Ортотопическая малого трансплантации кишечника у крыс

Резюме

Малый трансплантации кишечника стало общепринятым вариантом лечения для пациентов с необратимыми кишечной недостаточности. Наши экспериментальные модели ортотопической небольшой трансплантации кишечника у крыс служит надежным инструментом для решения основных иммунологических и воспалительных процессов, которые усложняют кишечного трансплантации.

Аннотация

Малый трансплантации кишечника стало общепринятым клиническим вариантом для пациентов с синдромом короткой кишки и недостаточности парентерального питания (необратимое кишечной недостаточности). В специализированных центрах улучшить оперативное управление и стратегии привели к отличным кратко-и среднесрочной пациентов и выживаемость трансплантата, обеспечивая при этом высокое качество жизни ^1,3. В отличие от более распространенных трансплантации других солидных органов (например, сердца, печени), многие основные механизмы функция трансплантата и иммунологические изменения индуцированные кишечные трансплантации не совсем известно ^6,7. Случаи острого отторжения, сепсис и хронической сердечной недостаточности трансплантата являются основными препятствиями по-прежнему способствует менее благоприятных долгосрочных результатов и препятствует более широкому занятости процедуру, несмотря на растущее число пациентов на дому парентерального питания тех, кто может извлечь выгоду из такой пересадки. В тонком кишечнике содержитсяБольшое количество пассажирских лейкоцитов обычно упоминается как часть кишечника лимфоидной системы (GALT) это является частью причиной высокой иммуногенности кишечного трансплантата. Наличие и близость многих комменсалы и патогенных микроорганизмов в кишечнике объясняется тяжести сепсиса эпизоды раз трансплантата слизистой целостность находится под угрозой (например, путем отказа). Для продвижения области кишечные и полиорганной трансплантации больше данных, полученных из надежных и возможные модели на животных необходимы. Модель предоставлена ​​здесь сочетает в себе надежность и технико-экономическое когда она будет создана в стандартной форме и могут предоставить ценную информацию в базовой сложные молекулярные, клеточные и функциональные механизмы, которые вызваны кишечной трансплантации. Мы успешно использовали и уточнена процедура описана более чем на 5 лет в нашей лаборатории ^8-11. Юпитер видео-формат особенно полезен для демонстрации комплексных процедурДюре и избежать ловушек для начальной группы планируют создать ортотопической грызунов исследования кишечного трансплантации.

протокол

1. Донор операции

1. Донор крысы должны быть поста в течение 24 ч (свободный доступ к воде / растворе глюкозы).
2. Для индукции анестезии Isoflurane ингаляции, начните с 2% на стандартные форсунки, а затем уменьшить до 1% после выполнения лапаротомии. Выполните ноги щепотку, чтобы проверить седативный эффект.
3. Бритье живот и очистить кожу Подготовка 3 раза (Kodan). Затем выполните средний разрез после подкожного введения анальгетиков.
4. После прививки, завернутый в солевом растворе пропитанной марли, отделить физиологические спайки между поджелудочной железой и восходящей ободочной кишки осторожно Q-наконечник (под операционным микроскопом с 6-кратным увеличением).
5. Лигируют и разделить илеоцекального и права и среднего колики судов, использующих 7-0 шелка. После восходящей ободочной кишки распространено на правой стороне верхней брыжеечной вены (SMV), илеоцекальной, правой и средней суда колики могут быть определены для перевязки и разделения использованием 7-0 связей.
6. Втяните живот вверх, так что весь SMV, расправляют, а подвергается. Использование комаров зажим для отвода. Зажим проводится пластилин масса формируется в форму по мере необходимости.
7. Лигируют и разделить pancreatico-перстной вены Исходя из SMV. Все мелкие pancreatico-перстной вены, происходящих из SMV должны быть тщательно определены, лигировали с 7-0 шелка и разделен перед ткани поджелудочной железы может быть удалена из трансплантата.
8. Лигируют и разделить потерять соединительной ткани, в том числе все лимфатические между SMV и брюшной аорты. С трансплантата все еще на правой стороне живота, теряют соединительной ткани, в том числе все лимфатические между SMV и брюшной аорты является доступным. Эта соединительная ткань должна быть лигировали использованием 7-0 шелка и разделить, чтобы избежать послеоперационных лимфореи из желудочно-кишечного трансплантата.
9. Лигируют и разделить правой почечной артерии. После того, как соединительная ткань делится, правой почечной артерии становится accessiblе и лигируют и разделил 7-0 использованием шелка.
10. Системно heparinise крысы с использованием 200 единиц гепарина IV через вену полового члена.
11. Лигируют предельной артерий, и разделить тонкой кишки при дуодено-соединения и тощей кишки в подвздошной кишки.
12. Аорты лигируют проксимальнее происхождения SMA. Воротной вены перерезана в месте слияния с селезеночной вены. Затем трансплантат собирают с сосудистой ножке, состоящей из SMA с аорты сегменте.

2. Процедура Backtable

1. Заливать трансплантата с использованием 3 мл Университета Висконсина решение (UW) при 4 ° С через аортальный трубопровода и орошения просвете кишечника от тощей кишки конца 30 мл Уро-Nebacetin решение N при 4 ° С (люмен орошения является обязательным) .

Сразу же после извлечения протеза, аорты трубопровод используется для перфузии с 3 мл охлажденной решение UW. Для этого 20 G IV катетер на10 мл шприц используется. Перфузат должны быть соблюдены, чтобы свободно вытекать из разделили воротной вены. Для кишечные орошения с Nebacetin, 50 мл шприц используется.

2. Хранить трансплантата в решении UW при 4 ° C в ходе подготовки получателя.

3. Получатель операции

1. Получатель крысы должны быть поститься в течение 24 ч (свободный доступ к воде / растворе глюкозы).
2. Для индукции анестезии Isoflurane ингаляции, начните с 2% на стандартные форсунки, а затем уменьшить до 1% после выполнения лапаротомии. Выполните ноги щепотку, чтобы проверить седативный эффект.
3. Бритье живот и очистить кожу Подготовка 3 раза (Kodan). Затем выполните средний разрез после подкожного введения Carprofen 5 мг / кг подкожно для интраоперационного обезболивания.
4. Оберните получателя кишечника в нормальном физиологическом растворе пропитанной марли и положите его на грудь получателя.
5. Откройте забрюшинного пространства прямо с Q-подсказки, и подвергать брюшнойвнутренней аорты и нижней полой вены чуть ниже почечных сосудов до уровня подвздошных сосудов, в случае необходимости также использовать microscissors. Лигируют небольшой поясничный и спинной tribuaries от аорты и полой вены 7-0 использованием шелка, чтобы избежать потери крови. (Для этого, изменения масштаба хирургического микроскопа 16x).
6. Крест-зажим аорты и нижней полой вены ниже левой почечных сосудов проксимальнее и выше подвздошной бифуркации дистально использованием микрососудов клипов. Только один зажим используется проксимально, так и дистально зажать оба судна одновременно. Надрезать оба судна вперед использованием microknife и промыть оставшиеся крови.
7. Создание конца в сторону анастомоза между трансплантатом сегмента аорты и инфраренальной аорты получателя с использованием непрерывного 10-0 Prolene шва .. Первоначально трансплантат находится на правой стороне живота (глава крысы расположен в 12 часов) для выполнения стежков назад стенке артериальных анастомозов и связывая нижней пребывания шва. Thан, трансплантат переданы в левой части живота (глава крысы расположены в 9 часов) для выявления и ушивания передней стенки анастомоза.
8. Конец-в-бок анастомоза между трансплантатом воротной вены и нижней полой вены реципиента осуществляется также путем запуска швов использованием 10-0 Prolene. С крыса все еще лежала боком (голова в 9 часов), трансплантат расположены на левой стороне живота и нижней пребывания шва находится. Анастомоза начал с задней стенки изнутри судна. После того, как нижняя пребывания шва связано, передние стежки стены могут быть выполнены из вне.
9. Снимите зажимы дистальных первой, а затем верхний зажимы. Любое кровотечение анастомоза находится под контролем прямого давления с помощью Q-Tips. Трансплантат должен быть проверен на равный и быстрый реперфузии.
10. Резекции тонкой кишки всей получателя после перевязки сосудов брыжейки. Получатели пройти промежуточные итоги резекция тонкой кишки, сохранение 2-3 см проximal тощей кишки и 1 см дистального отдела подвздошной кишки.
11. Восстановление кишечной непрерывности проксимальных (еюно-эюностомия) и дистальных (подвздошно-илеостомия) из конца в конец кишечного анастомоза использованием прервал один слой шва с 6-0 Monocryl. Около 16 швов, необходимых для завершения анастомоза.
12. Промывать в брюшную полость с физиологическим раствором до полной очистки. Администрирование 2 мл физиологического раствора внутрибрюшинно для замены жидкости. Затем закройте живот с помощью непрерывного шва с 3-0 Викрил для мышечного слоя плюс непрерывного шва кожи.
13. В послеоперационном периоде у крыс должна быть поста (с доступом к воде и раствора глюкозы) в течение еще 24 ч, затем перезапущен на стандартных крыс корма и воды вволю. Обезболивание с карпрофена следует вводить в течение 3 дней (см. дозировку ниже).

Результаты

Нормальное течение послеоперационного периода

Пересаженных животные должны быстро восстановиться от процедуры, предусмотренной тепла лампы в течение примерно 1 часа. Гипотермия является одной из основных причин послеоперационной летальности и должны быть тщательно и?...

Обсуждение

В то время как кишечная модели трансплантации у крыс были описаны еще в 1970-е годы ⁵ наиболее недавно занятых модели включают гетеротопической кишечного трансплантации с использованием различных методов ^13. В то время как гетеротопической процедур в целом имеют то преимущес?...

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Название реагента	Компания	Номер в каталоге	Комментарии (по желанию)
Висконсинского университета (UW) решение (ViaSpan)	Bristol-Myers Squibb
Уро-Nebacetin N решения	Nycomed	6967855
Ампициллин	Ratiopharm
Carprofen (Римадил)	Pfizer
Prolene 10-0 unresorbable шва	Ethicon
Monocryl 6-0 рассасывающийся шовный	Ethicon
Викрил 3-0 рассасывающийся шовный	Ethicon
внутривенного катетера G 20 1.1x33 мм	Braun
внутривенного катетера G 22 0.9x25 мм	Braun
Kodan кожи Prep	Schülke
NaCl 0,9% инфузионных растворов	Braun
Изогнутый пинцет малый	FineScienceTools	11009-13
Micro щипцы изогнутые	AESCULAP	BD 333
Micro щипцы изогнутые	AESCULAP	FD281R
Micro щипцы прямой 1	WPI	5
Micro щипцы прямой 2	WPI	2
Микро-иглодержатель	WPI	14081
Микро-ножницы	FineScienceTools	15006-09
Micro скальпеля	МАНИ	Офтальмологическая ножом
Micro зажимы	AESCULAP	FB329R