Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokol, Barth sendromunun teşhisi için lökosit kardiyolipinin kütle spektrometrik "parmak izinin" nasıl elde edileceğini göstermektedir. Yüksek monolizokardiyolipin-kardiyolipin oranının değerlendirilmesi, Barth sendromlu hastaları %100 duyarlılık ve özgüllüğü olan kontrol kalp yetmezliği hastalarından ayırmaktadır.

Özet

Yapısında dört yağ asidi zinciri taşıyan dimerik bir fosfolipid olan kardiyolipin (CL), mitokondrinin lipit belirtecidir ve burada iç zarın işleyişinde çok önemli bir rol oynar. Metaboliti monolizokardiyolipin (MLCL), hayvan hücrelerinin lipit ekstraktında fizyolojik olarak neredeyse yoktur ve görünümü, bebeklik döneminde ciddi kardiyomiyopatiye neden olan nadir ve sıklıkla yanlış teşhis edilen bir genetik hastalık olan Barth sendromunun (BTHS) ayırt edici özelliğidir. Burada açıklanan yöntem bir "kardiyolipin parmak izi" oluşturur ve hücresel lipit profillerinde CL ve MLCL türlerinin göreceli seviyelerinin basit bir analizine izin verir. Lökositler söz konusu olduğunda, matris yardımlı lazer desorpsiyon iyonizasyonu - uçuş süresi / kütle spektrometrisi ( MALDI-TOF / MS) yoluyla MLCL / CL oranını ölçmek için sadece 1 mL kan gerekir. Tahlil basittir ve BTHS'yi taramak için bir klinik biyokimya laboratuvarının rutin çalışmalarına kolayca entegre edilebilir. Test, BTHS için% 100 duyarlılık ve özgüllük gösterir ve bu da onu uygun bir tanı testi haline getirir.

Giriş

Barth sendromu (BTH), erken başlangıçlı kardiyomiyopati, iskelet kası miyopatisi, büyüme gecikmesi, nötropeni, değişken mitokondriyal solunum zinciri disfonksiyonu ve anormal mitokondriyal yapı 1,2,3,4,5 ile karakterize nadir görülen X'e bağlı bir hastalıktır. BTHS, şu anda dünya çapında bilinen 250'den az vaka ile milyon erkek başına bir vaka prevalansına sahiptir, ancak hastalığın 2,6 tanısının az olduğu yaygın olarak kabul edilmektedir. BTHS, Xq28.127,8 kromozomuna lokalize olan Tafazzin (TAFAZZIN) geninin fonksiyon kaybı mutasyonlarından kaynaklanır ve mitokondriyal fosfolipid kardiyolipinin (CL) eksik yeniden şekillenmesine neden olur, bu da normalde oldukça simetrik ve doymamış bir açil bileşimine yol açan bir süreç 9,10'dur. CL, oksidatif fosforilasyon (yani mitokondriyal enerji metabolizması), süperkompleks oluşumu, protein ithalatı için hayati önem taşıyan ve mitokondriyal dinamikler, mitofaji ve apoptoz 11,12,13,14,15,16 için hayati önem taşıyan iç zarın önemli bir bileşeni olduğu mitokondrinin imza lipiti olarak kabul edilmiştir. . TAFAZZIN'in fonksiyon kaybı üzerine, CL yeniden şekillenmesi başarısız olur ve BTHS hastalarının mitokondrilerinde spesifik fosfolipid anormallikleri ortaya çıkar: olgun CL seviyesi (CLm) azalırken, monolizokardiyolipin (MLCL) ve değişmiş CL açil bileşimi (yani, olgunlaşmamış CL türleri, CLi) düzeylerinde artış meydana gelir. Bu, MLCL / CL oranının17'sinde çarpıcı bir artışa neden olur.

BTHS tanısı genellikle zordur, çünkü bozukluk son derece değişken klinik ve biyokimyasal özellikler gösterir ve aynı aileden etkilenen bireyler arasında ve zaman içinde bir hasta içinde farklılık gösterebilir 3,5. Birçok BTHS erkek çocuğu, 3-metilglutakonik asidin (3-MGCA) idrar atılımının çok yüksek bir seviyesini gösterir, ancak idrar seviyesi normal olabilir veya zamanla hastalarda sadece hafif bir şekilde artabilir3. Bununla birlikte, artmış 3-MGCA, 3-metilglutakonil-CoA hidrataz eksikliği (AUH defekti), 3-metilglutakonik asidüri, distoni-sağırlık, ensefalopati, Leigh benzeri (MEGDEL) sendromu, Costeff sendromu ve ataksi (DCMA) sendromu ile dilate kardiyomiyopati gibi diğer çeşitli mitokondriyal ve mitokondriyal olmayan bozuklukların bir özelliğidir18,19 . Bu nedenle, BTHS için bir belirteç olarak 3-MCGA'nın zayıf özgüllüğü ve hastalardaki muazzam değişkenlik, biyokimyasal tanıyı belirsiz hale getirmektedir.

Ayrıca,bozukluğa neden olan 120'den fazla farklı TAFAZZIN mutasyonu tanımlanmıştır 5 ve bu nedenle genetik tanı karmaşık, yavaş ve pahalı olabilir. Ayrıca, TAFAZZIN geninin moleküler analizi, kodlamayan veya düzenleyen dizilerdeki mutasyonların varlığında yanlış negatif sonuçlara yol açabilir3. BTHS, (monolizo-) CL türlerinin nispi miktarları ve dağılımı belirlenerek açık bir şekilde test edilebilir ve TAFAZZIN gen dizilimi ile doğrulanabilir veya bunun tersi de geçerlidir.

Tanı için pratik bir test, MLCL / CL oranının Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) ve Elektro Sprey İyonizasyon / Kütle spektrometrisi (ESI / MS) analizi ile kan noktası20,21'de ölçülmesidir. Bazı hastalarda normale yakın CL düzeyleri olduğu halde MLCL/CL oranı değiştiği için CL düzeyinin ölçülmesi tek başına tanı için yeterli değildir. Bu nedenle MLCL/CL oranının ölçümü BTHS tanısı için %100 duyarlılık ve özgüllüğe sahiptir21. HPLC ve ESI/MS analizine dayanan bir başka doğrulanmış yöntem lökositler22 üzerinde kurulmuştur, ancak daha önce ekstrakte edilen lipitlerin ayrılması için karmaşık kromatografik teknikler ve cihazların pahalılığı bu analizi birkaç klinik laboratuvarla sınırlandırmaktadır. Tüm bu faktörler, basit bir tanı testinin eksikliği ile birlikte, durumun yetersiz teşhisine katkıda bulunmuştur.

MALDI-TOF/MS, lipid analizinde23,24 bir başka geçerli araçtır. Bu analitik teknik, çeşitli biyolojik örneklerin lipit profillerini doğrudan elde etmek için kullanılabilir, böylece MS Görüntüleme uygulamaları için doku kesitleri de dahil olmak üzere ekstraksiyon ve ayırma adımları25,26,27,28,29 atlanır 30. Bu avantaj göz önüne alındığında, MALDI-TOF / MS ile sağlam lökositlerde mitokondriyal CL'nin profilini çıkararak BTHS'yi teşhis etmek için basit ve hızlı bir yöntem geliştirilmiştir28. Eritrosit sedimantasyonu ve lizis ile sadece 1 mL tam kandan lökosit izolasyonu basittir ve özel ekipman veya reaktif gerektirmez. Ayrıca, küçük miktarlarda lökositlere uygulanan hızlı bir lipit "mini ekstraksiyon" protokolü, bozulmamış lökositlerden elde edilenlerden daha yüksek sinyal-gürültü oranına (S / N) sahip daha temiz MS sinyallerine sahip spektrumların başarılı bir şekilde elde edilmesini garanti etmek için tanımlanmıştır28. Bu ileri adım çok az zaman alır ve analizlerin zayıf hassasiyete sahip MS cihazlarında gerçekleştirildiğinde bile tekrarlanabilir olmasını sağlar. Özetle, burada açıklanan analitik yöntem minimum numune hazırlama gerektirir, çünkü zaman alıcı ve emek yoğun kromatografik lipit ayrımı atlanabilir, böylece test hızlandırılabilir.

Protokol

Sağlıklı donörlerin ve kalp yetmezliği hastalarının kan örnekleri Bari Poliklinik Hastanesi'nde (İtalya) toplanırken, BTHS hastalarının örnekleri Bristol Royal Çocuk Hastanesi'ndeki (İngiltere) Ulusal Sağlık Hizmeti İngiltere BTHS kliniği tarafından elde edildi. Sağlıklı donörlerin, hastaların ve ebeveynlerin (uygun olduğunda) yazılı bilgilendirilmiş onamları ve ilgili etik kurulların onayları alınmıştır.

NOT: Hemen kullanılmazsa, kan (K-EDTA jel tüpünde) 4 ° C'de 24-48 saate kadar saklanabilir.

1. Kırmızı kan hücrelerinin (RBC'ler) dekstran sedimantasyonu ile lökositlerin izolasyonu

  1. Kanı karıştırmak için kan örneklerini (K-EDTA'da) 10 dakika boyunca yörüngesel bir çalkalayıcıya koyun.
  2. 1.5 mL'lik bir tüpte 0.9 mL tam kana, 0.1 mL% 20 dekstran çözeltisi ekleyin (moleküler kütle > 100 kDa,% 0.9 NaCl'de). Pipetleyin ve süspansiyonu nazikçe 20 kez dağıtırken, aksi takdirde RBC'leri tüpün üstünde tutacak hava kabarcıklarından kaçının. RBC'lerin tortusunu oda sıcaklığında yaklaşık 1 saat bekletin.
  3. Bir şırınga kullanarak, sarı süpernatantı toplayın ve 15 mL'lik bir tüpe aktarın ve ardından oda sıcaklığında 15 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj yapın (fren yok, salıncak kovası rotoru).
  4. Süpernatantı atın ve esas olarak lökositler ve artık RBC'ler içeren peleti 0.6 mL buz gibi soğuk bi-damıtılmış suda (ddH2O) yeniden askıya alın.
  5. ~ 15 s'den sonra, doğru ozmolariteyi geri kazanmak için hücre süspansiyonuna 0,2 mL'lik 0,6 M KCl ekleyin. Kısa ozmotik şok RBC'yi lize edecek ve lökositleri sağlam bırakacaktır. Son ses seviyesini 1x PBS ile 2,5 mL'ye ayarlayın.
  6. Süspansiyonu oda sıcaklığında 15 dakika boyunca 400 x g'de santrifüj yapın (fren yok, salıncak kovası rotoru). Süpernatantı atın ve lökosit peletini 2,5 mL 1x PBS ile tekrar yıkayın.
  7. Adım 1.6'daki gibi santrifüj yapın ve süpernatanı atın. Lökosit içeren peleti 200 μL sterilize ddH2O'da yeniden askıya alın.
    NOT: Yazarların deneyimlerine göre, bu 200 μg ila 400 μg arasında değişen bir protein içeriğine karşılık gelir.
  8. Süspansiyonu -80 ° C'de dondurun veya aşağıdaki gibi doğrudan lipit ekstraksiyonu gerçekleştirin.

2. İzole lökositlerden lipitlerin "Mini ekstraksiyonu"

  1. 20 μL lökosit süspansiyonunu (yaklaşık 20-40 μg proteinler) 1.5 mL'lik bir tüpe aktarın ve 30 s için 16.000 x g'de döndürün.
  2. Süpernatanı atın, kalan pelete 10 μL CHCl3 ekleyin ve lipit ekstraksiyonunu teşvik etmek için tekrar tekrar pipet ekleyin.
  3. Son olarak, CHCl3'teki pelete 10 μL 9-aminoakridin (9-AA) matris çözeltisi (2-propanol / asetonitril içinde 10 mg / mL 9-AA, 60: 40 v / v) ekleyin. Pipet ve karıştırmak için tekrar tekrar dağıtın.
  4. CHCl 3 ve 9-AA'daki lipitleri içeren çözeltiyi30 s için 16.000 x g'de döndürün ve daha sonra süpernatantı analiz edilecek MALDI hedefi (numune plakası) üzerinde 0.35 μL'lik damlacıklar halinde (her numune için üç kopya) biriktirin ('kurutulmuş damlacık' biriktirme yöntemi).
  5. Damlacıkların havasını en az 10-15 dakika kurumaya bırakın.

3. MALDI-TOF/MS ile lipid analizi

  1. Bir MALDI-TOF kütle spektrometresinde üçlü olarak numunelerin kütle spektrumlarını elde edin.
  2. Lipid standartlarıyla kalibrasyondan sonra ( bakınız Malzeme Tablosu), analizleri negatif iyon modunda ayarlayın ve küçük molekül analizi için 200 Th ila 2.000 Th arasındaki algılama m / z aralığını optimize edin.
  3. Lazer akıcılığını, S / N'ye (en az 2) sahip olmak için eşiğin% 5 üzerinde (CL ve MLCL) tutun.
  4. Gecikmeli darbeli ekstraksiyonu kullanarak reflektör modunda spektrum elde edin. Her kütle spektrumu için ortalama 2.000 tek lazer atışı (4 x 500'ün toplamı). Dedektör doygunluğunu önlemek için 400 Th'ye kapılı matris bastırma uygulayın.

4. (MLCL + CLi) / CLm oranı nasıl hesaplanır

  1. Elde edilen spektrumları analiz etmek için MALDI-TOF/MS cihaz yazılımını çalıştırın (bkz.
  2. Aç komutunu kullanarak, ilgilenilen spektrumun seçilmesine ve yüklenmesine izin veren Spektrum Tarayıcısı iletişim kutusunu açın.
  3. Menü çubuğunda, Pürüzsüz Kütle Spektrumu simgelerine tıklayın ve Kütle Spektrumu Taban Çizgisini Çıkarın.
  4. Dosya > Kütle Spektrumunu Dışa Aktar>a tıklayın ve spektrumu veri noktası çiftleri içeren iki sütunlu bir tablo olarak dışa aktarmak için ASCII formatını seçin: m / z (x) ve yoğunluk (y). Koordinatları kopyalayıp bir e-tablo programına yapıştırın (*.xls).
  5. Analiz edilen her örneğin üçlüsü için 4.2 ile 4.4 arasındaki adımları yineleyin ve koordinatları Şekil 1'de (Adım 1) gösterildiği gibi aynı elektronik tablo program dosyasına yapıştırın.
  6. Listelenen her tür için Şekil 1'de (Adım 2) gösterilen x-aralıklarını takiben, tepe alanını elde etmek için SUM işleviyle y 1, y2 ve y3 değerlerinin toplamını (üçlü) hesaplayın (Şekil 1; Adım 3).
  7. Üçlü alan değerlerinin ortalamasını ORTALAMA fonksiyonuna göre gerçekleştirin (Şekil 1; Adım 3).
  8. Her türün ortalama alan değerlerini sütuna Şekil 1'de (Adım 2) gösterildiği gibi yerleştirin.
  9. CLm 72:7 türlerinin28'deki gibi sadece ilk izotopologunu göz önünde bulundurmak için, CLm 72:8'in M + 2 izotopologu ile CLm 72:7'nin monoizotopik zirvesi arasındaki örtüşme için izotopik düzeltmeyi Şekil 1'de gösterildiği gibi hesaplayın (Adım 4).
  10. Son olarak, Şekil 1'de (Adım 5) gösterildiği gibi (MLCL + CLi)/CLm oranını hesaplayın.

Sonuçlar

Bu çalışmada, lökositlerin 1 mL tam kandan izole edilmesi ve MALDI-TOF/MS ile CL parmak izinin alınması için basit ve hızlı bir yöntem tanımlanmıştır (bkz. Şekil 2). Şekil 3 , kontrol deneklerinden ve BTHS genç erkeklerinden elde edilen lökositlerin temsili CL parmak izinin CL ve MLCL kütle (m / z) aralığında karşılaştırılmasını göstermektedir. Tablo 1 , bu kütle spektrumlarında tespit edilen CL ve MLCL t...

Tartışmalar

Barth sendromu, doğuştan gelen bir metabolizma hatası ve 2,6'nın az teşhis edilmesi muhtemel olan yaşamı değiştiren bir durumdur. Daha önce de belirtildiği gibi, katkıda bulunan bir faktör, basit bir tanı testinin olmaması olabilir. Burada, BTHS taraması için lökositlerde MLCL / CL oranını MALDI-TOF / MS ile ölçmek için basit ve hızlı bir yöntem tanımlanmıştır. Ayrıca, MALDI-TOF kütle spektrometreleri dünya çapında klinik l...

Açıklamalar

Tüm yazarlar, çalışmanın potansiyel bir çıkar çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişkinin yokluğunda yapıldığını beyan eder.

Teşekkürler

BTHS'li bireylere ve ailelerine araştırmamıza katıldıkları için minnettarız. Barth Sendromu Vakfı ABD ve Barth Sendromu İngiltere Vakfı'na destekleri ve Bristol'deki yıllık toplantıda kan örneklerinin toplanmasına yardımcı oldukları için teşekkür ederiz. Bu çalışma Barth Sendromu Vakfı ABD, Barth Italia Onlus ve Apulia Bölgesi tarafından finanse edilmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1,1′,2,2′-tetratetradecanoyl cardiolipinAvanti Polar Lipids750332Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,1′2,2′-tetra- (9Z-octadecenoyl) cardiolipinAvanti Polar Lipids710335Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-di- (9Z-hexadecenoyl)-sn-glycero-3-phosphoethanolamineAvanti Polar Lipids878130Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-sn-glycero-3-phosphateAvanti Polar Lipids830845Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-snglycero-3-phospho-(1′-rac-glycerol)Avanti Polar Lipids840445Lipid standard for MALDI-TOF calibration
1,2-ditetradecanoyl-sn-glycero-3-phospho-L-serineAvanti Polar Lipids840033Lipid standard for MALDI-TOF calibration
2-Propanol, ACS reagent, ≥99.5%Merck Life Science S.r.l.190764
9-Aminoacridine hemihydrate, 98%Acros Organics134410010
Acetonitrile, ACS reagent, ≥99.5%Merck Life Science S.r.l.360457
Chloroform, ACS reagent, ≥99.8%Merck Life Science S.r.l.319988
Dextran from Leuconostoc spp. Mr 450,000-650,000Merck Life Science S.r.l.31392
Flex Analysis 3.3Bruker DaltonicsSoftware
MALDI-TOF mass spectrometer Microflex LRFBruker Daltonics
Microsoft ExcelMicrosoft OfficeSoftware
OmniPur 10X PBS Liquid ConcentrateMerck Life Science S.r.l.6505-OP
Potassium chloride, ACS reagent, 99.0-100.5%Merck Life Science S.r.l.P3911
Sodium chloride, ACS reagent, ≥99.0%Merck Life Science S.r.l.S9888

Referanslar

  1. Barth, P. G., et al. X-linked cardioskeletal myopathy and neutropenia (Barth syndrome): respiratory-chain abnormalities in cultured fibroblasts. Journal of Inherited Metabolic Disease. 19 (2), 157-160 (1996).
  2. Steward, C. G., et al. syndrome (X linked cardiac and skeletal myopathy, neutropenia, and organic aciduria): rarely recognised, frequently fatal [abstract]. Archives of Disease in Childhood. 89, 48 (2004).
  3. Clarke, S. L. N., et al. Barth syndrome. Orphanet Journal of Rare Diseases. 8, 23 (2013).
  4. Zegallai, H. M., Hatch, G. M. Barth syndrome: cardiolipin, cellular pathophysiology, management, and novel therapeutic targets. Molecular and Cellular Biochemistry. 476 (3), 1605-1629 (2021).
  5. Taylor, C., et al. Clinical presentation and natural history of Barth Syndrome: An overview. Journal of Inherited Metabolic Disease. 45 (1), 7-16 (2022).
  6. Miller, P. C., Ren, M., Schlame, M., Toth, M. J., Phoon, C. A. Bayesian analysis to determine the prevalence of Barth syndrome in the pediatric population. The Journal of Pediatrics. 217, 139-144 (2020).
  7. Bione, S., et al. A novel X-linked gene, G4.5. is responsible for Barth syndrome. Nature Genetics. 12 (4), 385-389 (1996).
  8. Whited, K., Baile, M. G., Currier, P., Claypool, S. M. Seven functional classes of Barth Syndrome mutation. Human Molecular Genetics. 22 (3), 483-492 (2013).
  9. Schlame, M., Ren, M., Xu, Y., Greenberg, M. L., Haller, I. Molecular symmetry in mitochondrial cardiolipins. Chemistry and Physics of Lipids. 138 (1-2), 38-49 (2005).
  10. Schlame, M., Xu, Y. The function of Tafazzin, a mitochondrial phospholipid-lysophospholipid acyltransferase. Journal of Molecular Biology. 432 (18), 5043-5051 (2020).
  11. Schlame, M., Rua, D., Greenberg, M. L. The biosynthesis and functional role of cardiolipin. Progress in Lipid Research. 39 (3), 257-288 (2000).
  12. Mileykovskaya, E., Dowhan, W. Cardiolipin membrane domains in prokaryotes and eukaryotes. Biochimica et Biophysica Acta. 1788 (10), 2084-2091 (2009).
  13. Claypool, S. M., Koehler, C. M. The complexity of cardiolipin in health and disease. Trends in Biochemical Sciences. 37 (1), 32-41 (2011).
  14. Ren, M., Phoon, C. K., Schlame, M. Metabolism and function of mitochondrial cardiolipin. Progress in Lipid Research. 55, 1-16 (2014).
  15. Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. Role of cardiolipin in mitochondrial function and dynamics in health and disease: Molecular and pharmacological aspects. Cells. 8 (7), 728 (2019).
  16. Acoba, M. G., Senoo, N., Claypool, S. M. Phospholipid ebb and flow makes mitochondria go. The Journal of Cell Biology. 219 (8), 03131 (2020).
  17. Schlame, M., et al. Phospholipid abnormalities in children with Barth syndrome. Journal of the American College of Cardiology. 42 (11), 1994-1999 (2003).
  18. Wortmann, S. B., et al. Inborn errors of metabolism with 3-methylglutaconic aciduria as discriminative feature: proper classification and nomenclature. Journal of Inherited Metabolic Disease. 36 (6), 923-928 (2013).
  19. Ikon, N., Ryan, R. O. On the origin of 3-methylglutaconic acid in disorders of mitochondrial energy metabolism. Journal of Inherited Metabolic Disease. 39 (5), 749-756 (2016).
  20. Kulik, W., et al. Bloodspot assay using HPLC-tandem mass spectrometry for detection of Barth syndrome. Clinical Chemistry. 54 (2), 371-378 (2008).
  21. Vaz, F. M., et al. An improved functional assay in blood spot to diagnose Barth syndrome using the monolysocardiolipin/cardiolipin ratio. Journal of Inherited Metabolic Disease. 45 (1), 29-37 (2022).
  22. Bowron, A., et al. Diagnosis of Barth syndrome using a novel LC-MS/MS method for leukocyte cardiolipin analysis. Journal of Inherited Metabolic Disease. 36 (5), 741-746 (2013).
  23. Sun, G., et al. Matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometric analysis of cellular glycerophospholipids enabled by multiplexed solvent dependent analyte-matrix interactions. Analytical Chemistry. 80 (19), 7576-7585 (2008).
  24. Leopold, J., Popkova, Y., Engel, K. M., Schiller, J. Recent developments of useful MALDI matrices for the mass spectrometric characterization of lipids. Biomolecules. 8 (4), 173 (2018).
  25. Angelini, R., Babudri, F., Lobasso, S., Corcelli, A. MALDI-TOF/MS analysis of archaebacterial lipids in lyophilized membranes dry-mixed with 9-aminoacridine. The Journal of Lipid Research. 51 (9), 2818-2825 (2010).
  26. Angelini, R., et al. Lipidomics of intact mitochondria by MALDI-TOF MS. The Journal of Lipid Research. 53 (7), 1417-1425 (2012).
  27. Angelini, R., Vormieter, G., Corcelli, A., Fuchs, B. A fast method for the determination of PC/LPC ratio in intact horse serum by MALDI-TOF-MS: an easy-to-follow lipid biomarker of inflammation. Chemistry and Physics of Lipids. 183, 169-175 (2014).
  28. Angelini, R., et al. Cardiolipin fingerprinting of leukocytes by MALDI-TOF/MS as a screening tool for Barth syndrome. The Journal of Lipid Research. 56 (9), 1787-1794 (2015).
  29. Lobasso, S., et al. A lipidomic approach to identify potential biomarkers in exosomes from melanoma cells with different metastatic potential. Frontiers in Physiology. 12, 748895 (2021).
  30. Angelini, R., et al. Visualizing cholesterol in the brain by on-tissue derivatization and quantitative mass spectrometry imaging. Analytical Chemistry. 93 (11), 4932-4949 (2021).
  31. Greco, V., et al. Applications of MALDI-TOF mass spectrometry in clinical proteomics. Expert Review of Proteomics. 15 (8), 683-696 (2018).
  32. Duncan, M., DeMarco, M. L. MALDI-MS: Emerging roles in pathology and laboratory medicine. Clinical Mass Spectrometry (Del Mar, Calif). 13, 1-4 (2019).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

BiyokimyaSay 181

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır