de la plaie pour contrôler la douleur postopératoire. </li><li> Fixez le PE-10 cathéter dans la fermeture de la peau avec de l&#39;adhésif cyanoacrylate chirurgicale. </li><li> Placer les électrodes ECG sous-cutané et de se connecter au périphérique de contrôle. Une attention particulière à la trajectoire du signal et la maximisation du signal lui-même est essentielle à la réussite de la réanimation. S&#39;assurer que tous les fils sont fixés à la surface d&#39;exploitation, minimiser les passages du signal, et de minimiser les isolateurs (comme l&#39;air dans les aiguilles creuses ou des torons) dans le trajet du signal. Aiguilles solides connecté à fil de plomb nonstranded peuvent être achetés ou fabriqués dans le laboratoire. Une fois connecté, optimiser le signal ECG sur l&#39;écran. </li></ol> 2. L&#39;arrêt cardiaque <ol><li> Assurez-vous que la souris est normothermique, définie comme la température rectale de 36,5 ° C - 37,5 ° C. Administrer 40 ul de la température ambiante 0,5 M de chlorure de potassium par voie intraveineuse et d&#39;observer isoélectrique traçage sur ECG. Ajustement de la dose pour le poids n&#39;est pas nécessaire dans la fourchette 20-25 g. Démarrer minuterie d&#39;arrêt. </li><li> Débranchez le ventilateur. Cesser la vapeur anesthésique. Eteignez le coussin chauffant et tout autre équipement qui produit du bruit électronique qui peut interférer avec la surveillance ECG. Placez une couverture isolante sur la souris. </li><li> Noter la température toutes les minutes pendant un arrêt cardiaque. Si nécessaire, une lampe de chauffage peut être utilisé pour amener la température centrale jusqu&#39;à la plage de normothermique. Pendant un arrêt cardiaque, de préparer les fournitures et l&#39;équipement (par exemple, la seringue d&#39;adrénaline) pour la réanimation. Une liste de contrôle peut être utile pour assurer la réanimation sans interruption, ce qui est essentiel pour la survie. </li><li> Après 7 minutes, 30 secondes d&#39;arrêt cardiaque, reconnecter le ventilateur et augmenter le taux à 180 respirations / min, en gardant le volume de marée à la mise en pré-arrêt. </li><li> A 8 minutes, commencer les compressions thoraciques à 300 BPM. Artefacts de mouvement sur l&#39;ECG peut être utilisé pour juger de la RCR taux. Les compressions thoraciques doit être livré avec l&#39;index, 5 mm au-dessus de l&#39;appendice xiphoïde et légèrement à gauche de la ligne médiane. La poitrine doit être compressée 1.3 à 1.2 de la distance et le recul antéropostérieur complet doit être autorisé entre les compressions. Positionnement des doigts et de la pression de compression optimale sont absolument essentiels. L&#39;incapacité d&#39;atteindre la survie de ce modèle est presque toujours due à suboptimale RCR. </li><li> Infuser 0,5 ml d&#39;épinéphrine diluée à 15 pg / ml, dans les 30 premières secondes de la RCR. Dose d&#39;adrénaline totale est de 8-12 ug. Observer attentivement l&#39;électrocardiogramme pour le retour à une circulation spontanée (ROSC). Narrow complexes QRS sont observées entre les artefacts de compression. RONC survient généralement entre 90 secondes et 2 minutes après le démarrage de la RCR. La réanimation est abandonnée si le ROSC ne se produit pas par 3 minutes. Fréquentes contractions ventriculaires prématurées et des changements dans l&#39;axe ECG sont observées dans les 2 premières minutes après RONC, et presque toujours résoudre en une tachycardie sinusale stable à 2 minutes. </li><li> Enregistrement de temps total de la réanimation et la dose d&#39;épinéphrine. Noter la température toutes les minutes pendant 10 minutes après RONC. </li><li> Conduit ECG peut être retiré lorsque la respiration spontanée débute, généralement dans les 12-15 minutes après l&#39;RONC. </li><li> Extubation de la trachée lors de la fréquence respiratoire spontanée est&gt; 60/min. </li><li> Placez la souris dans une cage de récupération sur une surface à température contrôlée mis à 37 ° C pour les 2 premières heures après la procédure, assurant un accès facile à la nourriture et l&#39;eau. La cage peut alors être déplacé à la norme des conditions de logement postopératoires lorsque la souris a complètement récupéré de l&#39;anesthésie et est actif. </li></ol> 3. Exsanguination / Perfusion-fixation et Harvest rein <ol><li> 24h après CA / RCR, induire une anesthésie avec l&#39;isoflurane 3-4% et sécuriser l&#39;animal en décubitus dorsal sur une surface de chirurgie au sein d&#39;une hotte qui est approprié pour une utilisation avec du formol .. </li><li> Approfondir l&#39;anesthésie