Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מראה כיצד להשיג "טביעת אצבע" ספקטרומטרית מסה של קרדיולפין לויקוציטים לאבחון תסמונת בארת. ההערכה של יחס מונו-קרדיוקרדיוליפין גבוה לקרדיולפין מפלה חולים עם תסמונת בארת מחולי אי ספיקת לב מבוקרת עם רגישות וספציפיות של 100%.

Abstract

קרדיולפין (CL), פוספוליפיד דימרי הנושא ארבע שרשראות חומצות שומן במבנהו, הוא סמן השומנים של המיטוכונדריה, שם הוא ממלא תפקיד מכריע בתפקוד הממברנה הפנימית. המטבוליט המונוליזוקרדיוליפין שלו (MLCL) כמעט נעדר מבחינה פיזיולוגית בתמצית השומנים של תאי בעלי חיים והופעתו היא סימן ההיכר של תסמונת בארת (BTHS), מחלה גנטית נדירה ולעתים קרובות מאובחנת באופן שגוי הגורמת לקרדיומיופתיה חמורה בינקותה. השיטה המתוארת כאן מייצרת "טביעת אצבע קרדיוליפינית" ומאפשרת בדיקה פשוטה של הרמות היחסיות של מיני CL ו-MLCL בפרופילי השומנים התאיים. במקרה של לויקוציטים, רק 1 מ"ל של דם נדרש כדי למדוד את יחס MLCL/CL באמצעות יינון ספיגת לייזר בסיוע מטריצה - ספקטרומטריית זמן טיסה/מסה (MALDI-TOF/MS) רק תוך 2 שעות מגמילה מהדם. הבדיקה פשוטה וניתן לשלב אותה בקלות בעבודה השגרתית של מעבדה לביוכימיה קלינית לבדיקת BTHS. הבדיקה מראה רגישות וספציפיות של 100% עבור BTHS, מה שהופך אותה לבדיקת אבחון מתאימה.

Introduction

תסמונת בארת (BTHS) היא מחלה נדירה הקשורה ל-X המאופיינת בקרדיומיופתיה בשלב מוקדם, מיופתיה של שרירי השלד, עיכוב גדילה, נויטרופניה, תפקוד לקוי של שרשרת הנשימה המיטוכונדרית המשתנה ומבנה מיטוכונדריאלי לא תקין 1,2,3,4,5. ל-BTHS יש שכיחות של מקרה אחד למיליון גברים עם כיום פחות מ-250 מקרים ידועים ברחבי העולם, אם כי מקובל שהמחלה סובלת מתת-אבחוןשל 2,6. BTHS נובע ממוטציות של אובדן תפקוד של הגן Tafazzin (TAFAZZIN) המותאם לכרומוזום Xq28.12 7,8 הגורמים לשיפוץ לקוי של קרדיולפין הפוספוליפיד המיטוכונדריאלי (CL), תהליך שבדרך כלל מוביל להרכב אציל סימטרי ובלתי רווי מאוד 9,10. CL נחשבה לשומנים הבולטים של המיטוכונדריה, שם היא מרכיב חשוב של הממברנה הפנימית, חיונית לזרחון חמצוני (כלומר, חילוף חומרים של אנרגיה מיטוכונדריאלית), היווצרות סופר-קומפלקס, יבוא חלבונים, ומעורבת בדינמיקה מיטוכונדריאלית, מיטופגיה ואפופטוזיס 11,12,13,14,15,16 . לאחר אובדן התפקוד של TAFAZZIN, שיפוץ CL נכשל והפרעות ספציפיות בפוספוליפידים מתעוררות במיטוכונדריה של חולי BTHS: רמת CL בוגרת (CLm) יורדת, בעוד שרמות מוגברות של מונוליזוקרדיוליפין (MLCL) והרכב אציל CL שונה (כלומר, מיני CL לא בשלים, CLi) מתרחשים. זה מביא לעלייה דרמטית של יחס MLCL/CL17.

אבחון של BTHS הוא לעתים קרובות קשה, שכן ההפרעה מציגה תכונות קליניות וביוכימיות משתנות ביותר ועשויה להיות שונה בין אנשים מושפעים מאותה משפחה ובתוך המטופל לאורך זמן 3,5. נערי BTHS רבים מראים רמה גבוהה מאוד של הפרשת שתן של חומצה 3-מתיל-גלוטקונית (3-MGCA), אך רמת השתן עשויה להיות נורמלית או רק עלייה קלה בחולים לאורך זמן3. עם זאת, עלייה של 3-MGCA היא תכונה של הפרעות מיטוכונדריאליות ולא מיטוכונדריאליות אחרות, כגון מחסור ב-3-מתיל-גלוטקוניל-CoA הידרטאז (פגם AUH), חומצה 3-מתיל-גלוטקונית, דיסטוניה-חירשות, אנצפלופתיה, תסמונת דמוית לי (MEGDEL), תסמונת קוסטף וקרדיומיופתיה מורחבת עם תסמונת אטקסיה (DCMA)18,19 . לפיכך, הספציפיות הירודה של 3-MCGA כסמן ל- BTHS והשונות העצומה בחולים הופכות את האבחנה הביוכימית לעמומה.

יתר על כן, תוארו למעלה מ-120 מוטציות שונות של TAFAZZIN הגורמות להפרעה5 , ולכן אבחנה גנטית יכולה להיות מסובכת, איטית ויקרה. יתר על כן, ניתוח מולקולרי של הגן TAFAZZIN יכול להוביל לתוצאות שליליות כוזבות בנוכחות מוטציות ברצפים שאינם מקודדים או מווסתים3. ניתן לבדוק את BTHS באופן חד משמעי על ידי קביעת הכמויות היחסיות וההתפלגות של מיני CL (מונוליסו-) ומאושרים על ידי ריצוף גנים של TAFAZZIN או להיפך.

בדיקה מעשית לאבחון היא מדידת יחס MLCL/CL על ידי כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים (HPLC) וניתוח אלקטרו ריסוס יינון / ספקטרומטריית מסה (ESI/MS) בכתמי דם20,21. מדידת רמת CL לבדה אינה מספקת לאבחון מכיוון שלחלק מהמטופלים יש רמות כמעט נורמליות של CL אך יחס MLCL/CL שונה. לכן, למדידת יחס MLCL/CL יש 100% רגישות וספציפיות לאבחון BTHS21. שיטה מאומתת נוספת המבוססת על ניתוח HPLC ו-ESI/MS הוקמה על לויקוציטים22, אך הטכניקות הכרומטוגרפיות המורכבות להפרדת שומנים שחולצו בעבר ויקרות המכשירים מגבילות ניתוח זה למספר מעבדות קליניות. כל הגורמים הללו, יחד עם היעדר בדיקה אבחנתית פשוטה, תרמו לתת-אבחון של המצב.

MALDI-TOF/MS הוא כלי תקף נוסף בניתוח שומנים23,24. טכניקה אנליטית זו יכולה לשמש כדי לקבל ישירות פרופילי שומנים של דגימות ביולוגיות שונות, ובכך לדלג על שלבי מיצוי והפרדה 25,26,27,28,29, כולל בקטעי רקמות עבור יישומי הדמיה של MS30. בהינתן יתרון זה, פותחה שיטה פשוטהומהירה לאבחון BTHS על ידי יצירת פרופיל CL מיטוכונדריאלי בלוקוציטים שלמים עם MALDI-TOF/MS. בידוד לויקוציטים רק מ 1 מ"ל של דם שלם על ידי שקיעה אריתרוציטים ותזה הוא פשוט ואינו דורש ציוד מיוחד או ריאגנטים. יתר על כן, פרוטוקול "מיני-מיצוי" של שומנים מהירים החל על כמויות זעירות של לויקוציטים תואר כמצדיק רכישה מוצלחת של ספקטרה בעלת אותות טרשת נפוצה נקיים יותר עם יחס אות לרעש גבוה יותר (S/N) מאשר באלה המתקבלים מלוקוציטים שלמים28. צעד נוסף זה לוקח מעט זמן ומאפשר לשחזר ניתוחים גם כאשר הם מבוצעים במכשירי טרשת נפוצה עם רגישות ירודה. לסיכום, השיטה האנליטית המתוארת כאן דורשת הכנת דגימה מינימלית מכיוון שניתן לדלג על הפרדת שומנים כרומטוגרפית גוזלת זמן ועבודה אינטנסיבית, ובכך להאיץ את הבדיקה.

Protocol

דגימות דם של תורמים בריאים וחולי אי ספיקת לב נאספו בבית החולים הפוליקליני בבארי (איטליה), בעוד שדגימות של חולי BTHS התקבלו על ידי מרפאת שירות הבריאות הלאומי בבריטניה BTHS בבית החולים המלכותי לילדים בבריסטול (בריטניה). התקבלו הסכמה מדעת בכתב של תורמים, מטופלים והורים בריאים (במידת הצורך) ואישורים של ועדות האתיקה המתאימות.

הערה: אם לא נעשה שימוש מיידי, ניתן לאחסן דם (בצינור ג'ל K-EDTA) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך עד 24-48 שעות.

1. בידוד של לויקוציטים על ידי שקיעה של תאי דם אדומים (RBCs)

  1. שים דגימות דם (ב- K-EDTA) על שייקר מסלולי במשך 10 דקות כדי לערבב דם.
  2. ל-0.9 מ"ל של דם שלם בצינור של 1.5 מ"ל, יש להוסיף 0.1 מ"ל של תמיסת דקסטרן של 20% (מסה מולקולרית > 100 kDa, ב-0.9% NaCl). פיפטה ופזרו את המתלים בעדינות 20 פעמים תוך הימנעות מבועות אוויר שאחרת היו שומרות על RBCs בחלק העליון של הצינור. תן RBCs משקעים במשך כשעה אחת בטמפרטורת החדר.
  3. באמצעות מזרק, לאסוף ולהעביר את הסופרנאטנט הצהוב לצינור 15 מ"ל, ולאחר מכן צנטריפוגה ב 400 x g במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (ללא בלם, רוטור דלי מתנדנד).
  4. יש להשליך את הסופרנטנט ולהחזיר את הכדור המכיל בעיקר לויקוציטים ושאריות RBCs ב-0.6 מ"ל של מים דו-מזוקקים קרים כקרח (ddH2O).
  5. לאחר ~ 15 שניות, הוסף 0.2 מ"ל של 0.6 M KCl למתלה התא כדי לשחזר את התנודות הנכונות. ההלם האוסמוטי הקצר ישקר את RBC וישאיר את הלויקוציטים שלמים. התאם את עוצמת הקול הסופית ל- 2.5 מ"ל עם 1x PBS.
  6. צנטריפוגה על המתלים ב 400 x g במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר (ללא בלם, רוטור דלי מתנדנד). יש להשליך את הסופרנטנט ולשטוף שוב את גלולת הלויקוציטים עם 2.5 מ"ל של 1x PBS.
  7. צנטריפוגה כמו בשלב 1.6 ולהשליך את הסופרנטנט. Resuspend את הכדור המכיל לויקוציטים ב 200 μL של ddHמעוקר 2O.
    הערה: מניסיונם של המחברים, זה מתאים לתכולת חלבון הנעה בין 200 מיקרוגרם ל-400 מיקרוגרם.
  8. הקפיאו את המתלים בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס או בצעו ישירות מיצוי שומנים באופן הבא.

2. "מיצוי מיני" של שומנים מלוקוציטים מבודדים

  1. מעבירים 20 μL של תרחיף לויקוציטים (כ-20-40 מיקרוגרם חלבונים) לצינור של 1.5 מ"ל ומסובבים ב-16,000 x גרם במשך 30 שניות.
  2. השליכו את הסופרנאטנט, הוסיפו 10 μL של CHCl3 לכדור הנותר, ופיפטה שוב ושוב כדי לקדם מיצוי שומנים.
  3. לבסוף, הוסיפו 10 μL של תמיסת מטריצה 9-aminoacridine (9-AA) (10 מ"ג/מ"ל 9-AA ב-2-פרופנול/אצטוניטריל, 60:40 v/v) לכדור ב-CHCl3. פיפטה ומפזרים שוב ושוב כדי לערבב.
  4. סובבו את התמיסה המכילה שומנים ב-CHCl3 ו-9-AA ב-16,000 x g במשך 30 שניות, ולאחר מכן הפקידו את ה-supernatant כטיפות של 0.35 μL (שלושה שכפולים עבור כל דגימה) על יעד MALDI (צלחת דגימה) שיש לנתח (שיטת תצהיר 'טיפות מיובשות').
  5. תנו לטיפות להתייבש לפחות למשך 10-15 דקות.

3. ניתוח שומנים על ידי MALDI-TOF/MS

  1. לרכוש ספקטרום מסה של דגימות במשולש על ספקטרומטר מסה MALDI-TOF.
  2. לאחר הכיול עם תקני השומנים (ראו טבלת חומרים), קבעו את הניתוחים במצב יונים שליליים ובצעו אופטימיזציה של טווח הגילוי m/z בין 200 Th ל-2,000 Th לניתוח מולקולות קטנות.
  3. שמור על שפעת הלייזר 5% מעל הסף (של CL ו- MLCL) כדי לקבל S/ N (לפחות 2).
  4. לרכוש ספקטרה במצב רפלקטור באמצעות חילוץ פועם מושהה. עבור כל ספקטרום מסה, ממוצע של 2,000 צילומי לייזר בודדים (סכום של 4 x 500). החל דיכוי מטריצה מגודרת על 400 Th כדי למנוע רוויית גלאי.

4. כיצד לחשב את היחס (MLCL + CLi)/CLm

  1. הפעל את תוכנת המכשירים MALDI-TOF/MS (ראה טבלת חומרים) כדי לנתח את הספקטרום הנרכש.
  2. באמצעות הפקודה פתח , פתח את תיבת הדו-שיח דפדפן ספקטרום המאפשרת בחירה וטעינה של ספקטרום העניין.
  3. בשורת התפריטים, לחץ על הסמלים ספקטרום מסה חלק והפחת את קו הבסיס של ספקטרום המסה.
  4. לחץ על קובץ > ייצוא ספקטרום מסה > ובחר בתבנית ASCII לייצוא הספקטרום כטבלה בת שתי עמודות עם זוגות של נקודות נתונים: m/z (x) ועוצמה (y). העתק והדבק את הקואורדינטות בתוכנית גיליון אלקטרוני (*.xls).
  5. חזור על שלבים 4.2 עד 4.4 עבור המשולשים של כל דגימה שנותחה, והדבק את הקואורדינטות באותו קובץ תוכנית גיליון אלקטרוני כפי שמוצג באיור 1 (שלב 1).
  6. בעקבות טווחי x המוצגים באיור 1 (שלב 2) עבור כל מין ברשימה, חישבו את הסכום של הערכים y1, y2 ו-y3 (משולשים) על ידי פונקציית SUM כדי לקבל את אזור השיא (איור 1; שלב 3).
  7. בצע את הממוצע של ערכי השטח המשולש לפי הפונקציה הממוצעת (איור 1; שלב 3).
  8. מקם את ערכי השטח הממוצעים עבור כל מין בעמודה כפי שמוצג באיור 1 (שלב 2).
  9. על מנת לשקול רק את האיזוטופולוג הראשון של המין CLm 72:7 כמוב-28, חישבו את התיקון האיזוטופי לחפיפה בין האיזוטופולוג M + 2 של CLm 72:8 לבין הפסגה המונאיזוטופית של CLm 72:7 כפי שמוצג באיור 1 (שלב 4).
  10. לבסוף, חשב את היחס (MLCL + CLi)/CLm כפי שמוצג באיור 1 (שלב 5).

תוצאות

במחקר זה תוארה שיטה פשוטה ומהירה לבידוד לויקוציטים מ-1 מ"ל של דם שלם ולהשגת טביעת אצבע CL על ידי MALDI-TOF/MS (ראו איור 2). איור 3 מראה את ההשוואה בין טביעת אצבע CL מייצגת של לויקוציטים, המתקבלת מנבדקי ביקורת לבין נערים צעירים מסוג BTHS, בטווח המסה CL וה-MLCL (m/z). טבל...

Discussion

תסמונת בארת היא טעות מולדת של חילוף חומרים ומצב משנה חיים שסביר להניח שיהיה מאובחןבתת-אבחנה של 2,6. כאמור, גורם תורם עשוי להיות היעדר בדיקת אבחון פשוטה. כאן תוארה שיטה פשוטה ומהירה למדידת יחס MLCL/CL על ידי MALDI-TOF/MS בלוקוציטים לצורך בדיקת BTHS. יתר על כן, ספקטרומטר...

Disclosures

כל המחברים מצהירים כי המחקר נערך בהיעדר כל קשר מסחרי או פיננסי שיכול להתפרש כניגוד עניינים פוטנציאלי.

Acknowledgements

אנו מודים לאנשים עם BTHS ולמשפחותיהם על השתתפותם במחקר שלנו. אנו מודים לקרן תסמונת בארת בארה"ב ולקרן תסמונת בארת בריטניה על תמיכתם ועל הסיוע באיסוף דגימות הדם בפגישה השנתית בבריסטול. מחקר זה מומן על ידי קרן תסמונת בארת ארה"ב, בארת איטליה אונלוס ואזור אפוליה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1,1′,2,2′-tetratetradecanoyl cardiolipinAvanti Polar Lipids750332Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,1′2,2′-tetra- (9Z-octadecenoyl) cardiolipinAvanti Polar Lipids710335Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-di- (9Z-hexadecenoyl)-sn-glycero-3-phosphoethanolamineAvanti Polar Lipids878130Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-sn-glycero-3-phosphateAvanti Polar Lipids830845Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-snglycero-3-phospho-(1′-rac-glycerol)Avanti Polar Lipids840445Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serineAvanti Polar Lipids840033Lipid standard for MALDI-TOF calibration
2-Propanol, ACS reagent, ≥99.5%Merck Life Science S.r.l.190764
9-Aminoacridine hemihydrate, 98%Acros Organics134410010
Acetonitrile, ACS reagent, ≥99.5%Merck Life Science S.r.l.360457
Chloroform, ACS reagent, ≥99.8%Merck Life Science S.r.l.319988
Dextran from Leuconostoc spp. Mr 450,000-650,000Merck Life Science S.r.l.31392
Flex Analysis 3.3Bruker DaltonicsSoftware
MALDI-TOF mass spectrometer Microflex LRFBruker Daltonics
Microsoft ExcelMicrosoft OfficeSoftware
OmniPur 10X PBS Liquid ConcentrateMerck Life Science S.r.l.6505-OP
Potassium chloride, ACS reagent, 99.0-100.5%Merck Life Science S.r.l.P3911
Sodium chloride, ACS reagent, ≥99.0%Merck Life Science S.r.l.S9888

References

  1. Barth, P. G., et al. X-linked cardioskeletal myopathy and neutropenia (Barth syndrome): respiratory-chain abnormalities in cultured fibroblasts. Journal of Inherited Metabolic Disease. 19 (2), 157-160 (1996).
  2. Steward, C. G., et al. syndrome (X linked cardiac and skeletal myopathy, neutropenia, and organic aciduria): rarely recognised, frequently fatal [abstract]. Archives of Disease in Childhood. 89, 48 (2004).
  3. Clarke, S. L. N., et al. Barth syndrome. Orphanet Journal of Rare Diseases. 8, 23 (2013).
  4. Zegallai, H. M., Hatch, G. M. Barth syndrome: cardiolipin, cellular pathophysiology, management, and novel therapeutic targets. Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (3), 1605-1629 (2021).
  5. Taylor, C., et al. Clinical presentation and natural history of Barth Syndrome: An overview. Journal of Inherited Metabolic Disease. 45 (1), 7-16 (2022).
  6. Miller, P. C., Ren, M., Schlame, M., Toth, M. J., Phoon, C. A. Bayesian analysis to determine the prevalence of Barth syndrome in the pediatric population. The Journal of Pediatrics. 217, 139-144 (2020).
  7. Bione, S., et al. A novel X-linked gene, G4.5. is responsible for Barth syndrome. Nature Genetics. 12 (4), 385-389 (1996).
  8. Whited, K., Baile, M. G., Currier, P., Claypool, S. M. Seven functional classes of Barth Syndrome mutation. Human Molecular Genetics. 22 (3), 483-492 (2013).
  9. Schlame, M., Ren, M., Xu, Y., Greenberg, M. L., Haller, I. Molecular symmetry in mitochondrial cardiolipins. Chemistry and Physics of Lipids. 138 (1-2), 38-49 (2005).
  10. Schlame, M., Xu, Y. The function of Tafazzin, a mitochondrial phospholipid-lysophospholipid acyltransferase. Journal of Molecular Biology. 432 (18), 5043-5051 (2020).
  11. Schlame, M., Rua, D., Greenberg, M. L. The biosynthesis and functional role of cardiolipin. Progress in Lipid Research. 39 (3), 257-288 (2000).
  12. Mileykovskaya, E., Dowhan, W. Cardiolipin membrane domains in prokaryotes and eukaryotes. Biochimica et Biophysica Acta. 1788 (10), 2084-2091 (2009).
  13. Claypool, S. M., Koehler, C. M. The complexity of cardiolipin in health and disease. Trends in Biochemical Sciences. 37 (1), 32-41 (2011).
  14. Ren, M., Phoon, C. K., Schlame, M. Metabolism and function of mitochondrial cardiolipin. Progress in Lipid Research. 55, 1-16 (2014).
  15. Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. Role of cardiolipin in mitochondrial function and dynamics in health and disease: Molecular and pharmacological aspects. Cells. 8 (7), 728 (2019).
  16. Acoba, M. G., Senoo, N., Claypool, S. M. Phospholipid ebb and flow makes mitochondria go. The Journal of Cell Biology. 219 (8), 03131 (2020).
  17. Schlame, M., et al. Phospholipid abnormalities in children with Barth syndrome. Journal of the American College of Cardiology. 42 (11), 1994-1999 (2003).
  18. Wortmann, S. B., et al. Inborn errors of metabolism with 3-methylglutaconic aciduria as discriminative feature: proper classification and nomenclature. Journal of Inherited Metabolic Disease. 36 (6), 923-928 (2013).
  19. Ikon, N., Ryan, R. O. On the origin of 3-methylglutaconic acid in disorders of mitochondrial energy metabolism. Journal of Inherited Metabolic Disease. 39 (5), 749-756 (2016).
  20. Kulik, W., et al. Bloodspot assay using HPLC-tandem mass spectrometry for detection of Barth syndrome. Clinical Chemistry. 54 (2), 371-378 (2008).
  21. Vaz, F. M., et al. An improved functional assay in blood spot to diagnose Barth syndrome using the monolysocardiolipin/cardiolipin ratio. Journal of Inherited Metabolic Disease. 45 (1), 29-37 (2022).
  22. Bowron, A., et al. Diagnosis of Barth syndrome using a novel LC-MS/MS method for leukocyte cardiolipin analysis. Journal of Inherited Metabolic Disease. 36 (5), 741-746 (2013).
  23. Sun, G., et al. Matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometric analysis of cellular glycerophospholipids enabled by multiplexed solvent dependent analyte-matrix interactions. Analytical Chemistry. 80 (19), 7576-7585 (2008).
  24. Leopold, J., Popkova, Y., Engel, K. M., Schiller, J. Recent developments of useful MALDI matrices for the mass spectrometric characterization of lipids. Biomolecules. 8 (4), 173 (2018).
  25. Angelini, R., Babudri, F., Lobasso, S., Corcelli, A. MALDI-TOF/MS analysis of archaebacterial lipids in lyophilized membranes dry-mixed with 9-aminoacridine. The Journal of Lipid Research. 51 (9), 2818-2825 (2010).
  26. Angelini, R., et al. Lipidomics of intact mitochondria by MALDI-TOF MS. The Journal of Lipid Research. 53 (7), 1417-1425 (2012).
  27. Angelini, R., Vormieter, G., Corcelli, A., Fuchs, B. A fast method for the determination of PC/LPC ratio in intact horse serum by MALDI-TOF-MS: an easy-to-follow lipid biomarker of inflammation. Chemistry and Physics of Lipids. 183, 169-175 (2014).
  28. Angelini, R., et al. Cardiolipin fingerprinting of leukocytes by MALDI-TOF/MS as a screening tool for Barth syndrome. The Journal of Lipid Research. 56 (9), 1787-1794 (2015).
  29. Lobasso, S., et al. A lipidomic approach to identify potential biomarkers in exosomes from melanoma cells with different metastatic potential. Frontiers in Physiology. 12, 748895 (2021).
  30. Angelini, R., et al. Visualizing cholesterol in the brain by on-tissue derivatization and quantitative mass spectrometry imaging. Analytical Chemistry. 93 (11), 4932-4949 (2021).
  31. Greco, V., et al. Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical proteomics. Expert Review of Proteomics. 15 (8), 683-696 (2018).
  32. Duncan, M., DeMarco, M. L. MALDI-MS: Emerging roles in pathology and laboratory medicine. Clinical Mass Spectrometry (Del Mar, Calif). 13, 1-4 (2019).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

181

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved