Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu

Özet

Bu farelere, sıkıştırılmış hormon peletlerin üretimi, hem de deri altından cerrahi implantasyon açıklar. Bu strateji, hormonal karsinojenezi ve iyi huylu prostat büyümesi düzenleme değerlendirmek için atimik çıplak farelerin böbrek kapsülünün altına hücre ve doku senograflarının büyümesi ile kombine edilebilir.

Özet

Iki yaygın prostat hastalıkları, prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) için yeni tedaviler, hormonal düzenlemeyi değerlendiren deneyler sıkı sıkıya bağlıdır. Seks steroid hormonlar (özellikle androjenler ve östrojenler) SKHA ve BPH önemli olan, biz sıkıştırılmış hormon granül kullanarak deneyler ile farelerde prostat büyümesi ve karsinojenezi uyaran kendi rollerini prob. Hormon ve / veya ilaç topakları kolaylıkla topak pres ile imal edilmiştir ve cerrahi olarak erkek fare konağın deri altı doku içine implante edilir. Ayrıca bağışıklık sistemi farelerinin böbrek kapsülü altında prostat hücre yeniden bileşenler Xenografting ile deri altından hormon topak implantasyonu birleştirerek hormonal kanser değerlendirilmesi için bir protokol açıklar. Ayrıca, deri altına topak implantasyonu hormon, BPH dokusunun renal kapsül Xenografting ile kombinasyon halinde, daha iyi huylu prost hormonal düzenleme anlaşılması için yararlıdırbüyüme yedik ve seks steroid hormon yolları hedef yeni tedavilerin test etmek.

Giriş

Prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) önemli sağlık yük vardır. SKHA erkeklerde ikinci en sık görülen solid organ kanseri ve ölüme ¹ ilgili kanser önde gelen nedenidir. BPH de yaşlı erkekler arasında son derece yaygın olduğunu ve BPH klinik bulgusu, alt üriner sistem semptomları (AÜSS), erkeklerin ^2% 50-90 etkileyeceği tahmin edilmektedir. Androjenler ve östrojenler, SKHA ve BPH önemli olduğu bilinmektedir da karsinojenezi 'nin büyüme ve altında yatan hormonal mekanizmaların anlaşılması ^3,4 eksik kalır. Basit ve genetik uysal hayvan modelleri prostat araştırma bu önceliklere hitap edecek çalışmaları desteklemek. Bu tür SKHA ve BPH, immunocomp içine tek başına ya da renal kapsülün Xenografting ile kombinasyon halinde deri altı, yavaş salma hormon peletlerin kullanılması, (başka bir bir türden hücreler, dokular ya da organların transferi) gibi hormon cevap veren hastalıklardaromised fare host, büyüme ve karsinogenez hormonal düzenlenmesini incelemek için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar.

Deri altına hormon topak implantasyonu kanser ve prostat ⁵ huylu büyüme hormonal düzenlenmesini incelemek için, basit ve yeniden üretilebilir bir tekniktir. 25 mg testosteron (T) ve 2.5 mg 17β-estradiol _(E2) ile yetişkin erkek farelerin deri altına implantasyonu, yaşlanan erkeklerde ^5,6 dinamik hormonal ortam yeniden, bir serum _E2 artışı ve T kademeli azalmaya neden olur. Buna ek olarak, bu model BPH-AÜSS ^5,7 klinik özellikleri birçok tartışıldı. Hormon tatbikat için alternatif yöntemler oral / gavaj uygulanmasını veya intraperitoneal enjeksiyon, kemirgen için sıkıntıya neden zaman içinde ilacın aynı miktarda sunma konusunda daha az tutarlıdır ve vardır daha fazlasını içerir, emek-yoğun bir defalık bir cerrahi implantasyon daha. Saat boyunca diğer deri altından modlarıormone ve / veya ilaç verme silastik kapsüller ⁸ bulunmaktadır. Daha da Silastic kapsüllerin kullanımı ile deneyime sahip olsa da, sıkıştırılmış granül kullanımı ve yeniden üretilebilirlik kolaylığı için tercih edilmektedir. Ayrıca, sıkıştırılmış hormon pelet bırakma oranları daha yaşlanan erkeklerde ^5,7 gözlenen dinamik cinsiyet steroid hormon oranları taklit.

Genetik olarak bağışıklık sistemi farelerin geliştirilmesi için, yabancı-doku naklinde tekniklerini içeren çeşitli in vivo model sistemleri, normal ve hastalıklı dokuların, çok çeşitli çalışma için geliştirilmiştir. Xenografting birkaç temel kategorisi vardır. Doku ksenogratflardır normal yapısı, habis tümör, ya da iyi huylu büyüme olabilir sağlam doku küçük bir parça oluşmaktadır. Szot ve diğ. (2007) son zamanlarda pankreas adacık ⁹ renal kapsül Xenografting aydınlatılmış var. Aamdal ve diğ. (1985) im 27 insan kanser hücre çizgilerinin böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tarifmunocompromised fare ¹⁰ ev sahipliği yapıyor. Greftler, aynı zamanda (ya da kanserli olmayan tümörijenik), tek bir ölümsüz hücre hattı meydana gelmiş olabilir ya da mezenşimin (hücre yeniden birleştirici aşı) izole edilmiş hücreler ile bir araya ölümsüzleştirilmiş hücre dizisinden oluşabilir.

Biz SKHA ve BPH gelişiminde stroma ve epitel rollerini araştırmak için, hücre yeniden bileşenler yabancı-doku naklinde lehine. Cunha ve ark. (1980) erişkin kemirgen mesane epiteli erkek fareler ana böbrek kapsülü altında embriyonik ürogenital sinüs mezenşimin (UGM) ve ksenogreflenmiş ile kombine edildiğinde, doku prostat asinüsü ¹¹ benzeyen yapıları içine geliştirir olduğunu bildirmek için ilk oldu. Norman et al. (1986), doku yeniden bileşenler birleştirildiğinde yetişkin fare prostatik duktal epitelyum ve UGM, duktal büyüme ve morfolojilerinden ¹² dallanma geçmesi gösterdi. Hayward ve ark. (1988), insan prostat epitelyum fetal m endüktif tepki gösterdiBenzer bir şekilde, ¹³ esenchyme. Birleştirerek prostat karsinogenez bir hormonal modeli, ölümsüzleştirilmiş insan prostat epitelyal hücre hattı BPH-1 UGM, birinci Wang et ^{al., 14} (2001) tarafından rapor edilmiştir ve laboratuvarda ¹⁵ yaygın olarak kullanılmaktadır. Benign prostat epitel insanlarda ⁵ ileri SKHA modelleme, metastatik hastalığa dönüşür çünkü bu model SKHA ilerlemesini anlamak için uygundur. Özel bileşenler, genetik olarak manipüle edilebilir, çünkü yeniden birleştirici hücre aşılama stromal-epitelial etkileşimleri değerlendirmek için bir yöntem olarak özellikle yararlıdır.

Xenografting için uygun diğer siteler intradermal, deri altı ve ortotopik yeri ¹⁶ bulunmaktadır. Ilgi konusu doku ve hastalık sürecine bağlı olarak, bu gibi uygun bir alternatif yaklaşımlar olabilir. Prostat hormonal zin ve iyi huylu büyüme düzenleme araştırmada, böbrek kapsülü seçinnedeniyle yüksek greft xenografting için site hızı, bol kan akımı, ve bir kapalı sitede ¹⁶ içine aşılanmasının daha fazla sayıda implant yeteneğini alır. Ayrıca, prostat atrofi ile sonuçlanan ana fare hormonal manipülasyon prostat ortotopik aşılama ¹⁶ kullanımını sınırlar.

Bu protokol, sıkıştırılmış hormon / ilaç topak üretimi ve cerrahi implantasyon, hem de insan prostat hücre ve doku greft renal kapsül Xenografting teknikler yer almaktadır. Hep birlikte, bu teknikler, genetik olarak modifiye edilmiş bir fare SKHA ve / veya kontrol suşları daha BPH başlatılmasından daha duyarlı olup olmadığını belirlemek için hassas bir tahlil sağlar. Xenografting in vivo histolojik ve habis moleküler özellikleri geliştirmek için deneysel hücrelerin potansiyel değerlendirme, hem de iyi huylu ve kötü huylu hastalıkların geniş bir yelpazede için yeni tedavi stratejileri için bir tahlili için güçlü bir tekniktir.

Protokol

1.. Sıkıştırılmış Hormon / Drug Pellet hazırlanması

1. Bir laboratuvar önlüğü, eldiven, maske, koruyucu gözlük ve bone Bu prosedür, bir kimyasal güvenlik kabini yapılmalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için, topak yapma makineleri önce iyice% 70 etanol ile ve pelletin her tür imalattan sonra temizlenir önemlidir.
2. Analitik ölçek kullanarak ve kağıt ağırlığı hormon / ilaç tozu istenilen miktarını ölçmek. Yaklaşık% 5 fazla presleme işlemi sırasında malzeme kaybı karşılamak için tavsiye edilir.
3. Bazı hormonları / ilaçların üretimi pelet önce karıştırılır, bir bağlayıcı madde veya dolgu maddesi gerektirir. Örneğin, 17β-estradiol, 2.5 mg pelet üretimi için, bir 25 mg pelet sonuçlanan kolesterol 22.5 mg, hormon ile birleştirir.
4. Dikkatle pres altında kalıp seti, yerine aktarmak ve pelet sıkıştırmak için sıkıca kolu aşağıya doğru bastırın. Olan sabit yüzey bakımı tutarlı basınç kullanınhacim oranı.
5. Sonraki kalıp yuvasını ters ve pelet serbest bırakmak için tekrar aşağıya kolu itin.
6. Bütünlüğü için pelet kontrol edin ve son kütle istenen aralıkta olup olmadığını belirlemek. Kabul edilebilir bir aralık (örneğin, 25 mg pelet için kabul edilebilir bir aralık 23,8-26,3 mg), nihai kütlesinde bir ±% 5 farktır.
7. Peletler ameliyat öncesi yapılan ve (koşulları ve depolama süresi pelet üretiminde kullanılan hormon ya da ilaç stabilitesi bağlı olarak) saklanabilir. Hormon granül üretim pelet alternatif olarak satın alınabilir. Pelet Satınalma onlar formüle ve bileşik olacağından olmayan ilaç sınıf ilaçların kullanımını önler.

2. Hücre Rekombinant ksenogratflarının hazırlanması

1. Hasat ve kültürü birincil fare ürogenital mesenkimi (UGM) sayımı için toplanan edilmeden önce en az 4 hafta boyunca stromal hücreler.
2. Kültür olağan zahmet prostat epitelial hücre hatları ölümsüzleştirilmişiyon ve sayımı için toplamak. Bu örnek için, süspansiyon içinde greft başına 250,000 UGM stromal hücreleri ile greft başına 100,000 BPH-1 epitel hücreleri karıştırılarak yeniden birleştirici hücre greft hazırlar.
3. Pelet hücreler bir araya ve 50 ul 25 ul bir hacim içinde greft arzu edilen sayıda, her biri için yeterli nötralize tip 1 fare kuyruk kolajeni yeniden askıya.
4. 15 dakika boyunca 37 ° C 'de yeniden birleştirici greft ayarlama ve daha sonra aşılama öncesi kadar 48 saat boyunca 37 ° C'de depolama için büyüme ortamı ile kaplayın.

3. Doku ksenogratflarının hazırlanması

1. Doku alımı ve cerrahi işlem sırasında kan yoluyla bulaşan patojenlere için evrensel önlemleri koruyun. Kurumsal inceleme kurulu onayı ve bilgilendirilmiş rıza takiben, cerrahi rezeksiyon taze prostat dokusu elde. BPH büyüme incelemeler için dokular, prostat veya basit prosedürlerin prostatektomi, transüretral rezeksiyon hasat edilebilir. SKHA veya benign prost birincil ksenogratflardıryedik doku radikal prostatektomi örneklerinde elde edilebilir.
2. Mağaza izotonik tamponlu hücre medya veya buz üzerinde normal serum fizyolojik doku hasat. Doku ve depolama koşullarına bağlı olarak, numuneler önce, doku grefti hazırlanmasına kadar 24 saat süre ile depolanabilir. Yaygın uygulama formalin içinde sabitlenmiş ve rutin histoloji için işlenen bir bölümünde, üç adet numune halinde bölmek için, tek parça moleküler analiz için dondurulmuş ve bir parçası ayrıca doku ksenograftlarda (boyut olarak 1-3 mm) ayrıldı geçmeli.

4. Ateş hazırlanması Cam Pipet Cilalı

1. Giyen göz koruması, laboratuvar mont ve ısıya dayanıklı eldiven, yaklaşık Bunsen beki alevi başlatmak için bir 60 ° açı içine yer cam Pasteur pipet.
2. Sıcak noktalar önlemek amacıyla pipet için bir sabit, hafif bir hareket tutun.
3. Amaç bir yuvarlak ile bir hafif kavisli uç olmanın ince ucu ve yangın lehçe çizmek, ucu kapalı.

5. Araçların Hazırlanması ve Cerrahi Suite

1. Bütün aletleri otoklavlayın. Ameliyat öncesinde, steril alanı korumak için özen, tüm araçları kontrol edin.
2. Emici pedler, diseksiyon kapsamı, anestezi burun konisi, cerrahi aletler ve çalışma alanı yönelmiş ısıtma lambası ile steril cerrahi alanı kurmak. Farelerde, ön ısıtılması boncuk sterilizatör arasında aletleri sterilize.
3. Montaj ve test anestezi cihazı; gaz skavenjeri tartın.
4. Tüm balmumu eşit eriyene kadar,% 70-80 güçte (eritilir ve erimemiş balmumu birleştirmek amacıyla balmumu ped yoğurma 1 dakika aralıklarla,) kadar 5 dakika boyunca mikrodalga fırın, ısı yastıkları balmumu kullanılması. Dokunarak, ped boş kemirgen kurtarma kafesinin altında çok sıcak ve yer değil emin olun.
5. Cerrahi maske, bone, eldiven ve önlük gibi kemirgen cerrahi işlemler, Don kişisel koruyucu ekipman.

6. Cerrahi Prosedür: Böbrek Kapsül Xenografting

1. Araştırma hayvanları içeren tüm işlemler kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitelerinin onayı ile yapılmalıdır. Önce anestezi indüksiyon, sağlık ve refahını sağlamak için fareyi gözlemlemek.
2. % 3-5 izofluran anestezi için odasına fare yerleştirin. Hayvan hareket durdu ve solunum hızı düştüğünde, yüzüstü pozisyonda burun konisi transfer, ve% 1-3 anestezi korumak.
3. Gerekirse, fare geri tıraş için makasları kullanın. Atimik çıplak (nu / nu) fareler kullanılarak, bu gerekli değildir.
4. Anestezi yeterliliğini değerlendirmek için uzatılmış arka ayak dokumasında firma basınç uygulayın. Fare basınca yanıt verirse, daha fazla zaman etkili olması için anestezi gereklidir. Eğer gerekli ise, uygun bir anestezi elde etmek için hafifçe anestezi akışını ayarlamak.
5. Fare anestezi yeterli olduğunda, cerrahi, ardından bir iyot karışımı (Betadine) çözeltisi ile cerrahi sitesi dezenfekte% 70 alkol.
6. Don steril eldiven ve önlük, cerrahi bölgeye steril örtüler geçerlidir. Dişli forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 2-3 cm dorsal orta hat kesi yapmak.
7. Künt makas veya bir sonda kullanarak, (bilateral aşılama için kesiğin her iki tarafında tek taraflı ya da aşılama için, bir tarafta) gövde duvarının arasındaki temel dermis ayırın.
8. Lateral pozisyon içine fare konumlandırmak ve kas duvarından böbrek profilini görüntüleyerek böbreğin yerini belirlemek. Karın üzerine başparmak ve işaret parmağı ile elle basınç uygulayarak iç organları görselleştirmek yardımcı olabilir.
9. Ince iris makası kullanarak ve omurga vücut duvarı paralel bir 1 cm kesi yapmak, büyük damarları ve sinirleri spinal önlemek için dikkat çekici. Yavaşça başlangıç ​​kesi yerleştirmeden sonra makas geniş açarak (böbreğin uzun eksenine göre biraz daha uzun) 1.5-2.0 sm Bu kesi Widen.
10. Işaret parmağı ve başparmak ile böbrek her iki tarafında kas duvarın dışında hafif bir basınç uygulayarak böbrek Exteriorize. Tuck cilt vücut duvarı üzerinde kalacak olan, batın böbrek altında kenarları. Böbrek dışarıya alınır birlikte, steril tuzlu su uygulanarak renal kapsülün hidrasyon korumak.
11. Ince 5. forseps kullanarak hafifçe böbrek parankimi gelen böbrek kapsülü kaldırın ve ince neşter ile, kapsülde 2 -4 mm kesi yapmak. Kesiğin boyutunun greft boyutuna göre belirlenir, ancak kapsülün bütünlüğünü korumak için en aza düşürülmesi gerekmektedir.
12. Böbrek yüzeyine teğet olan kapsül altında bir yuvarlak kapalı uç ile ince ve yangın parlatılmış çizilmiş, bir cam Pasteur pipet işleyin. Yavaşça böbrek parankimi zarar vermemeye büyük özen kullanarak, greft için küçük bir kapsül cebi açın.
13. Böbrek Kapsülün kesik kenar aşı i ince forseps ile kaldırılmış, veateş cilalı cam pipet ile kapsül altında cep içine sokulur ve s. Birçok greft böbrek kapsülü altına yerleştirilir ve eşit olarak böbrek yüzeyinde aralıklı olabilir.
14. Aşılama sırasında, kapsül susuz olur ise, steril tuzlu su uygulanarak nemli olmalıdır.
15. Aşılama işlemi tamamlandığında, yavaşça vücut boşluğuna böbrek yerine kas duvar kesiğin tarafı kaldırın. Greftler kapsülü altında dışarı kayma olmadığını gözlemleyin.
16. Bir tek sütür (4-0, FS-2 vikril sütür) ile kas duvarı kapatın. Cerrahi işlem fareyi yeniden konumlandırarak kontralateral böbrek üzerinde tekrar edilebilir.
17. Aşılama tamamlandığında, fare (Protokol adım 7) aynı cerrahi işlem sırasında cilt altı pelet implantasyonu tabi olabilir.
18. Dişli forseps kullanarak, cilt kesi kenarları aynı hizaya ve insizyon kapatmak için 2-3 cerrahi yara klipleri geçerlidir. Analjezi yönetmek (kullandığımız 5-10 mg / kg carprofderi altı enjeksiyonu) ile en ve geri kafes yanal yatar konumda fare. Bir lamba ya da ısıtma pedi gelen ısı ile vücut ısısının bakım sağlamak. Az 15 dakika içinde gerçekleşmesi gereken fare, tam iyileşme için gözlemleyin.
19. Fareler kanama ve / veya diğer komplikasyonlar, ameliyat sonrası ağrı belirtileri sonraki 24 saat gözlem altında tutulmalıdır. Düzenli enfeksiyon belirtileri için cerrahi kesi inceleyin.
20. 7-14 gün ameliyat sonrası cerrahi yara klip temizleme cihazı ile yara klipleri çıkarın.

7. Cerrahi Prosedür: Subkutan Pelet İmplantasyonu

1. Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsül 6,1-6,5 adımlar.
2. Cilt forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 1-2 cm dorsal orta hat kesi yapmak.
3. Künt makas veya bir sonda kullanılarak, bir kafatası yönünde gövde duvarından temel dermis ayırın.
4. Cilt forseps kullanarak,nazikçe cilt kesisi kranial yönü kaldırın ve düz, dişli forseps ile yavaşça hormon pelet tutan, pelet yerleştirin ve künt prob ile oluşturulan cepte, boyun ense de bırakın.
5. Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsülünden 6,18-6,20 adımlar. Derialtı pelet implantasyonu gerçekleştirirken yalnızca, cerrahi insizyon kapatmak için 1 cerrahi yara klibi kullanabilirsiniz.

Sonuçlar

Test edilecek olan hipotez bağlı olarak, doku ya da hücre yeniden bileşenler böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tek başına, ya da deri altı hormon topak implantasyonu ile kombinasyon halinde gerçekleştirilebilir. Deri altından hormon topak implantasyonu ile böbrek yabancı-doku naklinde kapsül deney birleştiren hayali bir deneyinin şematik Şekil 1 'de gösterilmiştir. Toz haline getirilmiş ve / veya kristal maddelerin çeşitli topak pres ile sıkıştırılmış pelet ür...

Tartışmalar

Bu kağıt ve belirtilen protokol, burada sıkıştırılmış hormonu ve / veya ilaç topaklarının imalatı ve farelerin deri altına topak implantasyonu için cerrahi prosedür tarif eder. Ele alınması araştırma sorusuna bağlı olarak, bu tekniğin tek başına, ya da yaygın olarak prostat araştırma ^17-19 kullanılan teknikleri prostat hücre rekombinant greft veya prostat doku xenogreftler, renal kapsül Xenografting ile birlikte yapılabilir. Birlikte ele alındığında, bu teknikler hormonal k...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
			EQUIPMENT & MATERIALS
Pellet press	PARR Industries	2815	3mm Punch & Die set
Analytical Balance	Ohaus	1918302	Voyager or other
Bunsen burner	Fisher Scientific	03-962Q
Dissecting microscope	Leica	L2
Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)	Braintree Scientific	39DP	Alternative to an electric heating pad
Hot Bead sterilizer	F.S.T.	18000-45
Isoflurane Vaporizer	Supera Anesthesia Innov	VAP3000
Induction Chamber	Supera Anesthesia Innov	RES644
F/AIR Canister	Supera Anesthesia Innov	80120
4 port Manifold	Supera Anesthesia Innov	RES536
Rebreathing Circuits	Supera Anesthesia Innov	CIR529
Inlet/Outlet Fittings	Supera Anesthesia Innov	VAP203/4
Pressure Reg/Gauge	Supera Anesthesia Innov	OXY508
Oxygen Flowmeter	Supera Anesthesia Innov	OXY660
21mm Clear Tubing	Supera Anesthesia Innov	301-150
Small Mice Nose Cone	Supera Anesthesia Innov	ACC526
Sterile surgical gown	Midwest Vet Supply	350.79866.2
Surgical mask	Midwest Vet Supply	350.50111.2	2-ply w/ earloops
Sterile gauze	Midwest Vet Supply	001.14100.2	2 x 2 inches
Sterile Gloves	Kimberly Clark	55092
Bouffant	Midwest Vet Supply	001.27100.2
Cotton Tip Applicator	Midwest Vet Supply	001.06220.2
Surgical Scrub Wash	Midwest Vet Supply	733.80010.3
Sterile Fields (Fenestrated)	General Econopak, Inc	88VCSTF
			REAGENTS
Cholesterol	Sigma-Aldrich	C-3292
Testosterone Proprionate	Sigma-Aldrich	T-1875
17β-estradiol	Sigma-Aldrich	E-2758
Isoflurane	Midwest Vet Supply	193.33161.3
Carprofen	Midwest Vet Supply	193.70200.3	Injectable (Rimadyl)
Betadine	Webster Veterinary	07-836-3379
Sterile saline	Midwest Vet Supply	193.74504.3	NaCl 0.9%, Injectable
			SURGICAL INSTRUMENTS
Straight Sharp/Blunt Scissors	Fine Scientific Tools (F.S.T.)	14054-13
Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)	F.S.T.	11055-10
Fine Iris scissors	F.S.T.	14090-09
Graefe Scalpel	F.S.T.	10071-12
Dumont #5 forceps	F.S.T.	11251-20
Glass Pasteur pipets	Fisher Scientific	S67050	5" length
Graefe forceps (Serrated, Curved)	F.S.T.	11052-10
Graefe forceps (Serrated, Straight)	F.S.T.	11050-10
Vicryl Suture	Midwest Vet Supply	295-92100.2	4-0, FS-2, Absorbable
Needle Holder w/ scissor action	F.S.T.	12002012
Wound Clips	Braintree Scientific	ACS CS	May use 7mm or 9mm clips
Reflex Wound Clipper	F.S.T.	12031-09	Correspond w/ wound clip size
Would Clip Remover	F.S.T.	12033-00	Universal
Sterilization Container	F.S.T.	20810-01	Any autoclavable container will do
Syringe w/ needle	BD	148292C	1cc, 25Gx1
Ear Tag Applicator	National Band & Tag Co.	1005s1	Alternative to ear notching
Small Animal Ear Tags	National Band & Tag Co.	1005-1