Évaluation rapide de la cytotoxicité in vitro du récepteur de l’antigène chimérique exprimant le jurkat à l’aide de l’imagerie fluorescente

Les cellules CAR-T sont constamment améliorées pour obtenir de meilleures réponses dans les essais cliniques humains. Nous cherchons des moyens d’évaluer cela dans notre laboratoire à l’aide d’une méthode impartiale à haut débit, comme l’utilisation de l’imagerie fluorescente pour filtrer les combinaisons qui fonctionnent le mieux. Il existe plusieurs combinaisons de constructions qui peuvent être conçues pour n’importe quel fragment variable de chaîne unique en modifiant la géométrie des domaines extracellulaire et charnière.

Nous avons conçu ce protocole pour identifier les combinaisons les plus efficaces dans l’élimination des cellules cibles à l’aide de cellules Jurkat. Il s’agit d’un protocole rapide et à haut débit pour cribler les constructions CAR en fonction de leur cytotoxicité à l’aide de cellules Jurkat, qui sont ensuite validées avec des cellules T conventionnelles. Une douzaine de constructions CAR différentes peuvent être testées simultanément dans une plaque de 96 puits en utilisant cette technique.

Ici, à Akhavan Lab, nous quantifions en chiffres absolus la cyclose directe des cellules cibles par les cellules CAR exprimant les cellules Jurkat à haut débit pour cribler plusieurs constructions CAR. L’objectif principal de notre laboratoire est d’améliorer la traduction clinique de la thérapie par cellules CAR-T contre les tumeurs cérébrales de haut grade. Nous tirons parti des criblages de médicaments à haut débit comme modalité pour améliorer la cytotoxicité des cellules CAR-T, ainsi que pour cibler le microenvironnement tumoral.