JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

In this study we present an in vitro culture system that can efficiently generate pDCs by co-culturing common lymphoid progenitors with AC-6 feeder cells in the presence of Flt3 ligand.

Abstract

תאים הדנדריטים Plasmacytoid (PDC) הם סוג חזק אני אינטרפרון תאים (IFN-I) ייצור המופעלים בתגובה לזיהום או בתגובות דלקתיות. למרבה הצער, מחקר של פונקצית PDC מתעכבת לפי התדירות הנמוכה שלהם באיברי הלימפה, ושיטות קיימות במבחנת דור DC בעיקר להעדיף הייצור של cDCs על pDCs. כאן אנו מציגים גישה ייחודית ליצירת יעילות pDCs מאבות הלימפה נפוצים (CLPs) במבחנה. באופן ספציפי, הפרוטוקול מתואר פרטים כיצד לטהר CLPs ממח עצם וליצור pDCs ידי coculturing עם AC-6 תאים מזינים מוקרן γ בנוכחות יגנד FLT3. מאפיין ייחודי של מערכת זו התרבות הוא שCLPs להעביר מתחת לAC-6 תאים ולהפוך לתאי יוצרי שטח מרוצפים, צעד קריטי להרחבת pDCs. DCs מורפולוגית המובהק, כלומר pDCs וcDCs, נוצרו לאחר כ -2 שבועות עם הרכב של 7pDCs 0-90% בתנאים אופטימליים. בדרך כלל, מספר pDCs שנוצר בשיטה זו הוא בערך פי 100 ממספר CLPs זרע. לכן, מדובר במערכת חדשנית שבה ליצירה וחסונה המספר הגדול של pDCs הנדרש כדי להקל על מחקרים נוספים להתפתחות והתפקוד של תאים אלה.

Introduction

תאים דנדריטים (DCS) הם תאי מציגי אנטיגן מקצועיים שמשחקים תפקיד חשוב בשליטה על תגובות 1 חיסונית. בעוד DCs הוא הטרוגנית, הם יכולים להיות מסווגים באופן כללי לשתי אוכלוסיות, DCS קונבנציונלי (cDCs) וDCs plasmacytoid (PDC) 2,3. בנוסף לאיברי הלימפה, cDCs וpDCs נמצאים גם ברקמות כוללים סרטן ריאות, מעי, ועור 2. המורפולוגיה של cDCs וpDCs שונה, עם cDCs מציג תחזיות כמו דנדריט-והצורה של pDCs להיות כמו תא-יותר פלזמה. בנוסף, סמן העכבר הנפוץ DC, CD11c, באה לידי ביטוי גבוה יותר על cDCs מאשר על pDCs. יתר על כן, cDCs ניתן לחלק עוד יותר לתוך CD11b + CD24 - cDCs וCD11b - CD24 + cDCs, אשר שניהם מבטאים רמות גבוהות יותר של כיתת MHC II ומולקולות costimulatory מאשר לעשות pDCs 2. pDCs מבוגרים, לעומת זאת, הוכח להביע Siglec-H וBST2 4 סלקטיבי. Functionally, cDCs הוא אנטיגן טוב יותר מאשר הצגת תאי pDCs; עם זאת, pDCs יכול לייצר כמות עצומה של סוג אני אינטרפרון על זיהום בנגיף או גירוי דלקתי 5.

cDCs וpDCs שניהם קצרים, ולכן, חייב להתחדש כל הזמן מאבות במח העצם (BM) 6,7. העברת מאמצת של אבות משותפים מיאלואידית (CMPS) ואבות הלימפה נפוצים (CLPs) לעכברים קטלני-המוקרנים מוכיחה כי יכולים להיות שנוצרו cDCs וpDCs משני השושלות 8-10. עם זאת, יש קבוצת משנה של pDCs המבטא RAG1 / 2 ויש מגזרי DJ מחדש במוקד IGH 11,12. תאים אלה גם לשתף דמיון מולקולרי עם לימפוציטים מסוג B, כוללים ביטוי של סמן B220, קולטני חישת חומצות גרעין (TLR7 / TLR9), וגורמי שעתוק (Spib וBcl11a) 13, כולל את כל האמינו להיות חתימות של השושלת הלימפה. לכן, CLPים עשוי להיות בחירה טובה עבור דור במבחנה של pDCs בגלל דמיון שושלת.

