Questo protocollo descrive un ampio modello animale di donazione dopo morte circolatoria seguita da perfusione regionale normotermica toracoaddominale che imita precisamente il trapianto di cuore clinico. Questo potrebbe essere usato per valutare potenziali strategie nella ricerca traslazionale. Il vantaggio principale di questo protocollo è che fornisce un modello preclinico adatto per il trapianto cardiaco date le somiglianze anatomiche e chirurgiche tecniche tra il suino di cinghiale e il cuore umano.
Inizia usando una penna cauteria per eseguire un'incisione della linea mediana su un animale anestetizzato dalla regione cervicale centrale allo xifoide. Quindi, dividere il grasso sottocutaneo, strato per strato, lungo la linea mediana usando l'elettrocauterizzazione per raggiungere il peristerno. Dopo aver tagliato intorno alla tacca sternale, utilizzare un dito per ritrarre e spazzare i tessuti molli da sotto lo sterno.
Aprire lo sterno con una sega ossea, assicurandosi che lo sterno sia completamente diviso, facendo attenzione alla vena sotto la parte superiore dell'osso sternale. Quindi, cauterizzare lo sterno o applicare cera ossea per garantire un'emostasi adeguata. Successivamente, usando l'elettrocauterizzazione, sezionare e rimuovere il timo sollevandolo dal pericardio e cauterizzare i vasi che forniscono il timo dall'aorta e dalla vena cava superiore per prevenire il sanguinamento.
Tagliare con cura il pericardio aperto con cauterizzazione. Durante il taglio, inserire le dita sotto il pericardio per evitare lesioni al cuore. Quindi, somministrare 300 unità per chilogrammo di eparina per via endovenosa per ottenere un'anticoagulazione sistemica.
Se il test è disponibile, assicurarsi che il tempo di coagulazione attivato sia superiore a 300 secondi. Somministrare un bolo di tre milligrammi per chilogrammo di propofol per via endovenosa. Quindi, interrompere la ventilazione meccanica e scollegare il tubo endotracheale.
Monitorare la pressione arteriosa e la saturazione di ossigeno periferico. Quando la pressione sistolica è inferiore a 50 millimetri di mercurio, iniziare il tempo di ischemia calda funzionale. Stabilire l'arresto circolatorio quando c'è asistolia e assenza di pulsatilità arteriosa.
Dopo il ritiro delle terapie di sostegno vitale e la conferma della morte, ritrarre il tratto di deflusso del ventricolo destro inferiormente, l'arteria polmonare a sinistra e l'aorta a destra. Quindi, sezionare attentamente lo spazio polmonare dell'aorta usando la cauterizzazione. Applicare un grande morsetto trasversale sui vasi sopraaortici per evitare ed escludere la perfusione cerebrale.
Successivamente, usando la pinza di Metzenbaum e ad angolo retto, sezionare delicatamente tra la vena cava superiore e l'arteria innominata e tra la vena cava inferiore e il pericardio. E cerchiare la vena cava superiore e inferiore usando un nastro ombelicale o una semplice sutura di seta zero e fissarli con un laccio emostatico. Utilizzando una sutura 3-0, posizionare due suture concentriche sull'avventizia dell'aorta ascendente distale, evitando suture a tutto spessore.
Quindi, posizionare una sutura a corda di borsa sull'atrio destro prima di fissare tutte le suture con un laccio emostatico. Successivamente, impostare e innescare il sistema di perfusione regionale normotermica. Quindi, cannulare l'aorta usando una cannula arteriosa francese da 17 a 21 e fissarla in posizione stringendo il laccio emostatico, tenendo la sutura del cordone della borsa.
Crea un'incisione di cinque millimetri al centro della corda della borsa sull'atrio destro e dilatala usando un piccolo strumento angolato, come un angolo retto o uno scatto. Coprire l'incisione con un dito per evitare un eccessivo sanguinamento. Quindi, utilizzare una cannula venosa a doppio stadio per incannulare l'atrio destro.
Quindi, fissare la cannula stringendo le suture del cordone della borsa usando un laccio emostatico. Collegare le cannule alla linea venosa del circuito di perfusione regionale normotermica utilizzando un connettore da mezzo a tre oltre otto pollici, garantendo una completa de-aerazione per evitare una camera di equilibrio nel sistema. Garantire che siano trascorsi almeno 15 minuti tra la dichiarazione di morte e l'inizio della perfusione regionale normotermica per comprendere il tempo necessario nella preparazione della pratica clinica, nel drappeggio e nell'accesso al cuore.
15 minuti dopo l'inizio del tempo di ischemia calda funzionale, avviare la perfusione regionale normotermica e regolare progressivamente le portate per raggiungere un indice di perfusione di 2,5 litri al minuto per metro quadrato. Riavviare la ventilazione meccanica con una frazione del 50% di ossigeno inspirato e sei millilitri per chilogrammo di volume corrente. Quando i criteri di svezzamento sono soddisfatti, interrompere la perfusione regionale normotermica.
Rimuovere la cannula dall'atrio destro e stringere rapidamente la sutura del cordone della borsa per ridurre al minimo la perdita di sangue. Fissare la sutura con i nodi. Quindi seguire la stessa procedura per rimuovere la cannula aortica.
Analizzare la funzione cardiaca attraverso l'ecocardiografia utilizzando una sonda transesofagea standard e una sonda transtoracica posizionata direttamente sul cuore. Risultati rappresentativi della funzione cardiaca hanno dimostrato un significativo declino della funzione cardiaca dopo la donazione dopo la morte circolatoria. Tuttavia, questi organi hanno dimostrato un recupero funzionale simile dopo il trapianto rispetto ai cuori trapiantati convenzionalmente.
Le misurazioni dell'ossimetria cerebrale durante la perfusione regionale normotermica con i vasi sopraaortici bloccati hanno confermato l'assenza di un'adeguata perfusione cerebrale, mentre le misurazioni della compliance polmonare durante la perfusione regionale normotermica e dopo lo svezzamento dal supporto non hanno mostrato alcun cambiamento significativo rispetto al basale. Lo sviluppo di questa tecnica ha introdotto l'importanza di valutare la trapiantabilità di altri organi come i polmoni, i reni e il fegato nel contesto della donazione dopo morte circolatoria e perfusione regionale normotermica.
