ラット同所性小腸移植

要約

小腸移植は、不可逆的な腸の障害を持つ患者のための受け入れられる治療の選択肢となっています。ラットにおける同所性小腸移植の私達の実験モデルは、腸移植を複雑に基礎免疫および炎症プロセスに対処するための信頼性の高いツールとして機能します。

要約

小腸移植は、非経口栄養の短腸症候群と障害（不可逆性腸疾患）の患者さんのために受け入れられている臨床検査オプションになっています。専門センターで手術を改善し、寿命^1,3の高品質を提供しながら管理する戦略が優れた短期および中期患者および移植片の生存につながっている。他の固形臓器のより一般的な移植とは異なり（ すなわち心臓、肝臓）腸移植により誘導される腎機能および免疫学的変化の多くの根本的なメカニズムは完全に知られている^6,7はありません。急性拒絶反応、敗血症および慢性移植片障害のエピソードはまだ不利な長期転帰に寄与し、潜在的にそのような移植の恩恵を受けるだろう在宅中心静脈栄養法を受けている患者が増えているにもかかわらず、手続きのより広範な雇用を妨げる主な障害となっている。小腸は含まれています乗客の白血球の数が多い一般的に腸関連リンパ系（GALT）腸移植の高いimmunogenity理由のこの部分の一部であると呼ばれる。移植粘膜の整合性が損なわれると、腸内で存在し、多くの共生および病原体の近接している（拒否するなどして）敗血症のエピソードの重症度を説明しています。信頼性と実現可能な動物モデルから生成される腸や臓器移植、より多くのデータのフィールドを進めるために必要とされる。モデルはここに一度標準化された方法で確立された信頼性と実現可能性の両方を兼ね備えていますし、腸の移植によってトリガされ、基礎となる複雑な分子、細胞および機能メカニズムに貴重な洞察を提供することができます提供しました。我々は、正常に我々の研究室で^8月11日で5年以上にわたって記載されている手順を使用し、洗練されてきた。 Joveのビデオベースの形式は複雑proceを実証するために特に有用であるdureおよび腸管移植を調査同所齧歯類モデルを確立することを計画してグループのための初期の落とし穴を避けることができます。

プロトコル

1。ドナー操作

1. ドナーラットを24時間（水/グルコース溶液への無料アクセス）の絶食に保つ必要があります。
2. イソフルラン吸入麻酔を誘導するために、標準のアトマイザーで2％で始まり、その後開腹術を行った後、1％まで減らすことができます。鎮静状態をチェックするためにつま先のピンチを実行します。
3. 腹部を剃ると皮膚の準備3回（講談）で清掃してください。その後、鎮痛剤の皮下投与後の正中切開を行います。
4. 移植片は生理食塩水に浸したガーゼでラップされた後、Q-ティップ（6X倍率の手術用顕微鏡下）で穏やかに膵臓と上行結腸の間の生理的な癒着を分離します。
5. 結紮すると7から0シルクを使用した回盲＆真ん中＆右結腸の血管を分割します。上行結腸は腸間膜静脈（SMV）の右側に広げられた後、回盲部、右および中結腸船は7から0の関係を用いてライゲーションおよび除算を識別することができます。
6. 全体SMVがまっすぐと露出するように、上向きに胃を縮める。引き込み用の蚊クランプを使用しています。クランプは、必要に応じた形状に形成された粘土の塊によって保持されている。
7. SMVから来る膵十二指腸静脈を結紮し、分割します。膵組織が移植から削除することができます前に、SMVから発信されたすべての小さな膵十二指腸静脈は慎重に、識別された7から0シルクで結紮し、分割しなければなりません。
8. SMVと腹部大動脈の間のすべてのリンパ管を含む失う結合組織を結紮し、分割します。まだ腹部の右側に移植すると、SMV、腹部大動脈がアクセス可能であるとの間のすべてのリンパ管を含む結合組織を失う。この結合組織は、7から0の絹を用いて連結し、腸移植から術後のリンパ漏を避けるために分割する必要があります。
9. 右腎動脈を結紮し、分割します。結合組織が分割された後、右腎動脈はaccessiblになるeと7から0絹を用いて連結し、分割されています。
10. 全身陰茎静脈を介してヘパリンIVの200台を用いたラットをheparinise。
11. マージナル動脈を結紮し、十二指腸空腸接合時および回腸末端部で小腸を分割します。
12. 大動脈は、SMAの原点に近位に連結される。門脈は脾静脈に合流する地点に離断されています。その後、移植片は、大動脈セグメントを持つSMAのその血管茎から成ると収穫されます。

2。 Backtable手順

1. 4℃ウィスコンシンソリューション（UW）大学の3ミリリットルを用いて移植片を灌流大動脈導管を介してCと4℃で泌尿Nebacetin Nの溶液30mlと空腸端から腸管腔を灌漑（ルーメン灌漑は必須です） 。

直ちに移植を抽出した後、大動脈導管は3ミリリットルチルドUW液で灌流するために使用されます。で、このため、20G静脈カテーテル10mlの注射器が使用されます。灌流液は門脈から自由に流出することが観察されるべきである。 Nebacetinと腸の灌漑のために、50mlの注射器が使用されます。

2. 受信者の準備中に4℃でUW液で移植を格納します。

3。受信者動作

1. レシピエントラットを24時間（水/グルコース溶液への無料アクセス）の絶食に保つ必要があります。
2. イソフルラン吸入麻酔を誘導するために、標準のアトマイザーで2％で始まり、その後開腹術を行った後、1％まで減らすことができます。鎮静状態をチェックするためにつま先のピンチを実行します。
3. 腹部を剃ると皮膚の準備3回（講談）で清掃してください。その後術中鎮痛カルプロフェン5 mg / kg皮下の皮下投与後の正中切開を行います。
4. 生理食塩水に浸したガーゼで受信者の腸をラップして、受信者の胸の上に置きます。
5. 綿棒とぶっきらぼうに後腹膜を開き、abdomiを公開ただ、必要に応じてダウン腸骨血管のレベルに腎血管、以下NAL大動脈と下大静脈はまたmicroscissorsを使用しています。血液の損失を避けるために、7から0シルクを使用した大動脈と大静脈から小さな腰と脊椎tribuariesをライゲーションする。 （これを行うには、16倍に手術用顕微鏡のズームを変更してください。）
6. 左腎血管近位および遠位微小血管クリップを使用して腸骨分岐上記下大動脈と下大静脈をクロスクランプ。唯一つのクランプを同時に両方の血管をクランプするために遠位ならびに近位使用されています。前方microknifeを使用して両方の血管を切開し、残りの血液を洗い流す。
7. 連続10から0 PROLENE縫合糸を用いて移植大動脈セグメントと受信者の大動脈大動脈の間に端側吻合を作成..当初、移植片は下ステー縫合の動脈吻合と抱き合わせの後ろの壁のステッチを実行するために腹部の右側（12時の位置に配置されたラットの頭）に配置されます。木曜日enは、グラフトは吻合部の前壁を露出し、縫合する腹部の左側（9時位置に配置されたラットの頭）に引き渡されます。
8. グラフト門脈と受信者の間でIVC端側吻合が10から0 PROLENEを使用して縫合を実行することにより、同様に実行されます。ラットまだ横向きに横たわって（9時の位置でヘッド）と、グラフトは、腹部の左側に配置され、下ステー縫合が配置されます。吻合は血管の内側から後ろの壁を使って起動されます。下ステー縫合糸が結ばれた後は、前壁のステッチは外側から行うことができます。
9. アッパークランプ続いた最初の遠位クランプを取り外します。すべて吻合出血は綿棒を使用して直接圧力によって制御される。移植片は、平等かつ迅速な再灌流をチェックする必要があります。
10. 腸間膜血管の結紮後全体受取人の小腸を切除。受信者は、プロの2-3センチメートルを維持したまま、小計腸切除を受けるximal空腸及び回腸遠位部の1cm。
11. 6から0 Monocrylで中断1層縫合糸を用いて腸吻合を終了するには、エンド·近（空腸空腸吻合術）と遠位（回腸造設）により腸の連続性を復元します。約16の縫合糸は、吻合を完了するために必要とされる。
12. きれいになるまでは通常の生理食塩水で腹腔内を洗浄してください。水分補給のために腹腔内に生理食塩水2mlを管理します。その後3から0筋層用VICRYLプラス連続皮膚縫合糸で連続縫合を使用して腹部を閉じます。
13. 術後のラットは標準ラット飼料と水を自由に摂取上で再起動し、別の24時間絶食（水とグルコース溶液へのアクセス権を持つ）に保つ必要があります。カルプロフェンと鎮痛は3日（以下の用量を参照）のために投与されるべきである。

結果

通常の術後経過

移植された動物は約1時間熱ランプ下の手順から迅速に回復する必要があります。低体温は術後死亡の主要な原因であるため、慎重に内および術後に避けるべきである。術中流体損失は2.5ミリリットル生理食塩水の皮下注射プラス2.5ミリリットルグルコース5パーセント最初の24時間毎に8時間に置き換えなければなりません。ラットはまた、術後最初の24時間?...

ディスカッション

ラットにおける腸移植モデルが1970ies ⁵のように早く説明してきたが、最近採用のモデルのほとんどは、さまざまなテクニックを^13を用い^て異所性腸移植を伴う。一般的に異手順は簡単顕微技術や評価のための移植の容易なアクセス可能性の利点を持っているが、異所性腸移植が考慮移植小腸と収縮活性のように、その機能面の複数の相互作用を考慮しないという大き?...

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
試薬の名称	会社	カタログ番号	コメント（オプション）
ウィスコンシン大学（UW）液（ViaSpan）	ブリストル·マイヤーズスクイブ
泌尿Nebacetin Nのソリューション	ナイコメッド	6967855
アンピシリン	Ratiopharm
カルプロフェン（Rimadyl）	ファイザー
プロレン10から0 unresorbable縫合	エチコン
Monocryl 6から0吸収性縫合糸	エチコン
ビクリル3から0吸収性縫合糸	エチコン
IVカテーテルG 20 1.1x33ミリメートル	ブラウン
IVカテーテルG 22 0.9x25ミリメートル	ブラウン
講談スキンプレップ	Schülke
NaClの0.9％輸液	ブラウン
小さな湾曲鉗子	FineScienceTools	11009から13
マイクロ鉗子は、湾曲	AESCULAP	BD 333
マイクロ鉗子は、湾曲	AESCULAP	FD281R
Microはストレート1鉗子	WPI	5
Microはストレート2鉗子	WPI	2
マイクロニードルホルダー	WPI	14081
マイクロ剪刀	FineScienceTools	15006から09
マイクロメス	MANI	眼科用ナイフ
マイクロクランプ	AESCULAP	FB329R