Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Özet

Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Özet

Küçük direnç arterlerin daralması ve artan veya intraluminal basınç azalması karşısında sırasıyla dilate; Miyojenik tepki olarak bilinen bu fenomen, yerel kan akımının önemli bir düzenleyicisidir. Izobarik koşullarda küçük direnç arterler sistemik vasküler direnç (SVR) önemli bir belirleyicisi olan Miyojenik tonu (MT) olarak bilinen daralmasını sürekli geliştirirler. Bu nedenle, küçük direnç arterlerde ex vivo basınçlı hazırlıkları yakın fizyolojik devletlerde mikrovasküler fonksiyonunu incelemek için önemli araçlardır. Bunu elde etmek için, küçük bir direnç, arter (çap ~ 260 um) bir taze izole sağlam kademeli bir, iki küçük cam kanüller ve basınçlı üzerine monte edilir. Bu arter hazırlıklar vivo özellikleri ve gerçek zamanlı olarak damar tonusu izin değerlendirmesinde en korur. Burada sıçanlardan basınçlı küçük direnç mezenterik arterlerde vazoaktiviteye değerlendirilmesi için ayrıntılı bir protokol sağlar; Bu arterler geliştirmeksürekli vazokonstriksiyon - maksimal çapının yaklaşık 25% - 70 mmHg basınçlı. Bu arter preparatları çeşitli hastalıkların hayvan modellerinde mikrovasküler fonksiyonunda değişiklik intra-arteryal basınç ve vazoaktiviteye arasındaki ilişki ile ilgili araştırma bileşiklerin etkisini incelemek ve belirlemek için kullanılabilir.

Giriş

Küçük direnç arterler SVR önemli belirleyicileri ve birçok hastalığın ^1,2 patofizyolojisinde önemli bir rol oynamaktadır. Diyabet ^3, gebelik ^4, iskemi-reperfüzyon ^5, obezite ve hipertansiyonun ^6,7 gibi koşullar genellikle değiştirilmiş mikrovasküler işlevi ile ilişkilidir. Vasküler myography çeşitli hastalıklarda mikrovasküler fonksiyonu değişiklikleri önemli bilgiler sağlamak değil, aynı zamanda terapötik hedefleri belirlemek yardımcı ve vazoaktif bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek değil sadece. Vasküler fonksiyon izometrik veya izobarik damar koşulları altında ⁸ izole küçük arterleri kullanarak çalışılmıştır. Izometrik myography detaylı açıklaması başka yerde ⁹ sağlanır. Ancak izobarik hazırlıkları ^10-12 karşı izometrik elde edilen verilerdeki farklılıklar vardır. Basınçlı arteriyel hazırlıklar yakın fizyolojik koşullarda mikrovasküler fonksiyonunun çalışma izin beri,Elde edilen bulgular, vasküler yatağa ^8,13 in vivo davranışları ile iyi korelasyon olabilir.

1902 yılında Bayliss ilk damar çapı ¹⁴ transmural basınç etkisi nitelendirdi. O basıncında bir azalma damar genişlemesi takip etti tavşan, kedi ve köpeklerde çeşitli vasküler yataklar küçük direnç arterlerinin gözlenen ve basınçtaki bir artış, vazokonstriksiyon izledi. Bu olgu, miyojenik yanıt olarak bilinir. Bayliss ve sonraki araştırmacılar izobarik koşullarda küçük direnç arterler MT ^15,16 olarak bilinen sürekli daralma geliştirmek görülmektedir. Miyojenik yanıt ve MT Her iki basınç myography (PM) tekniği kullanılarak değerlendirilebilir. PM küçük arterler, venler ve diğer gemilerin vazoaktiviteye belirlemek için öncelikle kullanılır. Adından da anlaşılacağı gibi - - vasküler çapına vazoaktif bileşiklerin etkisini değerlendirmek ek olarak, AM intravasküler basıncı aracılı ch değerlendirmek için kullanılırvasküler çapına anges. Son birkaç yıl içinde, video mikroskobu ve cam pipet PM gerçekleştirmek için daha kolay yaptık çekerek gelişmiş bilgisayar yazılımı, gelişmeler. Ancak, küçük kan damarlarının canlı bozulmamış kesimleri diseksiyonu sıkıcı ve bazen zorlayıcı olmaya devam etmektedir. Burada sıçanlardan izole edilen küçük mezenterik direnç arterlerinde miyojenik tepkisini incelemek için ayrıntılı bir protokol özetlemektedir.

Protokol

Burada gösterilen örnekler Gürcistan Regents University IACUC tarafından onaylanmış deneylerden vardır - Protokol No: # 2011-0408

Reaktifler 1. Hazırlık

1. Diseksiyon çözüm stok hazırlayın: stok diseksiyon solüsyonu (5x) 500 ml için, 21.18 g NaCl, 0.875 gr KCI, 0,739 gr MgSO _4, 1.049 gr MOPS ve Milli-Q su 450 ml 0.019 gr EDTA çözülür. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 500 ml hacim hazırlayın. Stok çözelti 7-10 gün kadar saklanabilir. Kimyasallar ve satıcıların bir listesi için Tablo 1'e bakınız. MM konsantrasyon için Tablo 2'ye bakınız.
2. Çalışma diseksiyon çözüm hazırlayın: her gün taze çalışma diseksiyon çözüm hazırlayın. 100 ml çalışma çözeltisi için 0.091 g glikoz, Milli-Q su içinde 79.8 ml 0.016 gr NaH ₂ PO ₄ ve 0.022 g sodyum piruvat çözülür. VOLU getirmek için 0.2 ml 1M _CaCl2 ve 20 ml diseksiyon çözüm stok ekle100 ml beni.
3. Fizyolojik tuzlu solüsyonu (PSS) hazırlanması: 950 ml, 1.000 mi PSS hazırlamak için 0.365 g KCI, 6,545 gr NaCl, 0.296 gr MgSO _4, 0.163 g KH ₂ PO ₄ çözülür, 2,072 g glikoz, 2,184 g NaHCO _3. ve 2,383 g HEPES Milli-Q su içinde işlenmiştir. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 1,000 ml sesi olun. 2 ml solüsyon çıkarın ve 1 M _CaCI2, 2 ml ile değiştirin. (Taze PSS günlük hazırlıklı olmak gerekiyor)
4. Ca ²⁺ olmadan, 100 ml PSS için 0.036 g KCI, 0.654 gr NaCl, 0.029 gr MgSO _4, 0.016 gr KH ₂ PO _4, 0.207 gr glikoz, 0.218 gr NaHCO _3, 0.238 çözülür: kalsiyum (Ca ²⁺⁾ ücretsiz PSS hazırlayın g HEPES, 0.015 g EGTA ve 0.0026 g sodyum nitroprussid (SNP) Milli-Q su içinde 95 ml. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 100 ml hacim Makyaj.

Cam kanüller 2. Hazırlık

1. Cam pipetler çekinüreticinin yönergelerine uygun olarak bir pipet çektirmenin kullanarak 100-150 mikron uçlu kanüller oluşturmak için.
2. Konik bir mikroelektrot beveller kullanılarak cam kanül ipuçları, yangın onları parlatmak ve bir ısıtıcı prob kullanılarak ~ 45 ° cam kanül ipuçlarını bükün.
3. Mikropipet tutucu içine kanüller yükleyin ve perfüzyon odasına üzerine mikropipet tutucu takın.

Perfüzyon Odası 3. hazırlanması

1. 5 dakika her biri için diseksiyon çözeltisi, ardından Milli-Q suyu ile durulayın perfüzyon odasına. Diseksiyon çözeltisinin 2 ml'si ile bölme yerleştirin.
2. Kanül içinden emme diseksiyon çözüm 10 ml şırınga kullanarak ve dikkatlice kabarcıkları olmadan tüm kanül ve ekli boru doldurun. Kabarcıklarının oluşmasını önlemek için yavaşça emme uygulayın.
3. Her künt forseps kullanarak yarım düğüm ile iki sütür hazırlayın. Oftalmik tek fılamentli naylon dikişlerle yana (10-0, 0.2 mt), sadece knot hazırlamak için kullanılanÇapı, 1-2 mm, diseksiyon mikroskobu gerekli olabilir.
4. Diseksiyon mikroskobu altında görselleştirme, biraz uzakta ucundan kısmen kapalı dikiş knot ile her iki kanüller yüklemek için diseksiyon forseps kullanabilir. Daha sonra bu knot kanüllü arter uçları üzerine dikkatlice kaydırdı edilecek ve tamamen kapattı.

Sprague-Dawley Rats gelen Mesenterik Arter Arcade 4. Koleksiyonu

1. Bu deneyler önce yerel Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) onayı isteyin. Kontrollü sıcaklık ve aydınlatma ve suya serbest erişime izin ve ticari bir kemirgen yemi ile hayvan barınağında Ev hayvanları.
2. Intraperitonal ketamin enjeksiyonu (80 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) sıçanlarda anestezisi. Ayak-tutam tarafından ve gerektiğinde Administer ek anestezik eğer derin anestezi onaylayın.
3. Cerrahi anestezi onayladıktan sonra, dekapitasyon hayvan euthanize. Uti için AAALAC yönergeleri izleyinHayvan ötanazi için uygun yöntemler lizing.
4. Sternum için pelvis bir orta hat laparotomi gerçekleştirmek için bir diseksiyon makas ve forseps kullanın. Bu iki adımda yapılır: İlk olarak, deri insizyon ve ikinci olarak, altta yatan tabaka kas insizyon. Bakım karın içi organları kesmemeye dikkat edilmelidir.
5. Pilor için bağırsak yakın ve ileo-çekal kavşağına yakın uzak ucuna proksimal ucunu kesin. Hem besin bulamacı ve böylece hücre dışı banyo solüsyonunun kirlenmesini önlemek dışkı sızıntısı önlemek için ayrı ayrı biter kravat. Besleme damar, yani üst mezenterik arter yakınındaki tabanında mezenter İnsizyon ve buz gibi soğuk diseksiyon çözeltisi içeren 50 ml'lik bir behere bütün ince bağırsak mezenterik yatak aktarın.
6. Hasat doku 5 dakika boyunca buz gibi soğuk diseksiyon çözeltisi içinde kalmak ve kan kurtulmak taze diseksiyon çözümü ile durulayın izin verin.

5. İzolasyon ve 4 ^th Kanülasyon Sipariş Mezenterik Arter

1. Bir sylgard kaplı çanak sağ taraftaki bağırsağın proksimal ucunu aşağı pin. (Şekil 1) mezenter yaymak için aşağı kesimi iğneleme ve kan damarlarını açığa bir saat yönünün tersinde yolunda kalan bağırsak uzatın. Not: Oda sıcaklığında arter segmentleri izole. Aksi takdirde buz üzerinde çanak içeren mezenterik çarşı yerleştirin. Bizim kurumda olanlar dahil olmak üzere bazı laboratuvarlar, 4 ° C'de arterleri incelemek için soğutucu üniteleri kullanın.
2. Stereo Zoom mikroskobu altında sipariş küçük mezenterik arterler ^inci 3 ^rd ve 4 küçük makas kullanarak ince bağırsağa (~ 260 mikron) paralel teşrih. Öncelikle kaplama yağ uzak teşrih. Sonra ven teşrih ve V-şekilli şube noktası ile arteri izole. Seçilen parçayı ponksiyon için dikkatli olun. Bir ^2. siparişi şube yakın yağ diseksiyon başlayın ^ve 3. ya da ^4. ord için yol bulmaker gemiler.
   1. Not: Arterler ve venler kendi duvar kalınlığı dayalı ayırt edilebilir - arteriyel duvar ven yıllardan daha kalındır. Ayrıca, bağ dokusu bitişik zaman arterler yok kolaylıkla iken gemiler, damarlar çöküşüne hafifçe dik çekilir. Lümen çapı arterlerin yana <400 mikron biz (çapı <300 mikron lümen) sipariş sıçan mezenterik arterler ^inci 4 kullanılan bu protokol için sistemik vasküler direncin önemli siteler vardır.
3. Ince bağırsağa arter paralel 4-5 mm'lik bölümü izole edin. Ince bağırsağın içine gömmek tüm ^5. sipariş dalları görselleştirmek ve biraz uzakta şube kökenli onları kesip bir kısmını korumak. Şube Bunlar korunmuş kısımları sonradan kanülasyon rehberlik, bir perfüzyon odasına arter segmentleri aktarmak için (diseksiyon forseps ile) siteleri tutan ve olarak hizmet vermektedir.
4. Ardından 2 kesi uzak yaparak arter segmentleri kesti^5. sipariş arterin her tarafında şube ve perfüzyon odasına transfer (Şekil 1C ve efsane bakınız).
5. (: 100-150 mikron çap) diseksiyon forseps ile arteriyel segmentinin ipuçları tutarak diseksiyon forseps kullanarak cam mikropipet biri gemilerin bir ucunu cannulate. Kanüle ucuna önceden yüklenmiş kısmen kapalı dikiş kaydırın ve emniyete alın. Not: arterin yakın ucu in situ ortamda taklit etmek servo kontrollü basınç ayar cihazına bağlı olan bir cam kanül üzerine kanüle edilebilir.
6. Bir diseksiyon çözüm kanül ve stopcock bağlayan tüp diseksiyon çözüm şırınga bu birleşir gibi bu kanül bağlı stopcock 10 ml şırınga yüklenen takın. Yavaşça şırınga yükseltmek. çözüm üzerinde yerçekimi kuvveti geminin açık ucundan içi damar kanı kaldıracaktır. Intra-arteriyel kan ayrılmasından sonra, Stopcock kapatın.
   Alternatif, basınç denetleyicisi stopcock takın açın ve yavaşça aynı sonucu elde etmek 5-10 mm Hg basıncı artırmak Not:.
7. Dikkatle arteryel segmentin çözülmüş ucuna mümkün olduğunca yakın, diğer bir kanül getirerek bir ikinci cam kanül üzerine kapların uzak ucunu bağlayın. Kanüle ucuna önceden yüklenmiş kısmen kapalı dikiş kaydırın ve emniyete alın. Bakım römorkör veya arteriyel segmentler çekmeyin alınmalıdır. Her iki kanüller bağlı stopcocks kapalı olduğundan emin olun.
8. Canlı video kaydı ile donatılmış inverted mikroskop aşamasına perfüzyon odasına aktarın.
9. Bir servo kontrollü basınç düzenleyici cihazı arteryel segmentin yakın ucuna bağlı kanülün Stopcock bağlayın ve stabil lümen içi basıncını korumak için kapalı kalır musluk için diğer kanüle takılı olduğundan emin olun.
10. Daha sonra, emiş ağzı a vakum boru eklemeknd perfüzyon odasının perfüzyon portuna tüp.
    Not: Eğimli iğne noktası perfüzyon için emme ve künt bir iğne bağlantı noktası için kullanılır.
11. Tek satır içi çözüm ısıtıcı ile sıcak PSS ile geminin perfüzyon başlatın (37 ° C, gaz karışımı ile dengelenmiş: nötr pH ve yeterli oksijenasyonu ¹⁷ korumak için% 5 CO _2,% 5 O ₂ ve% 90 N) 2 ml / dak kullanarak bir peristaltik pompası. Da vakumu açın. Sürekli sıcaklığını izlemek için odasında bir termistör yerleştirin.
12. Odasında PSS sıcaklığı yaklaştığında ~ 37 ° C (genellikle 5 dakika içinde), yavaş yavaş 20 ila 100 mmHg intraluminal basınç artışı ve sızıntı olup olmadığını kontrol edin damarları. Bu basınç regülatörü otomatik basınç ayarı kullanılarak yapılır. Sızıntı ile gemiler atın ve başka bir segment ile değiştirin. sızıntıları ile gemiler baskıyı tutmak mümkün olmayacaktır.
13. 100 mmHg basıncı korurken virajlı için arteriyel segmenti değerlendirin.Vida kolu kullanarak, arteriyel segmentinde düzeltmek için kanül taşıyın. Üzerinde arter segmentleri germeyin; Gol in vivo arter segmenti uzunluğu taklit etmektir.
14. 70 mmHg basıncı azaltmak (mezenterik çarşı ¹⁸ in vivo basınç taklit etmek) ve arteriyel segmenti stabilize ve miyojen sesi geliştirmeye olanak sağlar. Arterler (40-70 mmHg), deneysel strateji ve vasküler yatağa göre değişken basınç altında olabilir. Önceden yayınlanmış yorum farklı vasküler yatak ^8'den arter segmentlerinde MT değişkenlik mükemmel bir inceleme sağlar.

Arter Çap 6. Ölçümü

1. Tek renkli bir görüntü şarj çiftli aygıt kamera ile donatılmış bir mikroskop 10X objektif View at arterler. Video kare kapmak ve gerçek zamanlı kenar algılama sistemi kullanılarak lümen çapı ölçün. Kullanılan ekipman bir listesi, Tablo 3'te verilmektedir.
2. Monitör ve kayıt damar dsürekli iameter.
3. MT gelişmesi için gözlemleyin. Not: sıçan mezenterik direnç arterlerde, 70 mmHg, MT geliştirme çapında% 20 azalma ~ ile karakterize olduğu görülmektedir. MT damar yatak ve hayvan türlerine göre değişir.
4. 1 mcM fenilefrin (Phe) ve 1 uM asetilkolin (ACh) ile vazokonstriktör ve vazodilatör yanıtları değerlendirerek damar canlılığı onaylayın.
5. Her bir deneyin sonunda, 20 dakika boyunca -serbest PSS Ca ^{2 +} arterleri inkübe pasif çapı (PD) belirler.

7. andMyogenic Tepki

1. 20 mm Hg basıncı azaltmak ve çapı stabilize etmek için izin verir. Artan adımlar (20, 40, 60, 80 ve 100), intraluminal basınç artış ve her basınç basamağında arterler (genellikle 5 dakika içinde) sabit bir çapı elde etmek için izin verir.
2. 20 mmHg intraluminal basıncı azaltmak ve ^{2 +} -ücretsiz PSS 0.39 mM içeren Ca arteriyel segmenti kuluçkayaEGTA ve 0.1 mM SNP. Arteriyel çapı (genellikle 15 dk) stabilize etmek için izin verin.
3. 0.39 mM EGTA ve 0.1 mM SNP içeren Ca ^{2 +} -ücretsiz PSS basınç adım yanıtı tekrarlayın.

Verilerin Sonuçlarının ve Hesaplama 8. yorumlanması

1. Ca ²⁺ gözlemlenen çapı yüzde fark aşağıdaki hesaplamaya göre her basınçta ^{2 +} -ücretsiz PSS Ca karşı ihtiva-eden olarak MT hesaplayın:
   
2. Çapı vazomosyon geçiren arter için 1 dakika için plato fazı ortalaması alınarak hesaplanabilir. Ilişkiye göre maksimal gevşeme (% PD) yüzde olarak toplanan verileri Express:% PD = 100 x [ΔD / PD]; ΔD önce ve herhangi bir araştırma bileşik (örneğin, Phe) ilave edildikten sonra çapı arasındaki fark; PD ayrıca pasif çapı (birmaksimal çapı).

Sonuçlar

Tipik bir basınç myograph kurulumunun şematik gösterimi, Şekil 1 'de gösterilmiştir. Kabın iki ucu cam mikropipet ile kanüllenmiş ve her iki tarafta da dikiş ile sabitlenir. Boru ve açık valf yardımı ile, tek bir kanül servo kontrollü bir basınç regülatörü bağlanır; Diğer Kanül, bir kapalı vana bağlanır. odacık bir CCD kamera bağlı bir inverted mikroskop ile gözlenir PSS ve damar çapı değişiklikleri ile perfüze.

70 mmHg basınç arte...

Tartışmalar

Kritik adımlar, sorun giderme ve modifikasyonları

Tipik bir izobarik damar hazırlık olarak, arter sıcak (37 ° C) PSS ile perfüze iki cam kanüller arasında 70 mmHg basınç altındadır. 30-45 dakika sonra, arterler 20-30 dk stabilize çapında kendiliğinden azalma ile karakterize, MT gelişir. çeşitli vasküler yataklar direnç arterler değişken MT geliştirmek. Cremastric arterler PD MT ~% 40 elde edebilir ise örnek sıçan direnci için mezenterik arterler, ~ PD% 25 MT gelişti...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
			Chemical
Acetylcholine	Sigma Aldrich	A6625
Calcium chloride (CaCl2)	Sigma Aldrich	223506
D-(+)-Glucose	Sigma Aldrich	G5767
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)	Sigma Aldrich	E3889
Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)	Sigma Aldrich	E9884
HEPES	Sigma Aldrich	H3784
Magnesium sulfate (MgSO4)	Sigma Aldrich	M7506
MOPS	Sigma Aldrich	M5162
Phenylephrine	Sigma Aldrich	P6126
Potassium chloride (KCl)	Sigma Aldrich	P3911
Potassium phosphate (KH2PO4)	Sigma Aldrich	P5655
Sodium bicarbonate (NaHCO3 )	Sigma Aldrich	S6014
Sodium chloride (NaCl)	Sigma Aldrich	S7653
Sodium hydroxide (NaOH)	Sigma Aldrich	S5881
Sodium nitroprusside	Sigma Aldrich	13451
Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)	Sigma Aldrich	S9638
Sodium pyruvate	Sigma Aldrich	P8574
			Table 1.
			Physiological salt solution (1000 ml) mM KCl 4.9 0.365 g NaCl 112 6.545 g MgSO4.7H2O 1.2 0.296 g KH2PO4 1.2 0.163 g Glucose 11.5 2.072 g NaHCO3 26 2.184 g HEPES 10 2.383 g CaCl2 2 2 ml (1M stock) De-ionized water 998 ml Ca2+ free physiological salt solution (100 ml) mM KCl 4.9 0.036 g NaCl 112 0.645 g MgSO4.7H2O 1.2 0.029 g KH2PO4 1.2 0.016 g Glucose 11.5 0.207 g NaHCO3 26 0.218 g HEPES 10 0.238 g EGTA 0.39 0.015 g Sodium nitroprusside 0.1 0.0026 g De-ionized water 100 ml Dissection solution, stock (500 ml) mM NaCl 145 21.18 g KCl 4.7 0.875 g MgSO4 1.2 0.739 g MOPS 2 1.049 g EDTA 0.02 0.019 g De-ionized water 500 ml Working dissection solution (100 ml) mM Dissection solution stock 20 ml Glucose 1.2 0.091 g NaH2PO4 5 0.016 g Sodium pyruvate 2 0.022 g CaCl2 2 0.2 ml (1M stock) De-ionized water 79.8 ml
			Table 2. Composition of Experimetnal solutions
			Equipment
CCD Monochrome Camera	The imaging Source	DMK 21AU04
Single inline solution heater	Warner Instruments	64-0102
Thermistor	Warner Instruments	64-0108
Dual automatic temperature controller	Warner Instruments	TC-344B
Flaming/Brown micropipette puller	Sutter Instruments	P-97
Fluorescence System Interface	IonOptix	model FSI-700
Forceps and scissors	World Precision Instruments
Ion Wizard-Core and Analysis	IonOptix	Ion Wizard 6.0
Laboratory tubing	Silastic	508-005
Male Sprague Dawley rat	Harlan Laboratories
Master flex console drive	Cole-parmer
Milli-Q Plus Ultrapure Water System	Millipore	ZD5211584
Ophthalmic monofilament nylon suture	Ethicon	9007G
Photometry and Dimensioning Microscope	Motic	AE31
Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer	Living Systems Instrumentation	PS-200
Stereomicroscope	Nikon Instruments Inc	SMZ660
Vessel Chamber	Living Systems Instrumentation	CH-1
Dissection dish	Living Systems Instrumentation	DD-90-S
Thin Wall Glass Capillaries	World Precision Instruments	TW120-6
Microforge	Stoelting	51550
			Table 3.