בעוד התדירות של שני cDCs וpDCs בבני אדם ועכברים היא מאוד נמוכה 6 פלורידה, DCS, במיוחד cDCs, יכול להיות שנוצר במבחנה מBM או אבות בנוכחות ציטוקינים, כגון GM-CSF 11,14 או יגנד FLT3 ( ) באמצעות מערכות ללא מזין 11,15,16. למרבה הצער, עם זאת, לא ניתן לייצר מספר גדול של pDCs במבחנה באמצעות FL 11,15,16. בעבר הראה כי pDCs יכול להיות שנוצר במבחנה ביעילות מCLPs באמצעות מערכת המזין AC-6 17. היתרון של שימוש בקו תא סטרומה AC-6 במערכת התרבות הוא שהיא מספקת מגע תאי תאים והפרשה של ציטוקינים התומכים בדור של מספר הגדול של pDCs מCLPs. למרות שייצור עם מערכת זו הוא די חזק, השכפול זהיר של ההליכים המתוארים להלן נדרש אניכדי n כדי להבטיח דור יעיל של pDCs.

Protocol

/ 6 עכברי wild-type C57BL נרכשו מהמרכז הלאומי בעלי החיים במעבדה (NLAC), טייוואן. כל העכברים התרבו וכל זמן תחת תנאי הפתוגן ללא ספציפיים. פרוטוקולים ונהלי שימוש בבעלי החיים היו נבדקו ואושרו על ידי ועדת הטיפול ושימוש בבעלי חיים המוסדיים של לאומית טייוואן המכללה לרפואה של האוניברסיטה (הרשאה מס ': 20,120,075). בנוסף, חוקרים עשו כל מאמץ כדי לצמצם את הפוטנציאל לכאב, לסבל, או מצוקה בבעלי החיים בעת ביצוע ניסויים. כל ההליכים המתוארים בוצעו ב RT בכפפות.

1. הכנת AC-6 תאי מזין

הערה: AC-6.21 (AC-6 בקיצור) שורת תאי סטרומה 18 (המסופקת על ידי י 'וייסמן, אוניברסיטת סטנפורד) יש לשמור בRPMI בתוספת 15% בסרום חום מומת שור עוברי (FBS). לשמש כתאים מזינים, AC-6 תאים עם 3,000 rad (30Gy) יום אחד לפני שיתוף התרבות למניעת תפוצתם מוקרן γ. ה הערהבAC-6 תאים נוטים לאבד את היכולת לתמוך ב- ההתמיינות שלהם אם נותרו צפוף בתחזוקה, או אם מספר המעבר שלהם הוא מעל 20.

  1. לשטוף AC-6 תאים פעם אחת עם 1 מיליליטר פוספט שנאגר מלוח של Dulbecco (DPBS) ולהסיר DPBS על ידי שאיפה. פנק את AC-6 תאים עם 0.8 מיליליטר פתרון טריפסין (טריפסין 0.05% ו -0.5 מ"מ EDTA בDPBS) במשך 3-5 דקות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ולאחר מכן לעצור את התגובה על ידי דילול זה עם 10 כרכים של מדיום תרבות להפוך את ההשעיה תא בודדת.
  2. זרע AC-6 תאים ב5.9x10 4 תאים / גם לתוך 12 גם צלחות ולדגור על 37 מעלות צלסיוס, 5% CO 2 O / N.
    הערה: הצפיפות של AC-6 תאים היא מאוד חשובה כמו צפיפות נמוכה תעדיף דור ה- CDC. זריעה בצפיפות של 5.9x10 4 תאים / גם יאפשר AC-6 כדי להגיע confluency ידי למחרת, שהוא אופטימלי לגזירה של pDCs מCLPs.
  3. מכשיר את AC-6 תאים ב3,000 רד (30 Gy) באמצעות γ-irradiator.
    הערה: המינון שניתן ללהקרין AC-6 הוא מותאם כדי למנוע את התאים ממתרבים ועדיין לשמור אותם קיימא מספיק זמן כדי לספק את ציטוקינים ומגע תאי תאים דרושים להתמיינות של DCs מCLPs.
  4. בינוני לשאוב ולהחליף עם 1 מיליליטר מלא RPMI (RPMI עם FBS מומת חום 10%, 50 מיקרוגרם / מיליליטר gentamycin וβ-mercaptoethanol 50 מיקרומטר).

2. תאים בודד בע"מ מעכברים

  1. להקריב עכברים על ידי CO 2 מחנק ונקע בצוואר הרחם. מניחים את העכברים על מגש לנתיחה ולעקר עם 70% אתנול. עושה חתך באמצע הבטן-ולהסיר את העור מחלקו האחורי של העכבר כולל העור מכסה את הגפיים התחתונים.
  2. לנתח עכברים במכסת מנוע חצי סטרילי. כדי לשחרר את עצם הירך וtibiae, קליפ עצם הירך מעל ומתחת tibiae מפרק הברך. לנתק את השרירים מהעצמות באמצעות מספריים ולמקם את העצמות בצלחת פטרי 6 סנטימטר המכילה 5 מ"ל להשלים RPMI.
  3. לעבור למכסת מנוע תרבות סטרילית. ממלאי מזרק 3 מיליליטר מחובר למחט 27G עם RPMI השלם. חותך את שני הקצוות של העצמות באמצעות מספריים, ולהכניס את מחט 27G כדי לשטוף את מוח מהעצמות בעדינות על ידי הזרקת RPMI השלם פעם אחת מכל קצה.
  4. הכן השעיה תא בודדת על ידי pipetting העדין התאים למעלה ולמטה 3-5 פעמים בצלחת התרבות באמצעות המזרק ללא המחט.
  5. צנטריפוגה התאים 5 דקות בXG 500 ולמזוג supernatant.
  6. תאי דם אדום Lyse עם חיץ 1 מיליליטר ACK (150 מ"מ NH 4 Cl, 10 מ"מ KHCO 3, 0.1 מ"מ EDTA) דוגרים דקות 1 ולעצור את התגובה על ידי דילול עם 10 כרכים של RPMI השלם. לאפשר לתאים לעמוד במשך 5 דקות כדי גלולה למטה גושי תאים מתים ופסולת רקמות על ידי כוח הכבידה.
    הערה: אל תעמוד יותר מ 5 דק 'כמו זה יגרום באובדן תא עקב שיקוע של תאי קיימא.
  7. supernatant המכיל תא לאט למזוג לפסולת צינור עוזבת חדשהמאחורי בצינור המקורי.
  8. צנטריפוגות במשך 5 דקות ב XG 500 לגלולת התאים, ולאחר מכן להסיר ולבטל את supernatant.
  9. Resuspend כולל תאים בע"מ (בדרך כלל 4-6 x 10 7 BM תאים מתקבלים מעכבר אחד) ב -100 μl חיץ FACS (1x PBS + 2% + 1 המ"מ EDTA FBS).

3. FACS ניתוח ומיון של CLPs

  1. להוסיף אנטי-CD16 / 32 (2.4G2 שיבוט supernant hybridoma, 50 μl / תגובה או 1-2 מיקרוגרם / תגובה) לתאים במאגר FACS (שלב 2.9) במשך 1-2 דקות כדי לחסום קולטני Fc.
    הערה: אנטי-CD16 / 32 גם נקרא בלוק FC, אשר מתווסף למניעה מחייבת הלא ספציפית של נוגדנים לתאים לבטא קולטנים Fc כוללים גרנולוציטים, מונוציטים, ולימפוציטים מסוג B.
  2. במקביל להכתים תאים עם הנוגדנים הבאים ניאון שכותרתו צבע (ל4x10 7 תאים) במשך 15 דקות על קרח, הימנעות אור הסביבה. נוגדנים: סמני שושלת PE-מצומדת (0.2 מיקרוגרם לכל אחד) כולל אנטי-CD3 (17 א2), אנטי-CD8 (53-6.7), אנטי-B220 (RA3-6B2), אנטי-CD19 (eBio1D3), אנטי-CD11b (M1 / 70), אנטי-Gr-1 (RB6-8C5), אנטי Thy1.1 (HIS51), אנטי-NK1.1 (PK136), אנטי-TER119 (TER-119), ואנטי-MHC-II (נימר-4), 0.2 מיקרוגרם אנטי-ג-קיט-PerCP-Cy5.5 (2B8), 1 מיקרוגרם אנטי SCA-1-FITC (D7), 0.4 מיקרוגרם אנטי-M-CSFR-APC (AFS98), ושל 0.2 מיקרוגרם אנטי-IL-7Rα-PE-Cy7 (A7R34).
  3. לשטוף את תאים עם FACS חיץ 3 מיליליטר, וצנטריפוגות במשך 5 דקות ב 500 x גרם.
  4. Resuspend תאי 300 FACS μl חיץ ותאי סינון דרך מסננת תא 40 מיקרומטר.
  5. שטוף את הצינור עם חיץ FACS 100 μl נוסף להתאושש כל תאים הנותרים ולסנן לFACS סטרילי מיון צינור תוך שימוש באותה מסננת תא.
  6. לבצע ניתוח התזרים cytometric מייד לאחר הצביעה באמצעות מסננים ומתחים מתאימים לגילוי אות. השתמש 488 ננומטר לייזר כדי לזהות את הנוגדנים שכותרת PerCP-Cy5.5 FITC-,, 561 ננומטר לייזר כדי לזהות פטרוביץ, ונוגדני PE-labelded-Cy7 ואס 633 ננומטראה לזהות את הנוגדן שכותרתו APC.
  7. מיין את CLPs פי הסמנים הבאים לין - SCA-1 int M-CSFR int c-kit - IL-7Rα + (כמוכתם בשלב 3.2) באמצעות סדרן תא. לאסוף תאים הממוינים בצינור 15 מיליליטר המכיל 8 מיליליטר של RPMI מלא ככרית.
  8. רשום את המספר המוחלט של תאים ממוינים, כפי שמוצג על ידי סדרן התא בסוף הריצה. בדרך כלל, ניתן להשיג 5x10 4 CLPs מBM של עכבר אחד.

4. CLPs וCoculture AC-6

  1. צנטריפוגה תאים הממוינים מצעד 3.7 במשך 10 דקות ב 500 XG, להסיר את supernatant וresuspend התא גלולה עם מספיק RPMI השלם כדי להשיג צפיפות תאים סביב 5x10 מיליליטר / 4 תאים. תאי זרע 500 / גם לתוך הצלחת 12-המכילה גם תאים מזינים מוכנים בשלב 1.4.
  2. הוספת 100 ng / ml FL 19 (הו-Flt3L איג שנוצר בבית באמצעות מערכת ביטוי הניתנת על ידי מ 'מנז, Universiטאי החולים ציריך, שווייץ) ולדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 עם ניטור חזותי תקופתי של פיתוח DC תחת מיקרוסקופ.
    הערה: FL האנושי רקומביננטי ניתן להשיג בחנויות או עכבר פלורידה יכולה לשמש כתחליף לhu-Flt3L איג לתמוך בפיתוח DC.
  3. לאסוף את התאים בsupernatant ביום 12 ולשטוף את הבארות פעם אחת עם 0.5 מ"ל להשלים בינוני RPMI שילוב supernatants וכתוצאה מכך. הוסף 0.5 מיליליטר בינוני טרי וגרוטאות התאים חסיד עם מגרד תא.
  4. מערבבים את המדיום המכיל תאים משני החלקים וצנטריפוגות במשך 5 דקות ב 500 x גרם.
  5. תאי supernatant ו resuspend למזוג במאגר FACS 50 μl. להוסיף אנטי-CD16 supernatant 50 μl / 32 hybridoma דגירה במשך 1-2 דקות כדי לחסום קולטני Fc.
  6. למנות ולהכתים את כל התאים עם הנוגדנים הבאים (0.05 מיקרוגרם לכל אחד) נגד CD11c-APC (N418), אנטי-CD11b-FITC, ואנטי-B220-PE.
  7. לשטוף ו צנטריפוגות התאים כמו לתארד בשלב 3.3.
  8. Resuspend תאי 100 μl FACS חיץ, שער ב+ CD11c ולנתח לcDCs (CD11c + CD11b + B220 -) וpDCs (CD11c + CD11b - + B220) 17.

תוצאות

כולל של 4-6x10 7 תאים BM מבודדים בדרך כלל מעצמות ירך וtibiae של C57BL / 6 עכבר אחד 6-8 WK-ישן, wild-type. כדי למיין את CLPs, הכולל תאי BM מגואלות נוגדני PE מצומדות נגד סמני שושלת (CD3, CD8, B220, CD19, CD11b, Gr-1, Thy1.1, NK1.1, TER119, וMHC-II), אנטי -c-קיט-PerCP / Cy5.5, אנטי SCA-1-FITC, אנטי-M-CSFR-APC ואנטי-IL-7Rα-PE / Cy7, ניתחו ומסודרי...

Discussion

כאן אנו מתארים מערכת במבחנה תרבות לדור החזקה של DCS, וpDCs בפרט, ממספר קטן של CLPs. ייחודה של מערכת זו התרבות הוא עקב השימוש של AC-6 תאים, שורת תאי סטרומה, כהאכלה. גישה זו הוכחה לספק לא רק ציטוקינים, כגון IL-7, SCF, M-CSF ופלורידה 20, אלא גם את קשר תאי תאים 21 הדרוש כדי לתמ...

Disclosures

Authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אנו מודים לבני זוג. מרקוס מנז ואירווינג וייסמן למתן חומרים כימיים. אנחנו גם מכירים את השירות הניתן על ידי Cytometric ניתוח הזרימה ותא מתקן המיון Core הראשון והמעבדה הליבה השנייה בלאומית טייוואן אוניברסיטת קולג 'של בית חולים לרפואה וNTU, בהתאמה. עבודה זו נתמכה על ידי משרד המדע והטכנולוגיה, טייוואן (רוב 102-2,320-B-002-030-MY3) ומכוני מחקר הבריאות הלאומי, טייוואן (NHRI-EX102-10256SI וNHRI-EX103-10256SI).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Anti-mouse Ly6g/Ly6c (PE), clone RB6-8C5Biolegend108408linage marker
Anti-mouse NK1.1 (PE), clone PK136Biolegend108708linage marker
Anti-mouse  CD11b (PE), cloneM1/70Biolegend101208linage marker
Anti-mouse CD19 (PE), clone eBio1D3Biolegend115508linage marker
Anti-mouse B220 (PE), clone RA3-6B2Biolegend103208linage marker/FACS
Anti-mouse CD3 (PE), clone 17A2Biolegend100308linage marker
Anti-mouse CD8a (PE), clone 53-6.7Biolegend100707linage marker
Anti-mouse MHC-II (PE), clone NIMR-4Biolegend107608linage marker
Anti-mouse Ter119 (PE), clone TER-119Biolegend116208linage marker
Anti-mouse Thy1.1 (PE), clone HIS51eBioscience12-0900-83linage marker
Anti-mouse M-CSFR (APC), clone AFS98Biolegend135510FACS
Anti-mouse c-Kit (PerCP/Cy5.5), clone 2B8Biolegend105824FACS
Anti-mouse Sca-1 (FITC), clone D7Biolegend108106FACS
Anti-mouse IL-7Ra (PE/Cy7), clone A7R34Biolegend135014FACS
Anti-mouse CD11c (PerCP/Cy5.5), clone N418Biolegend117328FACS
Anti-mouse CD11b (FITC), clone M1/70Biolegend101206FACS
FACSAria IIIBD BiosciencesCell sorter
FACS sorting tube BD Biosciences352054
FlowJoFlowJo LLCFlow analysis sofrware

References

  1. Hartwig, C., et al. Fcgamma receptor-mediated antigen uptake by lung DC contributes to allergic airway hyper-responsiveness and inflammation. Eur. J. Immunol. 40, 1284-1295 (2010).
  2. Merad, M., Sathe, P., Helft, J., Miller, J., Mortha, A. The dendritic cell lineage: ontogeny and function of dendritic cells and their subsets in the steady state and the inflamed setting. Annu. Rev. Immunol. 31, 563-604 (2013).
  3. Mildner, A., Jung, S. Development and Function of Dendritic Cell Subsets. Immunity. 40, 642-656 (2014).
  4. Swiecki, M., Colonna, M. Unraveling the functions of plasmacytoid dendritic cells during viral infections, autoimmunity, and tolerance. Immunol. Rev. 234, 142-162 (2010).
  5. Liu, Y. J. IPC: professional type 1 interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors. Annu. Rev. Immunol. 23, 275-306 (2005).
  6. Merad, M., Manz, M. G. Dendritic cell homeostasis. Blood. 113, 3418-3427 (2009).
  7. Ghosh, H. S., Cisse, B., Bunin, A., Lewis, K. L., Reizis, B. Continuous expression of the transcription factor e2-2 maintains the cell fate of mature plasmacytoid dendritic cells. Immunity. 33, 905-916 (2010).
  8. Karsunky, H., Merad, M., Cozzio, A., Weissman, I. L., Manz, M. G. Flt3 ligand regulates dendritic cell development from Flt3+ lymphoid and myeloid-committed progenitors to Flt3+ dendritic cells in vivo. J. Exp. Med. 198, 305-313 (2003).
  9. Manz, M. G., Traver, D., Miyamoto, T., Weissman, I. L., Akashi, K. Dendritic cell potentials of early lymphoid and myeloid progenitors. Blood. 97, 3333-3341 (2001).
  10. D'Amico, A., Wu, L. The early progenitors of mouse dendritic cells and plasmacytoid predendritic cells are within the bone marrow hemopoietic precursors expressing Flt3. J. Exp. Med. 198, 293-303 (2003).
  11. Sathe, P., Vremec, D., Wu, L., Corcoran, L., Shortman, K. Convergent differentiation: myeloid and lymphoid pathways to murine plasmacytoid dendritic cells. Blood. 121, 11-19 (2013).
  12. Shigematsu, H., et al. Plasmacytoid dendritic cells activate lymphoid-specific genetic programs irrespective of their cellular origin. Immunity. 21, 43-53 (2004).
  13. Reizis, B., Bunin, A., Ghosh, H. S., Lewis, K. L., Sisirak, V. Plasmacytoid dendritic cells: recent progress and open questions. Annu. Rev. Immunol. 29, 163-183 (2011).
  14. Inaba, K., et al. Generation of large numbers of dendritic cells from mouse bone marrow cultures supplemented with granulocyte/macrophage colony-stimulating factor. J. Exp. Med. 176, 1693-1702 (1992).
  15. Naik, S. H., et al. Development of plasmacytoid and conventional dendritic cell subtypes from single precursor cells derived in vitro and in vivo. Nat. Immunol. 8, 1217-1226 (2007).
  16. Onai, N., et al. Identification of clonogenic common Flt3+M-CSFR+ plasmacytoid and conventional dendritic cell progenitors in mouse bone marrow. Nat. Immunol. 8, 1207-1216 (2007).
  17. Chen, Y. L., et al. A type I IFN-Flt3 ligand axis augments plasmacytoid dendritic cell development from common lymphoid progenitors. J. Exp. Med. 210, 2515-2522 (2013).
  18. Whitlock, C. A., Tidmarsh, G. F., Muller-Sieburg, C., Weissman, I. L. Bone marrow stromal cell lines with lymphopoietic activity express high levels of a pre-B neoplasia-associated molecule. Cell. 48, 1009-1021 (1987).
  19. Onai, N., Obata-Onai, A., Tussiwand, R., Lanzavecchia, A., Manz, M. G. Activation of the Flt3 signal transduction cascade rescues and enhances type I interferon-producing and dendritic cell development. J. Exp. Med. 203, 227-238 (2006).
  20. Szilvassy, S. J., et al. Leukemia inhibitory factor upregulates cytokine expression by a murine stromal cell line enabling the maintenance of highly enriched competitive repopulating stem cells. Blood. 87, 4618-4628 (1996).
  21. Arcanjo, K., et al. Biochemical characterization of heparan sulfate derived from murine hemopoietic stromal cell lines: a bone marrow-derived cell line S17 and a fetal liver-derived cell line AFT024. J. Cell. Biochem. 87, 160-172 (2002).
  22. Onai, N., et al. A clonogenic progenitor with prominent plasmacytoid dendritic cell developmental potential. Immunity. 38, 943-957 (2013).
  23. Whitlock, C. A., Muller-Sieburg, C. E. Long-term B-lymphoid cultures from murine bone marrow establishment and cloning by using stromal cell line AC 6.21. Methods Mol. Biol. 75, 231-248 (1997).
  24. Chen, Y. -. L., Chang, S., Chen, T. -. T., Lee, C. -. K. Efficient Generation of Plasmacytoid Dendritic Cell from Common Lymphoid Progenitors by Flt3 Ligand. PLoS ONE. 10 (8), e0135217 (2015).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

105hematopoiesisplasmacytoidAC 6FLT3

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved