마우스의 Intralymphatic 면역 및 예방 접종

요약

예방 및 치료 백신은 종종 노드와 면역 세포의 결과로 가난한 참여 림프로 인해 백신의 주 배수에 강한 면역 반응을 자극하는 데 실패합니다. 림프절 백신의 직접 주사에 의해, 소위 intralymphatic 주입은 백신 효능 강하게 개선 될 수 있으며, 백신의 투여 량을 저감 할 수있다.

초록

백신은 일반적으로 면역 반응의 자극을 위해 피하 또는 근육 주사합니다. 이것의 성공은 항원 제시 세포가 원하는 면역 반응의 생성을 위해 림프구와 상호 작용할 수있는 림프절에 백신의 효율적인 배수를 필요로합니다. 강도 및 유도 된 면역 반응의 유형은 밀도 또는 주파수의 상호 작용뿐만 아니라, 미세 환경, 사이토킨, 특히 콘텐츠에 의존한다. 말초 주입 백신만을 분 분획 림프절에 도달 할 때, 마우스 및 인간의 예방 접종 서혜부 림프절, 즉 intralymphatic 주사로 백신의 직접 주입에 의해 수행되었다. 남자에서, 절차는 초음파에 의해 안내된다. 마우스에서, 작은 (5-10 ㎜) 절개, 림프절 지역화 및 집게로 고정화는 마취 된 동물의 서혜부 영역에 만들어지고, 백신의 20 μL의 부피는 카메라 제어하에 주입한다.절개 수술 봉합사를 사용하여 하나의 스티치 닫힙니다. 마우스는 플라스미드 DNA, RNA, 펩타이드, 단백질, 입자, 박테리아뿐만 아니라 보조제 접종하고, 백신의 모든 유형에 대한 면역 반응의 강력한 개선이 관찰되었다. 예방 접종의 intralymphatic 방법은 기존의 예방 접종이 부족 면제 또는 가능한 경우 백신의 양이 한정되어 생산 상황에 특히 적합합니다.

서문

백신은 일반적으로 면역 반응의 자극을 위해 피하 또는 근육 주사합니다. 이 절차의 성공은 항원 제시 세포는 T-와 B-세포 반응의 생성을 위해 림프구와 상호 작용할 수있는 림프절에 백신의 효율적인 배수를 필요로합니다. 또, 강도 및 유도 면역 반응의 유형은 밀도 또는 주파수와 같은 상호 작용뿐만 아니라 미세 환경 자체, 사이토 카인, 특히 콘텐츠에 의존한다. 말초 조직에 주입 백신의 단지 작은 분획이 림프절에 도달 할 때, 림프절로 백신의 직접 주입에 의해 생쥐와 인간의 접종은, 사이트가 면역 반응을 생성하고, 수행되었다. 사람에서의 절차는 초음파, 또한 림프 시스템의 시각화 및 진단을위한 이미징 요원의 관리에 사용되는 절차에 의해 안내된다. 마우스에서, 절차는 침습적이다. 여기에, 작은 (5 ~ 10 ㎜) incisioN 마취 된 동물 ^1의 서혜부 제, 림프 노드는 지역화 포셉 고정화하고, 백신의 10 ~ 20 μL의 부피는 시각 제어에 주입되고, 10 ㎕를 먼저 주사에 사용되는 젊은 생쥐 작은 림프 노드와, 반면에 20 ㎕의 큰 림프절이 림프 세의 노드 또는 이미 끝났다 마우스에 주입 할 수있다. 절개 수술 봉합사를 사용하여 하나의 스티치 닫을 수 있습니다. 이 방법으로, 마우스는 플라스미드 ^{DNA, 3,} 메신저 RNA ^4, 펩타이드 ^1,3,5,6, 단백질 ^{7 ~ 10, 11를} 입자, 박테리아 ^(12)뿐만 아니라 보조제 ^7,13, 면역의 강력한 개선과 예방 접종 백신의 모든 유형에 대한 반응이 관찰되었다. 예방 접종의 intralymphatic 방법은 기존의 예방 접종이 부족한 면역을 생산 또는 사용 가능한 백신의 양이 제한 또는 버전입니다 상황에서 특히 적합하다비용이 많이 드는 예. 인간의, 예방 접종의 intralymphatic 방법은 알레르기 환자 ^{14, 15} 또는 암 ^16-21 환자에 적용되었습니다. 현재의 개념이 intralymphatic 방법 등 근육 및 피하 주사 등의 주사 방법보다 더 침습적 인 것입니다 만, 고통의 인식은 정맥 천자 ⁽¹⁵⁾ 후보다 높은 없습니다. 그것은 intralymphatic 예방 접종은 질병 예방 및 치료, 특히 예방 접종의 다른 방법에 대한 대안 또는 보완 될 것으로 예상된다. 이 문서 intralymphatic 예방 접종의 절차가 생쥐에서 수행하는 방법을 상세하게 설명합니다. 설명 모든 절차는 취리히의 주립 수의학 기관의 승인을 스위스 연방 정부의 가이드 라인과 과학적인 목적으로 사용되는 동물의 보호에 관한 지침에 따라 수행 하였다.

프로토콜

1. 쥐의 마취

1. 완충 식염수에 케타민 (해리 성 마취제)과 자일 라진 (진정제 및 진통제)을 혼합하여 마취제를 준비합니다. 최종 솔루션에서 케타민과 자일 라진의 농도는 각각 12.5, 2 ㎎ / ㎖이다.
2. 25 ~ 30 G 바늘과 주사기를 사용하여 복강 내 투여하여 마우스에 마취제를 주입한다. 체중의 0.1 ml/10 g을 사용합니다.
3. 각막의 건조 아웃을 방지하기 위해 마우스의 눈에 안과 연고를 적용합니다.
4. 마우스가 충분히 집게와의 발이나 발가락을 집어 마취 확신한다. 마우스가 핀치에 반사와 반응하지 않는 경우 수술을 진행합니다. 마우스는 반사 신경이나 근육의 수축과 핀치에 반응하는 경우, 1 ~ 2 분 정도 기다린 핀치 테스트를 반복합니다. 마우스가 여전히 반응의 경우, 새로운 동물로 마우스를 대체하고 이후 단계 1.2의 절차를 반복합니다.

2. 외과 I마우스의 사타구니 지역의 ncision

1. 그 뒷면에 마우스를 놓습니다.
2. 소독 에탄올 (70 %)와 하나의 서혜부 십니다. 더 나은 소독을 제공하기 위해, 서혜부 에탄올 모피 전에 소독을 제거하는 면도 할 수있다.
3. 뒷다리를 가지고 고관절의 약 90 °의 각도를 생산하는 엉덩이 관절을 구부립니다.
4. 곡선 microdissecting 집게를 사용하여 엉덩이 관절이 구부러 서혜부에서 마우스 스킨을 약간 적신 피부를 당겨.
5. 집게로 피부를 누른 상태에서, 외과 용 가위를 사용하여 피부를 통해 작은 절개 (<5 mm)를 절단.
6. 절개 부위에 폐쇄 가위의 끝을 놓고 더 절개 안쪽을 잡고 가위를 열어 절개를 엽니 다. 이 찢어 및 10 mm 이하의 직경을 생산한다 피부를 일으킬 것이다. 주 :가요 라이트 가이드 등으로 감기 광원 시인성을 향상시키기 위해 사용될 수있다. 이전에마우스, 특히 남성, 림프절의 식별 인해 사타구니 지역에있는 지방이 많은 조직에 어려울 수 있습니다.

3. Intralymphatic 주입

1. 28 ~ 30 G 피하 주사 바늘과 주사기 (0.5 ㎖ 이하)을 준비, 짧은 베벨 긴 베벨 것이 바람직 할 수있다. 백신의 대기음 10 ㎕를 주입 주사기가 공기 무료입니다 확신합니다.
2. 곡선 포셉의 도움 폐쇄 가위의 끝을 가진 서혜부 림프절 지역화. 림프절은 더 흰 지방 조직 내에서 회색 표시되고 추가로 입력하고 림프절을 떠나 심성 및 원심성 모세 혈관을 통해 확인할 수 있습니다.
3. 곡선 포셉의 가지 사이를 잡고 림프절을 고정시킨다.
4. 주사기를 타고 위로 향하게 경사와 림프절에 바늘을 삽입하고 전체 경사가 림프절을 들어 확인하고.
5. 백신 (10 μL)을 주입한다. 만약 림프 고개를 끄덕전자는 (폭파) 팽창되고, 주입이 성공적으로 가정 할 수있다. 바늘이 림프절에 깊은 충분히 배치되어 있지 않은 경우, 일부 또는 전체 백신은 누출 및 림프 노드를 입력 할 수 있습니다. 바늘이 너무 깊이 삽입하면, 주입 된 백신은 피하 림프 노드 아래에 발표 될 예정이다. 후자의 경우, 주사를 반복하거나 새로운 미처리 마우스로 마우스를 교체.

4. 봉합하여 절개 닫기

1. 무균 수술 봉합의 팩을 엽니 다.
2. 바늘 몸의 말단 부분에 바늘 홀더 봉합 바늘을 잡아. 첫 번째 래칫 어획량까지 짜내서 바늘 홀더를 조입니다.
3. (톱니 또는 취소 톱니 포셉이나 피부 후크 사용될 수있는 외과 의사의 선호도에 따라) 집게를 사용하여 절개의 한면에서 피부의 보류를 가져 가라. 바늘 CA입니까. 2-3mm을 절개의 가장자리에서, 피부의 외부로부터 입력.
4. 이보게집게로 피부의 유지 EN과 집게로 절개의 반대편을 파악. 바늘 CA입니까. 2-3mm을 절개의 가장자리에서, 피부의 내부로부터 입력.
5. 바늘 홀더를 풀고 집게로 바늘 끝을 잡고. 여러 마우스가 처리 될 경우, 짧은 끝을 떠나 (제 1 바늘 삽입 지점 외부 트레드 편리한 길이를 떠나, 피부를 통해 접지면과 바늘을 빼낼 수 있지만, 5 ~ 10 마우스는 하나의 봉합 바늘에 운영 할 수있다 /) 밟다.
6. 표준 외과 의사의 프로토콜에 따라 선호하는 매듭을합니다. 절개 부위가 10mm 이하인 경우 하나의 스티치가 충분하다. 큰 절개를 들어, 두 번째 스티치를합니다.

5. 후 운영 처리

1. 새장에 마우스를 놓고 보온하는 조직 커버. 여러 쥐를 치료​​하면, 따뜻하게 서로에게 가까이 놓습니다. 그들이 깨어 때까지 다른 방법으로는, 따뜻한 패드에 마우스를 배치최대.
2. 그들이 일어날 때까지 쥐를 관찰합니다.
3. 치유뿐만 아니라 상처 감염과 같은 다른 임상 증상을 상처에 관해서는 매일 쥐를 관찰합니다. 상처는 일반적으로 충분히 이틀 폐쇄 절차의 7 일 이내에 치유됩니다.

결과

생쥐 intralymphatic 주사의 절차는 수술 성격에도 불구하고, 정직하고 상대적으로 빠르다. 훈련을받은 사람이 3 ~ 4 분의 절차를 수행 할 수 있습니다. 한 스티치 폐쇄 절개 일반적으로 두 일 이내에 치유 (그림 1)

Intralymphatic 백신 또는 면역이 mRNA를 사용하여 수행되었으며, 플라스미드 DNA, 펩타이드, 단백질, 바이러스 및 박테리아. 2 단백질 포스 포 리파?...

토론

Intralymphatic 예방 접종 및 면역 항체 반응과 T 세포 반응을 모두 자극에 적절한 것으로 표시되었습니다. 이 비디오 문서에서 알 수 있듯이, 예방 접종의 intralymphatic 절차는 생쥐에 강한 면역 반응을 자극하기위한 빠르고 쉬운 방법입니다. 숙련 된 외과 의사가 3 ~ 4 분 동안 절차를 수행 할 수 있습니다. 세션은 또한 하나가 일반적 마취와 봉합을 수행하고 제 외과 절개 및 주입을하고이 외과 의사 사?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ketamine (Ketasol-100)	Graeub AG, Switzerland		Anesthetics
Xylazine (Rompun)	Bayer, Germany		Anesthetics
Viscotears Eye-Gel	Novartis, Switzerland		To keep eyes from drying out during anesthesia.
BD Micro-Fine 0.5 ml	BD Medical, France		29 G Insulin syringes with permanently attached needles
6-0 Dermalon Monofilament nylon	Covidien, MA, USA		For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue)
Curved forceps, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision and holding of lymph node
Straight surgical scissors, 4.5 inch	Polymed, Switzerland		For incision
Needle holder, 5.5 inch	Polymed, Switzerland		To close incision with suture