הערכת myogenic תגובה וVasoactivity בעורקי ההתנגדות mesenteric שימוש Myography לחץ

Summary

myography לחץ משמש כדי להעריך vasoactivity של עורקים קטנים המתפתחים התכווצות מתמשכת כאשר לחץ. כתב יד זה מספק פרוטוקול מפורט להעריך במגזרים בודדים של עורקי mesenteric קטנים מחולדות, vasoactivity ואת ההשפעה של לחץ intraluminal על קוטר כלי דם.

Abstract

עורקי התנגדות קטנים להצר ולהרחיב בהתאמה בתגובה לעלייה או ירידה בלחץ intraluminal; תופעה זו ידועה כתגובת myogenic היא רגולטור מרכזי של זרימת דם מקומית. בתנאי isobaric עורקי התנגדות קטנים לפתח ספגו התכווצות הידועה כטון myogenic (MT), אשר הוא הקובע עיקרי של התנגדות המערכתית של כלי דם (SVR). מכאן, הכנות בלחץ vivo לשעבר של עורקי התנגדות קטנים הן כלים עיקריים ללמוד לתפקד כלי דם במדינות קרובים-פיסיולוגיות. כדי להשיג זאת, קטע שלם מבודד טרי של עורק קטן התנגדות (קוטר ~ 260 מיקרומטר) הוא רכוב על שתי קנולות זכוכית קטנה ודחוסות. הכנות עורקים אלה לשמר ביותר במאפייני vivo והערכת היתר של טון של כלי דם בזמן אמת. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט להערכת vasoactivity בעורקי mesenteric ההתנגדות קטנות בלחץ מחולדות; עורקים אלה לפתחהתכווצות כלי דם מתמשך - כ -25% מקוטר מקסימאלי - כאשר לחץ על 70 מ"מ כספית. הכנות עורקים אלה ניתן להשתמש כדי לחקור את ההשפעה של תרכובות מחקריות על קשר בין לחץ וvasoactivity התוך עורקים ולקבוע שינויים בתפקוד כלי דם במודלים של בעלי חיים במחלות שונות.

Introduction

עורקי התנגדות קטנים הם גורמים עיקריים של SVR ולשחק תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיה של מחלות רבות ^1,2. תנאים כגון סוכרת ^3, הריון ^4, איסכמיה reperfusion ^5, השמנת יתר ולחץ דם ^6,7 לעתים קרובות קשורים בתפקוד כלי דם שונה. myography כלי דם לא יכול רק לספק תובנות חשובות שינויים בתפקוד כלי דם במחלות שונות, אלא גם לסייע בזיהוי מטרות טיפוליות ולהעריך את היעילות של תרכובות vasoactive. תפקוד כלי דם נחקר באמצעות עורקים קטנים מבודדים בתנאי כלי איזומטרי או isobaric ^8. תיאור מפורט של myography איזומטרי מסופק במקום אחר ^9. עם זאת יש הבדלים בנתונים המתקבלים מאיזומטרי לעומת הכנות isobaric ^10-12. מאז הכנות עורקים בלחץ תאפשר המחקר של פונקצית כלי דם בתנאים קרובים-פיסיולוגיים,ממצאים שהתקבלו עשויים להיות מתואמים טובים יותר עם ​​התנהגות של מיטת כלי דם ^8,13 in vivo.

בשינה 1902 בייליס תואר לראשונה את ההשפעה של לחץ transmural בקוטר כלי דם ^14. הוא נצפה בעורקי התנגדות קטנים מהמיטות כלי דם שונות של ארנבים, חתולים וכלבים שירידה בלחץ בעקבות התרחבות, ועלייה בלחץ בעקבות התכווצות כלי דם. תופעה זו ידועה בשם תגובת myogenic. בייליס וחוקרים שלאחר מכן הבחינו כי בתנאי isobaric עורקי התנגדות קטנה לפתח התכווצות מתמשכת הידועה כMT ^15,16. שתי תגובת myogenic וMT ניתן להעריך באמצעות myography לחץ טכניקה (PM). PM משמש בעיקר כדי לקבוע vasoactivity של עורקים קטנים, ורידים וכלי שיט אחרים. בנוסף להערכת ההשפעה של תרכובות vasoactive בקוטר כלי דם, אחר הצהריים - כשמו מציין - משמש כדי להעריך CH-תיווך לחץ תוך-Anges בקוטר כלי דם. במהלך העשורים האחרונים התקדמות בתוכנת מחשב, שמשופרות מיקרוסקופיה הווידאו ופיפטה הזכוכית מושכים קדימה, עשו PM קל יותר לבצע. עם זאת, דיסקציה של מגזרים שלמים קיימא של כלי דם קטנים נשארה מייגע ולעתים מאתגרת. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט ללמוד תגובת myogenic בעורקי התנגדות mesenteric הקטנים המבודדים מחולדות.

Protocol

דוגמאות שהובאו כאן הן מניסויים שאושרו על ידי IACUC בג'ורג'יה עוצרים אוניברסיטה - פרוטוקול לא: # 2011-0408

1. הכנת ריאגנטים

1. הכן מניית פתרון לנתיחה: עבור 500 מיליליטר של תמיסת נתיחת המניות (5x), לפזר 21.18 גרם NaCl, 0.875 גרם KCl, .739 MgSO ז _4, 1.049 מגבים גרם ו0.019 EDTA גרם ב450 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 500 מיליליטר עם מים מילי- Q. פתרון מניות יכול להיות מאוחסן עד 7-10 ימים. ראה טבלה 1 לרשימה של כימיקלים והספקים שלהם. ראה טבלה 2 לריכוז במ"מ.
2. הכן את הפתרון לנתיחה עובד: הכן פתרון לנתיחה עבודה טרי בכל יום. לפתרון עובד 100 מיליליטר, לפזר .091 גלוקוז גרם, 0.016 Nah גרם פירובט נתרן ₄ ו0.022 גרם ₂ PO ב79.8 מיליליטר של מים מילי- Q. להוסיף מניית פתרון לנתיחה 0.2 מיליליטר 1M CaCl ₂ ו -20 מיליליטר להביא voluלי 100 מיליליטר.
3. הכן תמיסת מלח פיזיולוגית (PSS): כדי להכין 1,000 מיליליטר PSS, לפזר .365 גרם KCl, NaCl 6.545 g, .296 MgSO ז _4, 0.163 גרם KH ₂ PO _4, 2.072 גלוקוז גרם, 2.184 NaHCO ז ₃ ו2.383 HEPES גרם ב950 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 1,000 מיליליטר עם מים מילי- Q. הסר 2 מיליליטר של תמיסה ולהחליף אותו עם 2 מיליליטר של 1 M CaCl _2. (טרי PSS צריך להיות מוכן ביום)
4. הכן סידן PSS בחינם (Ca ^{2 +):} 100 מיליליטר לPSS ללא Ca ^{2 +,} לפזר .036 גרם KCl, NaCl .654 גרם, 0.029 MgSO ז _4, 0.016 גרם KH ₂ PO _4, .207 גלוקוז גרם, 0.218 גרם NaHCO _3, .238 ז HEPES, 0.015 EGTA גרם ו0.0026 nitroprusside נתרן גרם (SNP) ב -95 מיליליטר מים מילי- Q. התאם ל- pH 7.3-7.4 באמצעות 1 N NaOH. מרכיבים את הנפח 100 מיליליטר עם מים מילי- Q.

2. הכנת זכוכית קנולות

1. משוך טפטפות זכוכיתעל מנת ליצור את קנולות הטו 100-150 מיקרומטר באמצעות חולץ פיפטה בהתאם להנחיות יצרן.
2. פוע הטיפים צינורית זכוכית באמצעות beveller microelectrode, האש ללטש אותם ולכופף את הטיפים צינורית זכוכית על ידי ~ 45 מעלות באמצעות בדיקה דוד.
3. טען את קנולות לבעל micropipette ולצרף את בעל micropipette לתא זלוף.

3. הכנת זלוף הקאמרי

1. תא זלוף לשטוף עם מים מילי- Q ואחריו פתרון לנתיחה במשך 5 דקות כל אחד. טען את התא עם 2 מיליליטר של פתרון לנתיחה.
2. פתרון יניקה נתיחה דרך צינורית באמצעות מזרק 10 מ"ל ולמלא בקפידה את כל הצינורית וצינורות המחוברים ללא כל בועות. החל יניקה בעדינות כדי למנוע דור של בועות.
3. הכן שני תפרים עם חצי קשר כל שימוש במלקחיים בוטים. מאז תפרי ניילון monofilament עיניים (10-0, 0.2 מטרי) משמשים להכנת הקשרים שרק1-2 מ"מ בקוטר, ייתכן שיהיה צורך מיקרוסקופ לנתיחה.
4. הדמיה תחת מיקרוסקופ לנתיחה, להשתמש במלקחיים לנתיחה כדי לטעון שני קנולות עם קשרים תפר סגורים חלקית מעט מהקצה. מאוחר יותר קשרים אלה החליקו בזהירות על קצות עורקי cannulated וסגורים לחלוטין.

4. אוסף של עורקי mesenteric ארקייד מSprague-Dawley חולדות

1. מחפש אישור הוועדה המקומית המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) לפני ביצוע ניסויים אלה. בעלי חיים בית במתקן החיה עם טמפרטורה מבוקרת ותאורה ולאפשר גישה חופשית למים ואוכל מכרסם מסחרי.
2. להרדים חולדות על ידי הזרקת intraperitoneal של קטמין (80 מ"ג / קילוגרם) ו xylazine (10 מ"ג / קילוגרם). לאשר הרדמה עמוקה על ידי הבוהן קמצוץ ואם הרדמה נוספת ניהול 'דרוש.
3. לאחר אישור ההרדמה כירורגית, להרדימו על ידי עריפת ראש. פעל לפי הנחיות AAALAC לדלקת בדרכי שתןLizing שיטות מתאימות להמתת חסד של בעלי חיים.
4. השתמש מספריים לנתיחה ומלקחיים לבצע laparotomy קו אמצע מאגן לעצם חזה. הדבר נעשה בשני שלבים: ראשון, לחתוך את העור והשני, לחתוך את שכבת השריר הבסיסית. יש להקפיד שלא לפגוע באיברים תוך-בטני.
5. חותך את הקצה הפרוקסימלי של מעי קרוב לשוער ואת הקצה הדיסטלי הקרוב לצומת ileo-cecal. לקשור שני קצוות בנפרד כדי למנוע דליפה של chyme וצואה וכך למנוע זיהום של פתרון רחצה תאי. לחתוך את לפדר בבסיסו ליד כלומר כלי דם האכלה, עורק mesenteric מעולה ולהעביר את מיטת mesenteric מעיים קטנה כל לכוס 50 מיליליטר המכילה פתרון לנתיחה קר כקרח.
6. לאפשר רקמה שנקטפו להישאר בפתרון לנתיחה קר קרח למשך 5 דקות ולשטוף עם פתרון לנתיחה טרי להיפטר מדם.

5. בידוד וCannulation של 4 ^th עורקים להזמין mesenteric

1. להצמיד את הקצה הפרוקסימלי של המעי בצד ימין בצלחת מצופה sylgard. להאריך את המעי שנותר בנתיב נגד כיוון השעון, מצמיד את הקטע למטה כדי להפיץ את לפדר וחושף את כלי הדם (איור 1). הערה: אנו לבודד מגזרי עורקים בטמפרטורת חדר. אחרת אנו שמים ארקייד mesenteric מכיל מנה על קרח. מעבדות מסוימות, כוללים אלה במוסד שלנו, להשתמש ביחידות ילר לנתח עורקים ב 4 מעלות צלזיוס.
2. תחת מיקרוסקופ זום סטריאו לנתח את 3 ^{rd ו-4} עורקי mesenteric קטנים כדי מקביל (~ 260 מיקרומטר) למעי הדק באמצעות מספריים קטנים. לנתח ראשון את כל שומן הכיסוי. לאחר מכן לנתח את הווריד ולבודד את העורק עם נקודת סניף בצורת V. היזהר שלא לנקב את הקטע שנבחר. התחל לנתח את השומן ליד סניף כדי 2 ^nd ולמצוא את הדרך ^ל-3 או 4 ORD ^הכלי אה.
   1. ניתן להבחין עורקים וורידים המבוססים על עובי הקיר שלהם - קיר העורק הוא עבה יותר מהווריד של: הערה. יתר על כן, כאשר סמוך רקמת חיבור הוא משך בעדינות בניצב לקריסת כלי, ורידים בקלות תוך עורקים לא. מאז עורקים עם קוטר לום <400 מיקרומטר הם אתרים מרכזיים של התנגדות כלי דם מערכתית, לפרוטוקול זה היינו 4 ^th עורקי mesenteric חולדה כדי (לומן קוטר <300 מיקרומטר).
3. לבודד את החלק של 4-5 מ"מ מקביל עורק למעי דק. דמיינו את כל 5 הסניפים כדי ^ה הטבעה לתוך מעי דק וחותך אותם מעט מהמקור של סניפים ולשמר חלק. חלקים אלה השתמרו סניפים לשמש מחזיקים אתרים (עם מלקחיים נתיחה) להעברת קטעי עורקים לתא זלוף ו, לאחר מכן להדריך את cannulation.
4. ואז לחתוך קטעי עורקים על ידי ביצוע חתכים 2 דיסטלי5 סניפים ^ה סדר בכל צד של העורק ולהעביר אותו לתא זלוף (ראו איור 1 ג ואגדה).
5. Cannulate קצה אחד של כלי על אחד micropipette הזכוכית (קוטר: 100-150 מיקרומטר) באמצעות מלקחיים לנתיחה על ידי לחיצה על הטיפים של מגזר העורקים עם מלקחיים לנתיחה. חלק את התפר הסגור באופן חלקי נטען בעבר על סוף cannulated ולאבטח אותו. הערה: קצה הפרוקסימלי של העורק ניתן cannulated על צינורית הזכוכית שמחוברת למכשיר ויסות לחץ שליטת סרוו לחקות בסביבת אתר.
6. צרף פתרון לנתיחה עמוס 10 מיליליטר מזרק לברזלים מחוברים לצינורית זו כך שפתרון לנתיחה בצינור המחבר את הצינורית וברזלים מתמזג עם שבמזרק. בעדינות להעלות את המזרק. הכוח הכבידה על הפתרון יסיר את הדם בכלי דם התוך מהקצה הפתוח של כלי השיט. לאחר הסרת הדם תוך-עורקים, לסגור את ברזלים.
   הערה: לחלופין, לצרף את ברזלים לבקר הלחץ, להפעיל אותו ולהגביר את הלחץ בעדינות כדי 5-10 מ"מ כספית כדי להשיג את אותה התוצאה.
7. לקשור את הקצה הדיסטלי של כלי על צינורית זכוכית שנייה על ידי הבאת הצינורית אחרת הקרובה ככל האפשר לסוף התיר של מגזר העורקים בזהירות. חלק את התפר הסגור באופן חלקי נטען בעבר על סוף cannulated ולאבטח אותו. יש להקפיד לא למשוך או למתוח על מגזרי עורקים. ודא כי ברזים למיניהם מצורפים לשתי קנולות סגורות.
8. העבר את תא זלוף על הבמה של מיקרוסקופ ההפוך מצוידים בהקלטת וידאו חי.
9. חבר את ברזלים של הצינורית קשורה לקצה הפרוקסימלי של קטע העורקי למכשיר ויסות לחץ שליטת סרוו ולוודא שברזלים מחוברים לצינורית אחרת נותר סגור כדי לשמור על לחץ intraluminal יציב.
10. בשלב הבא, לצרף את צינורות ואקום ליציאת יניקהND זלוף צינורות ליציאת זלוף של החדר.
    הערה: יציאת מחט משופעת משמשת ליניקה ויציאת מחט קהה לזלוף.
11. התחל זלוף של כלי עם PSS החם באמצעות דוד פתרון מוטבע יחיד (37 מעלות צלזיוס, equilibrated עם תערובת גז: 5% CO _2, 5% O ₂ ו- N 90% כדי לשמור על pH ניטראלי וחמצון נאות ¹⁷⁾ ב 2 מיליליטר / דקה באמצעות משאבת peristaltic. הפעל הוואקום על גם כן. הנח thermistor בתא לעקוב אחר טמפרטורה ברציפות.
12. ככל שהטמפרטורה של PSS בתא מתקרבת ~ 37 ° C (בדרך כלל תוך 5 דקות), להגדיל לאט לחץ intraluminal 20-100 מ"מ כספית ולבדוק כלי דליפות. הדבר נעשה באמצעות ההגדרה האוטומטית של לחץ ווסת לחץ. מחק כלי עם דליפה ולהחליף עם מגזר אחר. כלי עם הדלפות לא יוכלו להחזיק את הלחץ.
13. להעריך את קטע עורקים לעיקולים, תוך שמירה על הלחץ על 100 מ"מ כספית.שימוש בבורג-המנוף, להעביר את הצינורית ליישר את קטע העורקים. אל מעל למתוח את מגזרי עורקים; המטרה היא לחקות באורך קטע עורקי vivo.
14. להפחית את הלחץ עד 70 מ"מ כספית (לחקות בלחץ vivo בארקייד mesenteric ¹⁸⁾ ולאפשר למגזר העורקים לייצב ולפתח טון myogenic. עורקים עשויים להיות בלחץ variably (40-70 מ"מ כספית) על פי אסטרטגיה ניסיונית ומיטת כלי דם. סקירה שפורסמה בעבר מספקת סקירה מצוינת של השתנות בMT במגזרי עורקים מהמיטות כלי דם שונות ^8.

6. מדידת קוטר עורקים

1. צפה בעורקים במטרת 10X על מיקרוסקופ מצויד במצלמה מכשיר מצמידה מטען וידאו בשחור-לבן. למדוד קוטר luminal באמצעות מערכת קצה-זיהוי בזמן אמת וחוטף מסגרת וידאו. רשימה של ציוד המשמש מסופקת בטבלה 3.
2. ד צג וכלי השיאiameter ברציפות.
3. שים לב להתפתחות של MT. הערה: הבחנו כי בעורקי התנגדות mesenteric חולדה, על 70 מ"מ כספית, פיתוח של MT מאופיין על ידי ~ ירידה של 20% בקוטר. MT משתנה בהתאם למין מיטה ובעלי החיים וכלי דם.
4. לאשר כדאיות של כלי דם על ידי הערכת תגובות מכווץ כלי דם וvasodilator לphenylephrine 1 מיקרומטר (Phe) ואצטילכולין 1 מיקרומטר (ACH).
5. בסופו של כל ניסוי, לקבוע קוטר פסיבי (PD) על ידי דוגרים עורקים בCa ^{2 +} PSS -חינם במשך 20 דקות.

7. תגובה myogenic

1. להפחית את הלחץ עד 20 מ"מ כספית ולאפשר הקוטר לייצב. להגביר את לחץ intraluminal בצעדים הדרגתיים (20, 40, 60, 80 ו -100) ובכל שלב לחץ לאפשר עורקים להשיג קוטר יציב (בדרך כלל תוך 5 דקות).
2. להפחית את לחץ intraluminal עד 20 מ"מ כספית ודגירת מגזר העורקים בCa ^{2 +} PSS -חינם מכיל 0.39 מ"מEGTA ו0.1 מ"מ SNP. לאפשר הקוטר העורק לייצב (בדרך כלל 15 דקות).
3. חזור על תגובת לחץ-צעד בPSS ^{2 +} -חינם Ca מכיל 0.39 מ"מ EGTA ו0.1 מ"מ SNP.

8. פרשנות של תוצאות וחישוב נתונים

1. לחשב את MT כהפרש אחוזים בקוטר נצפה עבור Ca ^{2 +} המכיל לעומת Ca ^{2 +} PSS -חינם בכל לחץ על פי החישוב הבא:
   
2. לעורקים עוברים vasomotion הקוטר עשוי להיות מחושב על ידי ממוצע שלב הרמה 1 דקות. להביע את הנתונים שנאספו כאחוז מהרפיה המקסימלי (PD%) על פי מערכת היחסים: PD% = 100 x [ΔD / PD]; ΔD ההבדל בין הקוטר לפני ואחרי תוספת של כל מתחם מחקרי (למשל Phe); PD הוא קוטר פסיבי (גםקוטר מקסימאלי).

תוצאות

ייצוג סכמטי של הגדרת myograph לחץ אופייני מוצג באיור 1. שני קצוות של כלי השיט הם cannulated עם micropipette זכוכית ומאובטח עם תפרים בשני הצדדים. דרך צינורות וברזלים פתוחים, צינורית אחד מחוברת ללחץ-רגולטור בשליטת סרוו; הצינורית אחרת מחוברת לברזלים סגורים. הקאמרית הוא perfused עם...

Discussion

צעדים, פתרון בעיות ושינויים קריטיים

בהכנת כלי isobaric טיפוסית, העורק בלחץ על 70 מ"מ כספית בין שתי קנולות זכוכית perfused עם PSS החם (37 מעלות צלזיוס). לאחר 30-45 דקות, עורקים לפתח MT, מאופיינים בירידה ספונטנית בקוטר שמייצבת ב20-30 דקות. עורקי ההתנג...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
			Chemical
Acetylcholine	Sigma Aldrich	A6625
Calcium chloride (CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-Glucose	Sigma Aldrich	G5767
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma Aldrich	H3784
Magnesium sulfate (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
MOPS	Sigma Aldrich	M5162
Phenylephrine	Sigma Aldrich	P6126
Potassium chloride (KCl)	Sigma Aldrich	P3911
Potassium phosphate (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Sodium bicarbonate (NaHCO3 )	Sigma Aldrich	S6014
Sodium chloride (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Sodium hydroxide (NaOH)	Sigma Aldrich	S5881
Sodium nitroprusside	Sigma Aldrich	13451
Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)	Sigma Aldrich	S9638
Sodium pyruvate	Sigma Aldrich	P8574
			Table 1.
			Physiological salt solution (1000 ml) mM KCl 4.9 0.365 g NaCl 112 6.545 g MgSO4.7H2O 1.2 0.296 g KH2PO4 1.2 0.163 g Glucose 11.5 2.072 g NaHCO3 26 2.184 g HEPES 10 2.383 g CaCl2 2 2 ml (1M stock) De-ionized water 998 ml Ca2+ free physiological salt solution (100 ml) mM KCl 4.9 0.036 g NaCl 112 0.645 g MgSO4.7H2O 1.2 0.029 g KH2PO4 1.2 0.016 g Glucose 11.5 0.207 g NaHCO3 26 0.218 g HEPES 10 0.238 g EGTA 0.39 0.015 g Sodium nitroprusside 0.1 0.0026 g De-ionized water 100 ml Dissection solution, stock (500 ml) mM NaCl 145 21.18 g KCl 4.7 0.875 g MgSO4 1.2 0.739 g MOPS 2 1.049 g EDTA 0.02 0.019 g De-ionized water 500 ml Working dissection solution (100 ml) mM Dissection solution stock 20 ml Glucose 1.2 0.091 g NaH2PO4 5 0.016 g Sodium pyruvate 2 0.022 g CaCl2 2 0.2 ml (1M stock) De-ionized water 79.8 ml
			Table 2. Composition of Experimetnal solutions
			Equipment
CCD Monochrome Camera	The imaging Source	DMK 21AU04
Single inline solution heater	Warner Instruments	64-0102
Thermistor	Warner Instruments	64-0108
Dual automatic temperature controller	Warner Instruments	TC-344B
Flaming/Brown micropipette puller	Sutter Instruments	P-97
Fluorescence System Interface	IonOptix	model FSI-700
Forceps and scissors	World Precision Instruments
Ion Wizard-Core and Analysis	IonOptix	Ion Wizard 6.0
Laboratory tubing	Silastic	508-005
Male Sprague Dawley rat	Harlan Laboratories
Master flex console drive	Cole-parmer
Milli-Q Plus Ultrapure Water System	Millipore	ZD5211584
Ophthalmic monofilament nylon suture	Ethicon	9007G
Photometry and Dimensioning Microscope	Motic	AE31
Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer	Living Systems Instrumentation	PS-200
Stereomicroscope	Nikon Instruments Inc	SMZ660
Vessel Chamber	Living Systems Instrumentation	CH-1
Dissection dish	Living Systems Instrumentation	DD-90-S
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW120-6
Microforge	Stoelting	51550
			Table 3.