JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Этот протокол демонстрирует технику орофарингеальной аспирации для использования в мышиной модели легочного фиброза с блеомицином.

Аннотация

Интерстициальная болезнь легких (ИЗЛ) представляет собой широкий спектр нарушений, характеризующихся прогрессирующим и часто необратимым рубцеванием паренхимы легких, наиболее распространенным из которых является идиопатический легочный фиброз (ИЛФ). Было разработано несколько животных моделей IPF, наиболее широко используемой является мышиная модель с блеомицином. Блеомицин является химиотерапевтическим средством, которое, как известно, вызывает повреждение ДНК в альвеолярном эпителии, что приводит к острому повреждению легких и фиброзу легких у людей. В моделях ИЛФ у грызунов используется введение блеомицина различными методами, наиболее распространенным из которых является интратрахея (ИТ). Недавно было показано, что метод орофарингеальной аспирации (ОА) столь же эффективен, как и ИТ для нескольких фиброзирующих агентов, со значительно меньшим количеством побочных эффектов и более простым путем доставки. В этом протоколе подробно описан метод доставки блеомицина при ОА в легкие мышей и приведены примеры потенциальных применений для количественного определения данных на последующих этапах. Эта методология предлагает простой, быстрый и безопасный способ использования этой широко используемой животной модели для изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе IPF.

Введение

Интерстициальная болезнь легких (ИЗЛ) относится к гетерогенной группе нарушений, характеризующихся прогрессирующим и необратимым рубцеванием альвеолярного пространства, интерстиция и дистальных отделов дыхательных путей1. Идиопатический легочный фиброз (ИЛФ) является наиболее распространенной формой ИЗЛ и имеет медиану выживаемости около трех лет2. ИЛФ является в конечном счете неизлечимым заболеванием, при этом ортотопическая трансплантация легких является спасительной терапией для отдельных пациентов. В настоящее время существует два одобренных FDA метода лечения ИЛФ, оба из которых просто замедляют скорость прогрессирования, а не стабилизируют или улучшают функцию легких у пациентов 3,4. В настоящее время предпринимаются значительные исследовательские усилия для выяснения основ ИЛФ и определения новых терапевтических мишеней. Существует множество животных моделей для изучения патогенеза IPF, каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки5. Несмотря на то, что ни одна модель не способна в полной мере описать сложность заболевания человека, эти подходы позволяют получить значительное представление о молекулярных механизмах ИЛФ и могут дополнить трансляционные исследования.

Мышиная модель блеомицина остается наиболее широко используемой и хорошо охарактеризованной in vivo моделью IPF6. Блеомицин является пептидным агентом, который индуцирует одно- и двухцепочечные разрывы ДНК. После его открытия в 1962 году было обнаружено, что блеомицин эффективен в лечении ряда видов рака, включая опухоли яичек и лимфому, однако его использование было ограничено дозозависимым пневмонитом и возникающим в результате легочным фиброзом. Эта легочная токсичность повторяется у мышей. При введении в виде однократной дозы, после начальной воспалительной фазы, фиброз может наблюдаться, начиная примерно с 5-го дня и достигая пика на 14-21 день9, 10, 11 (Рисунок 1). Спонтанное разрешение происходит примерно через 6 недель, хотя постоянные фиброзные изменения могут быть достигнуты при повторном приеме12. Учитывая преходящий и воспалительный характер, у блеомицина модели13 есть некоторые недостатки, однако он предлагает быструю, надежную и воспроизводимую систему, позволяющую начать восполнять некоторые из основных пробелов в понимании ИЗЛ в нашей области и позволяет исследователям сравнивать результаты за последние пять десятилетий. Другие подходы к установке включают модели мышей с асбестозом и диоксидом кремния, которые предлагают аналогичные временные циклы (дни 14-28)6,14,15,16. Тем не менее, эти модели генерируют гистологическую картину, более соответствующую пневмокониозу, чем ИЛФ, и требуют использования взвешенных в воздухе частиц, что требует осторожного обращения. В качестве альтернативы существуют животные модели, использующие эпителиальную экспрессию трансгенов, таких как дифтерийный токсин и TGF-β1. Они повторяют невоспалительное повреждение эпителиальных клеток альвеолярного типа 2, наблюдаемое при IPF, однако занимают немного больше времени (21-30d) и требуют использования специализированных животных, которые должны быть скрещены с любыми существующими трансгенными моделями, представляющими интерес. Наконец, было показано, что аденовирально-опосредованная сверхэкспрессия цитокинов, включая TGF-β1, IL-β1 и TNF-α, вызывает фиброз легких у грызунов, как правило, к 14-му дню 17,18,19. Эти модели сверхэкспрессии цитокинов обеспечивают удобную интраназальную доставку, хотя и требуют тщательной очистки и обращения.

Существует несколько подходов к доставке блеомицина, включая интратрахеальный (IT), интраназальный, внутрибрюшинный, подкожный и внутривенный пути6. Наиболее распространенным методом является доставка ИТ, традиционно включающий либо эндотрахеальную интубацию, либо хирургическую трахеостомию20, оба из которых требуют глубокой седации, технических тонкостей и связаны с периоперационной заболеваемостью и смертностью. Недавно было показано, что метод орофарингеальной аспирации (ОА) столь же эффективен, как и ИТ, со значительно меньшим количеством побочных эффектов и более простым путем доставки 14,21,22,23,24,25,26. В этой статье мы представляем подробный визуальный протокол для метода доставки блеомицина в легкие мышей с помощью ОА и освещаем различные потенциальные приложения для количественного определения данных.

протокол

Исследования на животных, описанные в этих экспериментах, проводились в соответствии с протоколами (ARC-2021-025, ARC-2010-039), утвержденными Комитетом по исследованиям животных (ARC) Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе и Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC). Было поддержано полное соответствие всем государственным и федеральным нормам и политикам в отношении использования лабораторных животных. Животные были размещены в учреждении по уходу за животными Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе и ухаживали за ними квалифицированным персоналом Отделения лабораторной медицины и медицины животных (DLAM) Калифорнийского университета в Лос-Анджелесе в условиях, свободных от патогенов. Мышей дикого типа C57BL/6 получили коммерчески и дали им возможность акклиматизироваться в течение не менее 14 дней. Для этих исследований использовались самцы мышей в возрасте 8-12 недель, со средней массой тела 20-25 г. Также можно использовать самок мышей, хотя важно сопоставлять пол и возраст животных в разных экспериментальных группах и условиях. Коммерческие данные о животных, реагентах и оборудовании, использованных в этом исследовании, перечислены в Таблице материалов.

1. Орофарингеальный прием блеомицина

  1. Приготовление блеомицина
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте блеомицин фармацевтического класса для обеспечения согласованности и воспроизводимости между животными и экспериментами. Доза блеомицина в единицах препарата на кг животного (Ед/кг), а не миллиграмм (мг) на кг.
    1. Растворите порошок блеомицина в стерильном PBS фармацевтического класса до исходной концентрации 10 Ед/мл. Блеомицин следует готовить под химическим колпаком с использованием надлежащих химиотерапевтических мер предосторожности. Хранить аликвоты при температуре -20 °C до 6 месяцев.
    2. Приготовьте окончательную рабочую концентрацию. Доза зависит от веса (0,5-3 ЕД/кг), и при необходимости вносятся коррективы в зависимости от используемого блеомицина и цели эксперимента (например, выживаемость или смертельная дозировка).
    3. При необходимости отрегулируйте итоговый объем введения. Для этих исследований блеомицин разбавляли до 0,375 Ед/мл, что соответствует 50 мкл для мыши массой 25 г, в результате чего конечная рабочая концентрация составила 0,75 Ед/кг.

2. Индукция анестезии

  1. Приготовьте коктейль для анестезии путем разведения кетамина и ксилазина в PBS до рабочих концентраций 10 мг/мл и 1 мг/мл соответственно. Выполняйте этот этап в стерильных условиях с использованием реагентов фармацевтического класса и в соответствии с утвержденными в учреждении протоколами.
  2. Вводите 10 мкл коктейля на грамм массы тела животного (рабочая концентрация: кетамин 100 мг/кг, ксилазин 10 мг/кг) путем внутрибрюшинной инъекции с помощью иглы 27,5 г и шприца объемом 1 мл.
    1. Убедитесь, что мышь должным образом обезболечена и не реагирует на вредные раздражители, такие как защемление пальца ноги. Эффект должен проявиться в течение 5 минут. Если чувствительность все еще сохраняется, введите дополнительный кетамин/ксилазин с шагом 20 мкл до тех пор, пока не будет достигнут желаемый уровень анестезии. Наносите офтальмологическую мазь, чтобы предотвратить сухость глаз во время анестезии.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Кетамин предпочтительнее других инъекционных анестетиков и седативных средств из-за его благоприятного профиля побочных эффектов. Оказывает минимальное влияние на гемодинамику, включая частоту сердечных сокращений и частоту дыхания. Ингаляционный изофлуран может быть использован в качестве альтернативного анестетика. В этих исследованиях предпочтение отдается кетамину/ксилазину, поскольку он приводит к длительному седативному эффекту и минимальному кашлю или рефлюксу блеомицина после введения.

3. Орофарингеальный прием

  1. После надлежащего успокоения подвесьте мышь на процедурной платформе под углом 60°-80°, подвесив ее за передние резцы, чтобы эффективно открыть ротоглотку (Рисунок 2A).
  2. Окклюзируйте носовой ход гладким микрососудистым зажимом, заставляя мышь дышать через ротоглотку.
  3. Выведите язык из ротоглотки с помощью щипцов.
  4. С помощью шаговой пипетки с острым наконечником аккуратно поместите желаемый объем блеомицина или физиологического раствора в заднюю часть ротоглотки. Убедитесь, что пузырь с жидкостью хорошо виден (рисунок 2B).
  5. Продолжайте удерживать язык на месте, пока животное не всосет раствор. Это должно быть заметно и часто слышно.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если животное быстро отсасывает раствор, визуализация в задней части ротоглотки может быть преходящей в течение нескольких секунд. В любом случае, в случае успеха, животное будет демонстрировать резкое и преходящее изменение в своем дыхании, делая быстрые, неглубокие вдохи. Может произойти пузырчатое выделение жидкости, что еще раз указывает на то, что жидкость успешно попала в нижние дыхательные пути. Также может возникать периодический кашель. Обычно это незначительный объем раствора блеомицина, который не должен влиять на результаты эксперимента, позволяя животному оставаться включенным в исследование. Избегайте повторного приема, так как это увеличивает риск удушья и изменяет конечную дозировку в зависимости от веса.
  6. После подтверждения аспирации осторожно снимите носовой зажим.
  7. Понаблюдайте за животным в подвешенном положении в течение 15-30 с, чтобы убедиться в отсутствии рефлюкса раствора блеомицина, затем верните его в клетку.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Максимальный объем рекомендуется 50 μл, чтобы свести к минимуму риск удушья. В зависимости от желаемой дозы блеомицина и веса мыши при необходимости регулируйте концентрацию раствора блеомицина. При выполнении этой техники используйте краситель на водной основе, такой как синий Эванса, чтобы подтвердить, что раствор вводится в нижние дыхательные пути, а не в желудок.

4. Восстановление животных

  1. После обработки поместите животное на бок в клетку с грелкой под ней, чтобы сохранить термонейтральность.
  2. Наблюдайте за мышами до тех пор, пока они не придут в полное сознание. Обычно это занимает 1-2 часа, в зависимости от используемой дозы кетамина и метаболизма животного. Аккуратно ущипните пальцы ног и поддерживайте эвтермию животных, чтобы облегчить пробуждение.
  3. Ежедневно проводите клиническое наблюдение за мышами на предмет изменений массы тела, груминга, уровня активности и респираторного статуса. Подобно другим методам доставки блеомицина, животные могут испытывать значительную потерю веса в течение 14-21 дня, что является ключевым маркером эффективности модели.
  4. Согласно протоколам ARC и IACUC, усыпляйте животных, если потеря веса превышает 20% от начального веса животного. Распространенность и тяжесть потери веса зависят от используемой дозы блеомицина и демографических характеристик мышей (см. выше).

5. Забор тканей, обработка и анализ конечных точек

  1. В зависимости от экспериментального вопроса и желаемого момента времени, усыпьте мышей в соответствии с протоколами IACUC и соберите у нихлегкие 28 в нужное время. Эффекты блеомицина часто сильно заметны визуально по сравнению с контролем, что указывает на успешное введение. В этих исследованиях мышей приносили в жертву на 7, 14 и 21 день.
  2. Для гистологии рассекают легкие en bloc и фиксируют их в 4% PFA на 24 ч. Продолжайте заделку парафина, срезы, гематоксилин и эозин (H&E) и/или трихромное окрашивание по Массону, как описано ранее 28,29,30.
  3. Для измерения коллагена гомогенизируйте правое легкое и используйте коммерчески доступный набор (см. Таблицу материалов) для измерения содержания гидроксипролина, как описано ранее31.
  4. Для проточной цитометрии переваривают правое легкое с помощью диссоциатора тканей и ферментативного раствора для получения одноклеточной суспензии. Проведите проточное цитометрическое окрашивание и анализ, как описано ранее 32,33,34.

Результаты

Описанный здесь протокол обобщает путь введения орофарингеальной аспирации в мышиной модели блеомицина. В этих экспериментах животных лечили либо блеомицином (0,75 ЕД/кг массы тела), либо PBS для фиктивного контроля. На 7, 14 и 21 день мышей усыпляли, их легкие высаживали, а ?...

Обсуждение

Представлен подробный видеопротокол по методике орофарингеальной аспирации для введения блеомицина для использования в мышиной модели легочного фиброза. Кроме того, мы выделяем потенциальные последующие применения для количественной оценки фиброзных и воспалите?...

Раскрытие информации

У авторов нет конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантом NIH имени Рут Л. Кирхштейн Национальной исследовательской службы (NRSA) на институциональную исследовательскую подготовку (T32), присужденным RW (2T32HL072752-16). Авторы также хотели бы выразить признательность за поддержку Центру здоровья легких Фонда Сола и Джойс Брандманов.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
anti-mouse CD45, Brlliant Violet 605BioLegend103155
anti-mouse CD64, AlexaFluor 647BioLegend139322
anti-mouse Ly6G, AlexaFluor 700BioLegend127622
anti-mouse MerTK, PE/Cy7BioLegend151522
anti-mouse SiglecF, PEBD Biosciences552126
BD Luer-Stub AdaptorsFisher Scientific13-681-21
BleomycinMcKesson1129996From NorthStar Rx 16714088601
Endotracheal Mouse Intubation KitKent ScientificETI-MSE
Fixable Live/Dead VioletThermoL34955
FlowJo v10 SoftwareFlowJo
gentleMACS DissociatorMiltenyi130-093-235
Hydroxyproline Assay KitSigmaMAK463
Liberase TMRoche5401127001
Moria Vessel ClampFine Science Tools18350-11
Mouse Endotracheal Intubation KitKentETI-MSE
Stepper PipetteDymaxTI15469
Wildtype C57BL/6 mice Jackson LaboratoriesJAX, stain #000664

Ссылки

  1. Martinez, F. J., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis. Nat Rev Dis Primers. 3, 17074 (2017).
  2. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., Mckeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: A systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  3. Richeldi, L., et al. Efficacy and safety of nintedanib in idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2071-2082 (2014).
  4. King, T. E., et al. A phase 3 trial of pirfenidone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2083-2092 (2014).
  5. Moore, B. B., et al. Animal models of fibrotic lung disease. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).
  6. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  7. Umezawa, H. Chemistry and mechanism of action of bleomycin. Fed Proc. 33 (11), 2296-2302 (1974).
  8. Muggia, F. M., Louie, A. C., Sikic, B. I. Pulmonary toxicity of antitumor agents. Cancer Treat Rev. 10 (4), 221-243 (1983).
  9. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  10. Kolb, P., et al. The importance of interventional timing in the bleomycin model of pulmonary fibrosis. Eur Respir J. 55 (6), 1901105 (2020).
  11. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  12. Chung, M. P., et al. Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).
  13. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  14. Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Exp Lung Res. 32 (5), 181-199 (2006).
  15. Sanchez, V. C., Pietruska, J. R., Miselis, N. R., Hurt, R. H., Kane, A. B. Biopersistence and potential adverse health impacts of fibrous nanomaterials: What have we learned from asbestos. Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 1 (5), 511-529 (2009).
  16. Barbarin, V., et al. The role of pro- and anti-inflammatory responses in silica-induced lung fibrosis. Respir Res. 6 (1), 112 (2005).
  17. Sime, P. J., Xing, Z., Graham, F. L., Csaky, K. G., Gauldie, J. Adenovector-mediated gene transfer of active transforming growth factor-beta1 induces prolonged severe fibrosis in rat lung. J Clin Invest. 100 (4), 768-776 (1997).
  18. Kolb, M., Margetts, P. J., Anthony, D. C., Pitossi, F., Gauldie, J. Transient expression of il-1beta induces acute lung injury and chronic repair leading to pulmonary fibrosis. J Clin Invest. 107 (12), 1529-1536 (2001).
  19. Sime, P. J., et al. Transfer of tumor necrosis factor-alpha to rat lung induces severe pulmonary inflammation and patchy interstitial fibrogenesis with induction of transforming growth factor-beta1 and myofibroblasts. Am J Pathol. 153 (3), 825-832 (1998).
  20. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922 (2019).
  21. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front Med (Lausanne). 5, 269 (2018).
  22. Egger, C., et al. Administration of bleomycin via the oropharyngeal aspiration route leads to sustained lung fibrosis in mice and rats as quantified by ute-MRI and histology. PLoS One. 8 (5), e63432 (2013).
  23. Bale, S., Sunkoju, M., Reddy, S. S., Swamy, V., Godugu, C. Oropharyngeal aspiration of bleomycin: An alternative experimental model of pulmonary fibrosis developed in Swiss mice. Indian J Pharmacol. 48 (6), 643-648 (2016).
  24. Scotton, C. J., et al. Increased local expression of coagulation factor x contributes to the fibrotic response in human and murine lung injury. J Clin Invest. 119 (9), 2550-2563 (2009).
  25. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society Workshop report: Use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  26. Rao, G. V., et al. Efficacy of a technique for exposing the mouse lung to particles aspirated from the pharynx. J Toxicol Environ Health A. 66 (15), 1441-1452 (2003).
  27. Redente, E. F., et al. Age and sex dimorphisms contribute to the severity of bleomycin-induced lung injury and fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301 (4), L510-L518 (2011).
  28. Birjandi, S. Z., et al. CD4(+)CD25(hi)Foxp3(+) cells exacerbate bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Pathol. 186 (8), 2008-2020 (2016).
  29. Hubner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques. 44 (4), 507-514 (2008).
  30. Joshi, N., et al. A spatially restricted fibrotic niche in pulmonary fibrosis is sustained by M-CSF/M-CSFR signalling in monocyte-derived alveolar macrophages. Eur Respir J. 55 (1), 1900646 (2020).
  31. Belperio, J. A., et al. Interaction of IL-13 and C10 in the pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (4), 419-427 (2002).
  32. Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (4), 503-510 (2013).
  33. Misharin, A. V., et al. Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span. J Exp Med. 214 (8), 2387-2404 (2017).
  34. Tighe, R. M., et al. Improving the quality and reproducibility of flow cytometry in the lung. An official American Thoracic Society workshop report. Am J Respir Cell Mol Biol. 61 (2), 150-161 (2019).
  35. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. 102, e52964 (2015).
  36. Adamson, I. Y., Bowden, D. H. The pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Am J Pathol. 77 (2), 185-197 (1974).
  37. Southam, D. S., Dolovich, M., O'byrne, P. M., Inman, M. D. Distribution of intranasal instillations in mice: Effects of volume, time, body position, and anesthesia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282 (4), L833-L839 (2002).
  38. Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol (1985). 90 (3), 1111-1117 (2001).
  39. Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am Rev Respir Dis. 127 (1), 63-66 (1983).
  40. Hecker, L., et al. Reversal of persistent fibrosis in aging by targeting nox4-nrf2 redox imbalance. Sci Transl Med. 6 (231), 231ra247 (2014).
  41. Chaudhary, N. I., Schnapp, A., Park, J. E. Pharmacologic differentiation of inflammation and fibrosis in the rat bleomycin model. Am J Respir Crit Care Med. 173 (7), 769-776 (2006).
  42. Kim, S. N., et al. Dose-response effects of bleomycin on inflammation and pulmonary fibrosis in mice. Toxicol Res. 26 (3), 217-222 (2010).
  43. Wells, A. U., Denton, C. P. Interstitial lung disease in connective tissue disease--mechanisms and management. Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 728-739 (2014).
  44. Idiopathic Pulmonary Fibrosis Clinical Research Network. Prednisone, azathioprine, and n-acetylcysteine for pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 366 (21), 1968-1977 (2012).
  45. Raghu, G., et al. An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement: Idiopathic pulmonary fibrosis: Evidence-based guidelines for diagnosis and management. Am J Respir Crit Care Med. 183 (6), 788-824 (2011).
  46. Kolb, M., et al. Differences in the fibrogenic response after transfer of active transforming growth factor-beta1 gene to lungs of "fibrosis-prone" and "fibrosis-resistant" mouse strains. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (2), 141-150 (2002).
  47. Sisson, T. H., et al. Targeted injury of type ii alveolar epithelial cells induces pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 181 (3), 254-263 (2010).
  48. Pierce, E. M., et al. Therapeutic targeting of cc ligand 21 or cc chemokine receptor 7 abrogates pulmonary fibrosis induced by the adoptive transfer of human pulmonary fibroblasts to immunodeficient mice. Am J Pathol. 170 (4), 1152-1164 (2007).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены