La investigación no podría haberse completado sin la dedicación y el esfuerzo de muchas personas en la Agriculture and Agri-Food Canada Research Centre, Lethbridge, Alberta, Canadá. En ese sentido, agradecemos a: Tara Shelton para pre-y post-operatorio de atención de los animales, la preparación quirúrgica, y anestesiología, el análisis de las muestras, y ayuda con imágenes de vídeo; Randy Wilde y Costa Estela de la atención pre-y post-operatorio; Jenny Gusse para el análisis de la muestra, Byron Lee para la imagen de trocar, y Brian Egland de cría de ovejas. También agradecemos a Brent Selinger (Departamento de Ciencias Biológicas de la Universidad de Lethbridge) para el suministro de equipo de vídeo y asesoramiento, así como otro tipo de ayuda (es decir, producción ejecutiva), y el Plan de Estudios Re-Centro de Desarrollo de la Universidad de Lethbridge de experiencia videografía. Este estudio fue apoyado en parte por subvenciones de los Alimentos y la Red Avanzada de Materiales (GDI), el Canadá-Alberta Industria de Carne Fondo para el Desarrollo (GDI), y de Agricultura y Agroalimentación de Canadá (GDI y JPK).

Procedimiento experimental: <ol><li> Todos los instrumentos se esterilizan en autoclave, no autoclaveable materiales son esterilizados en una solución de esterilización en frío Germex por un mínimo de 10 min. </li><li> Las ovejas son premedicados con acepromacina (0,05 mg / kg), glicopirrolato (0.005 mg / kg), y el tartrato de butorfanol (0,2 mg / kg) de mensajería instantánea, y se fue a 15-20 minutos. </li><li> El cuello se afeita y se ha borrado de la piel quirúrgicamente. Una vez que la vena yugular se visualiza, 0,1 ml de lidocaína se inyecta SC sobre la vena, se introduce el catéter en la vena y se fija a la piel mediante la identificación del ganado etiqueta de cemento y 2 &quot;, cinta de hospital. Durante la cirugía, los animales se les da 10 ml / kg / h de Plasmalyte 148 (por gravedad). </li><li> Diazepam (0,2 mg / kg) se administra IV, y la anestesia se indujo con tiopental sódico (10 mg / kg). Aerosol de lidocaína endotraqueal se aplica a las cuerdas vocales, la oveja está intubado, y se mantiene en el isoflurano (1.5-2.5% en O 100 2% a una tasa de 4 L / min) por la duración de la cirugía. </li><li> El animal se coloca en decúbito dorsal sobre una alfombra con calefacción para ayudar a mantener la temperatura corporal durante la cirugía. Un tubo gástrico se inserta en el rumen para prevenir timpanismo excesivo. </li><li> La parte ventral del abdomen se rasura y la piel se prepara para la cirugía con tres lavados quirúrgicos Prepodyne. El abdomen es entonces cubierto, asegurando que la exposición adecuada de la herida quirúrgica (ombligo en el abdomen caudal) se mantiene. </li><li> Una incisión de línea media 15-20 cm se realiza mediante un electroscapel, caudalmente desde el ombligo, y el pliegue ileocecal se encuentra en el cuadrante inferior derecho del abdomen. El caudal del íleon y el ciego luego se exterioriza. A lo largo del procedimiento, la manipulación del intestino se reduce al mínimo y se tiene cuidado para asegurar el intestino exteriorizado se mantiene húmeda con agua tibia (37-39 ° C) estéril tamponada con fosfato (PBS, pH 7,2). </li><li> Un segmento de 85 cm del íleon (es decir, el &quot;segmento intestinal&quot;) se mide y se sujeta con pinzas Doyen (abrazaderas intestinal) y las grandes pinzas de Kelly en cada extremo del segmento. Dentro del segmento intestinal, &#39;loops&#39; y &#39;espacios intermedios &quot;entre los bucles se establecerá. Pinzas Doyen se colocan en el lado del íleon a unir (anastomosis), y las pinzas de Kelly se colocan en el lado del segmento intestinal del íleon. </li><li> El íleon se corta entre cada Doyen y pinza Kelly y el segmento intestinal designado para los bucles es ligeramente enrojecida dos veces con 60 ml de PBS caliente para eliminar la ingesta. </li><li> Un cóctel de antibióticos de amplio espectro (200 mg de enrofloxacino y 250 mg de metronidazol en PBS caliente, 60 ml de volumen total) se distribuye en todo el segmento intestinal y se dejó durante 30 min. </li><li> Los extremos del corte proximal y distal del íleon (excluyendo el segmento intestinal) se unen para formar un tracto intestinal continua y funcional. En primer lugar, el íleon es alineado por dos suturas, colocados en los bordes mesentérico y antimesentérico del intestino, respectivamente. Entonces, un patrón simple sutura continua (2-0 Vicryl) se completa en ambos lados del intestino para unirse al intestino. </li><li> PBS caliente (3-5 ml) se inyecta en el lugar de anastomosis para comprobar si hay fugas y la falta de sutura. Entonces, la punta de la pinza de Kelly se presiona contra la superficie serosa del intestino, cerca del sitio de la anastomosis, y hacia adentro avanzadas en el sitio de anastomosis para garantizar el lumen intestinal es grande y patente. </li><li> El cóctel de antibióticos se elimina el segmento intestinal. Cada extremo del segmento se cerró con un patrón de sutura continua simple (reabsorbibles; Vicryl 2-0), seguido de un patrón de sutura Vicryl 2-0 con inversión. </li><li> Los 85 cm de longitud del segmento intestinal se divide en tres &quot;bucles&quot; de 15 cm, dos de 15 cm de largo &quot;espacios intermedios&quot; entre los bucles, y dos de 5 cm de longitud de extremo romo compartimentos en los extremos del segmento intestinal (Figura 1) . Los lazos se crean mediante la colocación de una ligadura de todo el intestino con seda 2-0. Es de destacar que los principales vasos mesentéricos no se ligan durante este procedimiento, ya que estas son necesarias para suministrar el intestino con la sangre, mantener la viabilidad intestinal. Además, las ligaduras se quedan mucho tiempo, ya que se utiliza para fijar el catéter. </li><li> Catéteres (tubos de silastic es decir) estar individualmente identificados con un marcador permanente. Una bola de silicio (5 mm de diámetro) que rodea el catéter, se coloca 4-5 cm del extremo del catéter para evitar que el catéter se salga del intestino (Figura 1). Después de la esterilización en autoclave, un ungüento antibiótico no (Orbeseal) es aséptica inserta en el extremo del catéter (3-5 mm), lo que asegura que el catéter queda patente (es decir, no se tapan por la mucosa desprendidas dentro del bucle). </li><li> Una pequeña incisión se coloca en la parte craneal de cada uno de los tres bucles. Cada agujero se agranda con un introductor de catéter (&quot;dilatador de vasos&quot;, es decir), y un segmento de 6-8 cm de catéter se inserta caudalmente enel lazo, hasta que el balón silcone pasa en el lumen (Figura 1). </li><li> La pared intestinal, alrededor de la sonda con una sutura bolsa (2-0 Vicryl). El catéter está asegurada en el intestino mediante la vinculación de la sonda con la seda de ligadura que delineó el extremo craneal del bucle. </li><li> Ampicilina (5 ml, 100 mg / ml en PBS caliente) se inyecta en cada ciclo y espacio intermedio, y el intestino se vuelve a colocar en la cavidad abdominal. Cefazolina (8 ml, 100 mg / ml en PBS caliente) se inyecta en la cavidad peritoneal a través de la incisión abdominal. </li><li> Se hace una incisión única puñalada pequeña se hace a través de la pared abdominal adyacente a la incisión de la línea media, y los catéteres se exteriorizan a través de este sitio. </li><li> La posición y la tensión de los catéteres se ajusta dentro de la cavidad peritoneal. Los músculos abdominales se cierran con un patrón de sutura simple interrumpida (sutura absorbible; catgut n º 3), y la piel se cierra con un patrón de interrupción colchón horizontal (sutura no absorbible; Supramid # 1). </li><li> Una curva del tubo hueco de acero inoxidable (7 mm de diámetro, 10 mm de diámetro exterior y 65 cm de longitud) se inserta bajo la piel cerca de la incisión abdominal, debajo de la piel de un sitio de salida solo caudal en el cuello y entre los hombros. Los catéteres se introducen en el tubo y la empujó hacia adelante por lo menos el 50% de la longitud del tubo. El tubo con los catéteres se tira de la piel en el sitio de salida, la exposición de los catéteres. </li><li> La tensión de los catéteres se ajusta en el sitio de incisión, y la piel se cierra con Supramid # 1. </li><li> Catéteres individuales son identificados y colocados dentro de un vendaje &quot;bolsa&quot;, que se sutura a la piel con Supramid # 1. La bolsa protege a los catéteres de daños posteriores. </li><li> Después de la operación, las ovejas son inyectados IM con flunixina (sid), con una dosis inicial de 2,2 mg / kg, seguida de una dosis de mantenimiento de 1,1 mg / kg una vez por 3 días. Las ovejas también se inyecta IM con Hemostam (3 ml) y enrofloxacina (2,5 mg / kg) sid de 3 y 5 días, respectivamente. Los animales se mantienen en 148 Plasmalyte intravenosa con una solución de dextrosa al 5%, administrada de forma continua con una bomba peristáltica para asegurar que el flujo (145 ml / hr) se desarrolla independientemente de la posición del cuerpo. Se les permite beber ad libitum, sino que se alimentan es restringida hasta que el rumen normal y las funciones intestinales se recuperan. La ingesta de alimentos, el consumo de agua, la temperatura corporal, el paso de las heces y la orina, los ruidos intestinales, dolor abdominal, el comportamiento y las concentraciones de glucosa en sangre son seguidos de cerca (la oferta); cuando sea necesario, las concentraciones de glucosa en los fluidos por vía intravenosa se ajustan para mantener las concentraciones de glucosa en sangre dentro del rango normal. Química sanguínea y hematología (es decir, la albúmina, fosfatasa alcalina, alanina aminotransferasa, amilasa, calcio, colesterol, creatinina, glucosa, fosfato inorgánico, bilirrubina total, proteínas totales, urea, la globulina, sodio, potasio, cloruro, presión parcial de oxígeno, pH, parcial de dióxido de carbono de presión, el bicarbonato y dióxido de carbono total, conteo de glóbulos rojos y glóbulos blancos, hematocrito, hemoglobina, el diferencial de leucocitos en sangre y plaquetas) son controlados antes y después de la cirugía de inmediato, y, posteriormente, cada dos días. Una vez que comienza la función normal del intestino, la terapia de fluidos por vía intravenosa se termina y los animales son trasladados a corrales (es decir, 5-7 días después de la cirugía). Los animales son mantenidos en corrales individuales (a la vista de otros animales), lo que reduce el estrés y el riesgo de sufrir daños a sus bolsas de catéter (por ejemplo, masticar un PenMate). </li><li> Para inyectar los tratamientos en los bucles individuales, 5 ml del tratamiento se inyecta en el catéter usando una jeringa estéril equipado con un calibre 18, con extremos romos aguja. Para garantizar el depósito de todo el tratamiento en el circuito, el catéter se inyecta con 3 ml de PBS. </li></ol> Puntos críticos: Procedimientos de importancia crucial para el éxito de este procedimiento quirúrgico incluyen: (1) verificar que el intestino no se tuerce sobre sí mismo antes de establecer la anastomosis, (2) asegurar la integridad y la permeabilidad de la anastomosis, (3) proteger adecuadamente el catéter para la pared del lazo con la ligadura delinear el extremo craneal del bucle, pero asegurándose de que la unión no afecta a la permeabilidad del catéter; (4) reducción de la manipulación intestinal y la garantía de que el intestino exteriorizado se mantiene húmedo; (5) asegurar el catéter adecuado tensión, (6) garantizando la integridad de la sonda no se ve afectada durante la sutura del músculo y la piel; (7) la prevención de hartarse de las ovejas después de la cirugía (es decir, durante el período de íleo postoperatorio) que puede causar retención ruminal y el deterioro de la función del rumen, y (8) asegurar que los animales reciban tratamiento suficiente líquido por vía intravenosa durante los primeros 3-5 días después de la cirugía, que las concentraciones de glucosa en sangre se controlan cuidadosamente, y las concentraciones de glucosa en los fluidos por vía intravenosa son ResulTed, si es necesario para prevenir la hipoglucemia. <img src="/files/ftp_upload/1301/1301fig1.jpg" alt="la figura 1" /> Figura 1. Representación esquemática de sondaje asas de íleon. Tenga en cuenta los tres de 15 cm de largo por sondaje &quot;loops&quot;, los dos de 15 cm de largo no sondaje &quot;espacios intermedios&quot; establecido entre los lazos, y los dos 5 cm de largo segmentos terminales, todos los establecidos en un 85 cm de largo &#39;del segmento intestinal &quot;de un íleo ovejas.

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	<li>Vidal, J. E., McClane, B. A., Saputo, J., Parker, J., Uzal, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Clostridium+perfringens+beta-toxin+on+the+rabbit+small+intestine+and+colon.">Effects of Clostridium perfringens beta-toxin on the rabbit small intestine and colon.</a> Infect. Immun. 76, 4396-4404 (2008).</li><li>Santos, R. L., Zhang, S., Tsolis, R. M., Baumler, A. J., Adams, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphologic+and+molecular+characterization+of+Salmonella+typhimurium+infection+in+neonatal+calves.">Morphologic and molecular characterization of Salmonella typhimurium infection in neonatal calves.</a> Vet. Pathol. 39, 200-215 (2002).</li><li>Uzzau, S., Leori, G. S., Petruzzi, V., Watson, P. R., Schianchi, G., Bacciu, D., Mazzarello, V., Wallis, T. S., Rubino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonella+enterica+serovar-host+specificity+does+not+correlate+with+the+magnitude+of+intestinal+invasion+in+sheep.">Salmonella enterica serovar-host specificity does not correlate with the magnitude of intestinal invasion in sheep.</a> Infect. Immun. 69, 3092-3099 (2001).</li><li>Gerdts, V., Uwiera, R. R. E., Mutwiri, G. K., Wilson, D. J., Bowersock, T., Kindane, A., Babiuk, L. A., Griebel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+intestinal+'loops'+provide+an+in+vivo+model+to+analyse+multiple+mucosal+immune+responses.">Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses.</a> J. Immunol. Methods. 256, 19-33 (2001).</li><li>Greibel, P. J., Davis, W. C., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+growth+and+differentiation+of+b+cells+isolated+from+follicles+from+ileal+Peyer's+patch+of+sheep.">An analysis of the growth and differentiation of b cells isolated from follicles from ileal Peyer's patch of sheep.</a> Immunology. 75, 601-607 (1992).</li><li>Motyka, G., Greibel, P. J., Reynolds, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agents+that+activate+protein+kinase+C+resue+sheep+ileal+Peyer's+patch+B+cells+from+apoptosis.">Agents that activate protein kinase C resue sheep ileal Peyer's patch B cells from apoptosis.</a> Eur. J. Immunol. 23, 1314-1321 (1993).</li></ol>

Todos los procedimientos en animales experimentales fueron aprobados por el Comité de Cuidado de Animales Institucional (Protocolo de la utilización de animales # 0609) y siguió las directrices establecidas por el Consejo Canadiense de Protección de los Animales. No tenemos nada que revelar.

En este procedimiento, hemos sido capaces de establecer con éxito los catéteres en las asas intestinales establecido en el íleon de los ovinos. Al adherirse a estrictos cuidados post-operatorios, los animales se recuperaron rápidamente del procedimiento, se reanuda la actividad normal de 5-7 días después de la cirugía. Se determinó que el establecimiento de los catéteres dentro de los ciclos no afecta la función inmune o la mucosa intestinal (datos no mostrados) y los animales pueden vivir por lo menos 8 seman...

<table border="1"><tr><td> Categoría / Número del artículo </td><td> Empresa </td><td> Catálogo </td></tr><tr><td colspan="3"> Suministros cirujano </td></tr><tr><td> Guantes quirúrgicos </td><td> WDDC un </td><td> 103091 </td></tr><tr><td> Mascarilla quirúrgica </td><td> WDDC </td><td> MAX53013 </td></tr><tr><td> Bata quirúrgica </td><td> B CDMV </td><td> 3365 </td></tr><tr><td> OB delantal </td><td> WDDC </td><td> 900062 </td></tr><tr><td> Gorro </td><td> WDDC </td><td> 903271 </td></tr><tr><td> EZ cepillo </td><td> WDDC </td><td> BDC377479 </td></tr><tr><td colspan="3"> Anestesia y los medicamentos </td></tr><tr><td> Anestesia de la máquina </td><td> Boyle </td><td> </td></tr><tr><td> Sodasorb </td><td> WDDC </td><td> 108638 </td></tr><tr><td> Laringoscopio </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> Laringoscopio de hoja (hoja Miller # 4) </td><td> WDDC </td><td> 902667 </td></tr><tr><td> Tubo endotraqueal (7,0 a 8,5 mm) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td> Lidocaína spray endotraqueal </td><td> WDDC </td><td> 103364 </td></tr><tr><td> Acepromacina </td><td> WDDC </td><td> AUS01020 </td></tr><tr><td> Glicopirrolato </td><td> WDDC </td><td> SAB2880 </td></tr><tr><td> Butorfanol tartrato </td><td> WDDC </td><td> AYE304541 </td></tr><tr><td> Diazepam </td><td> WDDC </td><td> sab790 </td></tr><tr><td> Tiopental sódico </td><td> WDDC </td><td> 103508 </td></tr><tr><td> Epinefrina hidrocloruro </td><td> WDDC </td><td> 103856 </td></tr><tr><td> Doxapram </td><td> Strathcona Farmacia </td><td> </td></tr><tr><td> Isoflurano </td><td> WDDC </td><td> 100339 </td></tr><tr><td> Hemostam </td><td> WDDC </td><td> 103857 </td></tr><tr><td> Flunixina </td><td> WDDC </td><td> sch140100 </td></tr><tr><td> Enrofloxacina </td><td> WDDC </td><td> hll0049 </td></tr><tr><td> Metronidazol </td><td> WDDC </td><td> 101653 </td></tr><tr><td> Ampicilina </td><td> WDDC </td><td> NOV67185-6 </td></tr><tr><td> Cefazolina </td><td> WDDC </td><td> nov69397 </td></tr><tr><td colspan="3"> Equipos quirúrgicos y suministros </td></tr><tr><td> Electroscapel </td><td> Macan </td><td> MV8 </td></tr><tr><td> Calefacción alfombra </td><td> Kane </td><td> PHMD-48 </td></tr><tr><td> Estómago tubo (tubo de Nalgene 5 / 16 &quot;ID) </td><td> Fisher Scientific </td><td> </td></tr><tr><td> Aguja conductor </td><td> WDDC </td><td> 108338 </td></tr><tr><td> Addison Brown pinza </td><td> WDDC </td><td> 911075 </td></tr><tr><td> Pinza diente de ratón </td><td> CDMV </td><td> 5275 </td></tr><tr><td> Kelly pinza </td><td> WDDC </td><td> 901133 </td></tr><tr><td> Mosquito hemostato </td><td> WDDC </td><td> 108471 </td></tr><tr><td> Carmalt pinza </td><td> WDDC </td><td> 901225 </td></tr><tr><td> Bisturí manejar </td><td> WDDC </td><td> 900285 </td></tr><tr><td> Hoja de bisturí # 22 </td><td> WDDC </td><td> 900511 </td></tr><tr><td> Metzenbaum tijera </td><td> WDDC </td><td> 901166 </td></tr><tr><td> Sharp-tijera afilada </td><td> WDDC </td><td> 108264 </td></tr><tr><td> Toalla pinza </td><td> WDDC </td><td> 901213 </td></tr><tr><td> Allis pinza de tejido </td><td> WDDC </td><td> 901201 </td></tr><tr><td> Decano de la pinza </td><td> WDDC </td><td> 904226 </td></tr><tr><td> Recipiente de acero inoxidable </td><td> WDDC </td><td> 903601 </td></tr><tr><td> De acero inoxidable trocar (curva) </td><td> Proveedor local </td><td> </td></tr><tr><td> Catéter introductor </td><td> WDDC </td><td> 11440 </td></tr><tr><td> Toalla quirúrgica </td><td> CDMV </td><td> 7972 </td></tr><tr><td> Cubrir desechables </td><td> WDDC </td><td> 900035 </td></tr><tr><td> Steri cortina </td><td> CDMV </td><td> 2323 </td></tr><tr><td> Coloque (40 x 40 cm) </td><td> CDMV </td><td> 8358 </td></tr><tr><td> Cubierta quirúrgica (7 &quot;x 11&quot; de apertura) </td><td> CDMV </td><td> 2694 </td></tr><tr><td> Vicryl (2-0) </td><td> WDDC </td><td> JJMJ333H </td></tr><tr><td> Seda 2-0 </td><td> WDDC </td><td> 105248 </td></tr><tr><td> Catgut n º 3 </td><td> WDDC </td><td> CSL547-2070 </td></tr><tr><td> Supramid # 1 </td><td> WDDC </td><td> CSL547-3040 </td></tr><tr><td> Agujas (cortar y no cortar) </td><td> WDDC </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> Catéter </td></tr><tr><td> Tubo de Silastic (0.040 &quot;ID, 0.085&quot; OD) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 11 a 189-15D </td></tr><tr><td> Ungüento Orbeseal </td><td> WDDC </td><td> 106344 </td></tr><tr><td> De silicona transparente (732 multiusos sellador) </td><td> Proveedor local </td><td> </td></tr><tr><td> Aguja de punta roma </td><td> WDDC </td><td> 905035 </td></tr><tr><td> Marcador (permanentes industrial) </td><td> Proveedor local </td><td> </td></tr><tr><td> Bolsa del catéter (construida de Hansaplast 7,5 cm) </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td colspan="3"> Vendajes </td></tr><tr><td> Hospital de la cinta (2 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> 103842 </td></tr><tr><td> Hospital de la cinta (1 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> VLMRENF20 </td></tr><tr><td> Gasa esponja 4x4 </td><td> WDDC </td><td> 107551 </td></tr><tr><td> Gasa se aferran </td><td> WDDC </td><td> 107633 </td></tr><tr><td> Hansaplast 7.5cm </td><td> WDDC </td><td> 104094 </td></tr><tr><td> Hansaplast rippable vendaje </td><td> WDDC </td><td> 104093 </td></tr><tr><td colspan="3"> NeEdles y jeringas </td></tr><tr><td> Jeringa (60 ml) </td><td> WDDC </td><td> 104004 </td></tr><tr><td> Jeringa (10 ml) </td><td> WDDC </td><td> bdc301604 </td></tr><tr><td> Aguja 25G </td><td> WDDC </td><td> BDC305122 </td></tr><tr><td> Aguja 20G </td><td> WDDC </td><td> BDC305175 </td></tr><tr><td> Aguja 18G </td><td> WDDC </td><td> 903353 </td></tr><tr><td colspan="3"> Intravenoso </td></tr><tr><td> Intracath IV catéter (16G 8 &quot;) </td><td> WDDC </td><td> bdc3831621 </td></tr><tr><td> IV equipo de administración (10 de caída) </td><td> WDDC </td><td> 101797 </td></tr><tr><td> 0,9% de NaCl </td><td> WDDC </td><td> BAXJB1322P </td></tr><tr><td> 148 Plasmalyte solución </td><td> WDDC </td><td> BAXJB2534 </td></tr><tr><td> Dextrosa </td><td> WDDC </td><td> MCT60190 </td></tr><tr><td> Bomba peristáltica </td><td> Cole Parmer </td><td> 7524-10 </td></tr><tr><td> Etiqueta de identificación del ganado de cemento </td><td> Proveedor local </td><td> </td></tr><tr><td colspan="3"> Sanatizers / desinfectantes </td></tr><tr><td> Germex solución </td><td> WDDC </td><td> mtc60270 </td></tr><tr><td> El alcohol isopropílico </td><td> WDDC </td><td> 104590 </td></tr><tr><td> Stanhexidine limpiador </td><td> WDDC </td><td> 109248 </td></tr><tr><td> Prepodyne solución </td><td> WDDC </td><td> 105710 </td></tr><tr><td> Prepodyne matorrales </td><td> WDDC </td><td> 105711 </td></tr></table> un Centro de Distribución de Medicamentos occidental LTD, Edmonton, AB. b El Centro de Distribución de Medicamentos Veterinarios Inc., St. Hyacinthe, QE.

catheterization of intestinal loops in ruminants

El intestino es una estructura compleja que está involucrado no sólo en la absorción de nutrientes, sino que también actúa como una barrera entre el individuo y el mundo exterior. Como tal, el intestino desempeña un papel fundamental en inmunovigilancia y la protección de los agentes patógenos entéricos. La investigación de la fisiología y la inmunología intestinal habitualmente emplea &#39;asas intestinales &quot;como modelo experimental. La mayoría de estos modelos de ciclo no son la recuperación de los procedimientos quirúrgicos que estudio a corto plazo (&lt;24 h) cambios en el intestino (1-3). Anteriormente hemos creado un modelo de recuperación de asa intestinal para medir específicamente a largo plazo (&lt;6 meses) los cambios inmunológicos en el intestino de oveja siguiente exposición a las vacunas, adyuvantes y virus (4). Este procedimiento tratamientos localizados a un determinado &#39;loop&#39;, lo que nos permite probar esta zona del intestino. Una desventaja importante de este método es la única ventana de oportunidad para administrar los tratamientos (es decir, en el momento de la cirugía). Además, las muestras tanto de la mucosa intestinal y el contenido luminal sólo pueden ser tomadas a la terminación del proyecto. Otras limitaciones más destacados del modelo anterior es que la manipulación quirúrgica y post-operatorio requerido medidas (por ejemplo, administración de antibióticos y analgésicos) puede afectar directamente el propio tratamiento y / o alterar la función inmune, por lo tanto los resultados de confusión. Por lo tanto, hemos modificado nuestro modelo de asa intestinal mediante la inserción de catéteres a largo plazo en los lazos. Las ovejas se recuperan totalmente del procedimiento, y se ven afectados por los catéteres exteriorizados. En particular, el establecimiento de los catéteres en los bucles nos permite introducir múltiples tratamientos en un intervalo prolongado, después de la recuperación de la cirugía y la eliminación de los fármacos administrados durante la cirugía y el período post-operatorio.

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Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Se describe un nuevo método quirúrgico para la cateterización &quot;asas intestinales&quot; en el íleon de los ovinos. Una vez que los animales se han recuperado de la cirugía y han limpiado los antibióticos y analgésicos, múltiples tratamientos pueden ser depositados directamente en los bucles a través de los catéteres.

La cateterización de asas intestinales en rumiantes

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

catheterization-of-intestinal-loops-in-ruminants

Research

JoVE Journal

Biology

13.6K vistas.  University of Alberta. Se describe un nuevo método quirúrgico para la cateterización "asas intestinales" en el íleon de los ovinos. Una vez que los animales se han recuperado de la cirugía y han limpiado los antibióticos y analgésicos, múltiples tratamientos pueden ser depositados directamente en los bucles a través de los catéteres.

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Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). Both UC and CD, when present in the colon, generate a similar symptom profile which can include diarrhea, rectal bleeding, abdominal pain, and weight loss.1 Although the pathogenesis of IBD remains unknown, it is described as a multifactorial disease that involves both genetic and environmental components.2
There are numerous and variable animal models of colonic inflammation that resemble several features of IBD. Animal models of colitis range from those arising spontaneously in susceptible strains of certain species to those requiring administration of specific concentrations of colitis-inducing chemicals, such as dextran sulphate sodium (DSS). Chemical-induced models of gut inflammation are the most commonly used and best described models of IBD. Administration of DSS in drinking water produces acute or chronic colitis depending on the administration protocol.3 Animals given DSS exhibit weight loss and signs of loose stool or diarrhea, sometimes with evidence of rectal bleeding.4,5 Here, we describe the methods by which colitis development and the resulting inflammatory response can be characterized following administration of DSS. These methods include histological analysis of hematoxylin/eosin stained colon sections, measurement of pro-inflammatory cytokines, and determination of myeloperoxidase (MPO) activity, which can be used as a surrogate marker of inflammation.6
The extent of the inflammatory response in disease state can be assessed by the presence of clinical symptoms or by alteration in histology in mucosal tissue. Colonic histological damage is assessed by using a scoring system that considers loss of crypt architecture, inflammatory cell infiltration, muscle thickening, goblet cell depletion, and crypt abscess.7 Quantitatively, levels of pro-inflammatory cytokines with acute inflammatory properties, such as interleukin (IL)-1&beta;, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF)-&alpha;,can be determined using conventional ELISA methods. In addition, MPO activity can be measured using a colorimetric assay and used as an index of inflammation.8
In experimental colitis, disease severity is often correlated with an increase in MPO activity and higher levels of pro-inflammatory cytokines. Colitis severity and inflammation-associated damage can be assessed by examining stool consistency and bleeding, in addition to assessing the histopathological state of the intestine using hematoxylin/eosin stained colonic tissue sections. Colonic tissue fragments can be used to determine MPO activity and cytokine production. Taken together, these measures can be used to evaluate the intestinal inflammatory response in animal models of experimental colitis.

Experimental models of inflammatory bowel disease have allowed us to examine the complex innate and adaptive immune responses associated with pathogenesis. Using histological scoring, quantification of pro-inflammatory cytokines and myeloperoxidase activity, one can begin to assess these responses seen in inflammatory bowel disease.

La investigación de la inflamación intestinal inducida por DSS en el modelo de la EII

Inflammatory bowel disease (IBD) encompasses a range of intestinal pathologies, the most common of which are ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease ...

Investigación

Biología

A Video Protocol of Retroviral Infection in Primary Intestinal Organoid Culture

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding primary 3D epithelial structures in vitro. Both the architecture and physiological properties of these &#39;mini-guts&#39;, also called organoids, closely resemble their in vivo counterparts. This makes them an attractive model system for the small intestinal epithelium. Using retroviral transduction, functional genetics can now be performed by conditional gene overexpression or knockdown. This video demonstrates the procedure of organoid culture, the generation of retroviruses, and the retroviral transduction of organoids to assist phenotypic analysis of the small intestinal epithelium in vitro. This novel organotypic model system in combination with retroviral mediated gene expression provides a valuable tool for rapid analysis of gene function in vitro without the need of costly and time-consuming generation for transgenic animals.

This protocol explains primary Lgr5-positve organoid culture and the subsequent performance of retroviral transduction. This enables Cre-inducible overexpression or knockdown of the delivered transgene and allows functional studies to be carried out in the novel in vitro organotypic model system.

Un Protocolo de vídeo de la infección retroviral en Primaria Intestinal organoide Cultura

Lgr5-positive stem cells can be supplemented with the essential growth factors Egf, Noggin, and R-Spondin, which allows us to culture ever-expanding ...

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and composed of mature enterocytes, goblet cells and enteroendocrine cells; and crypts, residing proximal to the submucosa and the muscularis, harboring adult stem and progenitor cells and mature Paneth cells, as well as stromal and immune cells of the crypt microenvironment. Until the last few years, in vitro studies of small intestine was limited to cell lines derived from either benign or malignant tumors, and did not represent the physiology of normal intestinal epithelia and the influence of the microenvironment in which they reside. Here, we demonstrate a method adapted from Sato et al. (2009) for culturing primary mouse intestinal crypt organoids derived from C57BL/6 mice. In addition, we present the use of crypt organoid cultures to assay the crypt metabolic profile in real time by measurement of basal oxygen consumption, glycolytic rate, ATP production and respiratory capacity. Organoids maintain properties defined by their source and retain aspects of their metabolic adaptation reflected by oxygen consumption and extracellular acidification rates. Real time metabolic studies in this crypt organoid culture system are a powerful tool to study crypt organoid energy metabolism, and how it can be modulated by nutritional and pharmacological factors.

Real Time Analysis of Metabolic Profile in Ex Vivo Mouse Intestinal Crypt Organoid Cultures

Small intestinal crypt organoids cultured ex vivo provide a tissue culture system that recapitulates growth of crypts dependent on stem cells and their niche. We established a method to assay the metabolic profile in real time in primary mouse crypt organoids. We found organoids maintain physiological properties defined by their source.

Bienes Análisis Tiempo de perfil metabólico en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Culturas ratón intestinal Cripta organoides

The small intestinal mucosa exhibits a repetitive architecture organized into two fundamental structures: villi, projecting into the intestinal lumen and ...

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth factors. Since organoids are highly similar to the original tissue in terms of homeostatic stem cell differentiation, cell polarity and presence of all terminally differentiated cell types known to the adult intestinal epithelium, they serve as an essential resource in experimental research on the epithelium. The possibility to express transgenes or interfering RNA using lentiviral or retroviral vectors in organoids has increased opportunities for functional analysis of the intestinal epithelium and intestinal stem cells, surpassing traditional mouse transgenics in speed and cost. In the current video protocol we show how to utilize transduction of small intestinal organoids with lentiviral vectors illustrated by use of doxycylin inducible transgenes, or IPTG inducible short hairpin RNA for overexpression or gene knockdown. Furthermore, considering organoid culture yields minute cell counts that may even be reduced by experimental treatment, we explain how to process organoids for downstream analysis aimed at quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry. Techniques that enable transgene expression and gene knock down in intestinal organoids contribute to the research potential that these intestinal epithelial structures hold, establishing organoid culture as a new standard in cell culture.

In this video protocol we give a step by step explanation of lentiviral transduction in organoids of primary intestinal epithelium and of processing and downstream analysis of these cultures by quantitative RT-PCR, RNA-microarray and immunohistochemistry.

Un protocolo para la de Lentiviral Transducción y Análisis de Aguas abajo de Intestinal organoides

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Measuring Pressure Volume Loops in the Mouse

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the mouse provides great potential to explore cardiac function at the molecular level. The mouse&#39;s small size does present some challenges in regards to performing detailed cardiac phenotyping. Miniaturization and other advancements in technology have made many methods of cardiac assessment possible in the mouse. Of these, the simultaneous collection of pressure and volume data provides a detailed picture of cardiac function that is not available through any other modality. Here a detailed procedure for the collection of pressure-volume loop data is described. Included is a discussion of the principles underlying the measurements and the potential sources of error. Anesthetic management and surgical approaches are discussed in great detail as they are both critical to obtaining high quality hemodynamic measurements. The principles of hemodynamic protocol development and relevant aspects of data analysis are also addressed.

This manuscript describes a detailed protocol for the collection of pressure-volume data from the mouse.

La medición de volumen de bucles de presión en el ratón

Understanding the causes and progression of heart disease presents a significant challenge to the biomedical community. The genetic flexibility of the ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and epithelial cell integrity, and disruption of the intestinal barrier function contributes to progression of gastrointestinal and systemic disease. Two simple methods are described here to measure the permeability of intestinal epithelium. In vitro, Caco-2BBe cells are plated in tissue culture wells as a monolayer and transepithelial electrical resistance (TER) can be measured by an epithelial (volt/ohm) meter. This method is convincing because of its user-friendly operation and repeatability. In vivo, mice are gavaged with 4 kDa fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran, and the FITC-dextran concentrations are measured in collected serum samples from mice to determine the epithelial permeability. Oral gavage provides an accurate dose, and therefore is the preferred method to measure the intestinal permeability in vivo. Taken together, these two methods can measure the permeability of the intestinal epithelium in vitro and in vivo, and hence be used to study the connection between diseases and barrier function.

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

Two methods are presented here to determine intestinal barrier function. An epithelial meter (volt/ohm) is used for measurements of transepithelial electrical resistance of cultured epithelia directly in tissue culture wells. In mice, the FITC-dextran gavage method is used to determine the intestinal permeability in vivo.

In Vitro e In Vivo métodos para determinar la permeabilidad de la célula epitelial Intestinal

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

Un modelo de ratón de la obstrucción Intestinal parcial

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Apoptosis Induction and Detection in a Primary Culture of Sea Cucumber Intestinal Cells

Primary cultured cells are used in a variety of scientific disciplines as exceptionally important tools for the functional evaluation of biological substances or characterization of specific biological activities. However, due to the lack of universally applicable cell culture media and protocols, well described cell culture methods for marine organisms are still limited. Meanwhile, the commonly occurring microbial contamination and polytropic properties of marine invertebrate cells further impede the establishment of an effective cell culture strategy for marine invertebrates. Here, we describe an easy-to-handle method for culturing intestinal cells from sea cucumber Apostichopus japonicus; additionally, we provide an example of in vitro apoptosis induction and detection in primary cultured intestinal cells. Moreover, this experiment provides details about the appropriate culture medium and cell collection method. The described protocol is compatible with a variety of widely available tissue samples from marine organisms including Echinodermata, Mollusca, and Crustacea, and it can provide sufficient cells for multiple in vitro experimental applications. This technique would enable researchers to efficiently manipulate primary cell cultures from marine invertebrates and to facilitate the functional evaluation of targeted biological materials on cells.

This protocol provides an easy-to-handle method to culture the intestinal cells from sea cucumber Apostichopus japonicus and is compatible with a variety of widely available tissue samples from marine organisms including Echinodermata, Mollusca, and Crustacea.

Inducción y detección de apoptosis en un cultivo primario de células intestinales de pepino marino

Primary cultured cells are used in a variety of scientific disciplines as exceptionally important tools for the functional evaluation of biological ...

3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is compartmentalized into crypts and villi: the stem and proliferating cells are confined to the crypts, whereas the villi epithelium contains only differentiated cells. Hence, the normal intestinal crypts, but not the villi, can give rise to organoids in 3D cultures. The procedure described here is applicable only to villus epithelium undergoing dedifferentiation leading to stemness. The method described uses the Smad4-loss-of-function:&#946;-catenin gain-of-function (Smad4KO:&#946;-cateninGOF) conditional mutant mouse. The mutation causes the intestinal villi to dedifferentiate and generate stem cells in the villi. Intestinal villi undergoing dedifferentiation are scraped off the intestine using glass slides, placed in a 70 &#181;m strainer and washed several times to filter out any loose cells or crypts prior to plating in BME-R1 matrix to determine their organoid-forming potential. Two main criteria were used to ensure that the resulting organoids were developed from the dedifferentiating villus compartment and not from the crypts: 1) microscopically evaluating&#160;the isolated villi to ensure absence of any tethered crypts, both before and after plating in the 3D matrix, and 2) monitoring the time course of organoid development from the villi. Organoid initiation from the villi occurs only two to five days after plating and appears irregularly shaped, whereas the crypt-derived organoids from the same intestinal epithelium are apparent within sixteen hours of plating and appear spherical. The limitation of the method, however, is that the number of organoids formed, and the time required for organoid initiation from the villi vary depending on the degree of dedifferentiation. Hence, depending upon the specificity of the mutation or the insult causing the dedifferentiation, the optimal stage at which villi can be harvested to assay their organoid forming potential, must be determined empirically.

The procedure describes isolation of the villi from the mouse intestinal epithelium undergoing dedifferentiation to determine their organoid forming potential.

Cultivo 3D de organoides del epitelio de las vellosidades intestinales sometidos a desdiferenciación

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Generation of Murine Primary Colon Epithelial Monolayers from Intestinal Crypts

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in the continuity of this barrier can result in inflammatory disorders such as inflammatory bowel disease. One of the limitations in the study of intestinal epithelial biology has been the lack of primary cell culture models, which has obliged researchers to use model cell lines derived from carcinomas. The advent of three dimensional (3D) enteroids has given epithelial biologists a powerful tool to generate primary cell cultures, nevertheless, these structures are embedded in extracellular matrix and lack the maturity characteristic of differentiated intestinal epithelial cells. Several techniques to generate intestinal epithelial monolayers have been published, but most are derived from established 3D enteroids making the process laborious and expensive. Here we describe a protocol to generate primary epithelial colon monolayers directly from murine intestinal crypts. We also detail experimental approaches that can be used with this model such as the generation of confluent cultures on permeable filters, confluent monolayer for scratch wound healing studies and sparse and confluent monolayers for immunofluorescence analysis.

In this protocol, we describe how to generate murine primary epithelial colon monolayers directly from intestinal crypts. We provide experimental approaches to generate confluent monolayers on permeable filters, confluent monolayers for scratch wound healing and biochemical studies, and sparse and confluent monolayers for immunofluorescence analysis.

Generación De Monocapas Epiteliales Murinas Primarias De Colon De Criptas Intestinales

The intestinal epithelium is comprised of a single layer of cells that act as a barrier between the gut lumen and the interior of the body. Disruption in ...