Çay Numunelerinde Pirrolizidin Alkaloid Kontaminasyonunun Kaynağı ve Yolu

Özet

Bu protokol, çay bahçelerindeki PA üreten yabani otlardan alınan çay örneklerinde pirolizidin alkaloidlerinin (PA'lar) kontaminasyonunu açıklamaktadır.

Özet

Çay örneklerinde insan sağlığı için tehdit oluşturan toksik pirolizidin alkaloidleri (PA'lar) bulunur. Bununla birlikte, çay örneklerinde PA kontaminasyonunun kaynağı ve yolu belirsizliğini korumuştur. Bu çalışmada, Ageratum conyzoides L., A. conyzoides rizosferik toprak, taze çay yaprakları ve kurutulmuş çay örneklerinde 15 PA'yı belirlemek için UPLC-MS / MS ile birleştirilmiş bir adsorban yöntemi geliştirilmiştir . Ortalama iyileşmeler %78-%111 arasında değişirken, göreceli standart sapmalar %0,33-%14,8 arasında değişmiştir. Çin'in Anhui Eyaleti'ndeki Jinzhai çay bahçesinden on beş çift A. conyzoides ve A. conyzoides rizosferik toprak örneği ve 60 taze çay yaprağı örneği toplandı ve 15 PA için analiz edildi . Taze çay yapraklarında, intermedine-N-oksit (ImNO) ve senecionine (Sn) hariç, 15 PA'nın tümü tespit edilmemiştir. ImNO'nun (34.7 μg / kg) içeriği Sn'ninkinden (9.69 μg / kg) daha büyüktü. Ek olarak, hem ImNO hem de Sn, çay bitkisinin genç yapraklarında yoğunlaşırken, içerikleri yaşlı yapraklarda daha düşüktü. Sonuçlar, çaydaki PA'ların çay bahçelerinde PA üreten yabani otlar-toprak-taze çay yaprakları yolundan aktarıldığını göstermiştir.

Giriş

İkincil metabolitler olarak, pirolizidin alkaloidleri (PA'lar) bitkileri otoburlara, böceklere ve patojenlere karşı korur ^1,2. Şimdiye kadar, dünya çapında 6.000'den fazla bitki türünde farklı yapılara sahip 660'tan fazla PA ve PA-N-oksit (PANO) bulunmuştur ^3,4. PA üreten bitkiler esas olarak Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae ve Apocynaceae ^5,6 familyalarında bulunur. PA'lar, güçlü elektrofilisiteye sahip olan ve DNA ve proteinler gibi nükleofillere saldırab....

Protokol

Bu çalışma için aşağıdaki yabancı ot türleri toplanmıştır: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. ve Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. Taze çay yaprakları Longjing 43 ^# çay ağaçlarının çeşitliliğinden toplandı ve kurutulmuş çay örnekleri, yeşil çay üretim sürecine göre işlenmiş ticari olarak temin edilebilen çaylardı (bkz.

Sonuçlar

Kurutulmuş çay numunelerinde, taze çay yapraklarında, yabancı otlarda ve toprakta 15 PA'nın optimize edilmiş adsorban saflaştırma ve analiz yöntemi oluşturulmuş ve SPE kartuşu kullanılarak yaygın olarak kullanılan saflaştırma yöntemiyle karşılaştırılmıştır. Sonuçlar, SPE kartuşu kullanılarak kurutulmuş çay örnekleri, yabani ot ve taze çay yapraklarındaki 15 PA'nın geri kazanımlarının% 72 -% 120 iken, adsorban saflaştırma kullanımının% 78 -% 98 olduğunu göstermiştir (

Tartışmalar

Bu çalışma, çay numunelerindeki PA'ların kontaminasyon yollarını ve kaynaklarını ve ayrıca çay bitkilerinin farklı bölgelerindeki PA'ların dağılımını araştırmak için etkili ve hassas bir yöntem geliştirmek üzere tasarlanmıştır. Bununla birlikte, bu çalışmada, kromatografik sütun üzerinde sadece 15 PA başarıyla ayrılmıştır, bu da^{bitki türleri 3,4'teki} çok sayıda alkaloitle karşılaştırıldığında çok küçük bir say.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile (99.9%)	Tedia Company,Inc.	21115197	CAS No:75-05-8
Ammonia (25%-28%)	Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.	181210	CAS No:1336-21-6
Ammonium formate (97.0%)	Anpel Laboratory Technoiogies (shanghai)	G0860050	CAS No:540-69-2
Carbon-GCB	CNW	B7760030	120-400 MESH, 10g. per box
Centrifuge Z 36 HK	HERMLE	Z36HK	30000 rpm (min:10 rpm), Dimensions (W x H x D): 71.5 cm× 42 cm × 51 cm
Commercially available tea product	Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchun	loose tea	Green tea
Europine N-oxid (EuNO) (98.0%)	BioCrick	323256	CAS No:65582-53-8
Europine (Eu) (98.0%)	BioCrick	98222	CAS No:570-19-4
Formate (98.0%)	Aladdin	E2022005	CAS No:64-18-6
HC-C18	CNW	D2110060	40-63 μm,100g.per box
Heliotrine (He) (98.0%)	BioCrick	906426	CAS No:303-33-3
Heliotrine-N-oxide (HeNO) (98.0%)	BioCrick	22581	CAS No:6209-65-0
High speed centrifuge TG16-WS	cence	203158000	Max:16000 r/min, 330 × 390 × 300 mm (L × W × H), Capacity: 6 × 50 mL
HSS T3 column	Waters	186004976	ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μm)
Intermedine (Im) (98.0%)	BioCrick	114843	CAS No:10285-06-0
Intermedine-N-oxide (ImNO) (98.0%)	BioCrick	340066	CAS No:95462-14-9
Jacobine (Jb) (98.0%)	BioCrick	132282048	CAS No:6870-67-3
Jacobine-N-oxide (JbNO) (98.0%)	ChemFaces	CFN00461	CAS No:38710-25-7
Methyl Alcohol (99.9%)	Tedia Company,Inc.	21115100	CAS No:67-56-1
PSA	Agela	P19-00833	40-60 μm, 60 Å 100g.per box
Retrorsine (Re) (98.0%)	BioCrick	5281743	CAS No:480-54-6
Retrorsine-N-oxide (ReNO) (98.0%)	BioCrick	5281734	CAS No:15503-86-3
Senecionine (Sc) (98.0%)	BioCrick	5280906	CAS No:130-01-8
Senecionine-N-oxide (ScNO) (98.0%)	BioCrick	5380876	CAS No:13268-67-2
Seneciphylline N-oxid (SpNO) (98.0%)	BioCrick	6442619	CAS No:38710-26-8
Seneciphylline (Sp) (98.0%)	BioCrick	5281750	CAS No:480-81-9
Senkirkine (Sk) (98.0%)	BioCrick	5281752	CAS No:2318-18-5
SPE PCX	Agilent Technologies	12108206	Cation Mixed Mode, 6 mL
Sulfuric acid (97%)	Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd.	1003019	CAS No:7664-93-9
Trisodium citrate	Sinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.	20121009	CAS No:6132-04-3
Ultrasonic cleaner	Supmile	KQ-600B	Inner slot size: 500 × 300 × 150 mm; Capacity: 22.5 L
UPLC-xevoTQMS	Waters	ZPLYY-003	Triple four-stage rod mass analyzer, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Liquid Phase System
Water bath thermostat oscillator	Guoyu instrument	SHY-2AHS	Oscillation times:  60-300 times/min, Constant temperature range: room temperature to 100 °C