Intralymphatic חיסוני וחיסון בעכברים

Summary

חיסון המניעה והטיפולי לעתים קרובות לא מצליח לעורר תגובה חיסונית חזקה בשל ניקוז שבוע של החיסון לבלוטות הלימפה ומעורבות עניות וכתוצאה מכך של תאים חיסוניים. על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות הלימפה, הזרקת intralymphatic כביכול, יעילות חיסון ניתן לשפר מאוד וניתן להפחית מינוני חיסון.

Abstract

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של תגובות חיסון. ההצלחה של זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של התגובות החיסונית רצתה. הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות, כמו גם את המיקרו, במיוחד התוכן של ציטוקינים. כמו שרק שבריר זעיר של חיסונים מוזרקים שולי מגיע לבלוטות הלימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם שבוצעו על ידי הזרקה ישירה של חיסון לבלוטות לימפה מפשעתי, כלומר הזרקת intralymphatic. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד. בעכברים, חתך קטן (5-10 מ"מ) הוא עשה באזור המפשעה של חיות מורדמות, הבלוטות לימפה היא מקומיות ומשותקת עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית.החתך נסגר עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ"א, רנ"א, פפטיד, חלבון, חלקיקים, חיידקים, כמו גם אדג'ובנטים, ושיפור חזק של תגובות חיסוניים נגד כל הסוג של חיסונים נצפה. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במצבים שבם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין מוגבל.

Introduction

חיסונים בדרך כלל מוזרקים מתחת לעור או לשריר לגירוי של מערכת החיסונית. ההצלחה של הליך זה דורשת ניקוז יעיל של חיסון לבלוטות הלימפה שבו תאי המציגים אנטיגנים יכולים לקיים אינטראקציה עם לימפוציטים לדור של T-ותגובות B-cell. בנוסף, הכוח והסוג של תגובה החיסונית המושרית תלוי גם בצפיפות או התדירות של אינטראקציות כאלה, כמו גם את המיקרו עצמו, במיוחד את התוכן של ציטוקינים. כחלק קטן בלבד של חיסון המוזרק לרקמה היקפית מגיע לבלוטות לימפה, חיסונים של עכברים ובני אדם על ידי הזרקה ישירה של החיסון לבלוטות הלימפה, האתר היו תגובה חיסונית נוצרות, כבר בוצע. באדם, ההליך מונחה על ידי אולטרסאונד, הליך משמש גם לניהול סוכני הדמיה להדמיה ואבחון במערכת הלימפה. בעכברים, ההליך הוא פולשני. כאן, incisio קטן (5-10 מ"מ)n מורכב באזור המפשעה של חיות הרדים ^1, הבלוטות לימפה היא מקומית ומשותק עם מלקחיים, ונפח של 10-20 μl של החיסון מוזרק תחת שליטה חזותית; 10 μl משמש לזריקות הראשונות ובעכברים צעירים עם בלוטות לימפה קטנות, בעוד שניתן להזריק 20 μl לבלוטות הלימפה של מבוגר או עכברים כבר דרוכים, שיש לי בלוטות לימפה גדולות יותר. החתך יכול להיות סגור עם תפר אחד באמצעות תפרים כירורגית. לפי שיטה זו, עכברים שחוסנו עם פלסמיד דנ"א ^2,3, RNA שליח ^4, פפטיד ^1,3,5,6, חלבון ^7-10, חלקיקי ^11, חיידקי ¹² כמו גם אדג'ובנטים ^7,13, ושיפור חזק של חיסון תגובות נגד כל הסוג של חיסונים כבר נצפו. שיטת intralymphatic של החיסון מתאימה במיוחד במקרים בהם חיסון קונבנציונלי מייצר חסינות בלתי מספיקה או שבו הסכום של חיסון זמין הוא מוגבל או very יקר. באדם, בשיטת intralymphatic של חיסון הוחל חולי אלרגיה ^14,15 או לחולים עם הסרטן ^16-21. למרות שהרעיון הנוכחי הוא ששיטת intralymphatic היא יותר פולשניים יותר מאשר בשיטות אחרות, כגון זריקות זריקות תוך שרירית ותת עורית, לתפיסת הכאב היא לא גבוהה יותר מאשר לאחר ניקור ורידי ^15. צפוי כי חיסון intralymphatic יהפוך חלופי או משלימים לשיטות אחרות של חיסונים מניעתי וטיפוליים במיוחד. מאמר זה מתאר בפרטים כיצד ההליך של חיסון intralymphatic מבוצע בעכברים. כל ההליכים שתוארו, אושרו על ידי וטרינרית סוכנות Cantonal ציריך ומבוצעים על פי הנחיות פדרליות שוויצריים והנחיות על ההגנה על בעלי החיים המשמשים למטרות מדעיות.

Protocol

1. בהרדמה של עכברים

1. הכן את חומרי ההרדמה על ידי ערבוב של קטמין (הרדמה דיסוציאטיבית) וxylazine (הרגעה ושיכוך כאבים) שבנאגר מלוח. הריכוזים של קטמין ו xylazine בפתרון הסופי הם 12.5 ו2 מ"ג / מיליליטר, בהתאמה.
2. להזריק חומרי ההרדמה לעכברים על ידי ממשל intraperitoneal באמצעות מזרק עם מחט G 25-30. השתמש 0.1 ml/10 גרם של משקל גוף.
3. החל משחת עיניים לעיניים של העכברים על מנת למנוע התייבשות של הקרניות.
4. מבטיח שהעכבר הוא הרדים מספיק על ידי צובט את הרגל או הבוהן שלה עם המלקחיים. אם העכבר אינו מגיב עם רפלקסים לקורט, המשך לניתוח. אם העכבר מגיב לצביטה עם רפלקסים או התכווצויות שרירים, חכה 1-2 דקות ולחזור על בדיקת הצביטה. אם העכבר עדיין מגיב, להחליף את העכבר עם בעלי חיים חדשים ולחזור על ההליכים מהשלב 1.2 ואילך.

2. אני כירורגיncision של אזור מפשעתי של העכבר

1. מניחים את העכבר על הגב שלה.
2. הרטב אזור אחד מפשעתי עם אתנול חיטוי (70%). כדי לספק חיטוי טוב יותר, באזור המפשעה עשוי להיות מגולח כדי להסיר חיטוי לפני פרווה עם אתנול.
3. קח את רגלו האחורית ולכופף את מפרק הירך כדי לייצר זווית כ 90 ° של מפרק הירך.
4. בעזרת מלקחיים microdissecting מעוקלים, לקחת את העור של העכבר באזור המפשעה שבו מפרק הירך הוא כפוף ולמשוך את העור הרטוב מעט.
5. בעוד מחזיק את העור עם המלקחיים, לחתוך חתך קטן (<5 מ"מ) דרך העור באמצעות מספריים כירורגיות.
6. הנח את הקצה של המספריים הסגורים לתוך החתך ועוד יותר לפתוח את החתך על ידי פתיחת המספריים כשהוא אוחז אותו בתוך החתך. זה יגרום לעור לקרוע וצריך לייצר בקוטר של פחות מ -10 מ"מ. הערה: מקור אור קר עם מדריכי אור גמישים יכול לשמש כדי לשפר את הנראות. במבוגרעכברים, בעיקר זכרים, זיהוי של הבלוטות לימפה עלול להיות קשה בשל הרבה יותר רקמת שומן באזור המפשעה.

3. הזרקת Intralymphatic

1. הכן את מזרק (0.5 מיליליטר או פחות) עם מחט מזרק G 28-30; פוע קצר עשוי להיות עדיף לפוע ארוך. לשאוב 10 μl של החיסון להיות מוזרק ולהבטיח שהמזרק הוא חופשי של אוויר.
2. למקם את הצומת לימפה מפשעתי עם עזרה של המלקחיים המעוקלים והקצה של המספריים הסגורים. הבלוטות לימפה תופיע אפרפרות בתוך רקמת השומן לבנבן יותר וניתן לזהות עוד דרך נימים מביא efferent וכניסה וביציאה לימפה.
3. לשתק את הבלוטות לימפה על ידי מחזיק אותו בין זרועות המלקחיים המעוקלים.
4. קח את המזרק ולהכניס את המחט לתוך הבלוטה לימפה עם השיפוע כלפי מעלה; מוודא השלם שפוע נכנס לימפה.
5. להזריק את החיסון (10 μl). אם ההנהון לימפהדואר הוא נפיחות (פיצוץ), ההזרקה ניתן להניח מוצלחת. אם המחט אינה ממוקמת עמוק מספיק לבלוטות לימפה, כל החיסון מסוים או עלול לדלוף החוצה ולא להיכנס לימפה. אם המחט מוחדרת עמוקה מדי, החיסון המוזרק ישוחרר תת עורי מתחת לימפה. במקרה של האחרון, לחזור על ההזרקה או להחליף את העכבר עם עכבר מטופל חדש.

4. סגירת החתך על ידי תפירה

1. פתח חפיסת תפר כירורגי סטרילי.
2. לאחוז במחט התפר עם בעל מחט בחלק הדיסטלי של גוף המחט. הדק את בעל המחט באמצעות אחיזתו עד שתופס את מחגר הראשון.
3. לאחוז בעור בצד אחד של החתך באמצעות מלקחיים (בהתאם להעדפותיו של המנתח, שיניים או בלתי שיני מלקחיים או ווי עור עשוי לשמש). הכנס את ca המחט. 2-3 מ"מ מהקצה של החתך, שנכנס מהצד החיצוני של העור.
4. לוסen האחיזה של העור עם המלקחיים ולהבין את הצד השני של החתך עם המלקחיים. הכנס את ca המחט. 2-3 מ"מ מהקצה של החתך, שנכנס מהפנימי של העור.
5. שחרר את בעל המחט ולתפוס את קצה מחט עם המלקחיים. משוך את המחט עם לדרוך דרך העור, משאיר את אורך נוח של לדרוך מחוץ לנקודת מחט ההכנסה הראשונה (אם כמה עכברים יטופלו, להשאיר סוף קצר יותר; 5-10 עכברים יכולים להיות מופעלים על עם מחט תפר אחד / לדרוך).
6. הפוך את הקשר המועדף על פי פרוטוקולי מנתח סטנדרטיים. תפר אחד די אם החתך אינו גדול מ10 מ"מ. לחתכים גדולים יותר, להפוך את התפר שני.

5. טיפול שלאחר תפעולי

1. מניחים את העכבר בכלוב ולכסות עם רקמות כדי להתחמם. כאשר מטפלים עכברים מרובים, למקם אותם קרוב אחד לשני כדי להתחמם. לחלופין, למקם את העכברים על משטח חם עד שהם התעוררועד.
2. שים לב לעכברים עד שהם מתעוררים.
3. שים לב לעכברים יומיים בכל הקשור לריפוי פצע, כמו גם סימפטומים קליניים אחרים, כגון זיהומים בפצע. הפצע הוא בדרך כלל סגור במידה מספקת בתוך יומיים ורפאו בתוך שבעה ימים של ההליך.

תוצאות

ההליך של זריקות intralymphatic בעכברים, למרות האופי כירורגית, הוא ישר קדימה ומהיר יחסית. אדם מאומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. החתך שנסגר עם תפר אחד בדרך כלל מרפא בתוך יומיים (איור 1)

חיסון או חיסון Intralymphatic שבוצע עם ה-mRNA, ה-DNA פלסמי...

Discussion

חיסונים וטיפול חיסוני Intralymphatic הוכחו כמתאימים לגירוי של שני תגובות נוגדנים ותגובות תאי T. כפי שמודגם במאמר וידאו זה, הליך intralymphatic של חיסון הוא שיטה מהירה וקלה להמרצת תגובה חיסונית חזקה בעכברים. מנתח מיומן יכול לבצע את ההליך ב3-4 דקות. המפגש יכול גם להיות משותף בין שני מנ...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ketamine (Ketasol-100)	Graeub AG, Switzerland		Anesthetics
Xylazine (Rompun)	Bayer, Germany		Anesthetics
Viscotears Eye-Gel	Novartis, Switzerland		To keep eyes from drying out during anesthesia.
BD Micro-Fine 0.5 ml	BD Medical, France		29 G Insulin syringes with permanently attached needles
6-0 Dermalon Monofilament nylon	Covidien, MA, USA		For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue)
Curved forceps, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision and holding of lymph node
Straight surgical scissors, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision
Needle holder, 5.5 inch	Polymed, Switzerland		To close incision with suture