העבודה מומן על ידי מענק מהמכון לרפואה Translational ותרופות, וכן להעניק הכשרה מהמכון לרפואה הנדסה (T32HL007954) באוניברסיטת פנסילבניה, ל &#39;מרלן כהן וג&#39;רום ח Fleisch Scholar גרנט ב אוניברסיטת קונטיקט המרכז לבריאות (LHS) ו - NS-NIH 029331 (FAW).

1. הכנת ציוד <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגבו את מסגרת משאבת stereotaxic עם אתנול 75% כדי לצמצם זיהום חיידקי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מחט מזרק המילטון סיליקה התמזגו. הערה: אם עיקור כימי משמש, הקפידו לשטוף מספר פעמים במים סטריליים לפני השימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגב פני השטח של נייר שעווה פרפין עם אתנול 75% ולאפשר לו להתייבש. </li></ol> 2. הכנת עכבר להזרקה הערה: יש עכברים נמסר מתקן בעל החיים שלכם לפחות 7 ימים לפני הניתוח כדי לאפשר להם להסתגל לסביבה החדשה להפחית את הלחץ. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשקול את העכבר על הבסיס טרום ניתוחית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשרות הרדמה עם חמצן 30%, תחמוצת החנקן ב -70%, ו -4% עד Isoflurane מגיב לצבוט זנב </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק עכבר עם עצירות 0.1mg/kg intraperitoneally על כאבים שלאחר הניתוח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גילוח הקרקפת </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעיל עם עיניים סטריליות וזלין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הקרקפת בבטאדין x 3 מגבונים, אז לאפשר קרקפת יבש </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא 1 חתך קו האמצע ס&quot;מ sagittal של הקרקפת בעזרת איזמל ניתוחים סטרילי הערה: חתך נדיב יאפשר חשיפה מלאה של ציוני דרך הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שבי 1 ס&quot;מ על פני הגחון של הזנב מתחיל 1 ס&quot;מ מבסיס ולהכין בבטאדין x 3 מגבונים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום העכבר על מסגרת stereotaxic הערה: חשוב לוודא עכבר מאובטח בתוך מסגרת עם משטח מקביל הגולגולת עם בסיס הפריים, עם חשיפה מצוינת גבחת לפחות 3 מ&quot;מ מימין גבחת. </li></ol> 3. דימום intracerebral ניתוח הערות: במהלך הניתוח כולו העכבר הוא הרדים עם חמצן 30%, תחמוצת החנקן ב -70%, ו -% 1-3 Isoflurane, שמרו ברציפות ב 37 ± 0.5 מעלות צלזיוס באמצעות thermistor שבשליטת כרית חימום פיקוח על ידי מדחום רקטלי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צרף מחט סטרילית 27 גרם על מזרק 1 סמ&quot;ק על מסגרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם זרוע stereotaxic עד מחט בדיוק מעל גבחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם את הזרוע כך מחט זה ב 2.5 מ&quot;מ לרוחב גבחת התחתון אל פני השטח של הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסובב ידנית מזרק לעשות חור בר על פני הגולגולת תוך יישום תנועה כלפי מטה עדין של טיפול מסגרת נטילת לא לגמרי לחרר הגולגולת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר חור המחט בר להשלים באופן ידני עם מזרק / מחט הערה: השלמת חור בר ביד המאפשר הכרה מיידית כאשר יש לך מחורר את השולחן הפנימי של הגולגולת ממזער את הסיכון של בשוגג דוחפים מחט לתוך המוח parenchyma. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע חתך רוחבי על פני השטח הגחון של הזנב באמצעות להב כירורגי סטרילי ומאפשרים 2-3 טיפות גדולות של דם עורקי ליפול על נייר שעווה פרפין. ואז מהר לעצור את הדימום עם לחץ באמצעות גזה סטרילי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משיכה 17 μL דם לתוך המזרק המילטון מזרק מקום על המשאבה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התאם זרוע stereotaxic לנקודה 5 ° מדיאלית ביחס לציר האנכי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזהירות להתאים זרוע stereotaxic כך קצה המחט היא מעל החור בר בגולגולת ואז נמוך יותר 3.5 מ&quot;מ מחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 2 דקות ואז למשוך את מחט 0.5 מ&quot;מ (כך טיפ כי הוא עמוק 3 מ&quot;מ) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן 5 דקות, כדי לאפשר למוח מחדש להרחיב סביב המחט ולמזער את הסיכון של דם refluxing את מסלול החדרת המחט במהלך ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק 1 דם μL / דקה עבור μL 7.5. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתן 5 דקות כדי לאפשר קרישת דם ראשוני עבור משמרות רקמות להתרחש כדי למזער עליות בלחץ תוך גולגולתי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק את μL הנותרים 7.5 ב μL 1 / דקה </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר מחט להישאר במקום במשך 25 דקות על מנת לאפשר קרישת דם הערה: אי להמתין קרישת הדם יביא דם refluxing את אתר הכנסת מחט כאשר משיכת המחט </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאט לאט למשוך את המחט מיד לשטוף עם מים חמים כדי למנוע כל הדם שיורית המחט של קרישת להבטיח reusability של מחט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את העכבר מהמסגרת ולסגור את הזנב חתכים בקרקפת עם דבק רפואי וטרינרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטל הרדמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר עכבר להתעורר בעת היותו חימם ברציפות עם גישה חופשית לחלח מזון. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור העכבר לכלוב עם להמלטה כאשר ער לחלוטין. המקום המזון גלולה רטוב על רצפת הכלוב כדי לעזור חיות גישה למזון. </li></ol> 4. נציג התוצאות: <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig1.jpg" alt="איור 1"/> באיור 1. סעיף העטרה של המוח עכבר 15 דקות לאחר הניתוח ICH. מיד לאחר להקריב את המוח נבדק להצלחה ICH מבוסס על בדיקה ברוטו של קטע העטרה באתר החדרת המחט. דימומים כי איתר לבסיס המוח, את המסלול מחט בעבר כפיס המוח, או לתוך החדרים נחשבו מוצלחים וכי עכבר חוסל מן מנתח הכל. בסך הכל ICH succeשיעורי ss היו 75-85% ב 50 עכברים עם תמותה 0%. <img src="/files/ftp_upload/2618/2618fig2.jpg" alt="איור 2"/> איור 2. בדיקות צילינדר מדגים hemiparesis שמאל לאחר ICH זכות הגרעינים הבזליים. (א) העכבר מדגם האחורי לאחר הניתוח ICH. הערה המיקום של forelimb רק זכות על הקיר של הגליל לאחר ICH שמאל הגרעינים הבזליים. (ב) גרף של בדיקות צילינדר 1 תוצאות מקבוצה של עכברים לאחר ניתוח ICH (n = 5) לעומת דמה (n = 4). עכברים שאם היו כל נהלים למעט הזרקת דם (מחט היה מוכנס לתוך המוח). עכבר כל הוצב גליל 12 ס&quot;מ זכוכית שקופה בקוטר נצפו במשך 20 מתנשא. המיקום הראשוני של forelimbs על הקיר של הגליל קלע לכל האחורי. תנועות עוקבות (כגון חקירה לרוחב) לא דורגו עד חזר העכבר אל הקרקע האחורי הבא הבקיע. המדד צדדים היה מחושב (# מיקומים forelimb ימין בצד של גליל - שמאל # מיקומים forelimb) / (# ימין + שמאל + # # שניהם), שבו 0 הצביעו על העדפה forelimb ו 1 הצביעו רק forelimb ימין היה בשימוש .

<ol>
	<li>Hua, Y., Schallert, T., Keep, R. F., Wu, J., Hoff, J. T., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+Tests+After+Intracerebral+Hemorrhage+in+the+Rat.">Behavioral Tests After Intracerebral Hemorrhage in the Rat.</a> Stroke. 33, 2478-2484 (2002).</li><li>James, M., Warner, D., Laskowitz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+Models+of+Intracerebral+Hemorrhage:+A+Translational+Perspective.">Preclinical Models of Intracerebral Hemorrhage: A Translational Perspective.</a> Neurocritical Care. 9, 139-152 (2008).</li><li>Foerch, C., Arai, K., Jin, G., Park, K. -. P., Pallast, S., van Leyen, K., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Model+of+Warfarin-Associated+Intracerebral+Hemorrhage.">Experimental Model of Warfarin-Associated Intracerebral Hemorrhage.</a> Stroke. 39, 3397-3404 (2008).</li><li>Nakamura, T., Xi, G., Hua, Y., Schallert, T., Hoff, J. T., Keep, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracerebral+hemorrhage+in+mice:+model+characterization+and+application+for+genetically+modified+mice.">Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 24, 487-494 (2004).</li><li>Rynkowski, M. A., Kim, G. H., Komotar, R. J., Otten, M. L., Ducruet, A. F., Zacharia, B. E., Kellner, C. P., Hahn, D. K., Merkow, M. B., Garrett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+autologous+blood+infusion.">A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion.</a> Nat. Protocols. 3, 122-128 (2008).</li><li>Wang, J., Fields, J., Dor&#233;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+an+improved+preclinical+mouse+model+of+intracerebral+hemorrhage+using+double+infusion+of+autologous+whole+blood.">The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood.</a> Brain Research. 1222, 214-221 (2008).</li><li>Zhao, X., Sun, G., Zhang, J., Strong, R., Song, W., Gonzales, N., Grotta, J. C., Aronowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoma+resolution+as+a+target+for+intracerebral+hemorrhage+treatment:+Role+for+peroxisome+proliferator-activated+receptor+&#947;+in+microglia/macrophages.">Hematoma resolution as a target for intracerebral hemorrhage treatment: Role for peroxisome proliferator-activated receptor &#947; in microglia/macrophages.</a> Annals of Neurology. 61, 352-362 (2007).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

מודל זה כירורגית של דימום intracerebral בעכברים באמצעות עצמיים עורק זנב תוצאות דם מודל לשחזור של דימום ספונטני הגרעינים הבזליים. מודל ICH בעכברים מציע את היתרון של הזמינות של חיות טרנסגניות לחקור פתופיזיולוגיה, אולם גודלם הקטן גורם נהלים נוירוכירורגיים קשה יותר מבחינה טכנ?...

מסגרת Stereotaxic לניתוחי מוח העכבר (Stoelting, 51925) Microinfusion המשאבה ואת המעבד (UMP-3 ו Micro4, מכשירים Precision העולם, סרסוטה, פלורידה) עכבר חם (Stoelting, 50300) עכבר הרדמה שאיפת (Braintree Scientific, EZ-AF9000) 25 μL gastight בורוסיליקט המילטון המזרק עם הבוכנה מצופה ולא מחט (חברת המילטון, רינו, NV, מזרק 1702RN: 765,401, טבעת חזוק: 30949, spacer: 30,946) מחט סיליקה התמזגו לחתוך באורך 2 ס&quot;מ (המילטון, 17739) * הערה המילטון מזרק מחט סיליקה התמזגו ניתן לעשות בה שימוש חוזר עבור ניתוחים רבים אם מעוקרים לפני הניתוח כל אחד. חומרים אלה חיוניים כדי למנוע קרישת הדם. כפפות מנתחים סטרילית שמלת כירורגי, מצנפת מסכה בבטאדין 75% אתנול מחט סטרילית 27 גרם (שימוש יחיד) מזרק סטרילי 1 סמ&quot;ק (שימוש יחיד) להב כירורגי סטרילי Cidex מים סטריליים עצירות ו isoflurane גזה סטרילית שעוות פרפין נייר משבצות דבק רפואי וטרינרי (Vetbond, 3M, סנט פול, מינסוטה)

autologous blood injection to model spontaneous intracerebral hemorrhage in mice

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model. While ICH
accounts for 10-15% of all strokes, there remains no specific
effective therapy. The autologous blood injection model in mice
involves the stereotaxic injection of arterial blood into the basal
ganglia mimicking a spontaneous hypertensive hemorrhage in man. The
response to hemorrhage can then be studied in vivo and the
neurobehavioral deficits quantified, allowing for description of the
ensuing pathology and the testing of potential therapeutic agents. The
procedure described in this protocol uses the double injection
technique to minimize risk of blood reflux up the needle track, no
anticoagulants in the pumping system, and eliminates all dead space
and expandable tubing in the system.

Watch this Scientific Journal Video about Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice at JoVE.com

Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

הדם עצמיים הזרקה מודל של דימום intracerebral בעכברים המתואר פרוטוקול זה משתמש בטכניקת הזרקה כפולה כדי למזער את הסיכון של ריפלוקס הדם במעלה השביל מחט, אין תרופות נגד קרישת דם במערכת שאיבה, ומונע כל שטח מת צינורות להרחבה במערכת.

הזרקת דם עצמיים על דגם דימום intracerebral ספונטנית עכברים

Investigation of the pathophysiology of injury after intracerebral
hemorrhage (ICH) requires a reproducible animal model.  While ICH
accounts for 10-15% ...

autologous-blood-injection-to-model-spontaneous-intracerebral

Research

JoVE Journal

Neuroscience

14.7K Views.  University of Connecticut Health Center. הדם עצמיים הזרקה מודל של דימום intracerebral בעכברים המתואר פרוטוקול זה משתמש בטכניקת הזרקה כפולה כדי למזער את הסיכון של ריפלוקס הדם במעלה השביל מחט, אין תרופות נגד קרישת דם במערכת שאיבה, ומונע כל שטח מת צינורות להרחבה במערכת.

Video: Autologous Blood Injection to Model Spontaneous Intracerebral Hemorrhage in Mice

Modeling Intracerebral Hemorrhage in Mice: Injection of Autologous Blood or Bacterial Collagenase

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related hospitalizations and for which no effective treatments are available to date1,2. Because of the heterogeneity of ICH in humans, various preclinical models are needed to thoroughly explore prospective therapeutic strategies3. Experimental ICH is commonly induced in rodents by intraparenchymal injection of either autologous blood or bacterial collagenase4. The appropriate model is selected based on the pathophysiology of hemorrhage induction and injury progression. The blood injection model mimics a rapidly progressing hemorrhage. Alternatively, bacterial collagenase enzymatically disrupts the basal lamina of brain capillaries, causing an active bleed that generally evolves over several hours5. Resultant perihematomal edema and neurofunctional deficits can be quantified from both models. In this study, we described and evaluated a modified double injection model of autologous whole blood6 as well as an ICH injection model of bacterial collagenase7, both of which target the basal ganglia (corpus striatum) of male CD-1 mice. We assessed neurofunctional deficits and brain edema at 24 and 72 hr after ICH induction. Intrastriatal injection of autologous blood (30 &mu;l) or bacterial collagenase (0.075U) caused reproducible neurofunctional deficits in mice and significantly increased brain edema at 24 and 72 hr after surgery (p&lt;0.05). In conclusion, both models yield consistent hemorrhagic infarcts and represent basic methods for preclinical ICH research.

Clinically relevant animal models of intracerebral hemorrhage (ICH) are needed to extend our knowledge of hemorrhagic stroke and to examine novel therapeutic strategies. In this study, we describe and evaluate two ICH models that implement unilateral injections of either autologous whole blood or bacterial collagenase into the basal ganglia (corpus striatum) of mice.

דימום דוגמנות intracerebral בעכברים: הזרקה של דם או השתלת collagenase קטריאלי

Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) defines a potentially life-threatening neurological malady that accounts for 10-15% of all stroke-related ...

Medicine

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective treatment and failure of large clinical trials aimed at hemostasis and clot removal demonstrate the need for further mechanism-driven investigation of ICH. This research may be performed through the framework provided by preclinical models. Two murine models in popular use include intrastriatal (basal ganglia) injection of either autologous whole blood or clostridial collagenase. Since, each model represents distinctly different pathophysiological features related to ICH, use of a particular model may be selected based on what aspect of the disease is to be studied. For example, autologous blood injection most accurately represents the brain&#39;s response to the presence of intraparenchymal blood, and may most closely replicate lobar hemorrhage. Clostridial collagenase injection most accurately represents the small vessel rupture and hematoma evolution characteristic of deep hemorrhages. Thus, each model results in different hematoma formation, neuroinflammatory response, cerebral edema development, and neurobehavioral outcomes. Robustness of a purported therapeutic intervention can be best assessed using both models. In this protocol, induction of ICH using both models, immediate post-operative demonstration of injury, and early post-operative care techniques are demonstrated. Both models result in reproducible injuries, hematoma volumes, and neurobehavioral deficits. Because of the heterogeneity of human ICH, multiple preclinical models are needed to thoroughly explore pathophysiologic mechanisms and test potential therapeutic strategies.

Preclinical models of intracerebral hemorrhage are utilized to mimic certain aspects of clinical disease. Thus, mechanisms of injury and potential therapeutic strategies may be explored. In this protocol, two models of intracerebral hemorrhage are described, intrastriatal (basal ganglia) injections of autologous blood or collagenase.

הזרקת Intrastriatal של עצמי בדם או קלוסטרידיאל Collagenase כמודלים Murine של Intracerebral שטף דם

Intracerebral hemorrhage (ICH) is a common form of cerebrovascular disease and is associated with significant morbidity and mortality. Lack of effective ...

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, primarily in the substantia nigra. The disease causes motor deficiencies, which present as rigidity, tremors and dementia in humans. Rotenone is an insecticide that causes oxidative damage by inhibiting the function of the electron transport chain in mitochondria. It is also used to model Parkinson&#8217;s disease in the Drosophila. Flies have an inherent negative geotactic response, which compels them to climb upwards upon being startled. It has been established that rotenone causes early mortality and locomotion defects that disrupt the flies&#8217; ability to climb after they have been tapped downwards. However, the effect of rotenone on spontaneous movement is not well documented. This study outlines two sensitive, reproducible, and high throughput assays to characterize rotenone-induced deficiencies in short-term startle-induced locomotion and long-term spontaneous locomotion in Drosophila. These assays can be conveniently adapted to characterize other Drosophila models of locomotion defects and efficacy of therapeutic agents.

Methods to Characterize Spontaneous and Startle-induced Locomotion in a Rotenone-induced Parkinson's Disease Model of Drosophila

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, causing locomotion defects. Rotenone models Parkinson&#8217;s disease in Drosophila. This paper outlines two assays that characterize both spontaneous and startle-induced locomotion deficiencies caused by rotenone.

שיטות כדי לאפיין ספונטניות ומושרות רתיעת תנועה במודל של מחלת פרקינסון מושרה Rotenone של<em&gt; דרוזופילה</em

Parkinson&#8217;s disease is a neurodegenerative disorder that results from the degeneration of dopaminergic neurons in the central nervous system, ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% of the total stroke-related mortality with an important morbidity in terms of neurological outcome. A delayed cerebral vasospasm (CVS) may occur most often in association with a delayed cerebral ischemia. Different animal models of SAH are now being used including endovascular perforation and direct injection of blood into the cisterna magna or even the prechiasmatic cistern, each exhibiting distinct advantages and disadvantages. In this article, a standardized mouse model of SAH by double direct injection of determined volumes of autologous whole blood into the cisterna magna is presented. Briefly, mice were weighed and then anesthetized by isoflurane inhalation. Then, the animal was placed in a reclining position on a heated blanket maintaining a rectal temperature of 37 &#176;C and positioned in a stereotactic frame with a cervical bend of about 30&#176;. Once in place, the tip of an elongated glass micropipette filled with the homologous arterial blood taken from carotid artery of another mouse of the same age and gender (C57Bl/6J) was positioned at a right angle in contact with the atlanto-occipital membrane by means of a micromanipulator. Then 60 &#181;L of blood was injected in the cisterna magna followed by a 30&#176; downward tilt of the animal for 2 minutes. The second infusion of 30 &#181;L of blood into the cisterna magna was performed 24 h after the first one. The individual follow-up of each animal is carried out daily (careful evaluation of weight and well-being). This procedure allows a predictable and highly reproducible distribution of blood, likely accompanied by intracranial pressure elevation that can be mimicked by an equivalent injection of an artificial cerebral spinal fluid (CSF), and represents an acute to mild-model of SAH inducing low mortality.

We described in this protocol a standardized subarachnoid hemorrhage (SAH) mouse model by a double injection of autologous whole-blood into the cisterna magna. The high degree of standardization of the double-injection procedure represents a middle-to-acute model of SAH with relative safety regarding mortality.

הזרקת דם ישירה כפולה לתוך מגנה צ'יסטרנה כודל של דימום Subarachnoid

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred microliters of autologous blood was taken from the tail vein and stereotaxically injected into the pons. The injection process was divided into 2 steps: First, 10 &#181;L of blood was injected into a specific location, anteroposterior position (AP) -9.0 mm; lateral (Lat) 0 mm; vertical (Vert) -9.2 mm, followed by a second injection of the residual blood located at AP -9.0 mm; Lat 0 mm; Vert -9.0 mm with a 20-minute interval. The balance beam test, limb placement test, and the modified Voestch neuroscore were used to evaluate neurological function. Magnetic Resonance Imaging (MRI) was used to assess the volume of hemorrhage in vivo. The symptoms of this model were in line with patients with massive pontine hemorrhage.

We present a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat via dual injection of autologous blood.

דימום פונטין מסיבי על ידי הזרקה כפולה של דם אוטולוגי

We provide a protocol to establish a massive pontine hemorrhage model in a rat. Rats weighing about 250 grams were used in this study. One hundred ...

Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely afflicting a fairly young population. Several animal models of SAH have been developed to investigate the pathophysiological mechanisms behind SAH and to test pharmacological interventions. The pre-chiasmatic, single injection model in the rat presented in this article is an experimental model of SAH with a predetermined blood volume. Briefly, the animal is anesthetized, intubated, and kept under mechanical ventilation. Temperature is regulated with a heating pad. A catheter is placed in the tail artery, enabling continuous blood pressure measurement as well as blood sampling. The atlantooccipital membrane is incised and a catheter for pressure recording is placed in the cisterna magna to enable intracerebral pressure measurement. This catheter can also be used for intrathecal therapeutic interventions. The rat is placed in a stereotaxic frame, a burr hole is drilled anteriorly to the bregma, and a catheter is inserted through the burr hole and placed just anterior to the optic chiasm. Autologous blood (0.3 mL) is withdrawn from the tail catheter and manually injected. This results in a rise of intracerebral pressure and a decrease of cerebral blood flow. The animal is kept sedated for 30 min and given subcutaneous saline and analgesics. The animal is extubated and returned to its cage. The pre-chiasmatic model has a high reproducibility rate and limited variation between animals due to the pre-determined blood volume. It mimics SAH in humans making it a relevant model for SAH research.

Subarachnoid hemorrhage continues to carry a high burden of mortality and morbidity in man. To facilitate further research into the condition and its pathophysiology, a pre-chiasmatic, single injection model is presented.

טרום כיאזמטי, הזרקה יחידה של דם אוטולוגי כדי לגרום לדימום ניסיוני subarachnoid במודל חולדה

Despite advances in treatment over the last decades, subarachnoid hemorrhage (SAH) continues to carry a high burden of morbidity and mortality, largely ...

Establishing a Subarachnoid Hemorrhage Rat Model Induced by Autologous Blood Injection

Source: B&#246;mers, J. et al. <a href="https://app.jove.com/v/62567">Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model.</a> J. Vis. Exp. (2021)
This video demonstrates the procedure for establishing a subarachnoid hemorrhage rat model. An anesthetized rat is implanted with probes to measure intracranial pressure and cerebral blood flow. The target site is identified, and the needle is inserted at a pre-chiasmatic position. Autologous blood is then injected into the subarachnoid space, increasing intracranial pressure and decreasing cerebral blood flow, establishing the model.

Source: B&#246;mers, J. et al. Pre-Chiasmatic, Single Injection of Autologous Blood to Induce Experimental Subarachnoid Hemorrhage in a Rat Model. J. Vis. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuropathology

Cerebrovascular Diseases

Inducing Massive Pontine Hemorrhage in a Rat Model by Autologous Blood Injection

<a href='https://app.jove.com/v/62089/massive-pontine-hemorrhage-by-dual-injection-of-autologous-blood'>Source: Tang, X. et. al., Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (2021)</a>This protocol describes the controlled infusion of autologous blood into the pontine region of a rat's brain to model massive pontine hemorrhage. The purpose is to simulate a localized brain bleed by increasing localized pressure.

Source: Tang, X. et. al., Massive Pontine Hemorrhage by Dual Injection of Autologous Blood. J. Vis. Exp. (2021)This protocol describes the controlled ...

הזרקת דם עצמיים על דגם דימום intracerebral ספונטנית עכברים

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video