כליות קפסולת Xenografting ותת עור מכבישי השרשה להערכת הערמונית Carcinogenesis והיפרפלזיה שפירה של הערמונית

Summary

אנו מתארים את הייצור של הורמון כדורים דחוסים, כמו גם השתלה כירורגית תת עורית לעכברים. אסטרטגיה זו יכולה להיות משולבת עם הצמיחה של xenografts תא והרקמה תחת הקפסולה הכליות של עכברים בעירום athymic להעריך היווצרות סרטן ורגולציה של צמיחת ערמונית שפירה הורמונלי.

Abstract

טיפולים חדשים עבור שתי מחלות נפוצות בבלוטת ערמונית, סרטן הערמונית (PrCa) והיפרפלזיה שפירה של הערמונית (BPH), תלויים באופן קריטי על ניסויי הערכת הוויסות הורמונלי שלהם. הורמוני סטרואידי מין (בעיקר אנדרוגנים ואסטרוגנים) הם חשובים בPrCa וBPH; לחקור התפקידים שלהם בזירוז צמיחת ערמונית וסרטן בעכברים עם ניסויים באמצעות כדורי הורמון דחוסים. כדורי הורמון ו / או תרופה מיוצרים בקלות עם עיתונות גלולה, וניתוח מושתלים לתוך הרקמה תת עורית של מארח עכבר הזכר. גם אנו מתארים פרוטוקול להערכת הסרטן הורמונלי על ידי שילוב של השתלת גלולה הורמון תת עורית עם xenografting של recombinants תא ערמונית תחת הקפסולה הכליות של עכברי מדוכאי חיסון. יתר על כן, השתלת גלולה הורמון תת עורי, בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות של רקמת BPH, כדאי להבין ויסות הורמונלי של פרוסט השפיר טוב יותראכלתי צמיחה, וכדי לבחון טיפולים חדשים מיקוד מסלולי הורמון מין סטרואידים.

Introduction

סרטן הערמונית (PrCa) והיפרפלזיה שפירה של הערמונית (BPH) הן מעמסה בריאותית משמעותית. PrCa הוא הסרטן השני הנפוץ ביותר מוצק האיבר אצל גברים וגורם מוביל לסרטן הקשורים למוות ^1. BPH הוא גם נפוץ מאוד בקרב גברים מבוגרים, והערכה הוא כי הביטוי הקליני של BPH, תסמינים בדרכי שתן תחתון (LUTS), ישפיע 50-90% מהגברים ^2. בעוד אנדרוגנים ואסטרוגנים ידועים להיות חשוב בPrCa וBPH, ההבנה של מנגנונים הורמונליים העומדים בבסיס היווצרות סרטן וצמיחה שלנו נשארה שלמה ^3,4. מודלים של בעלי חיים פשוטים וגנטי צייתנים לחזק את המחקרים שיעסקו בסדרי עדיפויות אלה במחקר ערמונית. במחלות הורמון מגיבות כמו PrCa וBPH, השימוש בתת עור, כדורי הורמון שחרור איטיים, בבידוד או בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות (ההעברה של תאים, רקמות או איברים ממין אחד למשנו) לimmunocompמארח עכבר romised, מספק שיטה פשוטה לשחזור ללימוד רגולציה הורמונלית של צמיחה והיווצרות סרטן.

השתלת גלולה הורמון תת עורי היא טכניקה פשוטה ולשעתק ללמוד ויסות הורמונלי של סרטן וגידול שפיר בערמונית ^5. השתלה תת עורית של עכברי זכרים מבוגרים עם 25 טסטוסטרון מ"ג (T) ו17β-אסטרדיול 2.5 מ"ג (ה _2), גורמת לעלייה בסרום E ₂ וירידה הדרגתית בT, יצירה מחדש של הסביבה ההורמונלית הדינמית של גברים מזדקנים ^5,6. בנוסף, מודל זה משחזר רבים של המאפיינים הקליניים של ^5,7 BPH-LUTS. שיטות חלופיות של ממשל הורמון כוללות אוראלי / gavage או זריקת intraperitoneal, אשר גורם למצוקה למכרסמים, הם פחות עקביים באספקת אותה הכמות של תרופה לאורך זמן, ויותר עתיר עבודה מאשר השתלה כירורגית חד פעמית. מצבים תת עורית אחרים לשעותormone ו / או אספקת סמים כוללות כמוסות Silastic ^8. אמנם יש לנו גם ניסיון עם שימוש בכמוסות Silastic, כדורים דחוסים הם העדיפו עבור קלות שימוש שלהם ושחזור. יתר על כן, שיעורי שחרורו של כדורי הורמון דחוסים יותר טובים לחקות את היחסים הדינמיים מין סטרואידי ההורמון נצפו בגברים מזדקנים ^5,7.

מאז הפיתוח של עכברים גנטי חיסון, in vivo מערכות מודל רבים המשלבות טכניקות xenografting פותחו עבור המחקר של מגוון רחב של רקמות בריאות וחולות. ישנן מספר קטגוריות בסיסיות של xenografting. xenografts הרקמה מורכבת של פיסה קטנה של רקמה שלמה, אשר יכול להיות מבנה נורמלי, גידול ממאיר, או גידול שפיר. Szot et al. (2007) לאחרונה מואר xenografting הקפסולה כליות של איי לבלב ^9. Aamdal et al. (1985) תאר xenografting הקפסולה כליות של 27 שורות תאי סרטן אנושיים בimעכבר munocompromised מארח ^10. יכולים גם להיות מורכבים תלים של שורה אחת הנציחה תא (סרטנית או שאינה סרטנית), או יכולים להיות מורכב משורת תאים הונצחו בשילוב עם תאים מבודדים מmesenchyme (שתל רקומביננטי תא).

אנו דוגלים xenografting של recombinants תא כדי לבחון את תפקידיהם של stroma והאפיתל בפיתוח PrCa וBPH. Cunha et al. (1980) היה הראשון לדווח כי כאשר אפיתל שלפוחית ​​העכברי מבוגר בשילוב עם mesenchyme עוברי ואברי המין סינוס (UGM) וxenografted תחת הקפסולה הכליות של מארחים עכברי זכרים, הרקמה מתפתחת למבנים הדומים acini ערמונית ^11. נורמן et al. (1986) הראה כי אפיתל עכבר הבוגר של הערמונית ductal וUGM, כאשר הוא משולב בrecombinants רקמות, עוברים צמיחת ductal והסתעפות המורפוגנזה ^12. הייוורד et al. (1988) הראה כי אפיתל ערמונית אדם מגיב לאינדוקטיביים מ 'עובריesenchyme באופן דומה ^13. מודל ההורמונלית של הסרטן בערמונית, על ידי שילוב של שורת תאי אפיתל הונצח ערמונית אדם BPH-1 עם UGM, דווח לראשונה על ידי וואנג et al. ¹⁴ (2001) ונעשה שימוש נרחב במעבדה שלנו ^15. מודל זה גם מתאים להבנת התקדמות PrCa כי אפיתל השפיר של הערמונית הופך למחלה גרורתית, דוגמנות PrCa המתקדמת בבני האדם ^5. מכיוון שניתן להשפיע על רכיבים ספציפיים גנטי, השתלת רקומביננטי תא שימושית במיוחד כגישה להעריך אינטראקציות סטרומה-אפיתל.

אתרים אחרים המתאימים לxenografting הם intradermal, תת עורית ובמקומות orthotopic ^16. בהתאם לתהליך הרקמות ומחלות של עניין, אלה עשויים להיות גישות חלופיות מתאימות. לצורך המחקר של סרטן ערמונית הורמונליים ורגולציה גידול שפירה, אנו בוחרים את הקפסולה הכליותאתר לxenografting בשל השתל גבוה יותר שלה לקחת שיעור, אספקת דם בשפע, ויכולת להשתיל מספר רב יותר של xenografts לאתר מוגבל אחד ^16. יתר על כן, מניפולציה הורמונלית של עכבר המארח כי תוצאות בניוון של הערמונית מגבילה את השימוש בהשתלת orthotopic ערמונית ^16.

פרוטוקול זה מתאר טכניקות של ייצור הורמון דחוס / סמים גלולה והשתלה כירורגית, כמו גם xenografting הקפסולה כליות של שתלי תא ערמונית אנושי ורקמות. יחד, טכניקות אלה מספקים assay רגיש כדי לקבוע אם עכבר מהונדס גנטי הוא רגיש יותר לPrCa ו / או ייזום BPH מאשר זני שליטה. Xenografting הוא טכניקה רבת עוצמה עבור in vivo הערכה של הפוטנציאל של תאים ניסיוניים כדי לפתח היסטולוגית ותכונות מולקולריות של ממאירות, כמו גם assay לאסטרטגיות טיפול חדשניים במגוון רחב של מחלות שפירים וממאירים.

Protocol

1. הכנת דחוסה הורמונים / תרופות גלולה

1. הליך זה צריך להיעשות במנדף בטיחות כימי בזמן שהוא לובש מעיל מעבדה, כפפות, מסיכה, משקפי מגן, ומכסה מנוע. כדי למנוע זיהום צולב, זה קריטי, כי ציוד גלולה קבלת הוא ניקה ביסודיות עם אתנול 70% לפני ואחרי הייצור של כל סוג של גלולה.
2. שימוש בקנה מידה אנליטית ולשקול נייר, למדוד כמות רצויה של אבקת הורמון / סמים. כ 5% חומר נוסף מומלץ כדי להתאים הפסד בלחיצה.
3. כמה הורמונים / תרופות דורשות סוכן מחייב או מילוי, שהוא מעורב לפני גלולה ייצור. לדוגמה, כדי לייצר גלולה 2.5 מ"ג 17β-אסטרדיול, ההורמון לשלב עם 22.5 מ"ג של כולסטרול, שתוצאתה גלולה 25 מ"ג.
4. להעביר בזהירות לתוך סט למות, מקום תחת לחץ ולדחוף את הידית בחוזקה כלפי מטה כדי לדחוס גלולה. השתמש בלחץ עקבי כדי לשמור על משטח קבוע הםיחס נפח.
5. הבא להפוך את בעל למות ולדחוף את הידית כלפי מטה שוב כדי לשחרר את הכדור.
6. בדוק גלולה לשלמות ולקבוע אם מסה סופית נמצאת בטווח רצוי. טווח מקובל הוא הבדל ± 5% במסה הסופית (לדוגמא, טווח מקובל לגלולת 25 מ"ג הוא 23.8-26.3 מ"ג).
7. פלטות יכולות להתבצע לפני ניתוח ומאוחסן (תנאים ואורך של אחסון תלוי ביציבות של ההורמון או תרופה המשמש בייצור גלולה). ניתן לרכוש כדורי הורמון כחלופה לגלולת ייצור. רכישת כדורים תמנע את השימוש בתרופות בדרגה שאינן תרופתיות ומאז הם יגובשו ומורכבים.

2. הכנת הנייד xenografts רקומביננטי

1. קציר ועכבר עיקרי תרבות mesenchyme ואברי המין (UGM) תאי סטרומה בפחות מ -4 שבועות לפני שנאסף לספירה.
2. תרבות הונצחה שורות תאי אפיתל בערמונית fash כרגיליון ולאסוף לספירה. בדוגמה זו, להכין תלי רקומביננטי תא על ידי ערבוב של 100,000 תאי האפיתל BPH-1 לכל שתל עם 250,000 תאי סטרומה UGM לשתל בהשעיה.
3. גלולה תאים יחד ומחדש להשעות קולגן עכברוש זנב הסוג נוטרל 1 מספיק כדי להפוך את המספר רצוי של שתלים, כל אחד בנפח של 25 μl 50 μl.
4. קבע שתלי רקומביננטי על 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות ולאחר מכן לכסות עם מדיום גידול לאחסון על 37 מעלות צלזיוס עד 48 שעות לפני השתלה.

3. הכנת xenografts רקמות

1. לשמור על אמצעי זהירות אוניברסלית לפתוגנים דם נישא במהלך רכש רקמות והליך כירורגי. לאחר אישור דירקטוריון הסקירה מוסדי והסכמה מדעת, להשיג רקמת ערמונית טרי מכריתה כירורגית. ללימודים של צמיחת BPH, ניתן לקצור רקמות מכריתה של הערמונית או נהלי כריתת ערמונית פשוטים. xenografts העיקרית של PrCa או פרוסט השפירניתן להשיג רקמה אכלה מדגימות כריתה רדיקאלית של ערמונית.
2. חנות שנקטפו רקמה בתקשורת איזוטוני נאגרה תא או מלח רגיל על קרח. בהתאם לתנאי הרקמות ואחסון, דגימות ניתן לאחסן לתקופה של עד 24 שעות לפני הכנת שתלי רקמה. מנהג נפוץ הוא לחלק את הדגימה לשלושה חלקים, עם סעיף אחד קבוע בפורמלין ושגרתי מעובד להיסטולוגיה, חתיכה אחת הצמד קפוא לניתוח מולקולרי וחתיכה אחת נוספת מחולקת לxenografts רקמות (1-3 מ"מ בגודל).

4. הכנת האש מלוטש זכוכית פיפטה

1. כפפות להגנה על העין לבישת, מעיל מעבדה ועמידות בחום, מקום קצה פיפטה פסטר זכוכית לתוך להבת מבער בונזן בזווית של כ 60 ° להתחיל.
2. שמור על תנועה מתמדת, קלה לפיפטה כדי למנוע נקודות חמות.
3. למשוך את הקצה דק ואש פולנית במטרה להיות סוף מעוגל מעט עם מעוגל, נסגר קצה.

5. הכנת מכשירים וחדרי ניתוח

1. החיטוי כל המכשירים. לפני הניתוח, לבדוק את כל המכשירים, מקפיד לשמור על שדה סטרילי.
2. הגדר את אזור ניתוח סטרילי עם רפידות סופגים, היקף לנתיחה, חרטומו הרדמה, מכשירי ניתוח ומנורת חימום המכוונים לאזור העבודה. לעקר כלים בין עכברים, מעקר את חרוז prewarm.
3. להרכיב ומכשירי הרדמה בדיקה; שוקל נבלות גז.
4. שימוש במיקרוגל, רפידות שעוות חום לתקופה של עד 5 דקות (במרווחים של 1 דקות, לישת משטח השעווה כדי לשלב שעווה נמסה ולא נמסה) ב70-80% כוח, עד שכל השעווה נמסה באופן שווה. על ידי מגע, להבטיח הכרית אינה חמה ומקום גם מתחת לכלוב התאוששות מכרסמים הריק.
5. ציוד מגן אישי לדון ניתוחי מכרסמים, כוללים מסיכת מנתחים, כובע, כפפות וגלימה.

6. הליך כירורגי: כליות קפסולת Xenografting

1. כל ההליכים הכרוכים בחיות מחקר צריכים להתבצע באישור של ועדות טיפול בבעלי חיים מוסדיים ולשימוש. לפני האינדוקציה של הרדמה, להתבונן בעכבר כדי להבטיח את בריאותם ורווחתם.
2. מניחים את העכבר לתוך תא לאינדוקציה של הרדמה isoflurane ב3-5%. כאשר בעלי החיים הפסיקו לזוז וקצב הנשימה ירד, להעביר לחרטומו במצב המועדים, ולשמור על הרדמה ב1-3%.
3. במידת צורך, השתמש בקוצץ לגלח את החלק האחורי של העכבר. זה אינו נחוץ כאשר ניצול עכברי עירום athymic (נו / נו).
4. החל לחץ חזק לחגורה של כף הרגל האחורית המורחבת להערכת הלימות של הרדמה. אם העכבר מגיב ללחץ, יש צורך בזמן רב יותר להרדמה תיכנס לתוקף. במידת צורך, להתאים את זרימת הרדמה מעט כדי להשיג הרדמה נאותה.
5. כאשר סמן העכבר הוא מורדם כראוי, לחטא את האתר כירורגית עם יוד כירורגית פתרון (פולידין) ואחריואלכוהול 70%.
6. דון כפפות וחלוק סטרילי; להחיל סדינים מעוקרים לאתר כירורגית. הרם את העור חזרה עם זוג המלקחיים שיניים, ותוך שימוש במספריים הגסים לעשות חתך קו האמצע 2-3 סנטימטר הגבי.
7. באמצעות מספריים קהים או בדיקה, להפריד את הדרמיס שבבסיס מקיר הגוף (בשני הצדדים של החתך להשתלה דו צדדית או בצד אחד להשתלה חד צדדית).
8. למקם את העכבר למקומו לרוחב, ולזהות את המיקום של הכליות על ידי הצגת פרופיל הכליות דרך קיר השריר. הפעלת לחץ ידני עדין עם האגודל ואצבע מורה על הבטן יכולה לסייע בהמחשת אברים פנימיים.
9. בעזרת המספריים איריס בסדר, ולטפל כדי למנוע ספינות גדולות ועצבים בעמוד השדרה, לעשות חתך 1 סנטימטר בקיר המקביל לגוף את עמוד השדרה. להרחיב את החתך הזה ל1.5-2.0 סנטימטר (מעט יותר מאשר הציר של הכליה הארוכה) בעדינות על ידי פתיחת המספריים רחבים יותר לאחר ביצועם בחתך הראשוני.
10. Exteriorize הכליות על ידי הפעלת לחץ עדין מחוץ לחומת השרירים בכל צד של הכליה באמצעות האצבע ואגודל. טאק עור קצוות מתחת לכליות exteriorized, שינוח על קיר הגוף. בעוד הכליות exteriorized, לשמור על לחות של הקפסולה הכליות על ידי יישום תמיסת מלח סטרילית.
11. באמצעות # 5 מלקחיים בסדר בעדינות להרים את הקפסולה הכליות מparenchyma של הכליה ועם אזמל דק, לעשות חתך מ"מ 2 -4 בכמוסה. גודל החתך נקבע על ידי הגודל של השתל, אך צריך להיות ממוזער על מנת לשמור על השלמות של הקפסולה.
12. מניפולציות זכוכית פיפטה פסטר שכבר נמשכה דק ואש מלוטשת עם סוף סגור מעוגל תחת הקפסולה משיקה למשטח של הכליה. בעדינות לפתוח כיס כמוסה קטן לשתלים, תוך שימוש בזהירות רבה שלא לפגוע בparenchyma הכליות.
13. קצה החתך של הקפסולה הכליות יוסר עם המלקחיים בסדר, ואני השתלs מוכנס לתוך הכיס מתחת לכמוסה באמצעות פיפטה הזכוכית מלוטשת האש. ניתן להציב כמה שתלי תחת הקפסולה הכליות ומחולקים באופן שווה על פני השטח בכליות.
14. אם, במהלך ההשתלה, הקפסולה הופכת מיובשת, זה צריך להיות טבול ידי החלת תמיסת מלח סטרילית.
15. כאשר השתלה היא מוחלטת, בעדינות להרים את צדי קיר שרירים החתך להחליף את הכליה בחזרה לתוך חלל הגוף. שים לב שהתלים לא להחליק מתחת לקפסולה.
16. סגור את קיר השרירים עם תפר אחד (4-0, FS-2 תפר vicryl). הליך כירורגים ניתן לחזור על הכליות נגדי על ידי למקם מחדש את העכבר.
17. כאשר השתלה היא מוחלטת, העכבר עשוי לעבור השתלה תת עורית גלולה באותה הפרוצדורה כירורגית (ראה שלב פרוטוקול 7).
18. בעזרת מלקחיים שיניים, ליישר את קצות חתך בעור ולהחיל 2-3 קליפים פצע ניתוח כדי לסגור את החתך. לנהל שיכוך כאבים (אנו משתמשים 5-10 מ"ג / קילוגרם carprofen באמצעות הזרקה תת עורית) ולמקם את העכבר במצב שכיבה לרוחב בכלוב ההתאוששות. להבטיח שמירה על טמפרטורת גוף בחום ממנורה או כרית חימום. שים לב להחלמה מלאה של העכבר, שאמורה להתרחש בפחות מ -15 דקות.
19. עכברים יש לשים לב לשעות 24 הבאות לסימנים של כאב שלאחר ניתוח, דימום ו / או סיבוכים אחרים. באופן קבוע לבדוק חתך ניתוחי לסימנים של זיהום.
20. הסרת קליפים פצע עם מכשיר הסרת סרטון פצע ניתוח 7-14 ימים לאחר הניתוח.

7. הליך כירורגי: תת עורי גלולה השרשה

1. חזור על שלבים 6.1-6.5 מהקפסולה כליות xenografting הליך כירורגי.
2. הרם את העור חזרה עם זוג המלקחיים עור, ושימוש במספריים הגסים לעשות חתך קו האמצע 1-2 סנטימטר הגבי.
3. באמצעות מספריים קהים או בדיקה, להפריד את הדרמיס שבבסיס מהגוף הקיר בכיוון גולגולתי.
4. באמצעות מלקחיים עור,בעדינות להרים את ההיבט גולגולתי של החתך בעור, ומחזיק את כדור ההורמון בעדינות עם מלקחיים ישרים, משוננים, הכנס את גלולה ולשחרר בעורף, בכיס שיצרת עם החללית הבוטה.
5. חזור על שלבים 6.18-6.20 מהקפסולה כליות xenografting הליך כירורגי. אם ביצוע השתלת גלולה התת עורית בלבד, להשתמש 1 קליפ פצע ניתוח כדי לסגור את החתך הניתוחי.

תוצאות

בהתאם להשערה להיבדק, xenografting הקפסולה הכליות של recombinants רקמה או תא יכול להתבצע בבידוד, או בשילוב עם השתלת גלולה הורמון תת עורית. סכמטי של ניסוי היפותטי שילוב ניסוי xenografting הקפסולה כליות עם השתלת גלולה הורמון תת עורית מודגמת באיור 1. מגוון רחב של חומרי אבקה ו / ?...

Discussion

מאמר זה והפרוטוקול שתואר במסמך זה מתארים את הייצור של הורמון דחוס ו / או כדורי סמים, וההליך כירורגי להשתלת גלולה תת עורית של עכברים. בהתאם לשאלת המחקר יש לטפל, טכניקה זו יכולה להתבצע ביחידים, או בשילוב עם xenografting הקפסולה הכליות של שתלי תא ערמונית רקומביננטי או xenografts רקמ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
			EQUIPMENT & MATERIALS
Pellet press	PARR Industries	2815	3mm Punch & Die set
Analytical Balance	Ohaus	1918302	Voyager or other
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-962Q
Dissecting microscope	Leica	L2
Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)	Braintree Scientific	39DP	Alternative to an electric heating pad
Hot Bead sterilizer	F.S.T.	18000-45
Isoflurane Vaporizer	Supera Anesthesia Innov	VAP3000
Induction Chamber	Supera Anesthesia Innov	RES644
F/AIR Canister	Supera Anesthesia Innov	80120
4 port Manifold	Supera Anesthesia Innov	RES536
Rebreathing Circuits	Supera Anesthesia Innov	CIR529
Inlet/Outlet Fittings	Supera Anesthesia Innov	VAP203/4
Pressure Reg/Gauge	Supera Anesthesia Innov	OXY508
Oxygen Flowmeter	Supera Anesthesia Innov	OXY660
21mm Clear Tubing	Supera Anesthesia Innov	301-150
Small Mice Nose Cone	Supera Anesthesia Innov	ACC526
Sterile surgical gown	Midwest Vet Supply	350.79866.2
Surgical mask	Midwest Vet Supply	350.50111.2	2-ply w/ earloops
Sterile gauze	Midwest Vet Supply	001.14100.2	2 x 2 inches
Sterile Gloves	Kimberly Clark	55092
Bouffant	Midwest Vet Supply	001.27100.2
Cotton Tip Applicator	Midwest Vet Supply	001.06220.2
Surgical Scrub Wash	Midwest Vet Supply	733.80010.3
Sterile Fields (Fenestrated)	General Econopak, Inc	88VCSTF
			REAGENTS
Cholesterol	Sigma-Aldrich	C-3292
Testosterone Proprionate	Sigma-Aldrich	T-1875
17β-estradiol	Sigma-Aldrich	E-2758
Isoflurane	Midwest Vet Supply	193.33161.3
Carprofen	Midwest Vet Supply	193.70200.3	Injectable (Rimadyl)
Betadine	Webster Veterinary	07-836-3379
Sterile saline	Midwest Vet Supply	193.74504.3	NaCl 0.9%, Injectable
			SURGICAL INSTRUMENTS
Straight Sharp/Blunt Scissors	Fine Scientific Tools (F.S.T.)	14054-13
Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)	F.S.T.	11055-10
Fine Iris scissors	F.S.T.	14090-09
Graefe Scalpel	F.S.T.	10071-12
Dumont #5 forceps	F.S.T.	11251-20
Glass Pasteur pipets	Fisher Scientific	S67050	5" length
Graefe forceps (Serrated, Curved)	F.S.T.	11052-10
Graefe forceps (Serrated, Straight)	F.S.T.	11050-10
Vicryl Suture	Midwest Vet Supply	295-92100.2	4-0, FS-2, Absorbable
Needle Holder w/ scissor action	F.S.T.	12002012
Wound Clips	Braintree Scientific	ACS CS	May use 7mm or 9mm clips
Reflex Wound Clipper	F.S.T.	12031-09	Correspond w/ wound clip size
Would Clip Remover	F.S.T.	12033-00	Universal
Sterilization Container	F.S.T.	20810-01	Any autoclavable container will do
Syringe w/ needle	BD	148292C	1cc, 25Gx1
Ear Tag Applicator	National Band & Tag Co.	1005s1	Alternative to ear notching
Small Animal Ear Tags	National Band & Tag Co.	1005-1