en augmentant progressivement la concentration de vapeurs anesthésiques à 5% et d&#39;assurer la souris est profondément anesthésié comme en témoigne l&#39;arrêt de la respiration spontanée. </li><li> Effectuer une thoracotomie preneuse et être exsangue de la souris par ponction apicale du ventricule cardiaque gauche selon les techniques standards. </li><li> Via la même aiguille, administrer saline à 0,9% en perfusion lente. Pour anticiper l&#39;perfusion / exsanguination, Nick l&#39;appendice auriculaire droit avec des ciseaux. Effectuer une laparotomie et d&#39;observer les reins. Quand ils sont blanchis, du sérum physiologique peut être modifiée à 4% de formol pour la fixation. Les reins sont ensuite noyés dans de la paraffine et colorées avec Fluoro-Jade B pour la quantification de la nécrose épithéliale tubulaire. </li></ol> 4. Les résultats représentatifs: Quand CA est induite, la pression artérielle moyenne (MAP) et le flux sanguin rénal régionales sang (RRBCF) chute à près de zéro et de rester stable jusqu&#39;à la réanimation commence (figure 1). 24h après CA / RCR, les indices sériques de la fonction rénale (azote uréique du sang, BUN et de créatinine) sont significativement élevées par rapport à une opération fictive animaux. ASAT / ALAT sont également élevés, offrant des preuves de profonde du corps entier ischémie (figure 2). Neutrophiles gélatinase associés lipocaline (NGAL), un indicateur sensible de lésion ischémique rénale est massivement 24h surexprimés après CA / CPR (figure 3). Enfin, microphotographies montrent l&#39;inégale, nécrose médullaire typique des lésions rénales ischémiques à l&#39;amincissement de l&#39;épithélium tubulaire et le remplissage luminal sur hématoxyline et éosine (Figure 4, partie A) et la mort cellulaire étendue dans l&#39;épithélium tubulaire médullaire lors tachée de fluoro-jade B ( Figure 4, partie B). <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig1.jpg" alt="Figure 1" /> Figure 1. L&#39;arrêt cardiaque induit une perte instantanée de la pression de perfusion, représentée ici comme la pression artérielle moyenne (MAP), mesurée dans l&#39;artère fémorale, résultant en quasi-complète cessation des régionales du flux sanguin rénal cortical (RRCBF) pendant toute la période d&#39;arrêt cardiaque (ombré région). Réanimation avec des compressions thoraciques et les retours d&#39;épinéphrine MAP à la normale et RRCBF augmente régulièrement dans la période de réanimation post. Reproduit avec la permission de 14 ans. <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig2.jpg" alt="Figure 2" /> Figure 2. 24h après l&#39;intervention, de l&#39;azote uréique du sang (BUN), la créatinine sérique, et l&#39;étendue de la mort des cellules tubulaires sont tous significativement élevés chez les animaux ayant subi CA / RCP par rapport aux animaux traités avec une procédure fictive. CA / RCR induit une insulte pan-organismique ischémique, ici en évidence par l&#39;élévation massive de la fonction hépatique des enzymes alanine aminotransférase (ALT) et d&#39;aspartate aminotransférase (AST) en CA / RCR souris par rapport aux animaux traités imposture. <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig3.jpg" alt="Figure 3" /> Figure 3. Western blot réalisée à l&#39;aide d&#39;anticorps polyclonaux de neutrophiles associée à la gélatinase lipocaline (NGAL), un indicateur sensible de lésion ischémique rénale. Les échantillons d&#39;urine ont été obtenus immédiatement avant («pré») et 24h après (&quot;24h&quot;) CA / RCR chez 4 animaux (étiquetés A, B, C et D ci-dessus). NGAL est massivement surexprimés chez la sourisl&#39;urine après CA / RCR. Reproduit avec la permission de 14 ans. <img src="/files/ftp_upload/3116/3116fig4.jpg" alt="Figure 4" /> Figure 4. A) hématoxyline et éosine d&#39;une section hilaire axe court de 24h tissu rénal après CA / RCR. Il ya des dommages inégaux, mais clair pour les tubules médullaires et tubulaires avec corticomédullaire brancher. Les flèches indiquent les tubules endommagé avec gonflées, des noyaux pycnotiques à la jonction cortico-médullaire. B) fluoro-jade B tache de la même région dans le même animal, 24h après CA / RCR. Taches B fluoro-jade vert vif cellules nécrotiques, montrant une nécrose parcellaire corticomédullaire tubulaire. Les flèches indiquent brillamment colorés tubules endommagé à la jonction cortico-médullaire. Ces résultats sont sensiblement similaires à résultats de la biopsie rénale chez les humains qui développent AKI, et contrairement à celles produites par d&#39;autres modèles animaux de l&#39;IRA.

<ol>
	<li>Chertow, G. M., Lazarus, J. 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P., Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrogen+is+renoprotective+via+a+non-receptor+dependent+mechanism+after+cardiac+arrest+in+vivo.">Estrogen is renoprotective via a non-receptor dependent mechanism after cardiac arrest in vivo.</a> Anesthesiology. 112, 395-405 (2010).</li><li>Hutchens, M. P., Nakano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+epoxide+hydrolase+gene+deletion+reduces+survival+after+cardiac+arrest+and+cardiopulmonary+resuscitation.">Soluble epoxide hydrolase gene deletion reduces survival after cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation.</a> Resuscitation. 76, 89-94 (2007).</li><li>Planta, I. v. o. n., Weil, M. 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Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Le modèle normothermique d&#39;un arrêt cardiaque et la réanimation cardio-pulmonaire chez la souris offre de multiples avenues de l&#39;évaluation dans un modèle qui reproduit la physiopathologie et la morphologie de la cause la plus fréquente de AKI, du corps entier hypoperfusion. Test d&#39;hypothèse peut être facilitée par l&#39;accès à une panoplie de techniques de manipulation génétique et l&#39;anatomie bien compris et caractérisés et la physiologie des souris de laboratoire. <p class="jove_con...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> Chlorure de Potassium </td><td> Abbott médicale </td><td> 06653-5 </td></tr><tr><td> L&#39;isoflurane </td><td> Abbott médicale </td><td> 05260-05 (et autres) </td></tr><tr><td> L&#39;épinéphrine HCl </td><td> Multiples </td><td> Multiples </td></tr><tr><td> Régulateur de température Digi-Sense </td><td> Cole-Palmer </td><td> EW-89000-00 </td></tr><tr><td> Angiocath IV Cath </td><td> VWR </td><td> 381134 </td></tr><tr><td> Introducteur Frova voies angle </td><td> Cuire </td><td> G27282 </td></tr><tr><td> Ventilateur Microvent pour souris </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 733591 </td></tr></tbody></table>

normothermic cardiac arrest and cardiopulmonary resuscitation: a mouse model of ischemia-reperfusion injury

Lésions rénales aiguës (IRA) est une commune, très meurtrières, complication d&#39;une maladie grave qui entraîne une mortalité élevée 1-4 et qui est le plus souvent causées par une hypoperfusion l&#39;ensemble du corps. 5,6 reproduction réussie d&#39;hypoperfusion l&#39;ensemble du corps dans des modèles rongeurs a été semé d&#39;embûches. 7-9,9,10 modèles qui emploient une ischémie focale ont démontré à maintes reprises des résultats qui ne traduisent pas la situation clinique, et des modèles animaux plus gros qui permettent l&#39;accès du corps manque toute une hypoperfusion de la boîte à outils complète de la manipulation génétique possible dans la souris. 11,12 Cependant, ces dernières années un modèle de souris d&#39;un arrêt cardiaque et de réanimation cardio-respiratoire a émergé qui peut être adapté pour modéliser AKI. 13 Ce modèle reproduit de manière fiable physiologiques, les résultats fonctionnels, anatomiques et histologiques vu dans AKI cliniques , est rapidement répétitif, et offre tous les avantages significatifs d&#39;un modèle murin de chirurgie, y compris l&#39;accès aux ressources génétiques et des techniques de manipulation, par rapport à faible coût pour les grands animaux, et la facilité d&#39;utilisation. Notre groupe a développé une vaste expérience de l&#39;utilisation de ce modèle pour évaluer un certain nombre d&#39;organes spécifiques dans les résultats AKI. 14,15

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Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Un modèle puissant pour les soins de blessures liées périopératoires et critiques rénale aiguë est présenté. En utilisant une hypoperfusion corps induites par arrêt cardiaque, il est possible à près de répliquer les modifications histologiques et fonctionnelles des cliniques AKI.

Normothermique arrêt cardiaque et la réanimation cardiorespiratoire: un modèle murin de l&#39;ischémie-reperfusion

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

normothermic-cardiac-arrest-cardiopulmonary-resuscitation-mouse-model

Research

JoVE Journal

Medicine

17.9K vues.  Oregon Health & Sciences University. Un modèle puissant pour les soins de blessures liées périopératoires et critiques rénale aiguë est présenté. En utilisant une hypoperfusion corps induites par arrêt cardiaque, il est possible à près de répliquer les modifications histologiques et fonctionnelles des cliniques AKI.

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Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often unreported mortality rates that may confound analyses. Bilateral renal pedicle clamping is commonly used to induce IR-AKI, but differences between effective clamp pressures and/or renal responses to ischemia between kidneys often lead to more variable results. In addition, shorter clamp times are known to induce more variable tubular injury, and while mice undergoing bilateral injury with longer clamp times develop more consistent tubular injury, they often die within the first 3 days after injury due to severe renal insufficiency. To improve post-injury survival and obtain more consistent and predictable results, we have developed two models of unilateral ischemia-reperfusion injury followed by contralateral nephrectomy. Both surgeries are performed using a dorsal approach, reducing surgical stress resulting from ventral laparotomy, commonly used for mouse IR-AKI surgeries. For induction of moderate injury BALB/c mice undergo unilateral clamping of the renal pedicle for 26 min and also undergo simultaneous contralateral nephrectomy. Using this approach, 50-60% of mice develop moderate AKI 24 hr after injury but 90-100% of mice survive. To induce more severe AKI, BALB/c mice undergo renal pedicle clamping for 30 min followed by contralateral nephrectomy 8 days after injury. This allows functional assessment of renal recovery after injury with 90-100% survival. Early post-injury tubular damage as well as post injury fibrosis are highly consistent using this model.

We describe models of moderate and severe ischemia-reperfusion-induced kidney injury in which the mice undergo unilateral renal pedicle clamping followed by simultaneous or delayed contralateral nephrectomy, respectively. These models consistently give rise to renal dysfunction and post-injury fibrosis, but injury severity and survival are dependent on mouse background, age and surgical equipment.

Ischémie-reperfusion modèle de lésions rénales aiguës et post blessures fibrose chez la souris

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Recherche

Médecine

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for myocardial infarction and cardiac complications of thoracic surgery. The ability of certain drugs to precondition the myocardium against ischemia reperfusion injury has led to multiple clinical trials, with little success. The isolated heart model allows acute observation of the functional effects of ischemia reperfusion injury in real time, including the effects of various pharmacological interventions administered at any time-point before or within the ischemia-reperfusion injury window. Since brief periods of ischemia can precondition the heart against ischemic injury, in situ aortic cannulation is performed to allow for functional assessment of non-preconditioned myocardium. A saline filled balloon is placed into the left ventricle to allow for real-time measurement of pressure generation. Ischemic injury is simulated by the cessation of perfusion buffer flow, followed by reperfusion. The duration of both ischemia and reperfusion can be modulated to examine biochemical events at any given time-point. Although the Langendorff isolated heart model does not allow for the consideration of systemic events affecting ischemia and reperfusion, it is an excellent model for the examination of acute functional and biochemical events within the window of ischemia reperfusion injury as well as the effect of pharmacological intervention on cardiac pre- and postconditioning. The goal of this protocol is to demonstrate how to perform in situ aortic cannulation and heart excision followed by ischemia/reperfusion injury in the Langendorff model.

The isolated rat heart is an enduring model for ischemia reperfusion injury. Here, we describe the process of harvesting the beating heart from a rat via in situ aortic cannulation, Langendorff perfusion of the heart, simulated ischemia-reperfusion injury, and infarct staining to confirm the extent of ischemic insult.

Induction et de l&#39;évaluation de l&#39;ischémie-reperfusion dans coeurs de rat Langendorff perfusés

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Modèle murin de Intestinal Ischémie-reperfusion

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, diabetic retinopathy, and retinal vascular occlusions. Rodent models of I/R injury are providing significant insights into mechanisms and treatment strategies for human I/R injury, especially with regard to neurodegenerative damage in the retinal neurovascular unit. Presented here is a protocol for inducing retinal I/R injury in mice through elevation of intraocular pressure (IOP). In this protocol, the ocular anterior chamber is cannulated with a needle, through which flows the drip of an elevated saline reservoir. Using this drip to raise IOP above systolic arterial blood pressure, a practitioner temporarily halts inner retinal blood flow (ischemia). When circulation is reinstated (reperfusion) by removal of the cannula, severe cellular damage ensues, resulting ultimately in retinal neurodegeneration. Recent studies demonstrate inflammation, vascular permeability, and capillary degeneration as additional elements of this model. Compared to alternative retinal I/R methodologies, such as retinal arterial ligation, retinal I/R injury by elevated IOP offers advantages in its&#160;anatomical specificity, experimental tractability, and technical accessibility, presenting itself as a valuable tool for examining neuronal pathogenesis and therapy in the retinal neurovascular unit.

This article describes a procedure for inducing retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure in mice. Retinal ischemia-reperfusion injury by elevated intraocular pressure serves to model human pathologies characterized by compromised oxygen and nutrient delivery in the retina, enabling researchers to examine potential cellular mechanisms and treatments for human diseases of the retinal neurovascular unit.

Un modèle de souris de Retinal Ischémie-reperfusion Grâce à une élévation de la pression intraoculaire

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Ultrasonographic Assessment During Cardiopulmonary Resuscitation

The US-CAB (Ultrasound, Circulation/Airway/Breathing) protocol integrates several sonographic techniques into a structured assessment of the circulation, airway, and breathing status of a patient during cardiopulmonary resuscitation (CPR) in an advanced life support-compliant manner. US-C provides a subxiphoid view of the heart, to look for potentially reversible causes of disease, such as pericardial effusion, pulmonary embolism, hypovolemia, and acute coronary thrombosis. Sonographic cardiac activity during CPR not only helps differentiate pseudo-pulseless electrical activity (PEA) from true PEA but also represents a higher chance of the return of spontaneous circulation (ROSC) and survival. Evaluation of the inferior vena cava (IVC) shows the fluid status of the patient and indicates the best methods to use for fluid resuscitation. If aortic dissection is suspected, a subxiphoid view of the aorta is suggested for identifying an intimal flap. Once intubation is done, tracheal ultrasound (US-A) at the suprasternal notch helps differentiate endotracheal intubation (one air-mucosal interface with one comet-tail) from esophageal intubation (double tract sign). Immediately following US-A, bilateral lung US (US-B) should be done to confirm proper bilateral ventilation using the lung sliding sign. In addition, US-C can be serially followed to see the dynamic changes in the cardiac chambers and IVC, or any cardiac contraction suggestive of ROSC. US-B can also detect coexisting lung or pleural pathologies without interfering with the performance of CPR. The main concern when implementing this method is maintaining high-quality CPR without delays in chest compressions when performing US-CAB. Rigorous training and continued practice are key to minimize any interruptions during resuscitation.

Here, we present a US-CAB (Ultrasound, Circulation/Airway/Breathing) protocol for use during cardiopulmonary resuscitation (CPR). US-C evaluates the subxiphoid view of the heart and inferior vena cava. After intubation, tracheal US (US-A) and lung US (US-B) help confirm endotracheal intubation and proper ventilation.

Évaluation ultrasonographique pendant la réanimation cardiorespiratoire

The US-CAB (Ultrasound, Circulation/Airway/Breathing) protocol integrates several sonographic techniques into a structured assessment of the circulation, ...

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many areas of biomedical research due to its cost-effectiveness and its translation to humans. This protocol describes a method to create a preclinical free skin flap model in rats with ischemia-reperfusion injury. The described 3 cm x 6 cm rat free skin flap model is easily obtained after the placement of several vascular ligatures and the section of the vascular pedicle. Then, 8 h after the ischemic insult and completion of the microsurgical anastomosis, the free skin flap develops the tissue damage. These ischemia-reperfusion injury-related damages can be studied in this model, making it a suitable model for evaluating therapeutic agents to address this pathophysiological process. Furthermore, two main monitoring techniques are described in the protocol for the assessment of this animal model: transit-time ultrasound technology and laser speckle contrast analysis.

Here, we describe a pre-clinical animal model for studying the pathophysiology of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery. This free skin flap model based on the superficial caudal epigastric vessels in the rat may also allow for the evaluation of different therapies and compounds to counteract ischemia-reperfusion injury-related damage.

Un modèle préclinique de rat pour l'étude des dommages d'ischémie-réperfusion dans la microchirurgie reconstructive

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Delayed Intramyocardial Delivery of Stem Cells after Ischemia Reperfusion Injury in a Murine Model

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, cardiac stem cell therapy is studied by delivering SCs concurrently with the induction of myocardial injury. However, this approach presents two significant limitations: the early hostile pro-inflammatory ischemic environment may affect the survival of transplanted SCs, and it does not represent the subacute infarction scenario where SCs will likely be used. Here we describe a two-part series of surgical procedures for the induction of ischemia-reperfusion injury and delivery of mesenchymal stem cells (MSCs). This method of stem cell administration may allow for the longer viability and retention around damaged tissue by circumventing the initial immune response. A model of ischemia reperfusion injury was induced in mice accompanied by the delivery of mesenchymal stem cells (3.0 x 105), stably expressing the reporter gene firefly luciferase under the constitutively expressed CMV promoter, intramyocardially 7 days later. The animals were imaged via ultrasound and bioluminescent imaging for confirmation of injury and injection of cells, respectively. Importantly, there was no added complication rate when performing this two-procedure approach for SC delivery. This method of stem cell administration, collectively with the utilization of state-of-the-art reporter genes, may allow for the in vivo study of viability and retention of transplanted SCs in a situation of chronic ischemia commonly seen clinically, while also circumventing the initial pro-inflammatory response. In summary, we established a protocol for the delayed delivery of stem cells into the myocardium, which can be used as a potential new approach in promoting regeneration of the damaged tissue.

Stems cells are continuously investigated as potential treatments for individuals with myocardial damage, however, their decreased viability and retention within injured tissue can impact their long-term efficacy. In this manuscript we describe an alternative method for stem cell delivery in a murine model of ischemia reperfusion injury.

Retard de l’accouchement intramyocardique des cellules souches après une blessure à l’Ischémie Reperfusion dans un modèle murine

There is significant interest in the use of stem cells (SCs) for the recovery of cardiac function in individuals with myocardial injuries. Most commonly, ...

A Rat Lung Transplantation Model of Warm Ischemia/Reperfusion Injury: Optimizations to Improve Outcomes

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods for choosing appropriate cuff sizes for the pulmonary vein (PV), pulmonary artery (PA), or bronchus (Br) are varied, thus making the determination of proper cuff size during rat lung transplantation an exercise of trial and error. By standardizing the cuffing technique to use the smallest effective cuff appropriate for the size of the vessel or bronchus, one can make the transplantation procedure safer, faster, and more successful. Since diameters of the PV, PA, and Br are related to the body weight of the rat, we present a strategy to choosing an appropriate size using a weight-based guide. Since lung volume is also related to body weight, we recommend that this relationship should also be considered when choosing the proper volume of air for donor lung inflation during warm ischemia as well as for the proper volume of PBS to be instilled during bronchoalveolar lavage (BAL) fluid collection. We also describe methods for 4th intercostal space dissection, wound closure, and sample collection from both the native and transplanted lobes.

Here, we present optimizations to a rat lung transplantation model that serve to improve outcomes. We provide a size guide for cuffs based on body weight, a measurement strategy to ascertain the 4th intercostal space, and methods of wound closure and BAL (bronchoalveolar lavage) fluid and tissue collection.

Un modèle de transplantation pulmonaire chez le rat de lésions d’ischémie chaude / reperfusion : optimisations pour améliorer les résultats

From our experience with rat lung transplantation, we have found several areas for improvement. Information in the existing literature regarding methods ...

An Effective Mouse Model of Unilateral Renal Ischemia-Reperfusion Injury

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models are the only available resources that mimic the complexities of the IRI-associated damage encountered in vivo. This paper describes an effective mouse model of unilateral renal IRI that delivers highly reproducible data. Ischemia is induced by occluding the right renal pedicle for 30 min followed by reperfusion. In addition to the surgical procedure, a sequential overview of the expected physiological and histopathological changes following renal IRI will be provided by comparing data from seven different reperfusion times (4 h, 8 h, 16 h, 1 day, 2 days, 4 days, and 7 days). Critical data for planning experiments ahead, such as mean surgical time, average anesthetic consumption, and body weight changes over time, will be shared. This work will help researchers implement a reliable renal IRI model and select the appropriate reperfusion time that aligns with their intended investigative goals.

Renal ischemia-reperfusion injury is associated with high morbidity and mortality in hospitalized patients. Here, we present a simple and effective mouse model of unilateral renal ischemia-reperfusion injury and provide a sequential overview of representative pathological changes observed in the kidney.

Un modèle murin efficace de lésion unilatérale d’ischémie rénale-reperfusion

Ischemia-reperfusion injury (IRI) is the leading cause of acute renal failure and is a significant contributor to delayed graft function. Animal models ...

A Piglet Perinatal Asphyxia Model to Study Cardiac Injury and Hemodynamics after Cardiac Arrest, Resuscitation, and the Return of Spontaneous Circulation

Neonatal piglets have been extensively used as translational models for perinatal asphyxia. In 2007, we adapted a well-established piglet asphyxia model by introducing cardiac arrest. This enabled us to study the impact of severe asphyxia on key outcomes, including the time taken for the return of spontaneous circulation (ROSC), as well as the effect of chest compressions according to alternative protocols for cardiopulmonary resuscitation. Due to the anatomical and physiological similarities between piglets and human neonates, piglets serve as good models in studies of cardiopulmonary resuscitation and hemodynamic monitoring. In fact, this cardiac arrest model has provided evidence for guideline development through research on resuscitation protocols, pathophysiology, biomarkers, and novel methods for hemodynamic monitoring. Notably, the incidental finding that a substantial fraction of piglets have pulseless electrical activity (PEA) during cardiac arrest may increase the applicability of the model (i.e., it may be used to study pathophysiology extending beyond the perinatal period). However, the model generation is technically challenging and requires various skill sets, dedicated personnel, and a fine balance of the measures, including the surgical protocols and the use of sedatives/analgesics, to ensure a reasonable rate of survival. In this paper, the protocol is described in detail, as well as experiences with adaptations to the protocol over the years.

This piglet model involves surgical instrumentation, asphyxiation until the cardiac arrest, resuscitation, and post-resuscitation observation. The model allows for multiple sampling per animal, and by using continuous invasive arterial blood pressure, ECG, and non-invasive cardiac output monitoring, it provides knowledge about hemodynamics and cardiac pathophysiology in perinatal asphyxia and neonatal cardiopulmonary resuscitation.

Un modèle d’asphyxie périnatale chez le porcelet pour étudier les lésions cardiaques et l’hémodynamique après un arrêt cardiaque, la réanimation et le retour de la circulation spontanée

Neonatal piglets have been extensively used as translational models for perinatal asphyxia. In 2007, we adapted a well-established piglet asphyxia model ...