השתלות מעי דק orthotopic בחולדות

Summary

השתלת מעי דק הפכה אפשרות טיפול מקובלת לחולים עם אי ספיקת מעיים בלתי הפיכה. מודל ניסיוני שלנו של השתלת מעי דק orthotopic בחולדות משמש ככלי אמין לטיפול חיסוני בסיסיות ותהליכים דלקתיים שיסבכו השתלת מעיים.

Abstract

השתלת מעי דק הפכה אפשרות קלינית מקובלת לחולים עם תסמונת מעי קצר וכישלון של תזונת Parenteral (כישלון מעיים בלתי הפיך). במרכזים מיוחדים השתפר אופרטיבי ואסטרטגיות ניהול הובילו למטופל מצוין לטווח קצר ובינוני טווח והישרדות שתל תוך מתן איכות חיים גבוהה ^1,3. שלא כמו בהשתלה הנפוצה יותר של איברים מוצקים אחרים (כלומר לב, כבד) רב מנגנון בסיסי של תפקוד שתל ושינויים חיסוניים הנגרם על ידי השתלת מעי אינו ידוע לחלוטין ^6,7. פרקים של דחייה חריפה, אלח דם וכישלון שתל הכרוני הם המכשולים העיקריים עדיין תורמים לתוצאות לטווח ארוכות פחות טובות ופוגעים תעסוקה נרחבת יותר של ההליך, למרות מספר גדל והולך של חולים על תזונת Parenteral הבית שהיה פוטנציאל להפיק תועלת מהשתלה מסוג זה. המעי הדק מכילמספר גדול של הנוסעים leucocytes נפוץ המכונה חלק ממערכת הלימפה קשורה (גאלט) להיות חלק זה מהסיבה לimmunogenity הגבוה של שתל מעי המעי. הנוכחות והקרבה של commensals ומזיקים רבים בבטן, מסבירות את החומרה של אפיזודות אלח דם פעם שלמות ריריות שתל נפגמת (למשל על ידי דחייה). כדי לקדם את התחום של נתוני מעיים וmultiorgan השתלה יותר שנוצרו ממודלים של בעלי חיים אמינים וריאליים הוא זקוקים. המודל אמור בהסכם זה משלב את שניהם אמינות והיתכנות הוקמה פעם אחת בצורה סטנדרטית ויכול לספק תובנה חשובה במנגנונים המורכבים המולקולריים, התאיים ופונקציונליים שמופעלים על ידי השתלת מעיים. אנחנו השתמשנו בהצלחה ומעודנת ההליך המתואר על יותר מ 5 שנים במעבדה שלנו ^8-11. פורמט וידאו מבוסס יופיטר הוא שימושי במיוחד כדי להדגים את proce המורכבדורה ולהימנע ממלכודות ראשוניות לקבוצות מתכננות להקים מודל מכרסם orthotopic חוקר השתלת מעיים.

Protocol

1. מבצע תורם

1. עכברוש התורם צריך להיות כל זמן צום של 24 שעות (גישה חופשיה לתמיסת מים / גלוקוז).
2. כדי לגרום להרדמת משאיפת isoflurane, להתחיל עם 2% בריסוס רגיל, ולאחר מכן להפחית 1% לאחר ביצוע laparotomy. בצע קמצוץ בוהן כדי לבדוק תרופות הרגעה.
3. לגלח את הבטן ולנקות עם הכנת עור 3 פעמים (Kodan). ואז לבצע חתך החציוני לאחר תת עורית ממשל של משכך כאבים.
4. לאחר ההשתלה היא עטופה בגזה ספוגה מלח, להפריד את ההידבקויות הפיזיולוגיות בין הלבלב והמעי הגס עולה בעדינות עם Q-קצה (מתחת למיקרוסקופ הניתוחי עם גדלת 6x).
5. לקשור ולחלק את כלי קוליק ileocecal וימין ואמצע באמצעות 7-0 משי. לאחר המעי הגס עולה פרוש לצד הימני של וריד mesenteric המעולה (SMV), כלי קוליק ileocecal, ימין ואמצע ניתן לזהות לקשירה וחלוקת שימוש 7-0 קשרים.
6. לחזור בו הקיבה כלפי מעלה, כך שכל SMV הוא התיישר וחשוף. השתמש במהדק יתושים להכחשה. המהדק מוחזק על ידי מסת פלסטלינה נוצרה לצורה במידת צורך.
7. לקשור ולחלק את ורידי לבלב והתריסריון, המגיעים מSMV. כל ורידי לבלב והתריסריון, הקטנים שמקורם SMV חייבים להיות מזוהים בזהירות, גבעול עם 7-0 משי ומחולקים לפני שניתן תהיה להסיר את רקמת הלבלב מהשתל.
8. לקשור ולחלק את רקמת חיבור מאבד כולל כל lymphatics בין SMV ואב העורקים בבטן. עם השתל עדיין בצד ימין של הבטן, לאבד רקמת חיבור כולל כל lymphatics בין SMV ואב העורקים בבטן הוא נגיש. רקמת חיבור זו חייבת להיות גבעול באמצעות 7-0 משי ומחולקת להימנע מlymphorrhea לאחר ניתוח השתלת המעיים.
9. לקשור ולחלק את עורק הכליה הימני. לאחר רקמת החיבור מתחלקת, עורק הכליה הימני הופך accessiblדואר ואת הגבעול ומחולק באמצעות 7-0 משי.
10. מערכתי heparinise העכברוש באמצעות 200 יחידות של הפרין iv דרך וריד הפין.
11. לקשור את העורקים השוליים, ולחלק את המעי הדק בצומת duodeno-jejunal ובאילאום המסוף.
12. אב עורקי גבעול proximally למקורו של SMA. וריד פורטל הצניעות הצטלב בנקודת המפגש עם וריד הטחול. אז השתל שנקטף עם מורכב pedicle כלי הדם של SMA עם קטע אב עורקים.

2. נוהל Backtable

1. תנקב את השתל באמצעות 3 מ"ל של אוניברסיטת ויסקונסין הפתרון (UW) ב 4 ° C באמצעות צינור אב העורקים ולהשקות לום המעיים מסוף jejunal עם 30 מ"ל של פתרון N-uro Nebacetin ב 4 ° C (השקית לומן היא חובה) .

מייד לאחר חילוץ השתל, צינור אב העורקים משמש לזלוף עם פתרון UW מצונן מ"ל 3. לשם כך, 20 קטטר G iv עלמזרק 10 מ"ל משמש. Perfusate צריך להיות שנצפה לזרום החוצה בחופשיות מוריד השער המחולק. להשקית מעי עם Nebacetin, מזרק 50 מ"ל משמש.

2. אחסן את השתל בפתרון UW ב 4 מעלות צלזיוס במהלך תקופת ההכנה של הנמען.

3. מבצע נמען

1. עכברוש הנמען צריך להיות כל זמן צום של 24 שעות (גישה חופשיה לתמיסת מים / גלוקוז).
2. כדי לגרום להרדמת משאיפת isoflurane, להתחיל עם 2% בריסוס רגיל, ולאחר מכן להפחית 1% לאחר ביצוע laparotomy. בצע קמצוץ בוהן כדי לבדוק תרופות הרגעה.
3. לגלח את הבטן ולנקות עם הכנת עור 3 פעמים (Kodan). ואז לבצע חתך החציוני לאחר תת עורית של ממשל carprofen 5 מ"ג / קילו sc לשיכוך כאבים במהלך ניתוח.
4. עטוף את מעי הנמען בגזה ספוגה מלח רגילה ומניח אותו על חזו של הנמען.
5. פתח retroperitoneum בוטות עם Q-טיפים, ולחשוף abdomiאב עורקי nal ונחות וריד נבוב ממש מתחת כלי הכליות עד לרמה של כלי הכסל, אם יש צורך להשתמש גם microscissors. לקשור את tribuaries המותני ועמוד השדרה הקטנה מאב העורקים ווריד הנבוב באמצעות 7-0 משי כדי להימנע מאיבוד דם. (לשם כך, לשנות את הזום עד 16x מיקרוסקופ הניתוחי).
6. צולב לצבוט את אב העורקים וIVC מתחת כלי הכליה השמאליים proximally ומעל הסתעפות כסל distally באמצעות סרטוני microvessel. רק מהדק אחד משמש proximally כמו גם distally כדי לצבוט את שני הכולים בו זמנית. חתוך שני כלי anteriorly באמצעות microknife ולשטוף את הדם שנותר.
7. יצירת השקת קצה לצד בין מגזר שתל אב עורקים ואב עורקי infrarenal של הנמען באמצעות תפר Prolene 10-0 מתמשך .. בתחילה, השתל ימוקם בצד ימין של הבטן (ראש העכברוש מוצב בשעת 12 לפנות בוקר) כדי לבצע את תפרי הקיר האחוריים של ההשקה העורקת וקשירה של התפרים שהיו נמוכים יותר. הen, השתל התהפך לצד השמאלי של הבטן (ראש העכברוש מוצב בשעה 9) לחשוף ולתפור את קיר החזית של ההשקה.
8. השקת קצה לצד בין וריד שער השתל וIVC של הנמען מבוצעת גם על ידי הפעלה באמצעות תפרים 10-0 Prolene. עם העכברוש עדיין שוכב על צד (ראש בשעת העמדה 9), השתל ימוקם בצד השמאלי של הבטן ותפרים שהיו תחתונים ממוקמים. השקתו התחילה עם הקיר האחורי מבפנים הכלי. לאחר השהייה של התפר התחתון קשור, תפרי הקיר הקדמיים יכולים להתבצע מבחוץ.
9. הסר את תפסי 1 דיסטלי, ואחריו את התפסים העליונים. כל דימום anastomotic נשלט על ידי לחץ ישיר באמצעות Q-טיפים. השתל צריך להיבדק לreperfusion שווה ומהיר.
10. לכרות המעי הדק של כל הנמען לאחר קשירה של כלי mesenteric. מקבלים לעבור enterectomy סיכום הביניים, שימור 2-3 סנטימטר של פרומעי צם ximal ו1 סנטימטר של אילאום דיסטלי.
11. שחזור המשכיות enteric ידי הפרוקסימלית (jejuno-jejunostomy) ודיסטלי (ileo-ileostomy) קצה לקצה anastomoses מעיים באמצעות תפר נקטע שכבה אחת עם 6-0 Monocryl. בערך 16 תפרים יש צורך להשלים את anastomoses.
12. השקיית חלל הצפק עם מלח רגיל עד נקי. לנהל 2 מ"ל של תמיסת מלח הרגיל intraperitoneally להחלפת נוזלים. ואז לסגור את הבטן באמצעות תפרים רצופים עם 3-0 Vicryl לשכבת השריר בתוספת תפר עור מתמשך.
13. בתקופה שלאחר ניתוח החולדות צריכות להיות כל הזמן בצום (עם גישה לפתרון גלוקוז ומים) עבור 24 שעות נוספות ואז מחדש על החולדה צ'או הסטנדרטי וכרצונך מים. שיכוך כאבים בcarprofen צריך להינתן במשך 3 ימים (ראה מינון בהמשך).

תוצאות

כמובן שלאחר ניתוח רגיל

החיות המושתלות צריכות להתאושש במהירות מההליך תחת מנורת חום לכ 1 שעות. היפותרמיה היא אחד הגורמים עיקריים לתמותה לאחר ניתוח ויש להימנע בזהירות תוך ואחרי ניתוח. הפסדי נוזלים במהלך ניתוח חייבים להיות מוחלפים על ...

Discussion

בעוד מודלי השתלת מעיים בעכברים כבר תוארו כבר ^ב5 1970ies רוב הדגמים המועסקים לאחרונה כרוך השתלת מעי heterotopic בטכניקות שונות ^13. בעוד הליכי heterotopic בכלל יש יתרון של טכניקות מייקרו קלות ונגישות קלה יותר של השתל לצורך ההערכה, השתלת מעיים heterotopic יש חסרון הגדול של לא לוק...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
שם המגיב	חברה	מספר קטלוגים	תגובות (אופציונלי)
אוניברסיטת ויסקונסין (UW) פתרון (ViaSpan)	בריסטול מאיירס סקוויב
פתרון uro-N Nebacetin	Nycomed	6967855
אמפיצילין	רציופארם
Carprofen (Rimadyl)	פייזר
Prolene 10-0 תפר unresorbable	Ethicon
Monocryl 6-0 תפר resorbable	Ethicon
Vicryl 3-0 תפר resorbable	Ethicon
ד הצנתר G 20 מ"מ 1.1x33	בראון
צנתר 22 מ"מ 0.9x25 ד G	בראון
Kodan העור Prep	Schülke
NaCl 0.9% פתרון עירוי	בראון
מלקחיים מעוגלים קטן	FineScienceTools	11009-13
מלקחי Micro מעוקלים	Aesculap	BD 333
מלקחי Micro מעוקלים	Aesculap	FD281R
מייקרו מלקחיים ישר 1	WPI	5
מייקרו מלקחיים ישר 2	WPI	2
בעל מחט מייקרו	WPI	14081
מספרי מייקרו	FineScienceTools	15006-09
מייקרו אזמל	מאני	סכין העינים
מהדק מייקרו	Aesculap	FB329R