מודל בעלי חיים גדול ליתר לחץ דם ריאתי וכשל בחדר ימין: קשירת עורק ריאות שמאלי ורצועת עורק ריאות ראשית מתקדמת בכבשים

Summary

כתב יד זה מתאר את הטכניקה הכירורגית ואת הגישה הניסיונית לפתח עומס לחץ חמור בחדר הימני כדי לדגמן את הפנוטיפים האדפטיביים והלא מתאימים שלהם.

Abstract

כשל חדר ימני מפורק (RVF) ביתר לחץ דם ריאתי (PH) הוא קטלני, עם אפשרויות טיפול רפואי מוגבלות. פיתוח ובדיקה של טיפולים חדשניים עבור PH דורש מודל בעלי חיים גדול רלוונטי מבחינה קלינית של עמידות מוגברת של כלי דם ריאתיים ו- RVF. כתב יד זה דן בהתפתחות האחרונה של מודל הביציות PH-RVF שפורסם בעבר המשתמש בקשירת עורק ריאות שמאלי (PA) וחסימת הרשות הפלסטינית העיקרית. מודל זה של PH-RVF הוא פלטפורמה רב-תכליתית לשליטה לא רק בחומרת המחלה אלא גם בתגובה הפנוטיפית של הקרוואן.

כבשים בוגרות (60-80 ק"ג) עברו קשירת PA (LPA) שמאלית, מיקום השרוול הראשי של הרשות הפלסטינית והכנסת צג לחץ קרוואנים. חפת הרשות הפלסטינית ומוניטור לחץ קרוואנים חוברו ליציאות תת עוריות. הנבדקים עברו פסים מתקדמים של הרשות הפלסטינית פעמיים בשבוע במשך 9 שבועות עם אמצעים רציפים של לחץ קרוואנים, לחצי שרוולים של הרשות הפלסטינית וגז דם ורידי מעורב (_SvO2). בייזום ובנקודת הקצה של מודל זה, הפונקציה והמידות של החדר הוערכו באמצעות אקוקרדיוגרפיה. בקבוצה מייצגת של 12 נבדקים בעלי חיים, הלחץ הממוצע והסיסטולי של הקרוואנים עלה מ-28 ± 5 ו-57 ± 7 מ"מ כספית בשבוע 1, בהתאמה, ל-44 ± 7 ו-93 ± 18 מ"מ כספית (ממוצע ± סטיית תקן) עד שבוע 9. אקוקרדיוגרפיה הדגימה ממצאים אופייניים של PH-RVF, במיוחד התרחבות קרוואנים, עובי קיר מוגבר וקשתות מחיצה. המגמה האורך של לחץ שרוול _SvO2 ו PA ממחישה כי קצב פסים PA ניתן titrated כדי לעורר פנוטיפים קרוואנים שונים. אסטרטגיית פסים מהירה יותר של הרשות הפלסטינית הובילה לירידה תלולה ב-SvO2 <-65%, מה שמצביע על פירוק קרוואנים, בעוד שאסטרטגיה איטית וקצבית יותר הובילה לתחזוקת SvO2 הפיזיולוגי ב-70%-80%. חיה אחת שחוותה את האסטרטגיה המואצת פיתחה מספר ליטרים של תפליט pleural ומיימת עד שבוע 9. מודל PH-RVF כרוני זה מספק כלי רב ערך לחקר מנגנונים מולקולריים, פיתוח סמנים ביולוגיים אבחוניים, ומאפשר חדשנות טיפולית לניהול הסתגלות קרוואנים וחוסר התאמה מ- PH.

Introduction

כשל חדר ימין מפורק (RV) הוא הגורם העיקרי לתחלואה ותמותה עבור חולים עם יתר לחץ דם ריאתי (PH). כישלון קרוואנים אחראי ליותר מ-50% מהאשפוזים בחולים עם PH ומהווה גורם מוות נפוץ באוכלוסיית מטופלים ^זו1,2. למרות הטיפולים הרפואיים הנוכחיים עבור PH יכול לספק אמצעים temporizing, הם לא להפוך את ההתקדמות של המחלה. ככזה, הטיפול ארוך הטווח היחיד הוא השתלת ריאות. כדי לחקור ולבדוק טיפולים רפואיים חדשים והתערבויות עבור PH ו- RVF, יש צורך במודל בעלי חיים רלוונטי מבחינה קלינית כדי לשחזר את הפתולוגיה המורכבת של המחלה. בפרט, יש צורך קליני גדול לפתח טיפוליים ממוקדי קרוואנים עבור חולי PH כדי לשפר את תפקוד הקרוואנים. עד כה, רוב המחקרים בבעלי חיים שפורסמו של PH ו RV תפקוד לקוי הסתמכו על יונקים קטנים כגון עכברים ^{וחולדות3}. מצד שני, היו רק קומץ של מודלים בעלי חיים גדולים לחקור את המחלה ואת פתולוגיה RV מעומס לא ^{תקין4,5,6,7}. בנוסף, אף אחד מהמודלים הגדולים של בעלי החיים שפורסמו בעבר אינם כוללים תיאורים של הליכים ניסיוניים לתיגרה מבוקרת של חומרת המחלה שמובילה באופן דיפרנציאלי לפיצוי לעומת פנוטיפים של כשל קרוואנים מפוצים. מודל בעלי חיים של PH שניתן לתייג כדי לגרום לכישלון קרוואנים חריף וכרוני בדרגות שונות של פיצוי נדרש כדי ללמוד מנגנוני מחלה ולפתח, לבדוק ולתרגם אבחון וטיפולים חדשניים עבור PH ו- RVF לפרקטיקה קלינית. מודל כזה בבעלי חיים גדולים הוא בעל ערך רב במיוחד לפיתוח של מכשירי תמיכה מכניים במחזור ^הדם8.

כאן, מודל PH-RVF בעלי חיים גדול וגדול כרוני באמצעות קשירת עורק ריאות שמאלי (PA) ופסים עיקריים מתקדמים של הרשות הפלסטינית בכבשים בוגרות מוצג ^9,10. קשירת הרשות הפלסטינית השמאלית (LPA) מגבירה את עמידות כלי הדם הריאתיים ומקטינה את קיבוליות הרשות הפלסטינית ^11,12. הגישה המתקדמת של פסים של הרשות הפלסטינית מאפשרת טיטרציה מדויקת של חומרת המחלה והתאמת קרוואנים. פלטפורמה זו יכולה גם להיות מנוצלת בקלות לחקירה אורכית של התקדמות המחלה לקראת פירוק קרוואנים. ההליכים והתהליכים הנדרשים לביצוע מודל זה מוצגים כמשאב לחוקרים המעוניינים בפלטפורמה חיה גדולה לפיתוח טיפולים חדשניים עבור PH ו- RVF.

Protocol

הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים ולשימוש במרכז הרפואי של אוניברסיטת ונדרבילט אישרה את הפרוטוקול. ההליכים המתוארים נערכו בהתאם למדריך של מועצת המחקר הלאומית של ארה"ב לטיפול ושימוש בחיות מעבדה, מהדורה 8. הסקירה הכללית וציר הזמן של ההליך הניסיוני מסופקים באיור 1. טבלה משלימה 1 מתארת את מין הכבשים, משקלם, גזעם, מקור הכבשים ומידע רלוונטי אחר שעשוי להועיל למטרות רבייה.

1. יום אחד לפני הניתוח, הכנת החיה

1. לעכב מזון במשך 24-40 שעות לפני ההליך הכירורגי כדי לשחרר את הלחץ של הרום של החיה.
2. החל מדבקת פנטניל 50 מיקרוגרם / שעה על אזור גזוז על הגב של הכבשים 12 שעות לפני ההליך. נקה את האזור עם כלורהקסידין כדי להסיר שאריות שמן לנולין לפני יישום תיקון. מכסים ומגינים על הטלאי עם רוטב צינורי אלסטי.

2. יום הניתוח, צעדים טרום ניתוחיים בחדר ההכנה

1. יש לנהל טילטמין/זולאזפאם תוך שרירית (2.2-5 מ"ג/ק"ג) ולספק 1%-3% איזופלוראן מעורבב עם 80%-100% חמצן באמצעות מסכת פנים כדי לגרום להרדמה.
2. הניחו את הכבשים על שולחן ההכנה ואבטחו את רגליה.
3. צנרור עם צינור אנדוטרכאלי 10 מ"מ ולהתחיל אוורור מכני במצב בקרת נפח (עוצמת הגאות והשפל, טלוויזיה = 10 מ"ל / קילוגרם, קצב נשימה, RR = 15 נשימות לדקה).
4. לגלח את השדה הכירורגי מצוואר הכבשה לבטן העליונה שלה, כמפורט להלן.
   1. גילחו את הצוואר הקדמי של הכבשים כדי לחשוף את העור מעל הוורידים הצוואריים לצנתור ורידים מרכזי (ראו שלב 3.7).
   2. גילחו את בית החזה הקדמי-צדדי באופן דו-צדדי כהכנה לכריתת חזה (ראו שלב 4.1).
   3. גילחו את הצד השמאלי של פלג הגוף העליון מהחזה לגב (כלומר, כמו הגב כמו השולחן יאפשר עם הנושא בתנוחה supine), ומחזה לאגף האחורי caudally, כהכנה להשתלת יציאות תת עוריות (ראה שלבים 4.12-4.15).
5. הכנס אנגיוקטטר 20 גרם בעורק האוזן לניטור לחץ עורקי ודגימת גז דם.
6. מניחים צינור סיליקון בקוטר פנימי של 3/8 "-1/2" עבור הפחתת לחץ rumen. הצינור האורוגסטרי יישאר ברומן לאורך כל ההליך.
7. להעביר את החיה מחדר ההכנה טרום הניתוח לסוויטה הכירורגית.

3. יום הניתוח, צעדים טרום ניתוחיים בסוויטת הניתוח

1. חברו מחדש את הכבשים למכונת ההנשמה בסוויטה הכירורגית, והמשיכו באוורור באותה סביבה בשלב 2.3 (איזופלוריין 1%-3%, טלוויזיה = 10 מ"ל/ק"ג, RR = 15 נשימות לדקה)
2. חבר את אוקסימטריית הדופק (_SpO2), לחץ דם עורקי, טמפרטורה, קפנוגרף גאות ושפל, וחיישני אלקטרוקרדיוגרמה (ECG) לצג ההרדמה.
3. חבר את החיישנים לסימנים חיוניים לבעל החיים.
   1. מניחים את אוקסימטר הדופק על לשונו של החיה.
   2. מניחים את בדיקת הטמפרטורה בפי הטבעת.
   3. חברו גשושיות אלקטרוקרדיוגרמה של 3 מוליכים: הניחו את העופרת האדומה על הרגל האחורית השמאלית, את העופרת הלבנה ברגל הקדמית הימנית ואת העופרת השחורה ברגל הקדמית השמאלית.
   4. חברו את קצה הלואר הגברי של העצירה המשולשת לאנגיוקטטר העורק האוזלי וחברו את קצה הלואר הנשי הנגדי למתמר הלחץ לניטור קו עורקים באמצעות צינורות לחץ בגודל המתאים.
      1. ישר את המתמר לרמה של טבלת ההפעלה.
      2. פתח את העצירה המשולשת על המתמר.
      3. גלול את הידית הראשית של צג האיברים החיוניים כדי להדגיש את ערוץ לחץ הדם העורקי ולאחר מכן לחץ על הידית כדי לבחור את הערוץ.
      4. בחר אפס IBP כדי לאפס את המתמר.
   5. חבר את חיבור הלואר הגברי של קו צג הקפנוגרפיה לחיבור הלואר הנשי בצינור ההנשמה כדי לפקח על _CO2 של סוף הגאות והשפל.
4. הגדירו את משאבות ה-IV למתן נוזלים מתמשך ולתמיכה אינוטרופית או בכלי דם.
   1. לנקב את המחיצה על שקית המלח עם סט הממשל הרביעי. ודא כי צינורות IV מהודק לפני ניקוב השקית כדי למנוע שפיכה.
   2. יישר ולהתאים את ניהול IV להגדיר צינורות לתוך משאבת רולר IV, ולבדוק אם הכיוון שצוין במשאבה תואם את הכיוון של ניהול נוזלים.
      הערה: ודא שערכת הניהול של IV תואמת למשאבת ה- IV.
   3. הפעל את המשאבה וציין PRIME כדי להסיר את כל האוויר בקו.
5. מקם את הכבשים להליך האופרטיבי.
   1. מהתנוחה העלובה, סובבו את הכבשים לתנוחת דקוביטוס צדדית חלקית ימנית.
   2. אבטחו את כף הרגל הקדמית הימנית כלפי מטה ואבטחו את כף הרגל הקדמית השמאלית תוך כדי משיכתה לצפאלד ולרוחב עם חבל או רצועות אטראומטיות.
   3. בצע אקוקרדיוגרפיה טרנסתורקית להערכה בסיסית של האנטומיה והתפקוד של החדר. Ultrasonography הוא גם שימושי כדי לקבוע את המרחב הבין צלעי האופטימלי המאפשר גישה כירורגית הן לעורק הריאות הראשי והן לעורק הריאות השמאלי.
6. נקו את השדה הכירורגי ללא לכלוך ומזהמים אחרים באמצעות סבון או מברשת קרצוף. הכינו את הצוואר והחזה עם תמיסת כלורהקסידין או בטאדין ועטפו את השדה הכירורגי בצורה סטרילית.
7. באמצעות הדרכת אולטרסאונד או ציוני דרך אנטומיים, לגשת לווריד הצוואר הפנימי השמאלי או הימני באמצעות מחט מאתר או אנגיוקט. באמצעות טכניקת סלדינגר, הכנס צנתר ורידים מרכזי תלת-לומן 7-צרפתי לומן לווריד הצוואר הפנימי לגישה תוך ורידית וניטור לחץ ורידי מרכזי.
   1. השתמש ביציאה הפרוקסימלית לניטור לחץ ויציאה דיסטלית עבור נוזלים ותרופות.
8. לנהל 20 מ"ג/ק"ג של cefazolin ו 5 מ"ג/ק"ג של enrofloxacin תוך ורידי. חזור על המינון של cefazolin כל 2-4 שעות במהלך ההליך.
9. לנהל בולוס 500 מ"ל של תמיסת מלח נורמלית כדי להגדיל את preload לפני הניתוח. התחל קצב נוזל תוך ורידי תחזוקה של 15 מ"ל / קילוגרם / שעה.

4. הליך אופרטיבי

1. בצע מיני-חזה חוסך שרירים (אורך < 8 ס"מ) במרחב הבין-צלעי הרביעי השמאלי כדי לקבל חשיפה מדיסטינלית. בחר מיני-בית החזה כדי לזרז התאוששות לאחר הניתוח.
   1. לאחר חלוקת העור, לפצל את השריר הבסיסי (החזה העיקרי) לאורך הסיבים שלה, אשר פועלים מעט אלכסוני למרחב הבין-צלעי. מניחים מפסק לשמירה עצמית כדי לפזר את שכבת השריר ולחשוף את דופן החזה.
   2. מחלקים את הקדמי serratus ואת השריר הבין-צלעי הבסיסי במרחב הבין-צלעי שנבחר, דואגים להישאר מיד cephalad לצלע.
   3. הזן את מרחב pleural ולאחר מכן להמשיך לשחרר באופן מלא את השרירים הבין צלעיים האחוריים לכיוון עמוד השדרה ואנטרום לכיוון עצם החזה כדי למנוע שבר צלעות בשוגג או נקע בעצם החזה. הימנע מפגיעה בכלי החלב באופן חציוני.
   4. מניחים את המפסקים לשמירה עצמית כדי לפתוח את חלל הצלעות ואת הרקמה הרכה העליונה. השתמש במפסק פינוצ'יטו קטן או בינוני כדי להפריד בין הצלעות לבין מפסק Tuffier (להב מפסק 5 ס"מ) כדי לשבת מאונך לפינוצ'יטו בתוך החלל הבין-צלעי, אשר מושך את הרקמה הרכה בתוך המרחב הבין-צלעי כדי לשפר את החשיפה.
2. חריש את קרום הלב הקדמי לעצב הפרני מבלי לפגוע בו וליצור באר קרום הלב עם תפרי משי 2-0 כדי לחשוף את הרשות הפלסטינית הראשית ואת הקרוואן. זהה את נספח הפרוזדורים השמאלי בתוך החשיפה כציון דרך לרמת הביפורציה של הרשות הפלסטינית.
   1. להעריך את החשיפה ולוודא אם החלל הבין-צלעי המתאים הוזן. באופן אידיאלי, הרשות הפלסטינית הפרוקסימלית ונספח הפרוזדורים השמאלי נראים בקלות ממש מתחת לחתך, מה שמרמז על כך שנבחר המרחב הבין-צלעי האופטימלי כדי לספק חשיפה הן לרשות הפלסטינית הראשית והן ל- LPA.
   2. אם החשיפה אינה מספקת כדי להגיע בבטחה הן לרשות הפלסטינית הראשית והן ל- LPA, אל תהססו לפתוח מרחב בין-צלעי נוסף כדי לבצע את כל השלבים הדרושים של המבצע; עם זאת, זה לא יהיה נחוץ עם בחירת חתך מתאימה.
3. לנתח סביב הרשות הפלסטינית הראשית ולבודד אותו עם קלטת טבור. ודאו ניתוח אחורי הולם למיקום הכובש הסופי ובדיקת זרימת הרשות הפלסטינית דיסטלית ככל האפשר ברשות הפלסטינית הראשית.
   1. הנח בדיקת זרימה סטרילית לתוך קערת מים או מלוחים בשדה הסטרילי כדי לכייל את תוכנת רכישת הנתונים. למסור את התקע החשמלי בצד השני למעצב לא סטרילי כדי לחבר את הגשוש למונה.
      1. עיין במסמכים המשלימים לקבלת פרטים על חיבור וכיול של גשושית זרימה של הרשות הפלסטינית ומד.
   2. החל כמות נדיבה של ג'ל אולטרסאונד סטרילי בחריץ של בדיקת זרימת הרשות הפלסטינית.
   3. התאימו את אניית הסיליקון לחריץ של בדיקת הזרימה PA והחלו שכבה נוספת של ג'ל אולטרסאונד על אניה.
   4. הנח את בדיקת הזרימה של הרשות הפלסטינית לרשות הפלסטינית ורכוש קריאות זרימה של הרשות הפלסטינית במד הזרימה ובממשק רכישת הנתונים.
      1. מיקום גשושית הזרימה של הרשות הפלסטינית עלול לגרום לחסימה חלקית של הרשות הפלסטינית שעלולה להפחית את עומס החדר השמאלי ומשמעותה לחץ עורקי. שים לב היטב למודינמיקה במהלך רכישת תזרים הרשות הפלסטינית.
      2. בדוק את מסך מד הזרימה כדי לוודא שעוצמת אות הזרימה של הרשות הפלסטינית היא 5 פסים. אם המונה מציג פחות מ-5 פסים, ודאו מגע הולם בין בדיקת הזרימה לבין הרשות הפלסטינית הראשית. החל ג'ל אולטרסאונד נוסף במידת הצורך.
4. השלם את הניתוח התוך-קרום הלב של LPA וסובב אותו עם סרט טבורי.
   1. השתמש מקל ספוג קטן או מפסק דק נזיל לנסיגה caudal של נספח הפרוזדורים השמאלי.
      הערה: חשיפה LPA הוא הקל על ידי נסיגה caudal של נספח פרוזדורים השמאלי, נסיגה cephalad של הרשות הפלסטינית הראשית, ונסיגה לרוחב של קרום הלב רק הקדמי למקום שבו LPA יוצא קרום הלב.
5. הניחו מעטפת כבדה של כלי דם מסיליקון סביב הרשות הפלסטינית הראשית (איור 2A, B, עיגול). ניתן לכוונן את גודל הכובש בהתבסס על קוטר הרשות הפלסטינית; להבטיח את ההתאמה היא נוחה. השתמש תפר משי 0 על מחט קית כדי לאבטח את הקצוות של כובש כלי הדם יחד עם תפר U. לאחר אבטחה סביב הרשות הפלסטינית הראשית, החלק את הכובש בזריזות לאורך הרשות הפלסטינית הראשית.
6. הקיפו את הרשות הפלסטינית הראשית הפרוקסימלית עם ניקוז פנרוז בגודל 1/2 אינץ', כדי להקל על הניתוח ולשמור מקום כדי למקם גשושית זרימה בניתוח ניתוח חוזר לאחר מכן. חותכים את ניקוז Penrose כדי להתאים באופן רופף סביב הרשות הפלסטינית ולהבטיח את Penrose לעצמו עם תפר פרולן 4-0 פועל (איור 2B).
7. הקימו קו לחץ של קרוואנים לניטור לחצי קרוואנים (איור 2B, חץ לבן).
   1. בחר מיקום עבור קו הלחץ של הקרוואנים בקיר נטול זרימת הקרוואנים. מניחים תפירת ארנק פוליפרופילן 5-0 חד-פעמית עם התחייבות המקיפה את המיקום שנבחר ומושיבים מלכודת כלי דם. הפוך את המועמדים מכפפה כירורגית סטרילית.
   2. הכינו את קו הלחץ של הקרוואנים: חתכו את הקצה הגברי של צינורות לחץ סטריליים בגודל 36 אינץ' בזווית של 30° כדי להקל על החדרה דרך שריר הלב. השתמש בעניבת משי 2-0 כדי לסמן את קו הלחץ בעומק אופטימלי למיקום בתוך הקרוואן.
   3. באמצעות אזמל בעל 11 להבים, בצעו קרדיוטומיה קטנה בקיר ללא RVOT בתוך תפר הארנק שהונח בעבר. שליטה דימום עם לחץ ידני או על ידי הידוק המלכודת על תפר הארנק מחרוזת.
      הערה: קבל ביופסיה בסיסית של הקיר ללא קרוואנים בשלב זה על-ידי דגימת רקמת קרוואן בתוך תפר הארנק. אתר ביופסיה זה יכול לשמש כנקודת הכניסה לקו הלחץ של הקרוואנים.
   4. הכנס ואבטח את הקצה החתוך של צינורות הלחץ לתוך מערכת היציאה RV (RVOT). לקשור את הארנק-מחרוזת ולאחר מכן לאבטח את הארנק-מחרוזת לצינורות הלחץ כדי לאבטח את קו הלחץ.
8. להאריך את צינורות RVOT על ידי חיבור צינורות לחץ נוספים לקו הלחץ RVOT.
9. העבירו את צינורות הלחץ הנוספים למעצב שאינו סטרילי כדי לחבר את הצינורות למתמר לחץ ולנטר את מדידת לחץ הקרוואן הבסיסי. הגדר את מתמר הלחץ כדלקמן.
   1. חברו את קצה הלואר הגברי של ערכת הניהול הרביעית לקצה הלואר הנשי של המתמר.
   2. חברו את קצה הלואר הנשי של צינורות הלחץ לקצה הלואר הזכרי של המתמר.
   3. ספייק ניהול IV להגדיר לתוך שקית מלוחים הפרין (2 IU / mL).
   4. מכניסים את שקית המלח לשקית לחץ ומעבירים את שקית הלחץ ל-250-300 מ"מ כספית כפי שצוין במד.
   5. הפעלה מלאה של הקו על ידי שחרור השסתום על המתמר, הבטחת de-airing תקין.
   6. בצע שיטות משלימות לכיול מתמר.
10. לאחר ניתוח זהיר סביב LPA, להקיף אותו עם קלטת טבורי. Ligate LPA על ידי קשירת את קלטת הטבור. שים לב לתגובה המודינמית של החיה לקשירה אם רלוונטי למחקר. הגדל את האוורור הדק כדי לפצות על אוורור שטח מת מוגבר שנוצר על קשירת LPA. התאמות אלה של מכונות הנשמה מפחיתות את החמצת הנשימתית.
11. הזרקו לאט עד 3 מ"ל של תמיסת מלח לתוך העיקול הראשי של הרשות הפלסטינית כדי להבטיח שאין דליפה תוך ניטור לחץ קרוואנים מקו הלחץ של RVOT. לאחר שתגובת הקרוואן מאושרת, הסר את תמיסת המלח המושרשת.
12. הביאו את קו הלחץ של RVOT ואת צינורות הכובש של הרשות הפלסטינית מהחזה, חלל בין-צלעי אחד מתחת לחתך בית החזה.
13. יוצרים שני כיסים תת עוריים לאורך השכבה הפשיסטית בגב השמאלי של הכבשים עד כמה שניתן לכיוון עמוד השדרה עד כמה שאפשרי בתוך השדה הסטרילי. אלה משמשים כאתרים לנמלים שוכנים (איור 2C).
14. באמצעות משיכת צינור חזה, מנהרה קו הלחץ RVOT וצינורות עכוז מן החתך בחזה אל אתרי נמל הגב השמאלי.
15. אבטחו הן את צינורות הדיוב והן את קו הלחץ של הקרוואנים לחיבורי העקיצה של הנמל. עיגן את העיבוד ואת צינורות הלחץ סביב מחברי היציאה עם קשרים נוספים. השתמשו במחבר התיל שסופק כדי להגן על החיבור (איור 1C). הושיבו את היציאות בתוך הכיסים התת-עוריים שנוצרו מראש.
16. עיגנו את הנמלים בשלושה מיקומים סביב שפתם אל הפאסיה הבסיסית עם תפרי פוליפרופילן 3-0 כדי למנוע נדידת נמל. יש למרוח מחדש את הרקמה התת עורית, הדרמיס והעור בשכבות עם תפרי פוליגלקטין 910. אשר מחדש את קריאות הלחץ באמצעות גישה מלעורית של היציאות. לשטוף את יציאת RVOT עם 5 מ"ל (1000 IU / mL, 5000 יחידות) של נתרן הפרין.
17. מניחים צינור חזה צרפתי 16-צרפתי בחלל הקרום השמאלי דרך חתך נפרד, מאבטחים אותו לעור ולאחר מכן מתחברים ליחידת ניקוז צינור חזה סגורה בלחץ של -20 ס"מ·_H2O. הניחו תפר U לא קשור סביב הצינור כדי להקל על הסגירה לאחר הסרת צינור החזה.
18. ניהול בלוק עצבים בין-צלעי (0.5-1 מ"ג/ק"ג bupivacaine) עבור משכך כאבים לאחר הניתוח.
19. סגור את בית החזה עם דמות של שמונה, #2 פוליגלקטין 910 תפרים. סגור את שכבת שריר החזה עם ריצה #0 פוליגלקטין 910. סגור את הרקמה התת עורית בשכבות של תפרי פוליגלקטין 910 רצים #2-0 ומהדק את העור.
20. מקם מחדש את החיה כדי recumbency הגב, להסיר את הצינור orogastric, ולאחר מכן להפסיק איזופלוראן.
21. המשך אוורור מכני וטיפול תומך עד pH דם עורקי > 7.35 ו _pCO2 < 55 מ"מ כספית.
22. מוציאים את הצנרור ברגע שהחיה נושמת באופן ספונטני, מרימה את ראשה ולועסת את הצינור האנדוקרטי. הסר את צינור החזה לפני התאוששות הרדמה מלאה. לקשור את תפר U כדי לסגור את חתך צינור החזה.
23. העבר את החיה לכלוב שלה תוך ניטור התאוששות ההרדמה שלה. ודא חמצן משלים (3-5 L / min על ידי מסכת פנים) זמין בכל עת בעוד הכבשים נשאר חסר תנועה. נטר סימנים חיוניים בכל שעה במשך 4 השעות הראשונות, כל 8 שעות במשך 24 השעות הבאות, ופעם ביום לאחר מכן.

5. התאוששות לאחר הניתוח

1. נטר את אתרי ההשתלה של בית החזה והנמל מדי יום לסימני זיהום. תן אנטיביוטיקה ארוכת טווח (ceftiofur, 5 מ"ג/ק"ג תוך שרירית) בתוך 24 שעות לאחר ההליך וכל 3-4 ימים לאחר מכן במשך שבוע אחד.
2. המשך את תיקון פנטניל לאחר הניתוח בסך הכל 72 שעות. לאחר מכן, לספק משככי כאבים נוספים (למשל, meloxicam, 1 מ"ג /ק"ג פעם ביום תוך שרירית) אם החיה ממשיכה להראות סימנים של כאב (כלומר, שחיקת שיניים, קצב לב גבוה).
3. הסר את התפרים החיצוניים ואת סיכות העור 10-14 ימים לאחר הניתוח או כפי שהומלץ על ידי צוות וטרינרי.
4. ודאו הגנה על אתר הנמל מפני שפשוף או גירוד של בעלי החיים באתרי הנמל כנגד מבנים מסביב באמצעות הלבשה צינורית (איור 2D).

6. רצועת PA כרונית (9 - 10 שבועות)

1. מעבירים את הכבשים למתחם קטן. גזוז את עודפי הצמר סביב הנמלים המושתלים.
2. נקו את האזורים המגולחים עם 70% אלכוהול איזופרופיל. יש למרוח תרסיס לידוקאין אקטואלי להרדמה מקומית.
3. הכינו שני מתמרים ללחץ לניטור לחצי קרוואנים ושרי כובש (איור 3A).
   1. עבור שני המתמרים: חברו את הקצה הנקבי של צינורות לחץ (36 אינץ' או יותר) לקצה הזכרי של המתמר. חברו את קצה הלואר הזכרי של צינורות הלחץ לאחד מקשרי הלואר הנשיים בתחנה משולשת. לבסוף, חבר מחט הובר 22 G לקצה luer זכר של כי stopcock שלישייה.
   2. למתמר לחץ קרוואנים: תלו שקית מלוחה מופרדת (2 IU/mL), ניקבו את השקית עם ערכת ניהול העירוי, וחברו את הקשר הגברי של ערכת ניהול IV לחיבור הלואר הנשי של מתמר לחץ הקרוואנים. לאחר מכן, לחץ על שקית המלח (למשל, שקית לחץ).
   3. למתמר הכובש: סובבו את המתמר ואת צינורות הלחץ במלואם. שים כובע לואר זכר על הקצה הנקבי של מתמר הלחץ כדי למנוע מנוזל השרוול לדלוף החוצה אל המתמר.
   4. חבר את שני המתמרים לחומרת רכישת הנתונים באמצעות כבל או מתאם מתאימים.
4. כייל את המתמרים כפי שצוין בקובץ משלים 1.
5. לחץ על התחל בפינה השמאלית העליונה של חלון התוכנה כדי להתחיל להקליט את תוכנת רכישת הנתונים כדי ללכוד צורות גל לחץ של RV ו- PA ב- 400 הרץ.
6. יש עוזר לספק ריסון קל של החיה לפני הגישה לנמל. הכנס מחט הובר ממתמר לחץ הקרוואן ליציאת הקרוואן. חברו מזרק של 10 מ"ל לתחנה התלת-כיוונית ונסו להזרים דם בחזרה למזרק מיציאת הקרוואנים (איור 3B).
   1. אם קשה למשוך בחזרה על המזרק, הראשון להזריק 5-10 מ"ל מלוחים לתוך יציאת RV כדי לחלץ את מקור החסימה.
   2. אם הסתימה נמשכת, להחדיר 2 מ"ג של מפעיל פלסמינוגן רקמות (tPA) לתוך היציאה כסוכן פיברינוליט ולהשאיר אותו לילה. בדוק למחרת כדי לשאוף את tPA.
7. לאחר שקו הלחץ של הקרוואנים נוצר, חבר את מחט הובר ממתמר השרוול של הרשות הפלסטינית.
8. לכוד את הערכים ההתחלתיים של לחצי שרוול קרוואנים ו-PA (איור 3C). שים לב לשינויים דרסטיים מקריאות קודמות.
   1. אם לחץ השרוול ו/או הקרוואנים של הרשות הפלסטינית ירד משמעותית מהקריאה הקודמת, ייתכן שזה סימן לכך ששרוול הרשות הפלסטינית דולף.
   2. שים לב לסימן ברור נוסף של דליפת שרוול הרשות הפלסטינית על ידי לימוד צורת הגל של השרוול של הרשות הפלסטינית. אם לחץ השרוול הממוצע של הרשות הפלסטינית יורד בקצב ניכר, אז יש סיכוי גבוה כי השרוול דולף.
      הערה: בדוק מחדש שכל חיבורי הלואר במתמר הלחץ, הצינורות והעצירה מתהדקים. תכולת הנוזלים בלחץ גבוה מן השרוול PA יכול לזרום בחזרה דליפה מתוך חיבורי luer רופפים.
      1. אם השרוול של הרשות הפלסטינית דולף, קבע את היקף הדליפה. אם קצב הדליפה הוא איטי, אז אסטרטגיית פסים תכופה יותר יכולה להתגבר על הדליפה כדי להפוך את מודל המחלה עדיין יעיל.
9. הזרקו באיטיות 3% תמיסת מלח היפרטונית ליציאת הכובש תוך שימת לב ללחצי קרוואנים ושרוולים.
   1. התאם את כמות ההזרקה בהתבסס על חומרת מחלת PH הרצויה פנוטיפ קרוואנים. עלייה שבועית של לחץ השרוול על ידי 100-150 מ"מ כספית היא מטרה סבירה לפתח פנוטיפ קרוואנים מפצה אדפטיבי.
   2. עלייה מהירה יותר בלחץ השרוול (>250 מ"מ כספית בשבוע) צפויה לייצר פנוטיפ קרוואנים מתפרק.
10. לאחר שרפת הרשות הפלסטינית מנופח לכמות הרצויה, הסר את מחט הובר מיציאת החפת.
11. תשיג דגימת דם מיציאת הקרוואנים.
    1. שאפו 10 מ"ל של דם מנמל הקרוואנים בצורה סטרילית והניחו בצד.
    2. מניחים מזרק חדש במקום מזרק השאיפה ושואפים כמה דם לפי הצורך מבלי לעבור את מגבלת בדיקת הדם השבועית של 7.5% מנפח הדם הכולל.
    3. חבר מחדש את המזרק המקורי עם דם שאפתני והחזר אותו דרך יציאת הקרוואנים.
    4. משוך את ידית השסתום של מתמר הלחץ כדי לשטוף תמיסת מלח הפרין משקית המלח לתוך יציאת הקרוואן. המשך לשטוף עד שהקו כולו יתבהר וחסר צבע.
12. יש לשטוף את יציאת הקרוואן עם 10 מ"ל של תמיסת מלח. לאחר מכן, עוד לשטוף את היציאה עם 5 מ"ל של 1000 U / mL של נתרן הפרין.
13. חזור על השלבים 6.1-6.12 כל 1-4 ימים במשך 9-10 שבועות.

תוצאות

קבוצה מייצגת של 12 כבשים משמשת כדי להראות את היעילות של מודל זה לפיתוח דרגות שונות של PH-RVF. בין כבשים אלה, לחץ השרוול הממוצע של הרשות הפלסטינית גדל מ 32 ± 20 מ"מ כספית בשבוע 1 עד 1002 ± 429 מ"מ כספית בשבוע 9. זה הביא להגדלת ממוצע הקרוואנים ולחצים סיסטוליים מ 28 ± 5 ו 57 ± 7 מ"מ כספית בשבוע 1, בהתאמה, ל 44 ± 7 ו 93 ?...

Discussion

מודל PH-RVF המוצג יכול לגרום באופן אמין לרמות שונות של חומרת המחלה כדי להתאים את מטרות החקירה. שתי גישות שונות משמשות בשילוב כדי לגרום למודל מחלה זה. ראשית, קשירת LPA משמשת להגברת ההתנגדות לכלי הדם הריאתיים ולהקטנת קיבוליות ^PA11,12, ובכך מבססת את נקודת המוצא של המוד...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chloride Irrigation Pour Bottle by Baxter Healthcare, 1000 mL	Medline	BHL2F7124	Surgical Disposable
0.25% Bupivacaine	Hospira Inc	0409-1160-18	Medication, Intra-Operative
0.9% Normal Saline, 1000 mL	Baxter Healthcare Corp	0338-0049-04	Medication, Intra-Operative
0.9% Normal Saline, 500 mL	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0049-03	Medication, Chronic PH
16 mm Heavy Duty Occluder with actuating tubing	Access Technologies	OC-16HD	Surgical Disposable
3-mL Skin Prep Applicator	Medline	MDF260400	Surgical Disposable
70% isopropyl alcohol prep pads	Medline	MDS090670	Disposable, Chronic PH
Adhesive bandage tape	Patterson Veterinary		Disposable, Chronic PH
Adson forceps	V. Mueller	NL1400	Surgical Instrument
Allis tissue forceps	V. Mueller	CH1560	Surgical Instrument
Aortic clamp, straight (bainbridge forceps)	V. Mueller	SU6001	Surgical Instrument
Backhaus towel forceps	V. Mueller	SU2900	Surgical Instrument
Bags, Infusion: Nonsterile Novaplus Infusion Bag, 500 mL	Medline	TCV4005H	Disposable, Chronic PH
Berry sternal needle holder	V. Mueller	CH2540	Surgical Instrument
Blades, Electrode: Electrode Blade, 6.5", with 0.24 cm Shaft	Medline	VALE15516	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #10	Medline	B-D371210	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #11	Medline	B-D371211	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #15	Medline	B-D371215	Surgical Disposable
BNC Male to BNC Male Cable	Digi-Key	415-0198-036	Equipment
Castroviejo needle holder	V. Mueller	CH8589	Surgical Instrument
Cefazolin	Apotex Corp	60505-6142-0	Medication, Intra-Operative
Ceftiofur Crystalline Free Acid	Zoetis Inc	54771-5223-1	Medication, Post-Operative
Chest Drain, with Dry Suction, Adult-Pediatric	Medline	DEKA6000LFH	Surgical Disposable
Chest tube passer	V. Mueller	CH04189	Surgical Instrument
COnfidence Flowprobes for Research (PAU-Series)	Transonic	24PAU	Equipment, Perivascular Flow Probe
Cooley tangential occlusion clamp	V. Mueller	CH6572	Surgical Instrument
Data Acquisition Hardware	ADInstruments	PowerLab 16/30	Equipment
DeBakey Aorta clamp	V. Mueller	CH7247	Surgical Instrument
DeBakey multi-purpose clamp	V. Mueller	CH7276	Surgical Instrument
Debakey tissue forceps, 12’’	V. Mueller	CH5906	Surgical Instrument
Debakey vascular tissue forceps 7 3/4’’	V. Mueller	CH5902	Surgical Instrument
Debakey vascular tissue forceps, 9’’	V. Mueller	CH5904	Surgical Instrument
Electrosurgical Generator	Covidien	Force FX-C	Equipment
Endotracheal Tube, 10mm	Patterson Veterinary	07-882-9008	Surgical Disposable
Enrofloxacin	Norbrook Laboratories Limited	55529-152-05	Medication, Intra-Operative
Fentanyl Transdermal Patch	Apotex Corp	60505-7007-2	Medication, Pre-Operative
Ferris smith tissue forceps	V. Mueller	SU2510	Surgical Instrument
Finochietto rib spreaders, large	V. Mueller	CH1220-1	Surgical Instrument
Finochietto rib spreaders, medium	V. Mueller	CH1215-1	Surgical Instrument
Flexsteel ribbon retractor, 1” x 13”	V. Mueller	SU3340	Surgical Instrument
Flexsteel ribbon retractor, 2” x 13”	V. Mueller	SU3346	Surgical Instrument
Foerster sponge forceps, curved	V. Mueller	GL660	Surgical Instrument
Gauze Sponges: Sterile X-ray Compatible Gauze Sponges, 16-Ply, 4" x 4"	Medline	PRM21430LFH	Surgical Disposable
Gerald-DeBakey forceps	V. Mueller	CH04242	Surgical Instrument
Glassman Allis	V. Mueller	SU6152	Surgical Instrument
Halsted mosquito forceps	V. Mueller	SU2702	Surgical Instrument
Harken clamp	V. Mueller	CH6462	Surgical Instrument
Heat Therapy Pump	Gaymar/Stryker	TP-400	Equipment
Heparin	Fresenius Kabi,	63323-540-31	Medication, Chronic PH
Hospira Primary IV Sets, 80"	Patterson Veterinary	07-835-0123	Surgical Disposable
Hypertonic saline 3%	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0054-03	Medication, Chronic PH
Hypodermic Needle with Bevel and Regular Wall, 20 G x 1"	Medline	B-D305175Z	Disposable, Chronic PH
Interface Cable, Edwards LifeScience Transducer to ADInstruments  Bridge Amplifier	Fogg System	0395-2434	Equipment
Intravenous Infusion Pump	Heska	Vet/IV 2.2 Infusion Pump	Equipment
Isoflurane	Patterson Veterinary	14043-704-06	Medication, Pre-Operative
Kantrowitz thoracic clamp, 9-1/2”	V. Mueller	CH1722	Surgical Instrument
Kelly hemostats	V. Mueller	88-0314	Surgical Instrument
Lidocaine HCl, 2.46%	PRN Pharmacal,	49427-434-04	Medication, Chronic PH
Ligaclip Multiple-Clip Appliers by Ethicon	Medline	ETHMCS20	Surgical Disposable
Loop, Vessel, Mini, Red, 2/pk, Sterile	Medline	DYNJVL12	Surgical Disposable
Lorna non-perforating towel forceps	V. Mueller	SU2937	Surgical Instrument
Mayo dissecting scissors, curved	V. Mueller	SU1826	Surgical Instrument
Mayo dissecting scissors, straight	V. Mueller	SU1821	Surgical Instrument
Medipore Dress-It Pre-Cut Dressing Covers by 3M	Medline	MMM2955Z	Surgical Disposable
Meloxicam	Patterson Veterinary	14043-909-10	Medication, Post-Operative
Mixter thoracic forceps, 9”	V. Mueller	CH1730-003	Surgical Instrument
Mosquito hemostats	V. Mueller	88-0301	Surgical Instrument
Multi-Channel Research Consoles	Transonic	T402/T403	Equipment, Perivascular Flow Meter
Multi-Lumen Central Venous Catheterization Kits	Medline	ARW45703XP1AH	Surgical Disposable
Multi-Parameter Vital Signs Monitor	Smiths Medical	SurgiVet Advisor 3	Equipment
Needles: Hypodermic Needle with Regular Bevel, Sterile, 18 G x 1.5"	Medline	B-D305185Z	Surgical Disposable
No. 3 knife handle	V. Mueller	SU1403-001	Surgical Instrument
No. 7 knife handle	V. Mueller	SU1407	Surgical Instrument
Non-Vented Male Luer Cap	Qosina	13614	Disposable, Chronic PH
Octal Bridge Amplifier	ADInstruments	FE228	Equipment
Ophthalmic Ointment	Akorn Animal Health	59399-162-35	Medication, Pre-Operative
Penrose Tubing, 6 mm x 46 cm, 11 mm Flat	Medline	SWD514604H	Surgical Disposable
Perma-Hand Black Braided Silk:  2-0 SH Taperpoint Needle, Control Release, 30"	Medline	ETHD8552	Surgical Disposable
Perma-Hand Suture, Black Braided, Size 0, 6 x 30”	Medline	ETHA306H	Surgical Disposable
Perma-Hand Suture, Black Braided, Size 4-0, 12 x 30"	Medline	ETHA303H	Surgical Disposable
Phenylephrine	West-Ward	0641-6142-25	Medication, Intra-Operative
Polyhesive Cordless Patient Return Electrodes, Adult	Medline	SWDE7509	Surgical Disposable
Port-A-Cath Huber Needle, Straight, 22 G x 1-1/2"	Medline	AAKM21200724	Disposable, Chronic PH
PROLENE Monofilament Suture, Blue, Size 4-0, 36", Double Arm, RB-1 Needle	Medline	ETHD7143	Surgical Disposable
PROLENE Polypropylene Monofilament Suture, Blue, Double-Armed, RB-1 Needle, Size 5-0, 24"	Medline	ETH8555H	Surgical Disposable
Regional Block Needles, 22-gauge	Medline	B-D408348Z	Surgical Disposable
Schnidt tonsil artery forceps	V. Mueller	M01700	Surgical Instrument
Skin staple extractor	Medline	CND3031	Disposable, Chronic PH
Skin stapler 35 wide, with counter	Medline	STAPLER35W	Surgical Disposable
Sphygmomanometer	Medline		Equipment
Sponge bowl	V. Mueller	GE-75	Surgical Instrument
Sponge, Lap: X-Ray Detectable Sterile Lap Sponge, 18" x 18", 5/Pack	Medline	MDS241518HH	Surgical Disposable
Sponge, Peanut: X-Ray Detectable Sterile Peanut Sponge, Small, 3/8"	Medline	MDS72038	Surgical Disposable
Sterile Disposable Deluxe OR Towel, Blue, 17'' x 27'', 2/Pack	Medline	MDT2168202	Surgical Disposable
Sterile Luer-Lock Syringe, 3 mL	Medline	SYR103010Z	Disposable, Chronic PH
Sterile Luer-Lock Syringe, 5 mL	Medline	SYR105010Z	Disposable, Chronic PH
Sterile Surgical Equipment Probe Covers	Medline	DYNJE5930	Surgical Disposable
Stopcock: 3-Way Stopcock with Handle in OFF Position, Rotating Adaptor Male Collar Fitting, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Surgical Disposable
Stopcock: 3-Way Stopcock with Handle in OFF Position, Rotating Adaptor Male Collar Fitting, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Disposable, Chronic PH
Subcutaneous Port with 5-French Connector and Blue Boot	Access Technologies	CP2AC-5NC	Surgical Disposable
Super cut metzenbaum dissecting scissors	V. Mueller	CH2032-S	Surgical Instrument
Super cut nelson-metzenbaum dissecting scissors	V. Mueller	CH2025-S	Surgical Instrument
Syringes: Sterile Luer-Lock Syringe, 10 mL	Medline	SYR110010Z	Surgical Disposable
Thoracic Catheter, Straight, 28 Fr x 20"	Medline	SWD570549H	Surgical Disposable
Three-quarter surgical drape	Medline	DYNJP2414H	Surgical Disposable
Tiletamine + Zolazepam	Zoetis Inc	54771-9050-1	Medication, Pre-Operative
TourniKwik Tourniquet Set with Four 7.5" Bronze-Colored Tubes and 1 Snare, 12 French	Medline	CVR79013	Surgical Disposable
Transducer clip	Edwards LifeScience	TCLIP05	Equipment
Trigger Aneroid Gauge (Sphygmomanometer)	Patterson Veterinary	07-815-0464	Equipment
TruWave Disposable Pressure Transducer Kits by Edwards Lifesciences	Medline	VSYPX260	Surgical Disposable and Chronic PH
TS420 Perivascular Flow Module	Transonic	TS420	Equipment, Perivascular Flow Meter
Tubing, Suction: Sterile Universal Suction Tubing with Straight Ribbed Connectors, 1/4" x 12'	Medline	OR612	Surgical Disposable
Tubing: Pressure Monitoring Tubing with Fixed Male Luer Lock and Female Fitting, Low Pressure, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Surgical Disposable
Tubing: Pressure Monitoring Tubing with Fixed Male Luer Lock and Female Fitting, Low Pressure, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Disposable, Chronic PH
Tubular Elastic Dressing Retainer	Medline	DERGL711	Disposable, Chronic PH
Tuffier rib retractor	V. Mueller	CD1101	Surgical Instrument
Tygon E-3603 Flexible Tubings	Fisher Scientific	14-171-227	Surgical Disposable
U.S.A retractor	V. Mueller	SU3660	Surgical Instrument
Umbilical Tape, Cotton, 3-Strand, 1/8 x 36"	Medline	ETHU12TH	Surgical Disposable
Valleylab Button Switch Pencil	Medline	VALE2516H	Surgical Disposable
Vanderbilt deep vessel forceps	V. Mueller	CH1687	Surgical Instrument
Veterinary Anesthesia Machine	Midmark	Matrx VMC	Equipment
Veterinary Anesthesia Ventilator	Hallowell EMC	Model 2000	Equipment
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 0 CT-1 36" Suture	Medline	ETHVCP946H	Surgical Disposable
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 2 TP-1 Taper 54" Suture	Medline	ETHVCP880T	Surgical Disposable
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 2-0 CT-1 18" Suture	Medline	ETHVCP739D	Surgical Disposable
Vital crile-wood needle holder, 10-3/8”	V. Mueller	CH2427	Surgical Instrument
Vital mayo-hegar needle holder, 7-1/4”	V. Mueller	CH2417	Surgical Instrument
Vital metzenbaum dissecting scissors, 14’’	V. Mueller	CH2009	Surgical Instrument
Vital metzenbaum dissecting scissors, 9”	V. Mueller	CH2006	Surgical Instrument
Vital ryder needle holder, 9”	V. Mueller	CH2510	Surgical Instrument
Yankauer, Bulb Tip: Sterile Rigid Yankauer with Bulb Tip, No Vent	Medline	DYND50130	Surgical Disposable