Avaliação Rápida da Citotoxicidade In Vitro do Receptor de Antígeno Quimérico Jurkat Expressando Usando Imagem Fluorescente

As células T CAR estão sendo constantemente aprimoradas para alcançar melhores respostas em testes clínicos em humanos. Estamos identificando maneiras de avaliar isso em nosso laboratório usando um método imparcial de alto rendimento, como o uso de imagens fluorescentes para selecionar combinações que funcionam melhor. Existem várias combinações de construtos que podem ser projetados para qualquer fragmento variável de cadeia única, modificando a geometria dos domínios extracelular e de dobradiça.

Desenhamos este protocolo para identificar as combinações com melhor eficácia na eliminação de células-alvo usando células Jurkat. Este é um protocolo rápido e de alto rendimento para rastrear construções de CAR com base em sua citotoxicidade de células-alvo usando células Jurkat, que são então validadas com células T convencionais. Uma dúzia de construções diferentes do CAR podem ser testadas em uma placa de 96 poços simultaneamente usando essa técnica.

Aqui no Laboratório de Akhavan, quantificamos em números absolutos a ciclose direta de células-alvo pelo CAR expressando células Jurkat de uma maneira de alto rendimento para selecionar várias construções CAR. O objetivo primário do nosso laboratório é melhorar a tradução clínica da terapia com células T CAR contra tumores cerebrais de alto grau. Aproveitamos as telas de drogas de alto rendimento como uma modalidade para melhorar a citotoxicidade das células T CAR, bem como visando o microambiente tumoral.