Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הזיהום של אלקלואידים פירוליזידין (PAs) בדגימות תה מעשבים המייצרים עשבים בשטחי הרשות הפלסטינית בגינות תה.

Abstract

אלקלואידים פירוליזידין רעילים (PAs) נמצאים בדגימות תה, אשר מהווים איום על בריאות האדם. עם זאת, המקור והתוואי של זיהום הרשות הפלסטינית בדגימות תה נותרו לא ברורים. בעבודה זו, פותחה שיטת ספיגה בשילוב עם UPLC-MS/MS כדי לקבוע 15 PAs בעשב Ageratum conyzoides L., A. conyzoides קרקע ריזוספרית, עלי תה טריים, ודגימות תה מיובש. ממוצע המחלימים נע בין 78%-111%, עם סטיות תקן יחסיות של 0.33%-14.8%. חמישה עשר זוגות של דגימות קרקע ריזוספריות של A. conyzoides ו-A. conyzoides ו-60 דגימות עלי תה טריים נאספו מגן התה Jinzhai בפרובינציית אנחווי, סין, ונותחו עבור 15 PAs. לא כל 15 ה-PAs התגלו בעלי תה טריים, למעט תחמוצת N (ImNO) וסנציונין (Sn). התוכן של ImNO (34.7 מיקרוגרם / ק"ג) היה גדול מזה של Sn (9.69 מיקרוגרם / ק"ג). בנוסף, הן ImNO והן Sn היו מרוכזים בעלים הצעירים של צמח התה, בעוד התוכן שלהם היה נמוך יותר בעלים הישנים. התוצאות הצביעו על כך שהרש"פ בתה הועברו דרך הדרך של עשבים שוטים המייצרים עשבים שוטים - אדמה - עלי תה טריים בגינות תה.

Introduction

כמטבוליטים משניים, אלקלואידים פירוליזידין (PAs) מגנים על צמחים מפני אוכלי עשב, חרקים ופתוגנים 1,2. עד כה, מעל 660 PAs ותחמוצות PA-N (PANOs) עם מבנים שונים נמצאו ביותר מ -6,000 מיני צמחים ברחבי העולם 3,4. צמחים המייצרים PA נמצאים בעיקר במשפחות מורכבים, Boraginaceae, Fabaceae ו- Apocynaceae 5,6. PAs מחומצנים בקלות לאלקלואידים לא יציבים של דהידרופירוליזידין, שיש להם אלקטרופיליות חזקה ויכולים לתקוף נוקלאופילים כגון DNA וחלבונים, וכתוצאה מכך נמק של תאי כבד, חסימות ורידיות, שחמת, מיימת ותסמינים אחרים 7,8. איבר המטרה העיקרי של רעילות הרשות הפלסטינית הוא הכבד. PAs יכולים גם לגרום לרעילות ריאות, כליות ואיברים אחרים ולרעילות מוטגנית, מסרטנת והתפתחותית 9,10.

מקרים של הרעלת בני אדם ובעלי חיים דווחו במדינות רבות כתוצאה מבליעה של עשבי תיבול מסורתיים, תוספי מזון או תה המכילים PAs או זיהום עקיף של מזונות כגון חלב, דבש או בשר (רעיל מבליעת מרעה המכיל PAs)11,12,13. ממצאי הרשות האירופית לבטיחות מזון (EFSA) מצביעים על כך שחומרים כגון תה (צמחי) הם מקור חשוב לחשיפה אנושית ל-PAs/PANOs14. דגימות תה אינן מייצרות PAs, בעוד שצמחים המייצרים PA נמצאים בדרך כלל בגני תה (למשל, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus ו- Ageratum conyzoides)15. בעבר נחשד כי התה עלול להיות מזוהם בחומרי PA ממפעלי הייצור שלהם במהלך הקטיף והעיבוד. עם זאת, נמצאו גם כמה עלי תה שנקטפו ביד (כלומר, ללא צמחים המייצרים ברש"פ), דבר המצביע על כך שחייבים להיות נתיבים או מקורות זיהום אחרים16. נערך ניסוי גידול משותף של סמרטוט (Senecio jacobaea) עם מליסה (Melissa officinalis), נענע חריפה (Mentha piperita), פטרוזיליה (Petroselinum crispum), קמומיל (Matricaria recutita) וצמחים nasturtium (Tropaeolum majus), והתוצאות הראו כי PAs זוהו בכל הצמחים הללו17. הוכח כי הרש"פ אכן מועבר ומוחלף בין צמחים חיים דרך אדמה18,19. Van Wyk et al.20 מצאו כי תה רויבוס (Aspalathus linearis) היה מזוהם קשות באתרים עשירים בעשבים והכיל PAs מאותו סוג ופרופורציה. עם זאת, לא נמצאו PAs בתה רויבוש באתרים נטולי עשבים.

נכון לעכשיו, ספקטרומטריית מסה טנדם של כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC-MS/MS) עם סלקטיביות ורגישות גבוהות נמצאת בשימוש נרחב בניתוח האיכותי והכמותי של PAs במוצרים חקלאיים ומזון21,22. שיטת הטיפול לדוגמה מורכבת בדרך כלל מיצוי פאזה מוצקה (SPE) או ניקוי QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) של תמציות מטריצות מזון מורכבות, אשר יכול להשיג את הרגישות הגבוהה ביותר האפשרית12,19. עם זאת, שיטות אנליטיות חזקות המאפשרות זיהוי וכימות של PAs במטריצות מורכבות כמו אדמה, עשבים שוטים ועלי תה טריים עדיין חסרות.

מחקר זה ניתח 15 PAs בדגימות תה מיובש, עלי תה טריים, עשבים שוטים ודגימות קרקע ריזוספריות של עשבים עם UPLC-MS/MS בשילוב עם שיטת טיהור סופג. יתר על כן, 15 דגימות קרקע ריזוספריות של עשבים ועשבים ו-60 דגימות עלי תה טריים נאספו מחמישה אתרי דגימה בגן התה ג'ינז'אי במחוז אנחווי, סין, ונותחו עבור 15 PAs. תוצאות אלה יכולות לספק שיטת סקר ומידע מסוים על המקור והמסלול של PAs (זיהום) בדגימות תה כדי להבטיח את האיכות והבטיחות של תה.

Protocol

לצורך המחקר הנוכחי נאספו מיני העשבים הבאים: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. ו-Crassocephalum crepidioides (בנט.) ש. מור. עלי התה הטריים נקטפו ממגוון עצי התה Longjing 43#, ודגימות התה המיובש היו תה זמין מסחרית שעובד בהתאם לתהליך ייצור התה הירוק (ראה טבלת חומרים).

1. איסוף דוגמאות

  1. אספו 40 דגימות אמיתיות.
    1. אספו 10 עשבים שוטים, 10 קרקעות ו-10 עלי תה טריים באופן אקראי ממספר גינות תה.
      הערה: במחקר הנוכחי, הקרקע נדגמה בעומק של 20 ס"מ עם כמות מדגם של 200 גרם.
    2. אספו באופן אקראי 10 מוצרי תה מיובשים (250 גרם) מסופרמרקט.
  2. אספו דגימות של עשבים שוטים, אדמה ועלי תה טריים כדי לחקור את מקור הזיהום של PAs בתה.
    1. קבעו חמש נקודות דגימה באותו גן תה, עם שלושה עותקים משוכפלים בכל נקודה.
    2. אספו דגימות עשבים מסוג Ageratum conyzoides L. עם תכולת הרש"פ הגבוהה ביותר הנפוצה בגינות תה.
      הערה: כמות המדגם הייתה 250 גרם עבור המחקר הנוכחי.
    3. אספו את דגימות הקרקע.
      הערה: דגימות הקרקע היו קרקע קנה שורש A. conyzoides בעומק של 20 ס"מ עם כמות דגימה של 200 גרם.
    4. אספו את עלי התה הטריים מחלקים שונים של צמחי התה, כולל ניצן אחד עם שני עלים, ניצן אחד עם שלושה עלים, ניצן אחד עם ארבעה עלים ועלים בוגרים.
      הערה: כמות הדגימה הייתה 250 גרם.

2. טיפול לדוגמה

  1. טפל בדגימות לפי השלבים הבאים.
    1. טוחנים את דגימות התה והאדמה המיובשים במטחנה, מעבירים את הדגימות המרוסקות דרך מסננת של 200 רשתות, ומאחסנים אותן בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
      הערה: התה המיובש היה מוצר תה זמין מסחרית (ראה טבלת חומרים), ולכן הוא נמעך ישירות ונופה לאחסון. דגימות הקרקע (200 גרם) הונחו במקום מאוורר בחושך לייבוש באוויר למשך כשבוע.
    2. הומוגניזציה של העשבים ועלי התה הטריים עם הומוגנייזר ואחסנו אותם ב -20 מעלות צלזיוס.
  2. בצע טיפול לדוגמה של מוצרי תה מיובשים, עלי תה טריים, ועשבים שוטים.
    1. שוקלים 1.00 גרם מכל דגימה (מוצרי תה מיובשים, עלי תה טריים ועשבים שוטים) ומניחים אותה בצינורות צנטריפוגות של 50 מ"ל.
    2. הוסף 10 מ"ל של תמיסת חומצה גופרתית 0.1 mol/L ומערבולת למשך 2 דקות למיצוי בשלב מוצק (באמצעות מחסנית SPE, ראה טבלת חומרים) ודקה לטיהור סופג. בצע חילוץ קולי23 במשך 15 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגה במשך 10 דקות במהירות של 9,390 x גרם בטמפרטורת החדר.
      הערה: כוחו של המתנד הקולי היה 290 W, תדירות התנודה הייתה 35 קילוהרץ, והטמפרטורה נקבעה ל -30 מעלות צלזיוס.
    3. מעבירים את הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל בעזרת טפטפת קצה פלסטיק.
    4. בצע את השלבים לעיל כדי לחזור על החילוץ פעם אחת. שלבו בין שני הסופרנאטנטים.
      1. הפעל את מחסניות SPE עם 5 מ"ל מתנול ו -5 מ"ל מים נטולי יונים. הוסף 10 מ"ל של supernatant למחסנית שהופעלה מראש ובצע ניקוי דגימה.
      2. לאחר שרמת התמיסה הדגימה הגיעה לשכבה העליונה של המחסניות, יש להדק את האנליטים עם 5 מ"ל של תמיסת חומצה פורמית 1% ולאחר מכן 5 מ"ל מתנול. השליכו את ה-eluate.
      3. יש לסנן עם 5 מ"ל מתנול (המכיל 0.5% מי אמוניה), לסנן את הפולט דרך מסנן קרום של 0.22 מיקרומטר, ולנתח באמצעות UPLC-MS/MS (ראה טבלת חומרים).
    5. בצע ניקוי לדוגמה באמצעות adsorbents.
      1. קח 2 מ"ל של supernatant (שלב 2.2.4) לתוך צינור צנטריפוגה 10 מ"ל מלא adsorbents של GCB:PSA:C18 (10 מ"ג: 20 מ"ג: 15 מ"ג, ראה טבלה של חומרים), מערבולת במשך 1 דקות, וצנטריפוגה ב 9,390 x גרם במשך 8 דקות בטמפרטורת החדר.
      2. להעביר 1 מ"ל של supernatant דרך מסנן קרום 0.22 מיקרומטר לפני ניתוח על ידי UPLC-MS/MS.
  3. לבצע טיפול בדגימות הקרקע.
    1. שוקלים דגימת קרקע של 1.00 גרם. מניחים אותו בצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל, ומוסיפים 0.1 מ"ל של תמיסת טריסודיום ציטראט 0.1 mol/L (ראה טבלת חומרים) כדי להתאים את ערך ה- pH של הקרקע ל- 6.0.
    2. אפשר לעמוד במשך 2 דקות, ולאחר מכן להוסיף 10 מ"ל של 0.1 mol / L חומצה גופרתית מתנול פתרון, מערבולת במשך 2 דקות לנער במשך 30 דקות, ולאחר מכן לבצע מיצוי קולי במשך 30 דקות.
    3. צנטריפוגה במשקל 9,390 x גרם למשך 10 דקות, ומעבירים את הסופרנאטנט לצינור צנטריפוגה בנפח 50 מ"ל עם טפטפת קצה פלסטיק.
    4. בצע את השלבים לעיל כדי לחזור על החילוץ ולשלב את supernatant פעמיים.
      הערה: שיטת הטיהור הייתה זהה לשלב 2.2.5.1 ולשלב 2.2.5.2.

3. ניתוח אינסטרומנטלי

  1. זהה את 15 PAs בדגימות תה מיובש, עלי תה טריים, עשבים ואדמה (דגימות משלב 2) באמצעות מערכת UPLC-MS/MS זמינה מסחרית (2.1 מ"מ x 100 מ"מ, 1.8 מיקרומטר) (ראה טבלת חומרים).
  2. הגדר את טמפרטורת העמודה ל- 40°C, את קצב הזרימה ל- 0.250 מ"ל/דקה ואת נפח ההזרקה ל- 3 μL.
  3. הגדר את השלב הנייד A: מתנול (המכיל 0.1% חומצה פורמית + 1 mmol / L אמוניום formate), ונייד שלב B: מים (מכיל 0.1% חומצה פורמית + 1 mmol / L אמוניום formate).
  4. הגדר הליך הדחה הדרגתית: 10% A מ-0.0 דקות עד 0.25 דקות, 10%-30% A מ-0.25 דקות עד 6.0 דקות, 30%-40% A מ-6.0 דקות עד 9.0 דקות, 40%-98% A מ-9.0 דקות עד 9.01 דקות שנמשך 1.9 דקות, ו-98%-100% A מ-11.0 דקות עד 11.1 דקות שנמשך 2.9 דקות.
  5. הגדר את פרמטרי ספקטרומטר המסה: מצב יינון, מקור יונים חיובי אלקטרוספריי (ESI+); לחץ אטומייזר, 7.0 בר; מתח נימי, 4.0 קילו וולט; חור מתחדד חזרה נושבת זרימה, 150 L / h; זרימת גז ממס, 800 L/h; טמפרטורת ממס, 400 °C; זרימת גז אימפקט, 0.25 מ"ל/דקה.

תוצאות

שיטת הטיהור והניתוח האופטימלית של 15 PAs בדגימות תה מיובש, עלי תה טריים, עשבים שוטים ואדמה נקבעה והושוותה לשיטת הטיהור הנפוצה באמצעות מחסנית SPE. התוצאות הראו כי השחזור של 15 PAs בדגימות תה מיובש, עשבים ועלי תה טריים באמצעות מחסנית SPE היה 72%-120%, בעוד שהשימוש בטיהור סופג היה 78%-98% (איור 1

Discussion

העבודה הנוכחית נועדה לפתח שיטה יעילה ורגישה לחקר נתיבי הזיהום והמקורות של PAs בדגימות תה, כמו גם את התפלגות הרש"פ בחלקים שונים של צמחי התה. עם זאת, במחקר זה, רק 15 PAs הופרדו בהצלחה על העמודה הכרומטוגרפית, שהוא מספר קטן מאוד בהשוואה למספר הגדול של אלקלואידים במיני צמחים 3,4

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (32102244), הפרויקט הלאומי לאיכות ובטיחות והערכת סיכונים של מוצרים חקלאיים (GJFP2021001), הקרן המדעית הטבעית של מחוז אנחווי (19252002) ומשרד החקלאות האמריקאי (HAW05020H).

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Acetonitrile (99.9%)Tedia Company,Inc.21115197CAS No:75-05-8
Ammonia (25%-28%)Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.181210CAS No:1336-21-6
Ammonium formate (97.0%)Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai)G0860050CAS No:540-69-2
Carbon-GCBCNWB7760030120-400 MESH, 10g. per box 
Centrifuge Z 36 HKHERMLEZ36HK30000 rpm (min:10 rpm), Dimensions (W x H x D): 71.5 cm× 42 cm × 51 cm
Commercially available tea productLvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchunloose teaGreen tea
Europine N-oxid (EuNO) (98.0%)BioCrick323256CAS No:65582-53-8
Europine (Eu) (98.0%)BioCrick98222CAS No:570-19-4
Formate (98.0%)AladdinE2022005CAS No:64-18-6
HC-C18CNWD211006040-63 μm,100g.per box
Heliotrine (He) (98.0%)BioCrick906426CAS No:303-33-3
Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%)BioCrick22581CAS No:6209-65-0
High speed centrifuge TG16-WScence203158000Max:16000 r/min, 330 × 390 × 300 mm (L × W × H), Capacity: 6 × 50 mL
HSS T3 columnWaters186004976ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μm)
Intermedine (Im) (98.0%)BioCrick114843CAS No:10285-06-0
Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0%)BioCrick340066CAS No:95462-14-9
Jacobine (Jb) (98.0%)BioCrick132282048CAS No:6870-67-3
Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0%)ChemFacesCFN00461CAS No:38710-25-7
Methyl Alcohol (99.9%)Tedia Company,Inc.21115100CAS No:67-56-1
PSAAgelaP19-0083340-60 μm, 60 Å 100g.per box
Retrorsine (Re) (98.0%)BioCrick5281743CAS No:480-54-6
Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%)BioCrick5281734CAS No:15503-86-3
Senecionine (Sc) (98.0%)BioCrick5280906CAS No:130-01-8
Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%)BioCrick5380876CAS No:13268-67-2
Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%)BioCrick6442619CAS No:38710-26-8
Seneciphylline (Sp) (98.0%)BioCrick5281750CAS No:480-81-9
Senkirkine (Sk) (98.0%)BioCrick5281752CAS No:2318-18-5
SPE PCXAgilent Technologies12108206Cation Mixed Mode, 6 mL
Sulfuric acid (97%)Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.1003019CAS No:7664-93-9
Trisodium citrateSinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.20121009CAS No:6132-04-3
Ultrasonic cleanerSupmileKQ-600BInner slot size: 500 × 300 × 150 mm; Capacity: 22.5 L
UPLC-xevoTQMSWatersZPLYY-003Triple four-stage rod mass analyzer, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System
Water bath thermostat oscillatorGuoyu instrumentSHY-2AHSOscillation times:  60-300 times/min, Constant temperature range: room temperature to 100 °C

References

  1. Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants. Molecules. 24 (3), 498 (2019).
  2. EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in food and feed. EFSA Journal. 9 (11), 134 (2011).
  3. Ma, C., et al. Determination and regulation of hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in food: A critical review of recent research. Food and Chemical Toxicology. 119, 50-60 (2018).
  4. Keuth, O., Humpf, H. U., Fürst, P., Melton, L., Shahidi, F., Varelis, P. Pyrrolizidine Alkaloids: Analytical Challenges. Encyclopedia of Food Chemistry. 1, 348-355 (2019).
  5. Huang, D. Y., et al. Pyrrolizidine alkaloids and its source analysis in tea. Journal of Food Safety & Quality. 9 (2), 229-236 (2018).
  6. Liang, A. H., Ye, Z. G. General situation of the toxicity researches on Senecio. China Journal of Chinese Materia Medica. 31 (2), 93-97 (2006).
  7. Li, Y. H., et al. Proteomic study of pyrrolizidine alkaloid-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in rats. Chemical Research in Toxicology. 28 (9), 1715-1727 (2015).
  8. Jia, Z. J., et al. Catalytic enantioselective synthesis of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity. The Journal of Organic Chemistry. 83, 7033-7041 (2018).
  9. Yang, M., et al. First evidence of pyrrolizidine alkaloid N-oxide-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in humans. Archives of Toxicology. 91 (12), 3913-3925 (2017).
  10. Chen, Z., Huo, J. R. Hepatic veno-occlusive disease associated with toxicity of pyrrolizidine alkaloids in herbal preparations. Netherlands Journal of Medicine. 68 (6), 252-260 (2010).
  11. Mattocks, A. R. . Chemistry and Toxicology of Pyrrolizidine Alkaloid. , (1986).
  12. Picron, J. F., Herman, M., Van Hoeck, E., Goscinny, S. Analytical strategies for the determination of pyrrolizidine alkaloids in plant based food and examination of the transfer rate during the infusion process. Food Chemistry. 266, 514-523 (2018).
  13. Kowalczyk, E., Kwiatek, K. Application of the sum parameter method for the determination of pyrrolizidine alkaloids in teas. Food Additives & Contaminants: Part A. 37 (4), 622-633 (2020).
  14. EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Risks for human health related to the presence of pyrrolizidine alkaloids in honey, tea, herbal infusions and food supplements. EFSA Journal. 15 (7), 04908 (2017).
  15. Han, H., et al. Pyrrolizidine alkaloids in tea: A review of analytical methods, contamination levels and health risk. Food Science. 42 (17), 255-266 (2021).
  16. Nowak, M., et al. Interspecific transfer of pyrrolizidine alkaloids: An unconsidered source of contaminations of phytopharmaceuticals and plant derived commodities. Food Chemistry. 213, 163-168 (2016).
  17. Selmar, D., et al. Transfer of pyrrolizidine alkaloids between living plants: A disregarded source of contaminations. Environmental Pollution. 248, 456-461 (2019).
  18. Izcara, S., et al. Miniaturized and modified QuEChERS method with mesostructured silica as clean-up sorbent for pyrrolizidine alkaloids determination in aromatic herbs. Food Chemistry. 380, 132189 (2022).
  19. Izcara, S., Casado, N., Morante-Zarcero, S., Sierra, I. A miniaturized QuEChERS method combined with ultrahigh liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids in oregano samples. Foods. 9 (9), 1319 (2020).
  20. Van Wyk, B. E., Stander, M. A., Long, H. S. Senecio angustifolius as the major source of pyrrolizidine alkaloid contamination of rooibos tea (Aspalathus linearis). South African Journal of Botany. 110, 124-131 (2017).
  21. Johnson, A. E., Molyneux, R. J., Merrill, G. B. Chemistry of toxic range plants. Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 33 (1), 50-55 (1985).
  22. Vrieling, K., de Vos, H., van Wijk, C. A. M. Genetic analysis of the concentrations of pyrrolizidine alkaloids in Senecio jacobaea. Phytochemistry. 32 (5), 1141-1144 (1993).
  23. Han, H. L., et al. Development, optimization, validation and application of ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids and pyrrolizidine alkaloid N-oxides in teas and weeds. Food control. 132, 108518 (2022).
  24. Bodi, D., et al. Determination of pyrrolizidine alkaloids in tea, herbal drugs and honey. Food Additives & Contaminants: Part A. 31 (11), 1886-1895 (2014).
  25. European Union Commission. Commission Regulation (EU) 2020/2040 of 11 December 2020 amending Regulation (EC) No 1881/2006 as regards maximum levels of pyrrolizidine alkaloids in certain foodstuffs. Official Journal of the European Union. 14 (12), 1-4 (2020).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE187

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved