JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מדגים את טכניקת השאיפה האורופרינגיאלית לשימוש במודל עכברי הבלאומיצין של פיברוזיס ריאתי.

Abstract

מחלת ריאות אינטרסטיציאלית (ILD) מייצגת ספקטרום רחב של הפרעות המאופיינות בהצטלקות מתקדמת ולעתים קרובות בלתי הפיכה של פרנכימת הריאות, הנפוצה ביותר היא פיברוזיס ריאתי אידיופטי (IPF). פותחו מספר מודלים של בעלי חיים של IPF, כאשר מודל עכברי הבלאומיצין הוא הנפוץ ביותר. בלאומיצין הוא תרופה כימותרפית הידועה כגורמת לנזק ל-DNA באפיתל המכתשית, וכתוצאה מכך לפגיעה חריפה בריאות ולפיברוזיס ריאתי בבני אדם. מודלים של מכרסמים של IPF משתמשים במתן בלאומיצין בשיטות שונות, הנפוצה ביותר היא תוך-קנה הנשימה (IT). לאחרונה, טכניקת שאיבת הפה והלוע (OA) הוכחה כיעילה באותה מידה כמו IT עבור תרופות פיברוזיות מרובות, עם הרבה פחות תופעות לוואי ודרך אספקה קלה יותר. פרוטוקול זה מפרט את שיטת ה-OA להעברת בלאומיצין לריאת העכברים ומדגיש דוגמאות ליישומים פוטנציאליים במורד הזרם לכימות נתונים. מתודולוגיה זו מציעה דרך פשוטה, מהירה ובטוחה להשתמש במודל בעלי חיים בשימוש נרחב זה לחקר המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס IPF.

Introduction

מחלת ריאות אינטרסטיציאלית (ILD) מתייחסת לקבוצה הטרוגנית של הפרעות המאופיינת בהצטלקות מתקדמת ובלתי הפיכה של חלל הנאדיות, האינטרסטיציום ודרכי הנשימה הדיסטליות1. פיברוזיס ריאתי אידיופטי (IPF) היא הצורה הנפוצה ביותר של ILD ונושאת הישרדות חציונית של כשלוש שנים2. IPF הוא מצב סופני בסופו של דבר, כאשר השתלת ריאות אורתוטופית היא טיפול הצלה עבור חולים נבחרים. ישנם כיום שני טיפולים שאושרו על ידי ה-FDA ל-IPF, שניהם רק מאטים את קצב ההתקדמות במקום לייצב או לשפר את תפקוד הריאות עבור חולים 3,4. מאמצי מחקר משמעותיים מתבצעים כדי להבהיר את היסודות של IPF ולזהות מטרות טיפוליות חדשות. קיימים אינספור מודלים של בעלי חיים לחקר פתוגנזה של IPF, לכל אחד יתרונות וחסרונות משלו5. בעוד שאף מודל אינו מסוגל לסכם באופן מלא את המורכבות של מחלות אנושיות, גישות אלה מציעות תובנה משמעותית לגבי המנגנונים המולקולריים של IPF ויכולות להשלים מחקרים תרגומיים.

מודל העכברים בלאומיצין נותר הנפוץ ביותר והמאופיין היטב במודל in vivo של IPF6. בלאומיצין הוא חומר פפטידי הגורם לשבירת DNA חד-גדילית וכפולה. לאחר גילויו בשנת 1962, נמצא כי בלאומיצין יעיל בטיפול במספר סוגי סרטן, כולל גידולי אשכים ולימפומה, אולם השימוש בו הוגבל על ידי דלקת ריאות תלוית מינון וכתוצאה מכך פיברוזיס ריאתי 7,8. רעילות ריאתית זו מסוכמת בעכברים. כאשר ניתן במנה אחת, לאחר שלב דלקתי ראשוני, ניתן לראות פיברוזיס החל מהיום החמישי, ומגיע לשיא בימים 14-21 9,10,11 (איור 1). פתרון ספונטני מתרחש לאחר כ-6 שבועות, אם כי ניתן להשיג שינויים פיברוטיים קבועים במינון חוזרשל 12. בהתחשב באופי החולף והדלקתי, ישנם כמה חסרונות מובנים במודל הבלאומיצין13, אולם הוא מציע מערכת מהירה, חזקה וניתנת לשחזור כדי להתחיל לענות על כמה מהפערים העיקריים בהבנת התחום שלנו של ILD ומאפשרת לחוקרים להשוות תוצאות במהלך חמשת העשורים האחרונים. גישות התקנה אחרות כוללות את דגמי האסבסטוזיס והסיליקה, המציעים מסלולי זמן דומים (ימים 14-28)6,14,15,16. עם זאת, מודלים אלה מייצרים דפוס היסטולוגי התואם יותר לפנאומוקוניוזיס מאשר IPF ודורשים שימוש בחלקיקים הנישאים באוויר, מה שמחייב טיפול זהיר. לחלופין, קיימים מודלים של בעלי חיים המשתמשים בביטוי טרנסגנים מונע אפיתל, כגון דיפתריה-רעלן ו-TGF-β1. אלה מסכמים את הפגיעה בתאי אפיתל המכתשית הלא דלקתית מסוג 2 הנראית ב-IPF, אולם לוקחים מעט יותר זמן (21-30d) ודורשים שימוש בבעלי חיים מיוחדים שיש להצליב לאחור בכל המודלים הטרנסגניים הקיימים המעניינים. לבסוף, ביטוי יתר של ציטוקינים, כולל TGF-β1, IL-β1 ו-TNF-α, הוכח כגורם לפיברוזיס ריאתי במכרסמים, בדרך כלל ביום 14 17,18,19. מודלים אלה של ביטוי יתר של ציטוקינים מאפשרים אספקה נוחה תוך אף, אם כי דורשים טיהור וטיפול זהירים.

קיימות גישות מרובות למתן בלאומיצין, כולל נתיבים תוך-קנה (IT), תוך-אף, תוך-צפק, תת עורי ותוך ורידי6. מתן IT היא השיטה הנפוצה ביותר, הכוללת באופן מסורתי אינטובציה אנדוטרכיאלית או טרכאוסטומיה כירורגית20, שתיהן דורשות טשטוש עמוק, עדינות טכנית וקשורות לתחלואה ותמותה סביב הניתוח. לאחרונה, טכניקת שאיבת הפה והלוע (OA) הוכחה כיעילה באותה מידה כמו IT, עם הרבה פחות תופעות לוואי ומסלול אספקה קל יותר 14,21,22,23,24,25,26. כאן, אנו מציגים פרוטוקול חזותי מפורט לשיטת OA להעברת בלאומיצין לריאת העכברים ומדגישים יישומים פוטנציאליים שונים במורד הזרם לכימות נתונים.

Protocol

מחקרים בבעלי חיים שתוארו בניסויים אלה נערכו תחת פרוטוקולים (ARC-2021-025, ARC-2010-039) שאושרו על ידי ועדת המחקר בבעלי חיים של UCLA (ARC) והוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). נשמרה עמידה מלאה בכל התקנות והמדיניות המדינתית והפדרלית בנוגע לשימוש בחיות מעבדה. בעלי החיים שוכנו במתקן לטיפול בבעלי חיים של UCLA וטופלו על ידי הצוות המיומן של המחלקה למעבדה ורפואת בעלי חיים (DLAM) של UCLA בתנאים נטולי פתוגנים. עכברי Wildtype C57BL/6 הושגו באופן מסחרי והורשו להתאקלם במשך 14 יום לפחות. עכברים זכרים בגילאי 8-12 שבועות שימשו למחקרים אלה, עם משקל גוף ממוצע של 20-25 גרם. ניתן להשתמש גם בעכברים נקבות, אם כי חשוב להתאים בעלי חיים למין ולגיל בין קבוצות ניסוי ותנאים27. הפרטים המסחריים של בעלי החיים, הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. מתן אורו-לוע של בלאומיצין

  1. הכנת בלאומיצין
    הערה: השתמש בבלאומיצין באיכות פרמצבטית כדי להבטיח עקביות ושחזור בין בעלי חיים לניסויים. מינון בלאומיצין ביחידות תרופה לק"ג בעל חיים (U/kg), לא מיליגרם (מ"ג) לק"ג.
    1. ממיסים אבקת בלאומיצין ב-PBS סטרילי באיכות פרמצבטית לריכוז מלאי של 10 U/mL. יש להכין בלאומיצין מתחת למכסה המנוע הכימי תוך שימוש באמצעי זהירות כימותרפיים נאותים. יש לאחסן את המינונים בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למשך עד 6 חודשים.
    2. הכן את ריכוז העבודה הסופי. המינון מבוסס על משקל (0.5-3 יחידות לק"ג), וההתאמות נעשות לפי הצורך בהתאם לבלאומיצין בו נעשה שימוש ולמטרת הניסוי (למשל, הישרדות או מינון קטלני).
    3. התאימו את נפח הטיפול הסופי לפי הצורך. עבור מחקרים אלה, יש לדלל את הבלאומיצין ל-0.375 U/mL, השווה ל-50 מיקרוליטר עבור עכבר של 25 גרם, וכתוצאה מכך ריכוז עבודה סופי של 0.75 U/kg.

2. אינדוקציה של הרדמה

  1. הכן את קוקטייל ההרדמה על ידי דילול קטמין וקסילזין ב-PBS לריכוזי עבודה של 10 מ"ג/מ"ל ו-1 מ"ג/מ"ל, בהתאמה. בצע שלב זה בתנאים סטריליים באמצעות ריאגנטים בדרגה פרמצבטית ובהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד.
  2. מתן 10 מיקרוליטר מהקוקטייל לגרם משקל גוף של בעל החיים (ריכוז עבודה: קטמין 100 מ"ג/ק"ג, קסילזין 10 מ"ג/ק"ג) באמצעות הזרקה תוך צפקית באמצעות מחט 27.5 גרם ומזרק 1 מ"ל.
    1. ודא שהעכבר מורדם כראוי ואינו מגיב לגירויים מזיקים, כגון צביטה בבוהן. יש לראות את ההשפעות תוך 5 דקות. אם עדיין מגיבים, יש לתת קטמין/קסילזין נוסף במרווחים של 20 מיקרוליטר עד להשגת רמת ההרדמה הרצויה. יש למרוח משחה עיניים למניעת יובש בעיניים בזמן הרדמה.
      הערה: קטמין מועדף על פני חומרי הרדמה ותרופות הרגעה מוזרקות אחרות בשל פרופיל תופעות הלוואי החיובי שלו. יש לו השפעות מינימליות על המודינמיקה, כולל קצב לב וקצב נשימה. איזופלורן בשאיפה יכול לשמש כחומר הרדמה חלופי. במחקרים אלה, קטמין/קסילזין מועדף מכיוון שהוא גורם להרגעה ממושכת ולמינימום שיעול או ריפלוקס של בלאומיצין לאחר מתן השימוש.

3. ניהול פה ולוע

  1. לאחר הרגעה נכונה, תלו את העכבר על הפלטפורמה הפרוצדורלית בזווית של 60°-80° על ידי תלייתו על ידי החותכות הקדמיות שלו כדי לפתוח ביעילות את הפה והלוע (איור 2A).
  2. חסום את מעבר האף בעזרת מהדק מיקרו-וסקולרי חלק, שמאלץ את העכבר לנשום דרך הלוע שלו.
  3. הוצא את הלשון מהלוע באמצעות מלקחיים.
  4. בעזרת פיפטת צעד עם קצה גבעול לור, הנח בעדינות את הנפח הרצוי של בלאומיצין, או בקרת מי מלח, בחלק האחורי של האורופרינקס. ודא שבועת נוזל נראית באופן גס (איור 2B).
  5. המשיכו להחזיק את הלשון במקומה עד שהחיה תשאב את התמיסה. זה צריך להיות ברור ולעתים קרובות בקול.
    הערה: אם החיה שואבת במהירות את התמיסה, ההדמיה בחלק האחורי של האורופרינקס עשויה להיות חולפת, תוך מספר שניות. בלי קשר, אם יצליח, החיה תפגין שינוי פתאומי וחולף בדפוס הנשימה שלה, ותנשום נשימות מהירות ורדודות. בעבוע של הנוזל עלול להתרחש, מה שמעיד עוד יותר על כך שהנוזל נכנס בהצלחה לדרכי הנשימה התחתונות. שיעול מדי פעם עלול להופיע גם כן. זהו בדרך כלל נפח זניח של תמיסת הבלאומיצין ואינו אמור להשפיע על תוצאות הניסוי, מה שמאפשר לבעל החיים להישאר כלול במחקר. הימנע ממינון חוזר, מכיוון שהוא מגביר את הסיכון לחנק ומשנה את המינון הסופי המבוסס על משקל.
  6. לאחר אישור השאיפה, הסר בזהירות את אטב האף.
  7. התבונן בבעל החיים במצב תלייה למשך 15-30 שניות כדי להבטיח שאין ריפלוקס של תמיסת הבלאומיצין, ולאחר מכן החזר אותו לכלוב שלו.
    הערה: מומלץ נפח מקסימלי של 50 מיקרוליטר כדי למזער את הסיכון לחנק. בהתאם למינון הרצוי של בלאומיצין ולמשקל העכבר, התאם את ריכוז תמיסת הבלאומיצין לפי הצורך. בעת תרגול טכניקה זו, השתמש בצבע על בסיס מים כגון כחול אוונס כדי לאשר שהתמיסה ניתנת לדרכי הנשימה התחתונות, ולא לקיבה14.

4. התאוששות בעלי חיים

  1. לאחר הטיפול, הניחו את בעל החיים על צדו בכלוב שלו עם כרית חימום מתחתיו כדי לשמור על ניטרליות תרמית.
  2. עקוב אחר העכברים עד שהם בהכרה מלאה. זה בדרך כלל לוקח 1-2 שעות, תלוי במינון הקטמין המשמש ובחילוף החומרים של החיה. צבט בעדינות את אצבעות הרגליים ושמור על בעלי החיים אותרמיים כדי להקל על ההתעוררות.
  3. עקוב קלינית אחר העכברים על בסיס יומי לאיתור שינויים במשקל הגוף, הטיפוח, רמת הפעילות ומצב הנשימה. בדומה לשיטות מתן אחרות של בלאומיצין, בעלי חיים עשויים לחוות ירידה משמעותית במשקל במהלך 14-21 יום, המהווה סמן מפתח ליעילות המודל.
  4. על פי פרוטוקולי ARC ו-IACUC, המתת חסד של בעלי חיים אם הירידה במשקל עולה על 20% מהמשקל ההתחלתי של בעל החיים. השכיחות והחומרה של ירידה במשקל תלויים במינון הבלאומיצין בו נעשה שימוש ובדמוגרפיה של העכברים (ראה לעיל).

5. קצירת רקמות, עיבוד וניתוח נקודת סיום

  1. בהתאם לשאלת הניסוי ולנקודת הזמן הרצויה, המתת חסד של העכברים בהתאם לפרוטוקולי IACUC וקצור את ריאותיהם28 בזמן המתאים. ההשפעות של בלאומיצין ניכרות לעתים קרובות באופן ויזואלי גס בהשוואה לביקורת, מה שמעיד על מתן מוצלח. במחקרים אלה, העכברים הוקרבו בימים 7, 14 ו-21.
  2. לצורך היסטולוגיה, נתח את הריאות בגוש וקבע אותן ב-4% PFA למשך 24 שעות. המשך עם הטמעת פרפין, חתך, המטוקסילין ואאוזין (H&E), ו/או צביעת הטריכרום של מאסון כפי שתואר קודם לכן 28,29,30.
  3. למדידת קולגן, הומוגניזציה של הריאה הימנית והשתמש בערכה זמינה מסחרית (ראה טבלת חומרים) כדי למדוד את תכולת ההידרוקסיפרולין כפי שתואר קודם לכן31.
  4. עבור ציטומטריית זרימה, עכל את הריאה הימנית באמצעות דיסוציאטור הרקמות ותמיסה אנזימטית לקבלת תרחיף חד-תא. בצע צביעה וניתוח ציטומטרי של זרימה כמתואר קודם לכן 32,33,34.

תוצאות

הפרוטוקול המתואר כאן מסכם את מסלול השאיפה של הפה והלוע במודל עכברי הבלאומיצין. בניסויים אלה, בעלי חיים טופלו בבלאומיצין (0.75U/kg משקל גוף) או PBS לבקרת דמה. בימים 7, 14 ו-21, עכברים הורדמו, ריאותיהם הושתלו ורקמותיהם תוקנו, כפי שתואר קודםלכן 35. פיברוזיס הוערכה באמצעות ...

Discussion

פרוטוקול וידאו מפורט מסופק על טכניקת השאיפה האורופרינגיאלית למתן בלאומיצין לשימוש במודל העכברי של פיברוזיס ריאתי. בנוסף, אנו מדגישים יישומים פוטנציאליים במורד הזרם לכימות שינויים פיברוטיים ודלקתיים הנגרמים על ידי בלאומיצין OA.

בעוד שאף בעל חיים לא מסכם ?...

Disclosures

למחברים אין ניגודי אינטרסים.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענק הכשרה למחקר מוסדי (T32) של NIH Ruth L. Kirchstein (NRSA) שהוענק ל-RW (2T32HL072752-16). המחברים רוצים גם להודות על תמיכתו של מרכז בריאות הריאות של קרן סול וג'ויס ברנדמן.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
anti-mouse CD45, Brlliant Violet 605BioLegend103155
anti-mouse CD64, AlexaFluor 647BioLegend139322
anti-mouse Ly6G, AlexaFluor 700BioLegend127622
anti-mouse MerTK, PE/Cy7BioLegend151522
anti-mouse SiglecF, PEBD Biosciences552126
BD Luer-Stub AdaptorsFisher Scientific13-681-21
BleomycinMcKesson1129996From NorthStar Rx 16714088601
Endotracheal Mouse Intubation KitKent ScientificETI-MSE
Fixable Live/Dead VioletThermoL34955
FlowJo v10 SoftwareFlowJo
gentleMACS DissociatorMiltenyi130-093-235
Hydroxyproline Assay KitSigmaMAK463
Liberase TMRoche5401127001
Moria Vessel ClampFine Science Tools18350-11
Mouse Endotracheal Intubation KitKentETI-MSE
Stepper PipetteDymaxTI15469
Wildtype C57BL/6 mice Jackson LaboratoriesJAX, stain #000664

References

  1. Martinez, F. J., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis. Nat Rev Dis Primers. 3, 17074 (2017).
  2. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., Mckeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: A systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  3. Richeldi, L., et al. Efficacy and safety of nintedanib in idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2071-2082 (2014).
  4. King, T. E., et al. A phase 3 trial of pirfenidone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2083-2092 (2014).
  5. Moore, B. B., et al. Animal models of fibrotic lung disease. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).
  6. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  7. Umezawa, H. Chemistry and mechanism of action of bleomycin. Fed Proc. 33 (11), 2296-2302 (1974).
  8. Muggia, F. M., Louie, A. C., Sikic, B. I. Pulmonary toxicity of antitumor agents. Cancer Treat Rev. 10 (4), 221-243 (1983).
  9. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  10. Kolb, P., et al. The importance of interventional timing in the bleomycin model of pulmonary fibrosis. Eur Respir J. 55 (6), 1901105 (2020).
  11. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  12. Chung, M. P., et al. Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).
  13. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  14. Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Exp Lung Res. 32 (5), 181-199 (2006).
  15. Sanchez, V. C., Pietruska, J. R., Miselis, N. R., Hurt, R. H., Kane, A. B. Biopersistence and potential adverse health impacts of fibrous nanomaterials: What have we learned from asbestos. Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 1 (5), 511-529 (2009).
  16. Barbarin, V., et al. The role of pro- and anti-inflammatory responses in silica-induced lung fibrosis. Respir Res. 6 (1), 112 (2005).
  17. Sime, P. J., Xing, Z., Graham, F. L., Csaky, K. G., Gauldie, J. Adenovector-mediated gene transfer of active transforming growth factor-beta1 induces prolonged severe fibrosis in rat lung. J Clin Invest. 100 (4), 768-776 (1997).
  18. Kolb, M., Margetts, P. J., Anthony, D. C., Pitossi, F., Gauldie, J. Transient expression of il-1beta induces acute lung injury and chronic repair leading to pulmonary fibrosis. J Clin Invest. 107 (12), 1529-1536 (2001).
  19. Sime, P. J., et al. Transfer of tumor necrosis factor-alpha to rat lung induces severe pulmonary inflammation and patchy interstitial fibrogenesis with induction of transforming growth factor-beta1 and myofibroblasts. Am J Pathol. 153 (3), 825-832 (1998).
  20. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922 (2019).
  21. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front Med (Lausanne). 5, 269 (2018).
  22. Egger, C., et al. Administration of bleomycin via the oropharyngeal aspiration route leads to sustained lung fibrosis in mice and rats as quantified by ute-MRI and histology. PLoS One. 8 (5), e63432 (2013).
  23. Bale, S., Sunkoju, M., Reddy, S. S., Swamy, V., Godugu, C. Oropharyngeal aspiration of bleomycin: An alternative experimental model of pulmonary fibrosis developed in Swiss mice. Indian J Pharmacol. 48 (6), 643-648 (2016).
  24. Scotton, C. J., et al. Increased local expression of coagulation factor x contributes to the fibrotic response in human and murine lung injury. J Clin Invest. 119 (9), 2550-2563 (2009).
  25. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society Workshop report: Use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  26. Rao, G. V., et al. Efficacy of a technique for exposing the mouse lung to particles aspirated from the pharynx. J Toxicol Environ Health A. 66 (15), 1441-1452 (2003).
  27. Redente, E. F., et al. Age and sex dimorphisms contribute to the severity of bleomycin-induced lung injury and fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301 (4), L510-L518 (2011).
  28. Birjandi, S. Z., et al. CD4(+)CD25(hi)Foxp3(+) cells exacerbate bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Pathol. 186 (8), 2008-2020 (2016).
  29. Hubner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques. 44 (4), 507-514 (2008).
  30. Joshi, N., et al. A spatially restricted fibrotic niche in pulmonary fibrosis is sustained by M-CSF/M-CSFR signalling in monocyte-derived alveolar macrophages. Eur Respir J. 55 (1), 1900646 (2020).
  31. Belperio, J. A., et al. Interaction of IL-13 and C10 in the pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (4), 419-427 (2002).
  32. Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (4), 503-510 (2013).
  33. Misharin, A. V., et al. Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span. J Exp Med. 214 (8), 2387-2404 (2017).
  34. Tighe, R. M., et al. Improving the quality and reproducibility of flow cytometry in the lung. An official American Thoracic Society workshop report. Am J Respir Cell Mol Biol. 61 (2), 150-161 (2019).
  35. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. 102, e52964 (2015).
  36. Adamson, I. Y., Bowden, D. H. The pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Am J Pathol. 77 (2), 185-197 (1974).
  37. Southam, D. S., Dolovich, M., O'byrne, P. M., Inman, M. D. Distribution of intranasal instillations in mice: Effects of volume, time, body position, and anesthesia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282 (4), L833-L839 (2002).
  38. Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol (1985). 90 (3), 1111-1117 (2001).
  39. Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am Rev Respir Dis. 127 (1), 63-66 (1983).
  40. Hecker, L., et al. Reversal of persistent fibrosis in aging by targeting nox4-nrf2 redox imbalance. Sci Transl Med. 6 (231), 231ra247 (2014).
  41. Chaudhary, N. I., Schnapp, A., Park, J. E. Pharmacologic differentiation of inflammation and fibrosis in the rat bleomycin model. Am J Respir Crit Care Med. 173 (7), 769-776 (2006).
  42. Kim, S. N., et al. Dose-response effects of bleomycin on inflammation and pulmonary fibrosis in mice. Toxicol Res. 26 (3), 217-222 (2010).
  43. Wells, A. U., Denton, C. P. Interstitial lung disease in connective tissue disease--mechanisms and management. Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 728-739 (2014).
  44. Idiopathic Pulmonary Fibrosis Clinical Research Network. Prednisone, azathioprine, and n-acetylcysteine for pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 366 (21), 1968-1977 (2012).
  45. Raghu, G., et al. An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement: Idiopathic pulmonary fibrosis: Evidence-based guidelines for diagnosis and management. Am J Respir Crit Care Med. 183 (6), 788-824 (2011).
  46. Kolb, M., et al. Differences in the fibrogenic response after transfer of active transforming growth factor-beta1 gene to lungs of "fibrosis-prone" and "fibrosis-resistant" mouse strains. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (2), 141-150 (2002).
  47. Sisson, T. H., et al. Targeted injury of type ii alveolar epithelial cells induces pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 181 (3), 254-263 (2010).
  48. Pierce, E. M., et al. Therapeutic targeting of cc ligand 21 or cc chemokine receptor 7 abrogates pulmonary fibrosis induced by the adoptive transfer of human pulmonary fibroblasts to immunodeficient mice. Am J Pathol. 170 (4), 1152-1164 (2007).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

JoVE219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved