Sıçanlarda Ortotopik Küçük Bağırsak Nakli

Özet

İnce bağırsak transplantasyonu irreversibl bağırsak yetmezliği olan hastalar için kabul edilen bir tedavi seçeneği haline gelmiştir. Sıçanlarda ortotopik ince barsak nakli Bizim deneysel model intestinal transplantasyon komplike yatan immünolojik ve inflamatuvar süreçleri ele güvenilir bir aracı olarak hizmet vermektedir.

Özet

İnce bağırsak transplantasyonu parenteral beslenme kısa bağırsak sendromu ve yetmezliği (geri dönüşümsüz intestinal yetmezlik) olan hastalar için kabul edilen bir klinik seçenek haline gelmiştir. Özelleşmiş merkezlerde ameliyat iyileşme ve yaşam ^1,3 yüksek kalite sunarken yönetme stratejileri mükemmel kısa ve orta vadeli hasta ve greft sağkalım sağlamıştır. Diğer katı organların daha yaygın nakli aksine (örneğin kalp, karaciğer) intestinal transplantasyon ile indüklenen greft fonksiyonu ve immünolojik değişiklikler birçok yatan mekanizmaları tamamen bilinen ^6,7 değildir. Rejeksiyon, sepsis ve kronik greft yetmezliği Episodes hala az avantajlı uzun dönem sonuçlarında katkıda bulunan ve potansiyel olarak böyle bir nakli yararlanacak evde parenteral beslenme hasta giderek artan sayısına rağmen prosedür daha yaygın istihdam önündeki temel engellerdir. Ince bağırsak içeriryolcu lökositlerin çok sayıda genellikle ilişkili lenfoid bağırsak sistemi (GALT) bağırsak greft yüksek immünojenitenin nedeni bu parçası olmak parçası olarak anılacaktır. Greft mukozal bütünlüğü (rejeksiyon örneğin) tehlikeye kez varlığı ve bağırsak birçok kommensal ve patojenlerin yakınlığı sepsis ataklarının şiddeti açıklar. Güvenli ve uygun hayvan modellerinde elde daha fazla bağırsak-ya da çoklu organ transplantasyon veri alanında ilerleme için gereklidir. Modeli Burada bir kez standart bir şekilde kurulan güvenilirlik ve fizibilite hem birleştirir ve bağırsak nakli ile tetiklenen yatan kompleks moleküler, hücresel ve fonksiyonel mekanizmaları hakkında değerli bilgiler verebilir sağladı. Biz başarıyla Laboratuvarımızda ^8-11 fazla 5 yıldır kullanılan ve tarif prosedür rafine var. Jüpiter Video tabanlı biçimde kompleks prosedürü göstermek için özellikle yararlıdırDure ve bağırsak nakli araştıran ortotopik kemirgen modeli kurmak için planlama grupları için ilk tuzaklardan kaçınmak.

Protokol

1. Donör Operasyonu

1. Donör sıçan 24 saat (su / glukoz solüsyonu ücretsiz erişim) için oruç tutulmalıdır.
2. İzofluran inhalasyon anestezi uygulamak için, standart atomizer üzerinde% 2 ile başlamak ve daha sonra laparotomi gerçekleştirdikten sonra% 1 azaltır. Sedasyon kontrol etmek için bir ayak tutam gerçekleştirin.
3. Karın Tıraş ve cilt hazırlık 3 kez (Kodan) ile temizleyin. Sonra analjezik subkutan uygulamadan sonra median insizyon gerçekleştirin.
4. Greft tuzlu batırılmış gazlı bez sarılmış sonra, pankreas ve bir Q-ucu (6x büyütme ile cerrahi mikroskop altında) hafifçe çıkan kolon arasındaki fizyolojik yapışıklıklar ayırın.
5. Arter ve 7-0 ipek kullanılarak ileoçekal ve orta ve sağ kolik damarları bölün. Çıkan kolon superior mezenterik ven sağ tarafında (SMV) dışarı yayılır sonra, ileoçekal sağ ve orta kolik damarları 7-0 bağları kullanarak ligasyonu ve bölünmesi için tespit edilebilir.
6. Tüm SMV dışarı doğruldu ve maruz böylece yukarı doğru mide çekin. Retraksiyon bir sivrisinek kelepçe kullanın. Kelepçe gerektiğinde bir şekil haline getirilir hamuru kütlesi tarafından tutulur.
7. Arter ve SMV gelen pankreatobiliyer-duodenal damarlar bölün. Pankreatik doku greft çıkarılmalıdır önce SMV kaynaklanan tüm küçük pankreatobiliyer-duodenum damarlar dikkatle tespit 7-0 ipek ile bağlandı ve bölünmesi gerekir.
8. Arter ve SMV ve abdominal aorta arasındaki tüm lenfatikler dahil kaybetmek bağ dokusu bölün. Hala karnın sağ tarafında greft ile, SMV ve abdominal aorta erişilebilir arasındaki tüm lenfatikler dahil bağ doku kaybedebilir. Bu bağ doku 7-0 ipek kullanılarak bağlandı ve bağırsak greft gelen postoperatif lymphorrhea önlemek için bölünmesi gerekir.
9. Arter ve sağ renal arter bölün. Bağ dokusu ayrılmıştır sonra, sağ renal arter accessibl olurve e ile bağlandı ve 7-0 ipek kullanılarak ayrılmıştır.
10. Sistemik penil ven yoluyla heparin iv 200 birimlerini kullanarak sıçan heparinise.
11. Marjinal arterler Arter ve duodenostenoz jejunal kavşakta ve terminal ileumdan ince bağırsak bölün.
12. Aort SMA kökeni proksimale bağlandı edilir. Portal ven splenik ven ile birleştiği noktada kesmiş edilir. Sonra greft, aort segmenti olan SMA, vasküler pedikül oluşan ile hasat edilir.

2. Backtable Prosedürü

1. Aort kanal aracılığıyla 4'te Wisconsin solüsyonu (UW) University ° C'de 3 ml kullanılarak greft serpmek ve 4 ° C (lümen sulama zorunlu edilir) Uro-Nebacetin N çözelti, 30 ml ile jejunum ucundan bağırsak lümeninde sulamak .

Hemen greft ekstraksiyon uygulandıktan sonra, aort boru 3 ml soğutulmuş UW solüsyonu ile perfüzyon için kullanılır. Bu, bir 20 G iv kateter10 ml lik bir şırınga kullanılır. Perfüzat bölünmüş portal ven özgürce dışarı akmasına dikkat edilmelidir. Nebacetin ile bağırsak sulama için, 50 ml'lik bir şırınga kullanılır.

2. Alıcının hazırlanması sırasında 4 ° C'de UW çözüm greft saklayın.

3. Alıcı Operasyonu

1. Alıcı sıçan 24 saat (su / glukoz solüsyonu ücretsiz erişim) için oruç tutulmalıdır.
2. İzofluran inhalasyon anestezi uygulamak için, standart atomizer üzerinde% 2 ile başlamak ve daha sonra laparotomi gerçekleştirdikten sonra% 1 azaltır. Sedasyon kontrol etmek için bir ayak tutam gerçekleştirin.
3. Karın Tıraş ve cilt hazırlık 3 kez (Kodan) ile temizleyin. Sonra analjezi için Carprofen 5 mg / kg sc subkutan uygulamadan sonra median insizyon gerçekleştirin.
4. Normal salin batırılmış gazlı bez alıcı barsak sarın ve alıcının göğüs üzerine yerleştirin.
5. Q-ipuçları ile dobra dobra retroperiton açın ve abdominal maruzSadece gerekirse aşağı iliak damarlar seviyesine böbrek damarları, aşağıda nal aorta ve vena kava inferior da microscissors kullanın. Kan kaybını önlemek için 7-0 ipek kullanılarak aort ve vena kava dan küçük bel ve omurga tribuaries Arter. (Bunu yapmak için, 16x cerrahi mikroskop zoom değiştirin.)
6. Distale mikrodamar klipler kullanarak sol renal damarların proksimal ve iliak bifurkasyon Aşağıda, yukarıda aorta ve IVC çapraz klemp. Sadece tek bir kelepçe aynı anda her iki damar sıkıştırmak için distal olarak hem de proksimal kullanılır. Anteriorde bir microknife kullanarak hem damarları kesilirken ve kalan kan yıkayın.
7. Sürekli 10-0 Prolene sütür kullanarak greft aort segmenti ve alıcının infrarenal aorta arasında bir uç-yan anastomoz oluşturun .. Başlangıçta, greft düşük fiyatının dikiş arteryel anastomoz ve bağlama arka duvarına dikiş gerçekleştirmek için karnın sağ tarafında (12'de konumlandırılmış sıçan kafası) üzerine yerleştirilir. Thtr, greft anastomoz ön duvarı açığa ve dikiş karın (9 o'clock konumlandırılmış sıçan başkanı) sol tarafına teslim edilmektedir.
8. Greft portal ven ve alıcının IVK arasında bir uç-yan anastomoz 10-0 Prolene kullanarak sütürlerinin tarafından aynı şekilde gerçekleştirilir. Sıçan ile hala yalan yanlara (9 munda kafası), greft karnın sol tarafında konumlandırılmış ve daha düşük bir konaklama sütür yerleştirilir. Anastomoz damar içeriden arka duvar ile başladı. Alt kenet bağlı kalmak sonra, ön duvar dikiş dışarıdan gerçekleştirilebilir.
9. Üst kelepçeler ardından ilk distal kelepçeleri sökün. Herhangi anastomotik kanama Q-ipuçlarını kullanarak doğrudan basınç tarafından kontrol edilir. Greft eşit ve hızlı reperfüzyon kontrol edilmelidir.
10. Mezenterik damarların ligasyonu sonrası tüm alıcının ince bağırsak rezeksiyonu. Alıcılar pro 2-3 cm koruyarak, subtotal enterektomi geçmesiximal jejunum ve ileum distalinde 1 cm.
11. Proksimal (Jejuno-jejunostomi) ve distal (ileo-ileostomi) uçtan 6-0 Monocryl bir kesintiye tek katmanlı sütür kullanılarak intestinal anastomozlar bitirmek. Tarafından enterik süreklilik Restore Yaklaşık 16 sütürler anastomozlar tamamlamak için ihtiyaç vardır.
12. Temizlenene kadar normal salin ile periton boşluğuna sulayın. Sıvı replasmanı için normal serum fizyolojik intraperitoneal 2 ml uygulayın. Sonra 3-0 kas tabakası için Vicryl artı sürekli bir cilt sütür ile devamlı sütür kullanılarak karın kapatın.
13. Postoperatif dönemde sonrasında ratlar standart sıçan yemi ve su ad libitum tarihinde yeniden bir 24 saat boyunca (su ve glikoz çözeltisi erişim) oruç tutulmalıdır. Carprofen ile analjezi 3 gün (aşağıda dozaj bakınız) uygulanmalıdır.

Sonuçlar

Normal postoperatif seyir

Nakledilen hayvanların yaklaşık 1 saat için bir ısı lambası altında prosedürü hızla kurtarmak gerekir. Hipotermi postoperatif mortalitenin önemli bir nedenidir ve dikkatle intra-ve postoperatif kaçınılmalıdır. İntraoperatif sıvı kayıpları 2.5 ml serum fizyolojik sc enjeksiyonu artı 2.5 ml Glukoz% 5, ilk 24 saat için her 8 saatte tarafından değiştirilmesi gerekir. Sıçanlarda da postoperatif ilk 24 saat glukoz solüsyonu (veya jel diyet) ve s...

Tartışmalar

Sıçanlarda intestinal transplantasyon modelleri 1970'lerde ⁵ gibi erken olarak tarif edilmiş olsa da son zamanlarda kullanılan modellerin en farklı teknikler kullanılarak ¹³ heterotopik bağırsak nakli içerir. Genel olarak heterotopik işlemleri daha kolay mikrocerrahi teknikleri ve değerlendirme için greft kolay erişilebilirlik avantajı varken, heterotopik intestinal transplantasyon hesaba nakledilen ince barsağın birden etkileşimleri ve kontraktil aktivitesi gibi fonksiyonel y?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reaktif Adı	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar (isteğe bağlı)
University of Wisconsin (UW) çözümü (ViaSpan)	Bristol-Myers Squibb
Üro-Nebacetin N çözümü	Nycomed	6967855
Ampisilin	Ratiopharm
Carprofen (Rimadyl)	Pfizer
Prolen 10-0 unresorbable sütür	Ethicon
Monocryl 6-0 emilebilir sütür	Ethicon
Vicryl 3-0 emilebilir sütür	Ethicon
iv Kateter G 20 1.1x33 mm	Braun
iv Kateter G 22 0.9x25 mm	Braun
Kodan Skin Prep	Schülke
% 0.9 NaCl İnfüzyon çözeltisi	Braun
Kavisli forseps küçük	FineScienceTools	11009-13
Mikro forseps kavisli	AESCULAP	BD 333
Mikro forseps kavisli	AESCULAP	FD281R
Mikro düz 1 forseps	TEFE	5
Mikro düz 2 forseps	TEFE	2
Mikro iğne tutucu	TEFE	14081
Mikro makaslar	FineScienceTools	15006-09
Mikro neşter	MANI	Oftalmik bıçak
Mikro kıskaç	AESCULAP	FB329R