JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bu protokol, pulmoner fibrozisin bleomisin murin modelinde kullanılmak üzere orofaringeal aspirasyon tekniğini göstermektedir.

Özet

İnterstisyel akciğer hastalığı (İAH), akciğer parankiminin ilerleyici ve sıklıkla geri dönüşümsüz skarlaşması ile karakterize geniş bir spektrumu temsil eder, en sık görüleni idiyopatik pulmoner fibrozis (İPF)'dir. İPF'nin çeşitli hayvan modelleri geliştirilmiştir ve bleomisin murin modeli en yaygın kullanılanıdır. Bleomisin, alveolar epitelde DNA hasarına neden olduğu bilinen ve insanlarda akut akciğer hasarı ve pulmoner fibroz ile sonuçlanan bir kemoterapötiktir. İPF'nin kemirgen modelleri, en yaygın olanı intratrakeal (IT) olmak üzere çeşitli yöntemlerle bleomisin uygulamasını kullanır. Son zamanlarda, orofaringeal aspirasyon (OA) tekniğinin, önemli ölçüde daha az yan etki ve daha kolay bir uygulama yolu ile çoklu fibrozan ajanlar için BT ile eşit derecede etkili olduğu gösterilmiştir. Bu protokol, murin akciğerine bleomisin iletimi için OA yöntemini detaylandırır ve veri ölçümü için potansiyel aşağı akış uygulamalarının örneklerini vurgular. Bu metodoloji, İPF'nin altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için yaygın olarak kullanılan bu hayvan modelini kullanmak için basit, hızlı ve güvenli bir yol sunar.

Giriş

İnterstisyel akciğer hastalığı (İAH), alveol boşluğunun, interstisyumun ve distal hava yollarının ilerleyici ve geri dönüşümsüz skarlaşması ile karakterize heterojen bir hastalık grubunu ifade eder1. İdiyopatik pulmoner fibrozis (İPF), İAH'nın en sık görülen şeklidir ve yaklaşık üç yıllık medyan sağkalım taşır2. İPF sonuçta terminal bir durumdur ve ortotopik akciğer nakli seçilmiş hastalar için bir kurtarma tedavisidir. Şu anda İPF için FDA onaylı iki tedavi vardır, her ikisi de hastalar için akciğer fonksiyonunu stabilize etmek veya iyileştirmek yerine sadece ilerleme hızını yavaşlatır 3,4. İPF'nin temellerini aydınlatmak ve yeni terapötik hedefleri belirlemek için önemli araştırma çabaları devam etmektedir. İPF patogenezini incelemek için her biri kendi avantaj ve dezavantajlarına sahip sayısız hayvan modeli mevcuttur5. Hiçbir model insan hastalığının karmaşıklığını tam olarak özetleyemese de, bu yaklaşımlar İPF'nin moleküler mekanizmaları hakkında önemli bilgiler sunar ve translasyonel çalışmaları tamamlayabilir.

Bleomisin murin modeli, IPF6'nın en yaygın kullanılan ve en iyi karakterize edilen in vivo modeli olmaya devam etmektedir. Bleomisin, tek ve çift sarmallı DNA kırılmalarını indükleyen bir peptit ajanıdır. 1962'de keşfedilmesinin ardından, bleomisinin testis tümörleri ve lenfoma dahil olmak üzere bir dizi kanserin tedavisinde etkili olduğu bulunmuştur, ancak kullanımı doza bağlı pnömoni ve bunun sonucunda ortaya çıkan pulmoner fibrozile sınırlı kalmıştır 7,8. Bu pulmoner toksisite farelerde özetlenir. Tek bir dozda uygulandığında, ilk enflamatuar fazı takiben, fibroz 5. güne yakın bir zamanda görülebilir ve 14-21 9,10,11. günlerde zirve yapar (Şekil 1). Spontan rezolüsyon yaklaşık 6 hafta sonra ortaya çıkar, ancak tekrarlayan dozlama12 ile kalıcı fibrotik değişiklikler elde edilebilir. Geçici ve enflamatuar doğası göz önüne alındığında, bleomisin model13 ile ilgili bazı doğal dezavantajlar vardır, ancak alanımızın ILD anlayışındaki bazı önemli boşlukları yanıtlamaya başlamak için hızlı, sağlam ve tekrarlanabilir bir sistem sunar ve araştırmacıların son beş yıldaki sonuçları karşılaştırmasına olanak tanır. Diğer kurulum yaklaşımları, benzer zaman kursları (14-28 gün) sunan asbestoz ve silika murin modellerini içerir6,14,15,16. Bununla birlikte, bu modeller, IPF'den daha pnömokonyoz ile daha tutarlı bir histolojik model oluşturur ve havadaki partiküllerin kullanılmasını gerektirir, bu da dikkatli kullanım gerektirir. Alternatif olarak, difteri-toksin ve TGF-β1 gibi epitel güdümlü transgen ekspresyonunu kullanan hayvan modelleri mevcuttur. Bunlar, İPF'de görülen inflamatuar olmayan alveolar tip 2 epitel hücre hasarını özetler, ancak biraz daha uzun sürer (21-30d) ve mevcut herhangi bir transgenik ilgilenilen modele geri çaprazlanması gereken özel hayvanların kullanılmasını gerektirir. Son olarak, TGF-β1, IL-β1 ve TNF-α dahil olmak üzere sitokinlerin adenoviral aracılı aşırı ekspresyonunun, tipik olarak 14. günde pulmoner fibrozisi indüklediği gösterilmiştir 17,18,19. Bu sitokin aşırı ekspresyon modelleri, dikkatli saflaştırma ve kullanım gerektirmesine rağmen, uygun intranazal doğuma izin verir.

Bleomisin verilmesi için intratrakeal (IT), intranazal, intraperitoneal, subkutan ve intravenöz yollar dahil olmak üzere birden fazla yaklaşım mevcuttur6. IT uygulaması en yaygın yöntemdir ve geleneksel olarak endotrakeal entübasyon veya cerrahi trakeostomi20'yi içerir ve her ikisi de derin sedasyon, teknik incelik gerektirir ve perioperatif morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. Son zamanlarda, orofaringeal aspirasyon (OA) tekniğinin, önemli ölçüde daha az yan etki ve daha kolay bir uygulama yolu ile BT kadar eşit derecede etkili olduğu gösterilmiştir 14,21,22,23,24,25,26. Burada, murin akciğerine bleomisin iletimi için OA yöntemi için ayrıntılı bir görsel protokol sunuyoruz ve veri ölçümü için çeşitli potansiyel aşağı akış uygulamalarını vurguluyoruz.

Protokol

Bu deneylerde açıklanan hayvan çalışmaları, UCLA Hayvan Araştırma Komitesi (ARC) ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanan protokoller (ARC-2021-025, ARC-2010-039) kapsamında gerçekleştirilmiştir. Laboratuvar hayvanı kullanımına ilişkin tüm eyalet ve federal düzenlemelere ve politikalara tam uyum sağlandı. Hayvanlar, UCLA'nın Hayvan Bakım Tesisi'nde barındırıldı ve UCLA Laboratuvar ve Hayvan Tıbbı Bölümü'nün (DLAM) kalifiye personeli tarafından patojen içermeyen koşullar altında bakıldı. Yabani tip C57BL / 6 fareleri ticari olarak elde edildi ve en az 14 gün boyunca alışmalarına izin verildi. Bu çalışmalar için ortalama vücut ağırlığı 20-25 g olan 8-12 haftalık erkek fareler kullanıldı. Dişi fareler de kullanılabilir, ancak deney grupları ve koşullar27 arasında hayvanların cinsiyetini ve yaşını eşleştirmek önemlidir. Bu çalışmada kullanılan hayvanların, reaktiflerin ve ekipmanların ticari detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Bleomisinin orofaringeal uygulaması

  1. Bleomisin hazırlanması
    NOT: Hayvanlar ve deneyler arasında tutarlılık ve tekrarlanabilirliği sağlamak için farmasötik dereceli bleomisin kullanın. Bölemeni, kg başına miligram (mg) değil, kg hayvan başına (U / kg) ilaç birimlerinde dozlayın.
    1. Bleomisin tozunu steril, farmasötik dereceli PBS'de 10 U / mL'lik bir stok konsantrasyonuna çözün. Bleomisin, uygun kemoterapötik önlemler kullanılarak kimyasal bir başlık altında hazırlanmalıdır. Alikotları -20 °C'de 6 aya kadar saklayın.
    2. Son çalışma konsantrasyonunu hazırlayın. Doz ağırlığa (0.5-3 U / kg) dayanır ve kullanılan bleomisine ve deneyin amacına bağlı olarak gerektiği gibi ayarlamalar yapılır (ör., hayatta kalma veya ölümcül dozlama).
    3. Son uygulama hacmini gerektiği gibi ayarlayın. Bu çalışmalar için, bleomisin'i 25 g'lık bir fare için 50 μL'ye eşit olan 0.375 U / mL'ye seyreltin ve bu da 0.75 U / kg'lık bir nihai çalışma konsantrasyonu ile sonuçlanır.

2. Anestezi indüksiyonu

  1. Anestezi kokteylini, ketamin ve ksilazini PBS'de sırasıyla 10 mg / mL ve 1 mg / mL'lik çalışma konsantrasyonlarına seyrelterek hazırlayın. Bu adımı, farmasötik dereceli reaktifler kullanarak ve kurumsal olarak onaylanmış protokollere uygun olarak steril koşullar altında gerçekleştirin.
  2. Hayvanın gram vücut ağırlığı başına 10 μL kokteyl uygulayın (çalışma konsantrasyonu: ketamin 100 mg / kg, ksilazin 10 mg / kg) 27.5 G iğne ve 1 mL şırınga kullanılarak intraperitoneal enjeksiyon yoluyla.
    1. Farenin uygun şekilde uyuşturulduğundan ve ayak parmağını sıkıştırmak gibi zararlı uyaranlara yanıt vermediğinden emin olun. Etkileri 5 dakika içinde görülmelidir. Hala yanıt veriyorsa, istenen anestezi seviyesine ulaşılana kadar 20 μL'lik artışlarla ek ketamin / ksilazin uygulayın. Anestezi altındayken göz kuruluğunu önlemek için oftalmik merhem sürün.
      NOT: Ketamin, olumlu yan etki profili nedeniyle enjekte edilen diğer anesteziklere ve sakinleştiricilere göre tercih edilir. Kalp atış hızı ve solunum hızı dahil olmak üzere hemodinamik üzerinde minimal etkileri vardır. İnhale izofluran, alternatif bir anestezik ajan olarak kullanılabilir. Bu çalışmalarda ketamin / ksilazin, uygulamadan sonra uzun süreli sedasyon ve minimal öksürük veya bleomisin reflüsü ile sonuçlandığı için tercih edilir.

3. Orofaringeal uygulama

  1. Düzgün bir şekilde sakinleştirildikten sonra, orofarinksi etkili bir şekilde açmak için fareyi ön kesici dişlerinden asarak 60 ° -80 ° açıyla prosedürel platform üzerinde askıya alın (Şekil 2A).
  2. Burun pasajını düz bir mikrovasküler klemp ile kapatın ve fareyi orofarenksinden nefes almaya zorlayın.
  3. Forseps kullanarak dili orofarenksten geri çekin.
  4. Saplama saplama uçlu bir step pipet kullanarak, istenen hacimde bleomisin veya salin kontrolünü orofarenksin arkasına nazikçe yerleştirin. Bir sıvı kabarcığının büyük ölçüde görünür olduğundan emin olun (Şekil 2B).
  5. Hayvan çözeltiyi aspire edene kadar dili yerinde tutmaya devam edin. Bu gözle görülür ve genellikle duyulabilir bir şekilde belirgin olmalıdır.
    NOT: Hayvan çözeltiyi hızlı bir şekilde aspire ederse, orofarenksin arkasındaki görselleştirme birkaç saniye içinde geçici olabilir. Ne olursa olsun, başarılı olursa, hayvan hızlı, sığ nefesler alarak solunum düzeninde ani ve geçici bir değişiklik gösterecektir. Sıvının köpürmesi meydana gelebilir, bu da sıvının alt solunum yoluna başarıyla girdiğini gösterir. Ara sıra öksürük de ortaya çıkabilir. Bu genellikle bleomisin çözeltisinin ihmal edilebilir bir hacmidir ve deneysel sonuçları etkilememelidir, bu da hayvanın çalışmaya dahil edilmesine izin verir. Boğulma riskini artırdığı ve son ağırlık bazlı dozlamayı değiştirdiği için tekrarlayan dozlamadan kaçının.
  6. Aspirasyon onaylandıktan sonra, burun klipsini dikkatlice çıkarın.
  7. Bleomisin çözeltisinin geri akışı olmadığından emin olmak için hayvanı 15-30 saniye asılı pozisyonda gözlemleyin, ardından kafesine geri koyun.
    NOT: Boğulma riskini en aza indirmek için maksimum 50 μL'lik bir hacim önerilir. İstenilen bleomisin dozuna ve farenin ağırlığına bağlı olarak, bleomisin çözeltisinin konsantrasyonunu gerektiği gibi ayarlayın. Bu tekniği uygularken, solüsyonun mideye değil alt solunum yollarına uygulandığını doğrulamak için Evans mavisi gibi su bazlı bir boya kullanın14.

4. Hayvanların geri kazanılması

  1. Tedaviden sonra, termonötraliteyi korumak için hayvanı altında bir ısıtma yastığı bulunan kafesine yan yatırın.
  2. Fareleri tamamen bilinçli olana kadar izleyin. Bu, kullanılan ketamin dozuna ve hayvanın metabolizmasına bağlı olarak tipik olarak 1-2 saat sürer. Ayak parmaklarını nazikçe sıkıştırın ve uyanmayı kolaylaştırmak için hayvanları ötermik tutun.
  3. Fareleri vücut ağırlığı, tımar, aktivite seviyesi ve solunum durumundaki değişiklikler için günlük olarak klinik olarak izleyin. Diğer bleomisin uygulama yöntemlerine benzer şekilde, hayvanlar 14-21 günlük kurs boyunca önemli ölçüde kilo kaybı yaşayabilir, bu da modelin etkinliğinin önemli bir göstergesidir.
  4. ARC ve IACUC protokolleri uyarınca, kilo kaybı hayvanın başlangıç ağırlığının %20'sini aşarsa hayvanlara ötenazi uygulayın. Kilo kaybının prevalansı ve şiddeti, kullanılan bleomisin dozuna ve farelerin demografik özelliklerine bağlıdır (yukarıya bakınız).

5. Doku toplama, işleme ve son nokta analizi

  1. Deneysel soruya ve istenen zaman noktasına bağlı olarak, fareleri IACUC protokollerine göre ötenazi yapın ve uygun zamanda akciğerlerini28 hasat edin. Bleomisinin etkileri, kontrole kıyasla genellikle görsel olarak büyük ölçüde belirgindir ve bu da başarılı bir uygulama olduğunu gösterir. Bu çalışmalarda fareler 7, 14 ve 21. günlerde sakrifiye edildi.
  2. Histoloji için, akciğerleri en blok halinde inceleyin ve 24 saat boyunca% 4 PFA'da sabitleyin. Daha önce tarif edildiği gibi parafin gömme, kesit alma, hematoksilen ve eozin (H & E) ve / veya Masson'un trikrom boyama ile devam edin 28,29,30.
  3. Kollajen ölçümü için, sağ akciğeri homojenize edin ve daha önce tarif edildiği gibi hidroksiprolin içeriğini ölçmek için ticari olarak temin edilebilen bir kit (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanın31.
  4. Akış sitometrisi için, tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için doku ayrıştırıcısı ve enzimatik bir çözelti kullanarak sağ akciğeri sindirin. Daha önce tarif edildiği gibi akış sitometrik boyama ve analiz yapın 32,33,34.

Sonuçlar

Burada tarif edilen protokol, bleomisin murin modelinde orofaringeal aspirasyon uygulama yolunu özetlemektedir. Bu deneylerde, hayvanlar sahte kontrol için bleomisin (0.75U / kg vücut ağırlığı) veya PBS ile tedavi edildi. 7, 14 ve 21. günlerde, farelere ötenazi yapıldı, akciğerleri çıkarıldı ve daha önce35 tarif edildiği gibi doku sabitlendi. Fibrozis hematoksilen ve eozin (H&E) histolojik boyama kullanılarak değerlendirildi. 7. günde, PBS ko...

Tartışmalar

Pulmoner fibrozisin murin modelinde kullanılmak üzere bleomisin uygulamak için orofaringeal aspirasyon tekniği hakkında ayrıntılı bir video protokolü sağlanmıştır. Ek olarak, OA bleomisinin neden olduğu fibrotik ve inflamasyon değişikliklerini ölçmek için potansiyel aşağı akış uygulamalarını vurguluyoruz.

Hiçbir hayvan insan hastalığının karmaşıklığını tam olarak özetlemese de, bleomisin fare modeli son elli yıldır kulla...

Açıklamalar

Yazarların herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, RW'ye (2T32HL072752-16) verilen NIH Ruth L. Kirchstein Ulusal Araştırma Hizmeti Ödülü (NRSA) Kurumsal Araştırma Eğitim Bursu (T32) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar ayrıca Saul ve Joyce Brandman Vakfı Akciğer Sağlığı Merkezi'nin desteğini de kabul etmek isterler.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
anti-mouse CD45, Brlliant Violet 605BioLegend103155
anti-mouse CD64, AlexaFluor 647BioLegend139322
anti-mouse Ly6G, AlexaFluor 700BioLegend127622
anti-mouse MerTK, PE/Cy7BioLegend151522
anti-mouse SiglecF, PEBD Biosciences552126
BD Luer-Stub AdaptorsFisher Scientific13-681-21
BleomycinMcKesson1129996From NorthStar Rx 16714088601
Endotracheal Mouse Intubation KitKent ScientificETI-MSE
Fixable Live/Dead VioletThermoL34955
FlowJo v10 SoftwareFlowJo
gentleMACS DissociatorMiltenyi130-093-235
Hydroxyproline Assay KitSigmaMAK463
Liberase TMRoche5401127001
Moria Vessel ClampFine Science Tools18350-11
Mouse Endotracheal Intubation KitKentETI-MSE
Stepper PipetteDymaxTI15469
Wildtype C57BL/6 mice Jackson LaboratoriesJAX, stain #000664

Referanslar

  1. Martinez, F. J., et al. Idiopathic pulmonary fibrosis. Nat Rev Dis Primers. 3, 17074 (2017).
  2. Hutchinson, J., Fogarty, A., Hubbard, R., Mckeever, T. Global incidence and mortality of idiopathic pulmonary fibrosis: A systematic review. Eur Respir J. 46 (3), 795-806 (2015).
  3. Richeldi, L., et al. Efficacy and safety of nintedanib in idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2071-2082 (2014).
  4. King, T. E., et al. A phase 3 trial of pirfenidone in patients with idiopathic pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 370 (22), 2083-2092 (2014).
  5. Moore, B. B., et al. Animal models of fibrotic lung disease. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (2), 167-179 (2013).
  6. Moore, B. B., Hogaboam, C. M. Murine models of pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (2), L152-L160 (2008).
  7. Umezawa, H. Chemistry and mechanism of action of bleomycin. Fed Proc. 33 (11), 2296-2302 (1974).
  8. Muggia, F. M., Louie, A. C., Sikic, B. I. Pulmonary toxicity of antitumor agents. Cancer Treat Rev. 10 (4), 221-243 (1983).
  9. Degryse, A. L., et al. Repetitive intratracheal bleomycin models several features of idiopathic pulmonary fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 299 (4), L442-L452 (2010).
  10. Kolb, P., et al. The importance of interventional timing in the bleomycin model of pulmonary fibrosis. Eur Respir J. 55 (6), 1901105 (2020).
  11. Izbicki, G., Segel, M. J., Christensen, T. G., Conner, M. W., Breuer, R. Time course of bleomycin-induced lung fibrosis. Int J Exp Pathol. 83 (3), 111-119 (2002).
  12. Chung, M. P., et al. Role of repeated lung injury and genetic background in bleomycin-induced fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 29 (3 Pt 1), 375-380 (2003).
  13. Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: A useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis. Int J Biochem Cell Biol. 40 (3), 362-382 (2008).
  14. Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Exp Lung Res. 32 (5), 181-199 (2006).
  15. Sanchez, V. C., Pietruska, J. R., Miselis, N. R., Hurt, R. H., Kane, A. B. Biopersistence and potential adverse health impacts of fibrous nanomaterials: What have we learned from asbestos. Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 1 (5), 511-529 (2009).
  16. Barbarin, V., et al. The role of pro- and anti-inflammatory responses in silica-induced lung fibrosis. Respir Res. 6 (1), 112 (2005).
  17. Sime, P. J., Xing, Z., Graham, F. L., Csaky, K. G., Gauldie, J. Adenovector-mediated gene transfer of active transforming growth factor-beta1 induces prolonged severe fibrosis in rat lung. J Clin Invest. 100 (4), 768-776 (1997).
  18. Kolb, M., Margetts, P. J., Anthony, D. C., Pitossi, F., Gauldie, J. Transient expression of il-1beta induces acute lung injury and chronic repair leading to pulmonary fibrosis. J Clin Invest. 107 (12), 1529-1536 (2001).
  19. Sime, P. J., et al. Transfer of tumor necrosis factor-alpha to rat lung induces severe pulmonary inflammation and patchy interstitial fibrogenesis with induction of transforming growth factor-beta1 and myofibroblasts. Am J Pathol. 153 (3), 825-832 (1998).
  20. Orlando, F., et al. Induction of mouse lung injury by endotracheal injection of bleomycin. J Vis Exp. (146), e58922 (2019).
  21. Barbayianni, I., Ninou, I., Tzouvelekis, A., Aidinis, V. Bleomycin revisited: A direct comparison of the intratracheal micro-spraying and the oropharyngeal aspiration routes of bleomycin administration in mice. Front Med (Lausanne). 5, 269 (2018).
  22. Egger, C., et al. Administration of bleomycin via the oropharyngeal aspiration route leads to sustained lung fibrosis in mice and rats as quantified by ute-MRI and histology. PLoS One. 8 (5), e63432 (2013).
  23. Bale, S., Sunkoju, M., Reddy, S. S., Swamy, V., Godugu, C. Oropharyngeal aspiration of bleomycin: An alternative experimental model of pulmonary fibrosis developed in Swiss mice. Indian J Pharmacol. 48 (6), 643-648 (2016).
  24. Scotton, C. J., et al. Increased local expression of coagulation factor x contributes to the fibrotic response in human and murine lung injury. J Clin Invest. 119 (9), 2550-2563 (2009).
  25. Jenkins, R. G., et al. An official American Thoracic Society Workshop report: Use of animal models for the preclinical assessment of potential therapies for pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 56 (5), 667-679 (2017).
  26. Rao, G. V., et al. Efficacy of a technique for exposing the mouse lung to particles aspirated from the pharynx. J Toxicol Environ Health A. 66 (15), 1441-1452 (2003).
  27. Redente, E. F., et al. Age and sex dimorphisms contribute to the severity of bleomycin-induced lung injury and fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301 (4), L510-L518 (2011).
  28. Birjandi, S. Z., et al. CD4(+)CD25(hi)Foxp3(+) cells exacerbate bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Pathol. 186 (8), 2008-2020 (2016).
  29. Hubner, R. H., et al. Standardized quantification of pulmonary fibrosis in histological samples. Biotechniques. 44 (4), 507-514 (2008).
  30. Joshi, N., et al. A spatially restricted fibrotic niche in pulmonary fibrosis is sustained by M-CSF/M-CSFR signalling in monocyte-derived alveolar macrophages. Eur Respir J. 55 (1), 1900646 (2020).
  31. Belperio, J. A., et al. Interaction of IL-13 and C10 in the pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (4), 419-427 (2002).
  32. Misharin, A. V., Morales-Nebreda, L., Mutlu, G. M., Budinger, G. R., Perlman, H. Flow cytometric analysis of macrophages and dendritic cell subsets in the mouse lung. Am J Respir Cell Mol Biol. 49 (4), 503-510 (2013).
  33. Misharin, A. V., et al. Monocyte-derived alveolar macrophages drive lung fibrosis and persist in the lung over the life span. J Exp Med. 214 (8), 2387-2404 (2017).
  34. Tighe, R. M., et al. Improving the quality and reproducibility of flow cytometry in the lung. An official American Thoracic Society workshop report. Am J Respir Cell Mol Biol. 61 (2), 150-161 (2019).
  35. Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and fixation methods useful in mouse lung cancer research. J Vis Exp. 102, e52964 (2015).
  36. Adamson, I. Y., Bowden, D. H. The pathogenesis of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in mice. Am J Pathol. 77 (2), 185-197 (1974).
  37. Southam, D. S., Dolovich, M., O'byrne, P. M., Inman, M. D. Distribution of intranasal instillations in mice: Effects of volume, time, body position, and anesthesia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 282 (4), L833-L839 (2002).
  38. Foster, W. M., Walters, D. M., Longphre, M., Macri, K., Miller, L. M. Methodology for the measurement of mucociliary function in the mouse by scintigraphy. J Appl Physiol (1985). 90 (3), 1111-1117 (2001).
  39. Schrier, D. J., Kunkel, R. G., Phan, S. H. The role of strain variation in murine bleomycin-induced pulmonary fibrosis. Am Rev Respir Dis. 127 (1), 63-66 (1983).
  40. Hecker, L., et al. Reversal of persistent fibrosis in aging by targeting nox4-nrf2 redox imbalance. Sci Transl Med. 6 (231), 231ra247 (2014).
  41. Chaudhary, N. I., Schnapp, A., Park, J. E. Pharmacologic differentiation of inflammation and fibrosis in the rat bleomycin model. Am J Respir Crit Care Med. 173 (7), 769-776 (2006).
  42. Kim, S. N., et al. Dose-response effects of bleomycin on inflammation and pulmonary fibrosis in mice. Toxicol Res. 26 (3), 217-222 (2010).
  43. Wells, A. U., Denton, C. P. Interstitial lung disease in connective tissue disease--mechanisms and management. Nat Rev Rheumatol. 10 (12), 728-739 (2014).
  44. Idiopathic Pulmonary Fibrosis Clinical Research Network. Prednisone, azathioprine, and n-acetylcysteine for pulmonary fibrosis. N Engl J Med. 366 (21), 1968-1977 (2012).
  45. Raghu, G., et al. An official ATS/ERS/JRS/ALAT statement: Idiopathic pulmonary fibrosis: Evidence-based guidelines for diagnosis and management. Am J Respir Crit Care Med. 183 (6), 788-824 (2011).
  46. Kolb, M., et al. Differences in the fibrogenic response after transfer of active transforming growth factor-beta1 gene to lungs of "fibrosis-prone" and "fibrosis-resistant" mouse strains. Am J Respir Cell Mol Biol. 27 (2), 141-150 (2002).
  47. Sisson, T. H., et al. Targeted injury of type ii alveolar epithelial cells induces pulmonary fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 181 (3), 254-263 (2010).
  48. Pierce, E. M., et al. Therapeutic targeting of cc ligand 21 or cc chemokine receptor 7 abrogates pulmonary fibrosis induced by the adoptive transfer of human pulmonary fibroblasts to immunodeficient mice. Am J Pathol. 170 (4), 1152-1164 (2007).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

JoVE de Bu AySay 219

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır