מודל זיהום קנדידה אלביקנס הקשור לצנתר בעכבר

Summary

אנו מבססים מודל עכברי של זיהום הקשור לצנתר C.albicans (CRI), שבו נוצר ביופילם על הצנתר, והאינטראקציה בין C.albicans למארח מתואמת היטב עם CRI הקליני. מודל זה מסייע לסנן טיפולים עבור CRI הקשור לביופילם של C.albicans , ומניח בסיס לשינוי קליני.

Abstract

זיהום הקשור לצנתר (CRI) הוא זיהום נוסוקומי נפוץ הנגרם על ידי קנדידה אלביקנס במהלך השתלת קטטר. בדרך כלל, ביופילמים נוצרים על פני השטח החיצוניים של הצנתר ומובילים לזיהומים מופצים, שהם קטלניים לחולים. אין מניעה וניהול טיפול יעיל במרפאות. לכן, דחוף להקים מודל בעלי חיים של CRI לסינון פרה-קליני של אסטרטגיות חדשות למניעתו ולטיפול בו. במחקר זה, צנתר פוליאתילן, צנתר רפואי בשימוש נרחב, הוחדר לחלק האחורי של עכברי BALB/c לאחר הסרת שיער. קנדידה אלביקנס ATCC MYA-2876 (SC5314) המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר חוסן לאחר מכן על פני העור לאורך הצנתר. פלואורסצנטיות אינטנסיבית נצפתה על פני הצנתר תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי 3 ימים לאחר מכן. ביופילמים בוגרים ועבים נמצאו על פני הצנתר באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים סורק. תוצאות אלה הצביעו על הידבקות, נשאות והיווצרות ביופילם של קנדידה אלביקנס על פני הצנתר. היפרפלזיה של האפידרמיס וחדירת תאים דלקתיים בדגימות העור הצביעו על השינויים ההיסטופתולוגיים של העור הקשור ל- CRI. לסיכום, מודל CRI עכבר הוקם בהצלחה. מודל זה צפוי להיות מועיל במחקר ופיתוח של ניהול טיפולי עבור קנדידה אלביקנס הקשורים CRI.

Introduction

בשנים האחרונות, עם הפיתוח והיישום של חומרים ביו-רפואיים, זיהומים הקשורים לשתלים מתגלים כבעיות קליניות קשות ^1,2. עם היישום הרחב של צנתרים רפואיים במרפאות, מספר זיהומים הקשורים ומוות הוא עצום מדי שנה ^3,4. נתיבי הזיהום הנפוצים של זיהום הקשור לצנתר (CRI) כוללים: (1) פתוגנים על פני העור חודרים לגוף ונצמדים לפני השטח החיצוניים של הצנתר ^5,6,7; (2) פתוגנים שמקורם בפעולה אספטית לא תקינה פולשים, נצמדים ומתיישבים בצנתר; (3) פתוגנים במחזור הדם נצמדים ומתיישבים בצנתר; (4) ....

Protocol

חיות ניסוי, עכברי BALB/c זכרים (12-16 גרם), נרכשו ממרכז חיות המעבדה, מרכז מדעי הבריאות של אוניברסיטת שיאן ג'יאוטונג. כל הנהלים אושרו על ידי הוועדה האתית המוסדית לבעלי חיים של אוניברסיטת שיאן ג'יאוטונג עם מספר הרישוי SCXK (שאאנשי) 2021-103.

1. חיץ והכנת ציוד

1. Transfect C. albicans זנים עם pCaExp פלסמיד בעל ביטוי גבוה.
   1. רכוש C . albicans (SC5314) מ- ATCC. השיגו את הזן הפלואורסצנטי²² בעל ביטוי גבוה של EGFP על-ידי הדבקת C. albicans עם פלסמיד pCaExp בעל ביטוי גבוה המכיל את מסגרת הקריאה הפתוחה המלאה של גן EGFP (מפת הפלסמיד מוצגת באיור ....

תוצאות

C . albicans ו biofilms על הצנתרים ניתן היה לצפות על ידי SEM. כפי שניתן לראות באיור 3²², פני השטח של צנתרי הפוליאתילן בקבוצת הצנתרים היו חלקים, ולא נצפה מיקרואורגניזם פתוגני מודבק. עם זאת, ביופילמים בוגרים וצפופים של C. albicans נראו על פני השטח של צנתרי הפוליאתילן בקבו.......

Discussion

CRI הוא אחד הזיהומים הנוזוקומיאליים הנפוצים ביותר בקליניקה²³. פתוגנים בתוספות העור, כגון האפידרמיס, בלוטות החלב וזקיקי השיער, הם כולם גורמים אפשריים ל- CRI^23,24. קנדידה הוא הפתוגן השלישי בגודלו הגורם ל- CRI, שבו קנדידה אלביקנס היה הסוג הנפוץ ב.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.5 Mactutrius turbidibris	Shanghai Lujing Technology Co., Ltd	5106063
2.5% glutaraldehyde fixative solution	Xingzhi Biotechnology Co., Ltd	DF015
4 °C refrigerator	Electrolux (China) Electric Co., Ltd	ESE6539TA
Agar	Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd	01-023
Analytical balances	Shimadzu	ATX124
Autoclaves Sterilizer	SANYO	MLS-3750
Butanol	Tianjin Chemio Reagent Co., Ltd	200-889-7
Carbenicillin	Amresco	C0885
Eclipse Ci Nikon upright optical microscope	Nikon	Eclipse Ts2-FL
Glucose	Macklin	D823520
Inoculation ring	Thermo Scientific	251586
Isoflurane	RWD	20210103
Paraformaldehyde	Beyotime Biotechnology	P0099
PAS dye kit	Servicebio	G1285
Peptone	Beijing Aoboxing Bio-tech Co., Ltd	01-001
Polyethylene catheter	Shining Plastic Mall	PE100
RWD R550 multi-channel small animal anesthesia machine	RWD	R550
SEM	Hitachi	TM-1000
Temperature incubator	Shanghai Zhichu Instrument Co., Ltd	ZQTY-50N
Ultrapure water water generator	Heal Force	NW20VF
Ultrasound machine	Do-Chrom	DS10260D
Xylene	Sinopharm  Chemical Reagent Co., Ltd	10023428
Yeast extract	Thermo Scientific Oxoid	LP0021B