Pulmoner Hipertansiyon ve Sağ Ventrikül Yetmezliği için Büyük Bir Hayvan Modeli: Koyunlarda Sol Pulmoner Arter Ligasyonu ve Progresif Ana Pulmoner Arter Bantlama

Özet

Bu makalede, uyarlanabilir ve maladaptif fenotiplerini modellemek için şiddetli sağ ventrikül basıncı aşırı yüklemesi geliştirmek için cerrahi teknik ve deneysel yaklaşım açıklanmaktadır.

Özet

Pulmoner hipertansiyonda (PH) dekomser sağ ventrikül yetmezliği (RVF) sınırlı tıbbi tedavi seçenekleri ile ölümcüldür. PH için yeni terapötiklerin geliştirilmesi ve testilmesi, akciğer damar direncinin ve RVF'nin klinik olarak ilgili büyük bir hayvan modelini gerektirir. Bu yazıda sol pulmoner arter (PA) ligasyonu ve ana PA tıkanıklığı kullanan daha önce yayınlanmış ovine PH-RVF modelinin en son gelişimi ele alınmıştır. Ph-RVF'nin bu modeli sadece hastalık şiddetini değil, aynı zamanda RV'nin fenotipik yanıtını da kontrol etmek için çok yönlü bir platformdur.

Yetişkin koyunlar (60-80 kg) sol PA (LPA) ligasyonu, ana PA manşetinin yerleştirilmesi ve RV basınç monitörünün yerleştirilmesinden geçirildi. PA manşet ve RV basınç monitörü deri altı bağlantı noktalarına bağlandı. Deneklere 9 hafta boyunca haftada iki kez progresif PA bandı, sıralı RV basıncı, PA manşet basıncı ve karışık venöz kan gazı (_SvO2) önlemleri uygulandı. Bu modelin başlangıç ve bitiş noktasında ekokardiyografi kullanılarak ventrikül fonksiyonu ve boyutları değerlendirildi. 12 hayvan deneği temsili bir grupta, RV ortalama ve sistolik basınç 1. haftada sırasıyla 28 ± 5 ve 57 ± 7 mmHg'den 44 ± 7'ye ve 93 ± 18 mmHg'ye (ortalama ± standart sapma) 9. Ekokardiyografide PH-RVF'nin karakteristik bulguları, özellikle RV genişlemesi, artan duvar kalınlığı ve septal eğilme gösterilmiştir. SvO2 ve PA manşet basıncının boyuna eğilimi, PA bantlama oranının değişen RV fenotiplerini ortaya çıkarmak için titratlanabileceğini göstermektedir. Daha hızlı bir PA bantlama stratejisi, SvO2'de % 65'< hızlı bir düşüşe yol açtı ve bu da RV dekomsasyonunu gösterirken, daha yavaş, daha tempolu bir strateji% 70-80'de fizyolojik SvO2'nin korunmasına yol açtı. Hızlandırılmış stratejiyi deneyimleyen bir hayvan, 9. haftaya kadar birkaç litre plevral efüzyon ve assit geliştirdi. Bu kronik PH-RVF modeli, moleküler mekanizmaları incelemek, tanısal biyobelirteçler geliştirmek ve PH'dan RV adaptasyonunu ve maladaptasyonunu yönetmek için terapötik inovasyonu sağlamak için değerli bir araç sağlar.

Giriş

Pulmoner hipertansiyon (PH) hastaları için morbidite ve mortalitenin baskın nedeni dekomser sağ ventrikül (RV) yetmezliğidir. RV yetmezliği PH'lı hastalarda hastaneye yatışların %50'sinden sorumludur ve bu hasta popülasyonunda yaygın bir ölüm ^nedenidir1,2. PH için mevcut tıbbi tedaviler zamansal önlemler sağlayabilse de, hastalığın ilerlemesini tersine çevirmez. Bu nedenle, tek uzun süreli tedavi akciğer naklidir. PH ve RVF için yeni tıbbi tedavileri ve müdahaleleri araştırmak ve test etmek için, hastalığın karmaşık patofizyolojisini yeniden oluşturmak için klinik olarak ilgili bir hayvan modeline ihtiyaç vardır. Özellikle, PH hastalarının RV fonksiyonlarını geliştirmeleri için RV hedefli terapötikler geliştirmek için büyük bir klinik ihtiyaç vardır. Bugüne kadar, PH ve RV disfonksiyonunun yayınlanan hayvan çalışmalarının çoğu fareler ve sıçanlar gibi küçük memelilere ^{dayanmıştır3}. Öte yandan, anormal ^{afterload4,5,6,7'den} hastalığı ve RV patofizyolojisini incelemek için sadece bir avuç büyük hayvan modeli olmuştur. Buna ek olarak, daha önce yayınlanan büyük hayvan modellerinin hiçbiri, farklı olarak telafi edilmiş ve dekompanse RV yetmezliği fenotiplerine yol açan hastalık şiddetinin kontrollü titrasyonu için deneysel prosedürlerin açıklamalarını içermez. Hastalık mekanizmalarını incelemek ve PH ve RVF için yeni tanı ve terapötikleri klinik uygulamaya geliştirmek, test etmek ve çevirmek için çeşitli derecelerde kompanzasyonla akut ve kronik RV yetmezliğine neden olacak şekilde titratlanabilen bir PH hayvan modeline ihtiyaç vardır. Büyük bir hayvanda böyle bir model özellikle mekanik dolaşım destek cihazlarının geliştirilmesi için ^değerlidir8.

Burada, yetişkin koyunlarda sol pulmoner arter (PA) ligasyonu ve progresif ana PA bantlama kullanılarak kronik, büyük bir hayvan PH-RVF modeli ^9,10 sunulmaktadır. Sol PA 'nın (LPA) ligasyonu pulmoner vasküler direnci arttırır ve PA kapasitansını ^{azaltır11,12}. progresif PA bantlama yaklaşımı, hastalık şiddetinin ve RV adaptasyonunun hassas titrasyonunu sağlar. Bu platform ayrıca RV dekombilasyonuna doğru hastalığın ilerlemesinin uzunlamasına araştırılması için de kullanılabilir. Bu modeli yürütmek için gereken prosedürler ve süreçler, PH ve RVF için yeni tedaviler geliştirmek için büyük bir hayvan platformuyla ilgilenen araştırmacılar için bir kaynak olarak sunulmaktadır.

Protokol

Vanderbilt Üniversitesi Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi protokolü onayladı. Açıklanan prosedürler, ABD Ulusal Araştırma Konseyi'nin Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu uyarınca 8. Deneysel prosedürün genel görünümü ve zaman çizelgesi Şekil 1'de verilmiştir. Ek Tablo 1, koyunun cinsiyetini, ağırlığını, cinsini, koyun kaynağını ve tekrarlanabilirlik amaçları için yararlı olabilecek diğer ilgili bilgileri açıklar.

1. Ameliyattan bir gün önce, hayvanın hazırlanması

1. Hayvanın rumenini dekompresyondan arındırmak için cerrahi işlemden önce yiyecekleri 24-40 saat saklayın.
2. İşlemden önce koyun dorsum 12 saat üzerinde yamuk bir alana 50 μg/ h fentanil yama uygulayın. Yama uygulamasından önce lanolin yağı kalıntılarını gidermek için bölgeyi klorheksidin ile temizleyin. Yamayı elastik borulu bir pansumanla örtün ve koruyun.

2. Ameliyat günü, hazırlık odasında ameliyat öncesi adımlar

1. Tiletamin/zolazepam intramüsküler (2.2-5 mg/kg) verin ve anesteziyi teşvik etmek için bir yüz maskesi ile oksijenin% 80-% 100'ü ile karıştırılmış izofluranların% 1-3'ünü sunun.
2. Koyun supine'i hazırlık masasına yerleştirin ve bacaklarını sabitleyin.
3. 10 mm endotrakeal tüp ile entübe edin ve ses kontrol modunda mekanik havalandırmaya başlayın (gelgit hacmi, TV = 10 mL / kg, solunum hızı, RR = dakikada 15 nefes).
4. Cerrahi alanı koyunun boynundan üst karnına kadar aşağıda ayrıntılı olarak açıklanmış olarak tıraş edin.
   1. Merkezi venöz kateterizasyon için şahdamarlarının üzerinde bulunan cildi ortaya çıkarmak için koyunun ön boynunu tıraş edin (bkz. adım 3.7).
   2. Torakotomi hazırlığında anterolateral toraksı iki taraflı tıraş edin (bkz. adım 4.1).
   3. Gövdenin sol tarafını göğüsten arkaya doğru tıraş edin (yani, masanın sırtüstü pozisyondaki konu ile izin vereceği kadar dorsally) ve deri altı bağlantı noktalarının implantasyonuna hazırlık için memeden arka kanada kaudally (bkz. adımlar 4.12-4.15).
5. Arteriyel basınç takibi ve kan gazı örneklemesi için auriküler artere 20 G anjiyokreter yerleştirin.
6. Rumen dekompresyon için iç çapı 3/8"-1/2" olan bir silikon tüp yerleştirin. Orogastrik tüp tüm prosedür boyunca rumen içinde kalacaktır.
7. Hayvanı ameliyat öncesi hazırlık odasından cerrahi süite taşıyın.

3. Ameliyat günü, ameliyat odasında ameliyat öncesi adımlar

1. Koyunları cerrahi süitteki ventilatöre yeniden bağlayın ve 2.3. adımda aynı ayarda havalandırmaya devam edin (izofluran % 1-3, TV = 10 mL / kg, RR = dakikada 15 nefes)
2. Darbe oksimetresi (_SpO2), arteriyel kan basıncı, sıcaklık, son gelgit kapnografı ve elektrokardiyogram (EKG) sensörlerini anestezik monitöre bağlayın.
3. Hayati belirtiler için sensörleri hayvana bağlayın.
   1. Nabız oksimetresini hayvanın diline yerleştirin.
   2. Sıcaklık probunu rektuma yerleştirin.
   3. 3 kurşunlu elektrokardiyogram problarını bağlayın: Kırmızı kurşunu sol arka bacağa, beyaz kurşunu sağ ön bacağa ve siyah kurşunu sol ön bacağa yerleştirin.
   4. Üç yönlü stopcock'un erkek luer ucunu auriküler arter anjiyokateterine bağlayın ve uygun büyüklükte bir basınç tüpü kullanarak arteriyel hat izleme için karşı dişi luer ucunu basınç dönüştürücüye bağlayın.
      1. Dönüştürücüsü çalışma tablosunun düzeyine hizalayın.
      2. Dönüştürücüdeki üç yönlü stopcock'u açın.
      3. Arteriyel kan basıncı kanalını vurgulamak için vitals monitörünün ana düğmesini kaydırın ve ardından kanalı seçmek için düğmeye basın.
      4. Dönüştürücüsü sıfırlamak için SIFIR IBP'yi seçin.
   5. Son gelgit _CO2'yi izlemek için kapnografi monitör hattının erkek luer bağlantısını ventilatör tüpündeki dişi luer bağlantısına bağlayın.
4. Sürekli sıvı yönetimi ve inotropik veya vazopresör desteği için IV pompaları kurun.
   1. Serum uygulama seti ile salin torbası üzerindeki septumu delin. Dökülmeyi önlemek için torbayı delinmeden önce IV borunun kenetlenmiş olduğundan emin olun.
   2. IV uygulama set borularını IV makaralı pompaya hizalayın ve takın ve pompada belirtilen yönün sıvı uygulama yönüyle uyuşup uyuşmadığını kontrol edin.
      NOT: IV yönetim setinin IV pompa ile uyumlu olduğundan emin olun.
   3. Pompayı açın ve hattaki tüm havayı çıkarmak için PRIME'ı belirtin.
5. Koyunları ameliyat prosedürü için konumlandırın.
   1. Supine konumundan koyunları kısmi sağ yanal decubitus pozisyonuna döndürün.
   2. Sağ ön ayağı aşağı doğru sabitleyin ve sol ön ayağı geri çekilirken ip veya atramatik kayışlarla sefalad ve yanal olarak sabitleyin.
   3. Ventrikül anatomisi ve fonksiyonunun temel değerlendirmesi için transtorasik ekokardiyografi gerçekleştirin. Ultrasonografi, hem ana pulmoner artere hem de sol pulmoner artere cerrahi erişimi kolaylaştıran optimal interkostal alanı belirlemek için de yararlıdır.
6. Sabun veya fırça kullanarak cerrahi alanı kir ve diğer kirleticilerden arındırın. Boynu ve göğsü klorheksidin veya betadin çözeltisi ile hazırlayın ve cerrahi alanı steril bir şekilde örtün.
7. Ultrason kılavuzunu veya anatomik yer işaretlerini kullanarak, bir bulucu iğnesi veya anjiyokat kullanarak sol veya sağ iç juguler damara erişin. Seldinger tekniğini kullanarak, intravenöz erişim ve merkezi venöz basınç izleme için iç juguler damar içine 7-Fransız üçlü lümen merkezi venöz kateter yerleştirin.
   1. Basınç izleme için proksimal portu ve sıvı ve ilaç kullanımı için distal portu kullanın.
8. 20 mg/kg cefazolin ve 5 mg/kg enrofloksasin intravenöz olarak uygulan. İşlem sırasında her 2-4 saat cefazolin dosing tekrarlayın.
9. Ameliyattan önce ön yükü artırmak için 500 mL'lik normal salin çözeltisi kullanın. 15 mL/kg/s bakım intravenöz sıvı oranına başlayın.

4. Operatif prosedür

1. Mediastinal maruziyet elde etmek için sol dördüncü interkostal alanda kas-saparing mini torakotomi (uzunluk < 8 cm) gerçekleştirin. Ameliyat sonrası iyileşmeyi hızlandırmak için mini torakotomiyi seçin.
   1. Cildi böldükten sonra, alttaki kası (pektoralis majör) interkostal alana hafifçe eğik çalışan lifleri boyunca boyuna bölün. Kas tabakasını yaymak ve göğüs duvarını ortaya çıkarmak için kendi kendini koruyan bir retraktör yerleştirin.
   2. Serratus ön ön ve alttaki interkostal kası seçilen interkostal alanda bölün, kaburgaya hemen sefalad kalmaya özen edin.
   3. Plevral alana girin ve daha sonra istemeden kaburga kırığı veya sternumda çıkık önlemek için interkostal kasları omurgaya ve anteromedially sternuma doğru tamamen serbest bırakmaya devam edin. Meme damarlarının medial olarak yaralanmasını önleyin.
   4. Kaburga alanını ve aşırı yumuşak dokuyu açmak için kendi kendini koruyan retraktörleri yerleştirin. Kaburgaları ayırmak için küçük veya orta bir Finochietto retraktörü ve maruziyeti iyileştirmek için interkoztal alan içindeki yumuşak dokuyu geri çeken interkostal alan içindeki Finochietto'ya dik oturmak için bir Tuffier retraktörü (5 cm retraktör bıçağı) kullanın.
2. Perikardiyum ön kısmını yaralanmadan phrenic sinire inzivaya alın ve ana PA ve RV'yi ortaya çıkarmak için 2-0 ipek dikişli perikardiyal bir kuyu oluşturun.
   1. Pozlamayı değerlendirin ve uygun interkostal uzayın girilip girildiğinden emin olun. İdeal olarak, proksimal PA ve sol atriyal ek kesiğin hemen altında kolayca görülebilir, bu da hem ana PA hem de LPA'ya maruz kalma sağlamak için en uygun interkostal alanın seçildiğini düşündürmektedir.
   2. Maruz kalma hem ana PA'ya hem de LPA'ya güvenli bir şekilde ulaşmak için yetersiz görülürse, operasyonun gerekli tüm adımlarını gerçekleştirmek için ek bir interkostal alan açmaktan çekinmeyin; ancak uygun kesi seçimi ile bu gerekli olmayacaktır.
3. Ana PA'nın etrafını parçalara ayırın ve göbek bandıyla izole edin. Nihai oklüder yerleşimi ve PA akış probu için ana PA'da mümkün olduğunca distal olarak yeterli arka diseksiyon sağlayın.
   1. Veri toplama yazılımını kalibre etmek için steril alana bir kase su veya tuzlu su içine steril bir akış probu yerleştirin. Diğer ucundaki elektrik fişini, probu sayaçla bağlamak için steril olmayan bir tasarıma teslim edin.
      1. PA akış probu ve ölçüm cihazının bağlanması ve kalibre edilmesiyle ilgili ayrıntılar için ek belgelere bakın.
   2. PA akış probunun oluğuna bol miktarda steril ultrason jeli uygulayın.
   3. Silikon astarı PA akış probunun oluğuna yerleştirin ve astara ek bir ultrason jeli tabakası uygulayın.
   4. PA akış probunu PA'ya yerleştirin ve akış ölçerde ve veri toplama arabiriminde PA akış okumaları alın.
      1. PA akış probunun yerleştirilmesi, sol ventrikül ön yükünü azaltabilen ve arteriyel basınç anlamına gelebilecek PA'nın kısmi tıkanmasına neden olabilir. PA akış alımı sırasında hemodinamiklere dikkat edin.
      2. PA akış sinyali gücünün 5 çubuk olduğundan emin olmak için akış ölçer ekranını kontrol edin. Sayaç 5'ten az çubuk görüntülerse, akış probu ile ana PA arasında yeterli temastan emin olun. Gerekirse ek ultrason jeli uygulayın.
4. LPA'nın perikardiyal diseksiyonunun tamamlanması ve göbek bandı ile çevrelemesi.
   1. Sol atriyal uzantının kaudal geri çekilmesi için küçük bir sünger çubuk veya ince dövülebilir retraktör kullanın.
      NOT: LPA'ya maruz kalma, sol atriyal uzantının kaudal geri çekilmesi, ana PA'nın sefaad geri çekilmesi ve perikardiyumun LPA'nın perikarddan çıktığı yere sadece ön tarafta yanal geri çekilmesi ile kolaylaşır.
5. Ana PA'nın etrafına ağır hizmet tipi silikon vasküler oklüder yerleştirin (Şekil 2A, B, daire). Oklüder boyutu PA çapına göre ayarlanabilir; uyumun rahat olduğundan emin olun. Damar tıkanıklığının uçlarını U dikişi ile birlikte sabitlemek için Keith iğnesi üzerinde 0 ipek dikiş kullanın. Ana PA'nın etrafına sabitlenince, tıkayucuyu ana PA boyunca distal olarak kaydırın.
6. Diseksiyonu kolaylaştırmak ve sonraki yeniden ameliyat cerrahisinde bir akış probu yerleştirmek için yer ayırmak için proksimal ana PA'yı 1/2" Penrose drenajı ile çevrele. Penrose drenajını PA'nın etrafına gevşek bir şekilde sığacak şekilde kesin ve Penrose'u çalışan 4-0 Prolene dikişi ile kendine sabitleyin (Şekil 2B).
7. RV basınçlarının izlenmesi için bir RV basınç hattı oluşturun (Şekil 2B, beyaz ok).
   1. RV çıkış sistemi olmayan duvardaki RV basınç hattı için bir konum seçin. Seçilen yeri çevreleyen rehinlerle 5-0 monofilament, nonabsorbable polipropilen çanta-string dikiş yerleştirin ve bir vasküler tuzak oturun. Rehinleri steril bir cerrahi eldivenden yapın.
   2. RV basınç hattını hazırlayın: Miyokarddan takılmayı kolaylaştırmak için steril 36'' basınç tüpünün erkek ucunu 30° açıyla kesin. Basınç çizgisini karavan içine yerleştirmek için en uygun derinlikte işaretlemek için 2-0 ipek kravat kullanın.
   3. 11 bıçaklı neşter kullanarak, daha önce yerleştirilmiş çanta ipli dikiş içinde RVOT serbest duvarında küçük bir kardiyotomi yapın. Kanamayı manuel basınçla veya çanta-ip dikişi üzerindeki tuzakları sıkılaştırarak kontrol edin.
      NOT: Çanta-string dikiş içindeki RV dokusunu örnekleyerek bu adımda RV serbest duvarının temel biyopsisini elde edin. Bu biyopsi bölgesi daha sonra RV basınç hattının giriş noktası olarak hizmet edebilir.
   4. Basınç tüpünün kesik ucunu RV çıkış kanalına (RVOT) yerleştirin ve sabitleyin. Çanta ipini bağlayın ve ardından basınç hattını sabitlemek için çanta ipini basınç tüpüne sabitleyin.
8. RVOT basınç hattına ek bir basınç tüpü bağlayarak RVOT boruyu genişletin.
9. Boruyu bir basınç dönüştürücüye bağlamak ve taban çizgisi RV basıncının ölçümünü izlemek için ek basınç borularını steril olmayan bir tasarıma teslim edin. Basınç dönüştürücüse aşağıdaki gibi ayarlayın.
   1. IV yönetim setini erkek luer ucini dönüştürücünün dişi luer ucuna bağlayın.
   2. Basınç tüpünün dişi luer ucunu dönüştürücünün erkek luer ucuna bağlayın.
   3. IV yönetimini heparinize edilmiş bir tuzlu su torbasına (2 IU/mL) sokun.
   4. Tuzlu su torbasını bir basınç torbasına takın ve basınç torbasını göstergede belirtildiği gibi 250-300 mmHg'ye pompala.
   5. Vanayı dönüştürücüye bırakarak hattı tamamen astarlayarak uygun havalandırmayı sağlayın.
   6. Dönüştürücü kalibrasyon için Tamamlayıcı Yöntemleri izleyin.
10. LPA'nın etrafını dikkatlice parçalayarak göbek bandıyla çevreleyin. Göbek bantını bağlayarak LPA'yı lige edin. Çalışmayla ilgiliyse, hayvanın ligasyona hemodinamik yanıtına dikkat edin. LPA ligasyonu üzerine oluşturulan artan ölü alan havalandırmasını telafi etmek için dakika havalandırmasını artırın. Bu ventilatör ayarlamaları solunum asidozu azaltır.
11. RVOT basınç hattından RV basıncını izlerken sızıntı olmadığından emin olmak için ana PA oklüderine yavaşça 3 mL'ye kadar salin enjekte edin. RV yanıtı onaylandıktan sonra, aşılanan salini geri çekin.
12. RVOT basınç hattını ve PA oklüder borularını göğüsten torakotomi kesisinin bir interkostal boşluk altından çıkarın.
13. Koyunun sol dorsumunda, steril alanda mümkün olduğunca omurgaya doğru arka tarafta iki subdermal cep oluşturur. Bunlar, indwelling bağlantı noktaları için siteler olarak hizmet vermektedir (Şekil 2C).
14. Göğüs tüpü çekeceği kullanarak, RVOT basınç hattını ve oklüder borularını göğüs kesisinden sol dorsum bağlantı noktası bölgelerine tüneller.
15. Limanın diken bağlantılarına hem tıkayıcı boru hem de RV basınç hattını sabitleyin. Tıkayıcıyı ve basınç borularını bağlantı noktası konnektörlerinin etrafına ek bağcıklarla tutturın. Bağlantıyı korumak için sağlanan dikenli konnektör bağlantı elemanını kullanın (Şekil 1C). Bağlantı noktalarını önceden oluşturulmuş alt ceplere oturt.
16. Liman göçünü önlemek için bağlantı noktalarını jantının etrafındaki üç yere 3-0 polipropilen dikiş ile alttaki fasyaya tutturun. Deri altı dokusunu, dermisini ve cildi poliglactin 910 dikişli katmanlar halinde yeniden onaylayın. Bağlantı noktalarının yoğun erişimiyle basınç okumalarını yeniden doğrula. RVOT portunu 5 mL (1000 IU/mL, 5000 birim) heparin sodyum ile yıkayın.
17. Sol plevral boşluğa ayrı bir kesiden 16 Fransız göğüs tüpü yerleştirin, cilde sabitleyin ve ardından -20 cm·_H2O basınçta kapalı bir göğüs tüpü drenaj ünitesine bağlayın.
18. Ameliyat sonrası analjezi için interkostal sinir bloğu (0.5-1 mg/kg bupivacaine) uygulanır.
19. Torakotomiyi sekiz, #2 poliglactin 910 dikiş ile kapatın. Pektoralis kas tabakasını #0 poliglactin 910 çalıştırarak kapatın. Deri altı dokusunu çalışan #2-0 poliglactin 910 dikiş katmanlarında kapatın ve cildi zımbalayın.
20. Hayvanı dorsal reumbency için yeniden konumlandırın, orogastrik tüpü çıkarın ve ardından izoflurane son ver.
21. Arteriyel kan pH'ı 7,35 > ve _pCO2 55 mmHg'< kadar mekanik ventilasyona ve destekleyici bakıma devam edin.
22. Hayvan kendiliğinden nefes aldığında, başını kaldırdığında ve endotrakeal tüpü çiğnedikten sonra ekstübat. Tam anestezik iyileşmeden önce göğüs tüpünü çıkarın. Göğüs tüpü kesisini kapatmak için U dikişini bağlayın.
23. Anestezi iyileşmesini izlerken hayvanı kafesine aktarın. Koyun hareketsiz kalırken ek oksijenin (yüz maskesiyle 3-5 L/dk) her zaman mevcut olduğundan emin olun. İlk 4 saat için her saat, sonraki 24 saat için her 8 saatte bir ve bundan sonra günde bir kez hayati belirtileri izleyin.

5. Ameliyat sonrası iyileşme

1. Torakotomi ve port implantasyon bölgelerini her gün enfeksiyon belirtileri açısından izleyin. İşlemden sonra 24 saat içinde ve bundan sonra 1 hafta boyunca her 3-4 günde bir uzun etkili antibiyotik (ceftiofur, 5 mg/kg intramüsküler olarak) uygulayın.
2. Toplam 72 saat boyunca fentanil yamasına ameliyat sonrası devam edin. Bundan sonra, hayvan ağrı belirtileri göstermeye devam ederse (örneğin, diş gıcırdatma, kalp atış hızı yükselmesi) ek analjezi (örneğin, meloksikam, günde bir kez intramüsküler olarak 1 mg / kg) sağlayın.
3. Dış dikişleri ve cilt zımbalarını ameliyattan 10-14 gün sonra veya veteriner personelinin önerdiği şekilde çıkarın.
4. Borulu bir pansuman kullanarak liman sahalarını çevredeki yapılara karşı sürtünen veya kazıyan hayvandan liman sahasının korunmasını sağlayın (Şekil 2D).

6. Kronik PA bantlama (9 - 10 hafta)

1. Koyunları küçük bir muhafazaya aktarın. Yerleştirilen bağlantı noktalarının etrafındaki fazla yünü kesin.
2. Tıraş edilen alanları % 70 izopropil alkolle temizleyin. Lokal anestezi için topikal lidokin spreyi uygulayın.
3. RV ve oklüder manşet basınçlarını izlemek için iki basınç dönüştürücü hazırlayın (Şekil 3A).
   1. Her iki dönüştürücü için: Basınç tüpünün dişi luer ucunu (36 in veya daha uzun) dönüştürücünün erkek luer ucuna bağlayın. Basınç tüpünün erkek luer ucunu üç yönlü bir stopcock üzerindeki dişi luer bağlantılarından birine bağlayın. Son olarak, 22 G Huber iğnesini o üç yönlü stopcock'un erkek ucuna bağlayın.
   2. RV basınç dönüştürücüsü için: Heparinize salin torbası (2 IU/mL) asın, torbayı IV uygulama seti ile delin ve IV yönetim setinin erkek luer bağlantısını RV basınç dönüştürücüsünün dişi luer bağlantısına bağlayın. Ardından, tuzlu su torbasını (örneğin, basınç torbası) bastırın.
   3. Oklüder dönüştürücü için: Dönüştürücü ve basınç tüpünü tam olarak astarın. Manşet sıvısının dönüştürücüye geri sızmasını önlemek için basınç dönüştürücüslerinin dişi ucuna bir erkek luer kapağı takın.
   4. Her iki dönüştürücü de uygun bir kablo veya bağdaştırıcı kullanarak veri toplama donanımına bağlayın.
4. Dönüştürücüleri Ek Dosya 1'de belirtildiği şekilde kalibre edin.
5. RV ve PA manşet basıncı dalga formlarını 400 Hz'de yakalamak için veri toplama yazılımını kaydetmeye başlamak için yazılım penceresinin sağ üst kısmındaki Başlat'a tıklayın.
6. Bir asistanın liman erişiminden önce hayvanın hafif bir şekilde kısıtlanmasını sağlayın. Huber iğnesini RV basınç dönüştürücüsten RV bağlantı noktasına yerleştirin. Üç yönlü stopcock'a 10 mL şırıngır takın ve RV portundan şırınna kan çekmeye çalışın (Şekil 3B).
   1. Şırındırı geri çekmek zorsa, tıkanıklık kaynağını yerinden çıkarmak için önce RV portuna 5-10 mL salin enjekte edin.
   2. Tıkanma devam ederse, fibrinolitik ajan olarak porta 2 mg doku plazminojen aktivatör (tPA) aşıla ve bir gece beklet. TPA'yı aspire etmek için ertesi günü kontrol edin.
7. RV basınç hattı kurulduktan sonra, Huber iğnesini PA manşet dönüştürücüsundan bağlayın.
8. RV ve PA manşet basınçlarının başlangıç değerlerini yakalayın (Şekil 3C). Önceki okumalardaki önemli değişikliklere dikkat edin.
   1. PA manşeti ve/veya RV basıncı önceki okumadan önemli ölçüde düştüyse, PA manşetinin sızdırdığının bir işareti olabilir.
   2. PA manşet dalga biçimini inceleyerek PA manşet sızıntısının başka bir belirgin belirtisini gözlemleyin. Ortalama PA manşet basıncı belirgin bir hızda düşerse, manşetin sızma olasılığı yüksektir.
      NOT: Basınç dönüştürücüsü, boru ve stopcock üzerindeki tüm luer bağlantılarının sıkılıp sıkıldığını yeniden kontrol edin. PA manşetinden gelen yüksek basınçlı sıvı içeriği geri akabilir ve gevşek luer bağlantılarından sızabilir.
      1. PA manşeti sızdırıyorsa, sızıntının boyutunu belirleyin. Sızıntı oranı yavaşsa, hastalık modelini hala etkili hale getirmek için daha sık bir bantlama stratejisi sızıntının üstesinden gelebilir.
9. RV ve manşet basınçlarına dikkat ederken oklüder portuna yavaşça% 3 hipertonik salin enjekte edin.
   1. Enjeksiyon miktarını istenen PH hastalığı şiddetine ve RV fenotipine göre ayarlayın. Manşet basıncının haftalık 100-150 mmHg artması, uyarlanabilir bir telafi edici RV fenotipi geliştirmek için makul bir hedeftir.
   2. Manşet basıncındaki daha hızlı artışlar (haftada >250 mmHg) muhtemelen telafi edici bir RV fenotipi üretecektir.
10. PA manşeti istenen miktarda şişirildikten sonra Huber iğnesini manşet portundan çıkarın.
11. Karavan portundan kan örneği alın.
    1. RV portunun 10 mL kanını steril bir şekilde aspire edin ve bir kenara koyun.
    2. Aspirasyon şırıngının yerine yeni bir şırıngın yerleştirin ve toplam kan hacminin% 7,5'i olan haftalık kan çekme sınırını aşmadan gerektiği kadar kan emiş edin.
    3. Orijinal şırındırı aspire kanla yeniden bağlayın ve RV portundan geri verin.
    4. Heparinize salinleri salin torbasından RV portuna yıkamak için basınç dönüştürücüsunun valf kolunu çekin. Tüm çizgi netleşene ve renksiz hale gelene kadar yıkamaya devam edin.
12. Karavan portunu 10 mL tuzlu su ile yıkayın. Daha sonra, limanı 5 mL 1000 U/mL heparin sodyum ile daha da yıkayın.
13. 9-10 hafta boyunca her 1-4 günde bir 6.1-6.12 adımlarını tekrarlayın.

Sonuçlar

12 koyundan oluşan temsili bir grup, bu modelin çeşitli derecelerde PH-RVF geliştirmek için etkinliğini göstermek için kullanılır. Bu koyunlar arasında ortalama PA manşet basıncı 1. haftada 32 ± 20 mmHg'den 1002'ye ± 9. haftada 429 mmHg'ye yükseldi. Bu, RV ortalama ve sistolik basınçların 1. haftada sırasıyla 28 ± 5 ve 57 ± 7 mmHg'den 9. haftaya kadar 44 ± 7 ve 93 ± 18 mmHg'ye yükseltilmesine neden oldu. Ayrıca PA manşet basıncı profili, modelin ince ayarlı hastalık fenotipinin etkinliği...

Tartışmalar

Sunulan PH-RVF modeli, araştırmanın hedeflerine uygun olarak farklı hastalık şiddeti düzeylerini güvenilir bir şekilde teşvik edebilir. Bu hastalık modelini indük etmek için birlikte iki farklı yaklaşım kullanılmaktadır. İlk olarak, LPA ligasyonu pulmoner vasküler direnci artırmaya ve PA kapasitansını düşürmeye hizmet ^eder11,12, böylece kronik modelin başlangıç noktasını zaten artmış bir RV artçı durumunda kurar. Daha sonra PA ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.9% Sodium Chloride Irrigation Pour Bottle by Baxter Healthcare, 1000 mL	Medline	BHL2F7124	Surgical Disposable
0.25% Bupivacaine	Hospira Inc	0409-1160-18	Medication, Intra-Operative
0.9% Normal Saline, 1000 mL	Baxter Healthcare Corp	0338-0049-04	Medication, Intra-Operative
0.9% Normal Saline, 500 mL	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0049-03	Medication, Chronic PH
16 mm Heavy Duty Occluder with actuating tubing	Access Technologies	OC-16HD	Surgical Disposable
3-mL Skin Prep Applicator	Medline	MDF260400	Surgical Disposable
70% isopropyl alcohol prep pads	Medline	MDS090670	Disposable, Chronic PH
Adhesive bandage tape	Patterson Veterinary		Disposable, Chronic PH
Adson forceps	V. Mueller	NL1400	Surgical Instrument
Allis tissue forceps	V. Mueller	CH1560	Surgical Instrument
Aortic clamp, straight (bainbridge forceps)	V. Mueller	SU6001	Surgical Instrument
Backhaus towel forceps	V. Mueller	SU2900	Surgical Instrument
Bags, Infusion: Nonsterile Novaplus Infusion Bag, 500 mL	Medline	TCV4005H	Disposable, Chronic PH
Berry sternal needle holder	V. Mueller	CH2540	Surgical Instrument
Blades, Electrode: Electrode Blade, 6.5", with 0.24 cm Shaft	Medline	VALE15516	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #10	Medline	B-D371210	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #11	Medline	B-D371211	Surgical Disposable
Blades: Stainless-Steel Sterile Surgical Blade, Size #15	Medline	B-D371215	Surgical Disposable
BNC Male to BNC Male Cable	Digi-Key	415-0198-036	Equipment
Castroviejo needle holder	V. Mueller	CH8589	Surgical Instrument
Cefazolin	Apotex Corp	60505-6142-0	Medication, Intra-Operative
Ceftiofur Crystalline Free Acid	Zoetis Inc	54771-5223-1	Medication, Post-Operative
Chest Drain, with Dry Suction, Adult-Pediatric	Medline	DEKA6000LFH	Surgical Disposable
Chest tube passer	V. Mueller	CH04189	Surgical Instrument
COnfidence Flowprobes for Research (PAU-Series)	Transonic	24PAU	Equipment, Perivascular Flow Probe
Cooley tangential occlusion clamp	V. Mueller	CH6572	Surgical Instrument
Data Acquisition Hardware	ADInstruments	PowerLab 16/30	Equipment
DeBakey Aorta clamp	V. Mueller	CH7247	Surgical Instrument
DeBakey multi-purpose clamp	V. Mueller	CH7276	Surgical Instrument
Debakey tissue forceps, 12’’	V. Mueller	CH5906	Surgical Instrument
Debakey vascular tissue forceps 7 3/4’’	V. Mueller	CH5902	Surgical Instrument
Debakey vascular tissue forceps, 9’’	V. Mueller	CH5904	Surgical Instrument
Electrosurgical Generator	Covidien	Force FX-C	Equipment
Endotracheal Tube, 10mm	Patterson Veterinary	07-882-9008	Surgical Disposable
Enrofloxacin	Norbrook Laboratories Limited	55529-152-05	Medication, Intra-Operative
Fentanyl Transdermal Patch	Apotex Corp	60505-7007-2	Medication, Pre-Operative
Ferris smith tissue forceps	V. Mueller	SU2510	Surgical Instrument
Finochietto rib spreaders, large	V. Mueller	CH1220-1	Surgical Instrument
Finochietto rib spreaders, medium	V. Mueller	CH1215-1	Surgical Instrument
Flexsteel ribbon retractor, 1” x 13”	V. Mueller	SU3340	Surgical Instrument
Flexsteel ribbon retractor, 2” x 13”	V. Mueller	SU3346	Surgical Instrument
Foerster sponge forceps, curved	V. Mueller	GL660	Surgical Instrument
Gauze Sponges: Sterile X-ray Compatible Gauze Sponges, 16-Ply, 4" x 4"	Medline	PRM21430LFH	Surgical Disposable
Gerald-DeBakey forceps	V. Mueller	CH04242	Surgical Instrument
Glassman Allis	V. Mueller	SU6152	Surgical Instrument
Halsted mosquito forceps	V. Mueller	SU2702	Surgical Instrument
Harken clamp	V. Mueller	CH6462	Surgical Instrument
Heat Therapy Pump	Gaymar/Stryker	TP-400	Equipment
Heparin	Fresenius Kabi,	63323-540-31	Medication, Chronic PH
Hospira Primary IV Sets, 80"	Patterson Veterinary	07-835-0123	Surgical Disposable
Hypertonic saline 3%	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0054-03	Medication, Chronic PH
Hypodermic Needle with Bevel and Regular Wall, 20 G x 1"	Medline	B-D305175Z	Disposable, Chronic PH
Interface Cable, Edwards LifeScience Transducer to ADInstruments  Bridge Amplifier	Fogg System	0395-2434	Equipment
Intravenous Infusion Pump	Heska	Vet/IV 2.2 Infusion Pump	Equipment
Isoflurane	Patterson Veterinary	14043-704-06	Medication, Pre-Operative
Kantrowitz thoracic clamp, 9-1/2”	V. Mueller	CH1722	Surgical Instrument
Kelly hemostats	V. Mueller	88-0314	Surgical Instrument
Lidocaine HCl, 2.46%	PRN Pharmacal,	49427-434-04	Medication, Chronic PH
Ligaclip Multiple-Clip Appliers by Ethicon	Medline	ETHMCS20	Surgical Disposable
Loop, Vessel, Mini, Red, 2/pk, Sterile	Medline	DYNJVL12	Surgical Disposable
Lorna non-perforating towel forceps	V. Mueller	SU2937	Surgical Instrument
Mayo dissecting scissors, curved	V. Mueller	SU1826	Surgical Instrument
Mayo dissecting scissors, straight	V. Mueller	SU1821	Surgical Instrument
Medipore Dress-It Pre-Cut Dressing Covers by 3M	Medline	MMM2955Z	Surgical Disposable
Meloxicam	Patterson Veterinary	14043-909-10	Medication, Post-Operative
Mixter thoracic forceps, 9”	V. Mueller	CH1730-003	Surgical Instrument
Mosquito hemostats	V. Mueller	88-0301	Surgical Instrument
Multi-Channel Research Consoles	Transonic	T402/T403	Equipment, Perivascular Flow Meter
Multi-Lumen Central Venous Catheterization Kits	Medline	ARW45703XP1AH	Surgical Disposable
Multi-Parameter Vital Signs Monitor	Smiths Medical	SurgiVet Advisor 3	Equipment
Needles: Hypodermic Needle with Regular Bevel, Sterile, 18 G x 1.5"	Medline	B-D305185Z	Surgical Disposable
No. 3 knife handle	V. Mueller	SU1403-001	Surgical Instrument
No. 7 knife handle	V. Mueller	SU1407	Surgical Instrument
Non-Vented Male Luer Cap	Qosina	13614	Disposable, Chronic PH
Octal Bridge Amplifier	ADInstruments	FE228	Equipment
Ophthalmic Ointment	Akorn Animal Health	59399-162-35	Medication, Pre-Operative
Penrose Tubing, 6 mm x 46 cm, 11 mm Flat	Medline	SWD514604H	Surgical Disposable
Perma-Hand Black Braided Silk:  2-0 SH Taperpoint Needle, Control Release, 30"	Medline	ETHD8552	Surgical Disposable
Perma-Hand Suture, Black Braided, Size 0, 6 x 30”	Medline	ETHA306H	Surgical Disposable
Perma-Hand Suture, Black Braided, Size 4-0, 12 x 30"	Medline	ETHA303H	Surgical Disposable
Phenylephrine	West-Ward	0641-6142-25	Medication, Intra-Operative
Polyhesive Cordless Patient Return Electrodes, Adult	Medline	SWDE7509	Surgical Disposable
Port-A-Cath Huber Needle, Straight, 22 G x 1-1/2"	Medline	AAKM21200724	Disposable, Chronic PH
PROLENE Monofilament Suture, Blue, Size 4-0, 36", Double Arm, RB-1 Needle	Medline	ETHD7143	Surgical Disposable
PROLENE Polypropylene Monofilament Suture, Blue, Double-Armed, RB-1 Needle, Size 5-0, 24"	Medline	ETH8555H	Surgical Disposable
Regional Block Needles, 22-gauge	Medline	B-D408348Z	Surgical Disposable
Schnidt tonsil artery forceps	V. Mueller	M01700	Surgical Instrument
Skin staple extractor	Medline	CND3031	Disposable, Chronic PH
Skin stapler 35 wide, with counter	Medline	STAPLER35W	Surgical Disposable
Sphygmomanometer	Medline		Equipment
Sponge bowl	V. Mueller	GE-75	Surgical Instrument
Sponge, Lap: X-Ray Detectable Sterile Lap Sponge, 18" x 18", 5/Pack	Medline	MDS241518HH	Surgical Disposable
Sponge, Peanut: X-Ray Detectable Sterile Peanut Sponge, Small, 3/8"	Medline	MDS72038	Surgical Disposable
Sterile Disposable Deluxe OR Towel, Blue, 17'' x 27'', 2/Pack	Medline	MDT2168202	Surgical Disposable
Sterile Luer-Lock Syringe, 3 mL	Medline	SYR103010Z	Disposable, Chronic PH
Sterile Luer-Lock Syringe, 5 mL	Medline	SYR105010Z	Disposable, Chronic PH
Sterile Surgical Equipment Probe Covers	Medline	DYNJE5930	Surgical Disposable
Stopcock: 3-Way Stopcock with Handle in OFF Position, Rotating Adaptor Male Collar Fitting, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Surgical Disposable
Stopcock: 3-Way Stopcock with Handle in OFF Position, Rotating Adaptor Male Collar Fitting, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Disposable, Chronic PH
Subcutaneous Port with 5-French Connector and Blue Boot	Access Technologies	CP2AC-5NC	Surgical Disposable
Super cut metzenbaum dissecting scissors	V. Mueller	CH2032-S	Surgical Instrument
Super cut nelson-metzenbaum dissecting scissors	V. Mueller	CH2025-S	Surgical Instrument
Syringes: Sterile Luer-Lock Syringe, 10 mL	Medline	SYR110010Z	Surgical Disposable
Thoracic Catheter, Straight, 28 Fr x 20"	Medline	SWD570549H	Surgical Disposable
Three-quarter surgical drape	Medline	DYNJP2414H	Surgical Disposable
Tiletamine + Zolazepam	Zoetis Inc	54771-9050-1	Medication, Pre-Operative
TourniKwik Tourniquet Set with Four 7.5" Bronze-Colored Tubes and 1 Snare, 12 French	Medline	CVR79013	Surgical Disposable
Transducer clip	Edwards LifeScience	TCLIP05	Equipment
Trigger Aneroid Gauge (Sphygmomanometer)	Patterson Veterinary	07-815-0464	Equipment
TruWave Disposable Pressure Transducer Kits by Edwards Lifesciences	Medline	VSYPX260	Surgical Disposable and Chronic PH
TS420 Perivascular Flow Module	Transonic	TS420	Equipment, Perivascular Flow Meter
Tubing, Suction: Sterile Universal Suction Tubing with Straight Ribbed Connectors, 1/4" x 12'	Medline	OR612	Surgical Disposable
Tubing: Pressure Monitoring Tubing with Fixed Male Luer Lock and Female Fitting, Low Pressure, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Surgical Disposable
Tubing: Pressure Monitoring Tubing with Fixed Male Luer Lock and Female Fitting, Low Pressure, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Disposable, Chronic PH
Tubular Elastic Dressing Retainer	Medline	DERGL711	Disposable, Chronic PH
Tuffier rib retractor	V. Mueller	CD1101	Surgical Instrument
Tygon E-3603 Flexible Tubings	Fisher Scientific	14-171-227	Surgical Disposable
U.S.A retractor	V. Mueller	SU3660	Surgical Instrument
Umbilical Tape, Cotton, 3-Strand, 1/8 x 36"	Medline	ETHU12TH	Surgical Disposable
Valleylab Button Switch Pencil	Medline	VALE2516H	Surgical Disposable
Vanderbilt deep vessel forceps	V. Mueller	CH1687	Surgical Instrument
Veterinary Anesthesia Machine	Midmark	Matrx VMC	Equipment
Veterinary Anesthesia Ventilator	Hallowell EMC	Model 2000	Equipment
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 0 CT-1 36" Suture	Medline	ETHVCP946H	Surgical Disposable
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 2 TP-1 Taper 54" Suture	Medline	ETHVCP880T	Surgical Disposable
Vicryl: Undyed Coated Vicryl 2-0 CT-1 18" Suture	Medline	ETHVCP739D	Surgical Disposable
Vital crile-wood needle holder, 10-3/8”	V. Mueller	CH2427	Surgical Instrument
Vital mayo-hegar needle holder, 7-1/4”	V. Mueller	CH2417	Surgical Instrument
Vital metzenbaum dissecting scissors, 14’’	V. Mueller	CH2009	Surgical Instrument
Vital metzenbaum dissecting scissors, 9”	V. Mueller	CH2006	Surgical Instrument
Vital ryder needle holder, 9”	V. Mueller	CH2510	Surgical Instrument
Yankauer, Bulb Tip: Sterile Rigid Yankauer with Bulb Tip, No Vent	Medline	DYND50130	Surgical Disposable