The authors have no acknowledgements.

참고 : 모든 동물의 절차는 신시내티 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의과 (NIH 출판 없음 국립 보건원 (National Institutes of Health)에서 실험 동물의 관리 및 사용을위한 설명서에 따라 승인을 수행 하였다 . 85-23) 1996 개정. 1. 안락사와 마우스 소독 <ol><li> 이소 플루 란의 supratheraputic 복용량을 포함하는 드롭 박스에 마우스를 놓고 효과를 흡입 할 수 있습니다. 마우스를 안락사되면, 상자에서 제거합니다. </li><li> Cervically 안락사의 두 번째 수단으로 탈구. </li><li> 70 % 에탄올로 세정하여 동물을 마우스의 외부 표면을 소독. </li></ol> 2. 식별 및 세 가지 다른 지방이 종점의 분리 <ol><li> 갈색 지방 조직 (BAT) 분리 : <ol><li> 확인 모피는 표피와 진피 라예을 통해 절단에 도움이 알코올 클렌징 젖은 상태인지 확인RS. </li><li> 테이블에 대해 그 뒤로와 부정사 위치에 마우스를 놓습니다. </li><li> 단지 집게, 리프트 다이어프램 아래 피부를 잡고 가위로 절개. </li><li> 복막을 노출 마우스의 외주에 가로 잘라. </li><li> 마우스의 상단 절반을 degloving하여 나비 모양의 BAT 저장소를 알 수있다. 한 손으로 낮은 부속과 복부를 잡고 머리를 향해 피부를 당겨입니다. </li><li> 이 테이블에 발생하기 쉬운 위치하도록 마우스의 방향을. 머리 노출 된 저장소를 오염되지 않도록주의하십시오. </li><li> 청소 수술 도구와 장갑의 새로운 쌍로 변경합니다. </li><li> 견갑골과 해당 저장소를 찾습니다. 조심스럽게 나비 꼭대기 어떤 표면 흰색 지방을 제거하고 견갑골 갈색 지방의 나비를 해부하다. 밀접 갈색 지방과 관련된 근육을 피하기 위해주의해야합니다. 참고 : 해부 현미경의 사용은 w 제거하는 것이 좋습니다하이트 지방뿐만 아니라 견갑골 갈색 지방으로부터 분리한다. </li><li> 지방 저장소를 제거하고 2 ml의 microcentrifuge 관에 전송합니다. </li><li> RNA 또는 단백질을 추출 할 경우, -80 ° C에서 액체 질소에 침지하고 저장함으로써 조직을 동결. 열화를 방지하기 위해 한 번에 시료를 동결. 배양 경우, DMEF-12의 조직을 커버하고 모든 샘플이 문화 (추가 정보)에 대한 수집까지 얼음에 설정합니다. </li></ol></li><li> 피하 지방 조직 (SQ)의 분리, 흰 지방 조직 디포 (WAT) : <ol><li> 지방 창고 간격이 교차 오염으로 장갑의 새로운 쌍에 넣습니다. </li><li> 사타구니, 마우스의 하단을 해제 gloving에 의해 삼각형 SQ 저장소를 알 수있다. 한 손으로 부속 상부 흉부를 잡고 다른 손으로 피트를 향해 아래로 피부를 당기는. </li><li> 머리와 노출 된 저장소를 오염되지 않도록주의하면서 앙와위에서 마우스의 방향을. </li><li> 청소 surgica장갑의 새로운 쌍 리터 악기와 변화. </li><li> 조심스럽게 SQ 지방의 삼각형을 해부하다. 지방, 유선 이웃, 근육과 샘플을 오염 또는 혈관을 절단하고 혈액 샘플을 오염하지 않도록주의하십시오. 참고 : 경계선이 명확하게 정의되지 않은 경우 해부 현미경의 사용을 권장합니다. </li><li> 지방 저장소를 제거하고 2 ml의 마이크로 원심 튜브에 전송할 수 있습니다. </li><li> RNA 또는 단백질을 추출 할 경우, -80 ° C에서 액체 질소에 침지하고 저장함으로써 조직을 동결. 열화를 방지하기 위해 한 번에 시료를 동결. </li><li> 염색의 경우, 수정하거나 OCT에 포함. 배양 경우, DMEF-12의 조직을 커버하고 모든 샘플이 문화 (추가 정보)에 대한 수집까지 얼음에 설정합니다. </li></ol></li><li> 생식소 지방 장기의 지방 조직 (VAT) 및 백색 지방 조직 (WAT) 디포의 분리 : <ol><li> 지방 창고 간격이 교차 오염으로 장갑의 새로운 쌍에 넣습니다. </li><li> 공상 과학으로ssors 직접 횡격막 아래, 가로 방향으로 복막을 잘라. coronally 복부 장기를 노출 항문의 중간에 격막에서 복막을 잘라. </li><li> 고환 또는 난소를 찾아 여성의 부고환 남성의 지방 또는 생식 지방으로 알려진 부착 된 흰색 지방 조직을 식별합니다. </li><li> 장갑의 새로운 쌍 청소 수술기구 및 변경 </li><li> 조심스럽게 고환, epididymides 및 바사 deferentia에서 부고환 지방 저장소를 모두 해부. 또는 여성의 경우, 신중하게 난소에서 모두 생식 지방 패드를 해부하다. </li><li> 지방 저장소를 제거하고 2 ML의 마이크로 원심 튜브로 전송. </li><li> RNA 또는 단백질을 추출 할 경우, -80 ° C에서 액체 질소에 침지하고 저장함으로써 조직을 동결. 열화를 방지하기 위해 한 번에 시료를 동결. </li><li> 염색의 경우, 수정하거나 OCT에 포함. 배양 경우, DMEF-12의 조직을 커버하고 모든 샘플이 문화 (추가 정보)에 대한 수집까지 얼음에 설정합니다. </리&gt; </ol></li></ol> 혈관 주위 지방 조직의 3. 분리 (PVAT) <ol><li> 심장의 분리 : <ol><li> 바깥쪽으로 확장 상부 및 하부 부속와 부정사 위치에 마우스를 배치합니다. </li><li> 수술 테이프를 사용하여 보안 부속. </li><li> 위에 나열된로 마우스를 위치하면, 집게로 칼 모양의 과정에 들어 올려 긴장을 만듭니다. 흉강의 하부 부분을 노출, 조리개를 통해 가로로 잘라. </li><li> 칼 모양의 과정에 들어 올려, 긴장을 유지하면서, 단지 흉골의 측면에, 머리를 향해 우량 흉곽을 통해 잘라. </li><li> 쇄골 바로 열등 흉곽을 들고, 두 방향으로 겨드랑이 향해 쇄골의 하부 길이 방향으로 절단. 흉강과 그 내용 (심장, 폐 등)를 분명하게 볼 수 있어야합니다. </li><li> 멸균 GA를 사용하여 외부 피와 유체의 흉강을 청소uze은 유체를 흡수합니다. 수집 기관 또는 선박 (추가 정보) 넘치도록해야합니다. </li><li> 유체 영역이 제거되고 나면, 심장의 노광을 더 허용 폐를 제거하고 부착 혈관 기관지 잘라. </li></ol></li><li> 현지화 및 절제술 대동맥의 혈관 주위 지방 조직 (PVAT) : <ol><li> 간, 위, 비장, 췌장, 소장, 대장 : 더 나은 대동맥의 열등한 부분을 식별 할 때 다음 장기를 제거합니다. </li><li> 제 위장과 식도의 식별과 함께 시작한다. 몸에서 위장을 무료로 위식도 접합부에서 식도를 잘라. </li><li> 다음으로, 창자와 주변 장간막을 식별합니다. 이 대동맥의 신장 부분에 매우 밀접하게 거짓말로 다음 &quot;장을 실행합니다.&quot;, 장간막을 통해 피상적으로 잘라 </li><li> 콜론이 가능한 직장에 가까운 무료 잘라. 따라서, 마우스의 위, 소장과 대장을 확보. </li><li> 다시부착 장간막과 혈관을 통해 절단에 의해 위장, 소장, 대장, 췌장, 비장 이동합니다. 췌장과 비장은 위장, 소장과 대장 무료로 제공한다. </li><li> 모든 돌출부를 제거, 장간막을 간정맥을 통해 절단과 연결하여 간을 제거합니다. </li><li> 내장 층을 버려야 지방은 신장을 둘러싸고 있습니다. 대동맥의 다른 세그먼트에 대한 지리적 마커 역할을하는 생체 내에서 대동맥에 부착 된 신장을 남겨주세요. </li><li> 멸균 1X PBS와 지역을 씻어 멸균 거즈로 흡수에 의해 모든 유체를 제거합니다. </li><li> 마이크로 가위와 마이크로 집게를 사용하여 척추의 등쪽 부착과 식도의 복부 첨부 파일에서 대동맥을 구분합니다. </li><li> 다음과 장골 영역에서의 분기점에 중심에 원점에서 대동맥에게 하행 대동맥의 길이를 분리하여 대동맥을 분리합니다. </li><li> 식별 및 쇄골 하 혈관을 격리 할 것. 이러한 혈관을 분리대동맥 루트에 목에 더 마음에 대동맥 접합과 뿌리를 노출합니다. </li><li> 다음 흉선을 제거하고 심장의 운동을 허용, 완두 동맥, 좌측 경동맥, 좌측 쇄골 하 동맥을 잘라. </li><li> 해부 현미경의 도움으로, 대동맥 주위의 혈관 주위 지방 조직 (PVAT) 층을 볼 수 있습니다. </li><li> 끼 또는 PVAT을 짜내, 부드럽게 마이크로 집게로 대동맥에서 PVAT 방법을 당기지하는 큰 관심을 복용. 조심스럽게 다이어프램의 위치 단지 우수한 흉부 지역에서 시작 마이크로 가위로 대동맥에 PVAT의 첨부 파일을 잘라. 참고 : 해부 현미경을 권장합니다. </li><li> 대동맥 혈관의 장골 분기에 바로 우수한있는 infrarenal 대동맥 지역에서 마무리,이 과정을 대동맥의 전체 길이를 반복합니다. </li><li> 대동맥 궁 PVAT가 요구되는 경우, 낮은 C에서 PVAT을 제거하는 방법과 동일한 방법을 사용아치의 urvature. </li><li> 2 ml의 microcentrifuge 관 (들)에 PVAT 샘플을 놓습니다. </li><li> RNA 또는 단백질을 추출 할 경우, -80 ° C에서 액체 질소에 침지하고 저장함으로써 조직을 동결. 열화를 방지하기 위해 한 번에 시료를 동결. 배양 경우, DMEF-12의 조직을 커버하고 모든 샘플이 문화 (추가 정보)에 대한 수집까지 얼음에 설정합니다. 참고 : 포괄적 인 지방 저장소 분석에 관심이 경우 추가 지방 저장소 고려해야 할은 다음과 같습니다 : 복막, 장간막, 대망, 심낭과 오금을. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+obesity+in+the+United+States,+2009-2010.">Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010.</a> NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).</li><li>Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. 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S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-fat+diet+increases+IL-1,+IL-6,+and+TNF-&#945;+production+by+increasing+NF-&#954;B+and+attenuating+PPAR-&#947;+expression+in+bone+marrow+mesenchymal+stem+cells.">A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-&#945; production by increasing NF-&#954;B and attenuating PPAR-&#947; expression in bone marrow mesenchymal stem cells.</a> Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).</li><li>Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+and+whole-body+fat+synthesis+in+humans+during+carbohydrate+overfeeding.">Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding.</a> Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).</li><li>Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinction+of+white,+beige+and+brown+adipocytes+derived+from+mesenchymal+stem+cells.">Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells.</a> World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).</li><li>Wu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beige+adipocytes+are+a+distinct+type+of+thermogenic+fat+cell+in+mouse+and.">Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and.</a> 150 (2), 366-376 (2012).</li><li>Giralt, M., Villarroya, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White,+brown,+beige/brite:+different+adipose+cells+for+different+functions.">White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions.</a> Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).</li><li>Casteilla, L., P&#233;nicaud, L., Cousin, B., Calise, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choosing+an+adipose+tissue+depot+for+sampling:+factors+in+selection+and+depot+specificity.">Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity.</a> Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).</li><li>Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+adipose+tissue+leukocytosis+in+obesity.">Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity.</a> Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests or other conflicts of interest.

비만은 합병증의 큰 호스트와 지방이 완전히 이해되지하는 역할의 전체 이해 될 수 있습니다; 지방의 분야에 따라서 지속적인 연구가 필요하다. 동물 모델은, 특히 쥐 모델은 질병 및 잠재적 인 제약 트리트먼트 테스트의 진행에 초기 연구에 이상적이다. 이 모델을 사용하여, 정확한 분리 및 지방 창고의 절제 지방에 영향을 질병의 병리학의 연구에서 매우 중요하고 필요한 도구입니다. <p class=...

지방이 때문에 20 세기의 지난 수십 년 동안 비만의 급격한 증가로, 미디어 스포트 라이트에서 주목할만한 활약을 보였습니다. 비만은 현재 성인의 3 분의 1, 미국 (US) 1 어린이와 청소년의 17 %보다 더 많은 영향을 미칩니다. 모든 인종 그룹에 걸쳐, 비만 전염병을 둘러싼 통계 조사는 멕시코 미국 (40.4 %), 모든 스페인 (39.1 %), 그리고 비에 비해 비 히스패닉 흑인 비만 (49.5 %)이 가장 높은 연령 보정 율을 보여 주었다 히스패닉 백인 (34.3 %) 2. 비만의 경제 효과도 의료 시스템에 대한 우려이다. 2012 년, 그것은 2005 년 미국에서 비만 치료의 연간 의료 비용이 1천9백2억달러, 전체 의료 지출 예산의 거의 21 %라고 추정되었다. 슬프게도, 소아 비만은 단독으로 직접 의료 비용 140 억 달러에 대한 책임을 것으로 추정했다. 통계적으로는 평균 의료 비용 것을 결정 하였다비만을 가진 개인이 병적 3-5 않고보다 높은 2천7백41달러 한 해였습니다. 제 2 형 당뇨병, 이상 지질 혈증, 심혈관 질환, 암, 근​​육 골격 장애 및 만성 염증 비만과 같은 다양한 조건의 주요 위험 인자이다. 비만은 깊이 대사 증후군 및 기타 만성 질환 6-8의 병인에 연결됩니다. 비만 및 다른 동반 질환 사이의 이러한 급격한 음의 연결로, 과학 연구는 더 나은 현재의 유행과 지방에 의해 연주 다양하고 중추적 인 역할을 이해하는 데 관심을 집중하고있다. 역사적으로, 지방 조직은 중요하지 않은 것으로 간주하고, 간단한 충전 조직으로 단지 전망되었다. 신진 대사, 호르몬 조절, 염증, 보호 및 절연 9 : 현재, 지방은 몸의 기능에 많은 중요한 역할을하는 것으로 나타났다. 지방 조직은 주로 구성되어있다지방 세포뿐만 아니라 혈관 주위 세포, 혈관 내피 세포, 단핵구, 대 식세포 및 다 능성 줄기 세포 (8)이 포함되어 있습니다. 지방 조직은 별개의 저장소에 몸 전체에 분포한다. 주요 저장소 피하, 근육, subdermally 발견하고, 본능적으로 열 수 있습니다. 지방이 저장소는 장애 8 비만 저장소 특정 감수성을 보여 및 관련 한 저장소에 특정 대사 프로파일을 가지고하는 것으로 나타났다. 전통적으로 지방 조직은 두 가지 유형으로 분류되었습니다 흰색 지방 조직 (WAT)과 갈색 지방 조직 (BAT); 최근 문학이 표시되지만 세 번째 그룹의 현존은 브라이트 또는 베이지 색 지방 (11) 세례. 지방 조직은 서로 다른 색상, 형태학, 대사 기능, 생화학 적 기능과 식 (10)의 유전자 패턴을 가지고있는 것으로 밝혀졌다. WAT의 지방 세포는 하나의 큰 지질 방울과 미토콘드리아의 다양한 양의가 있습니다. WAT지배적으로 몸의 피하 지방과 내장에서 발견된다. 주로 에너지 저장과 장기 보호 WAT 사이트로서 기능한다. BAT의 지방 세포는 다방 형태와 풍부한 미토콘드리아를 가지고있다. BAT는 주로 목 및 가슴의 큰 혈관뿐만 아니라, 견갑골 (12)에 위치한다. 열 발생 (7)을 조절하는 에너지 늘리지 행동에 BAT는 주로 기능. 브라이트 또는 베이지 색 지방은 BAT에 유사한 형태와 표현을 공유하는 것으로 나타났다하지만 흰색 지방 세포 (11)에서 유래 것으로 밝혀졌다. 이 논문에 기술 된 수술 방법은 다음과 같은 요인에 서로 다른 효과를 분석 할 수있는 능력과 연구자를 제공합니다 : 환경, 의약품, 및 유전학, 지방에 미칠를; 뿐만 아니라 유익한 또는 해로운 역할 지방은 질병과 전반적인 건강에 재생 될 때. 또한, 길을 제공하는 단계를 식별하고 지방 조직의 다른 유형을 차단더 나은 수 있도록 저장소 사이의 생화학 적 관계와 차이 이해합니다. 이것은 본체 내의 위치, 기능 및 지방 유형 간의 관계를 결정하는데 도움을 줄 수있다. 이는 상술 한 방법은 시험 관내 연구를 위해 총 시각화, 유전자 발현 분석, 단백질 발현 분석, 조직 학적 검사와 일차 세포주의 분리를위한 수단을 제공함으로써이를 달성한다. 현재 다른 ​​지방 저장소뿐만 아니라 그 해부학 적 위치 대사 동작에 대한 통찰력을 제공하는 많은 문서가있다; 하지만 구체적으로 지역화 식별하고 이러한 저장소를 분리하는 방법에 대한 심도있는 방법을 제공하지 않습니다. 이 수술 방법은 하나 또는 두 저장소 13-14의 분리를 위해 설계된 다른 방법에 비해 박리 및 오염의 최소량 여러 저장소의 분리를 허용하는 정확한 방법을 제공한다. 이 프로토콜의 목적은 제공하는 것이다여러 해부학 적 위치에서 지방 창고의 다른 유형의 식별 및 분리를위한 정확한 방법.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="730">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Name of Reagent/ Equipment</td>
			<td style="width:175px;">Company</td>
			<td style="width:125px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:188px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">isoflurane</td>
			<td>Med-Vet International&#160;</td>
			<td>#RXISO-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:175px;">Fisher</td>
			<td style="width:125px;">07-678-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">DMEF-12</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">D-6421</td>
			<td>Warm in waterbath before putting on tissue</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">2 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:175px;">Midsci</td>
			<td style="width:125px;">MCT-200-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:175px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:125px;">P5368-10PAK</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization, identification, and excision of murine adipose depots

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 reached a staggering sum of $190.2 billion in direct medical costs alone. Obesity is a major risk factor for a wide host of diseases. Historically, little was known regarding adipose and its major and essential functions in the body. Brown and white adipose are the two main types of adipose but current literature has identified a new type of fat called brite or beige adipose. Research has shown that adipose depots have specific metabolic profiles and certain depots allow for a propensity for obesity and other related disorders. The goal of this protocol is to provide researchers the capacity to identify and excise adipose depots that will allow for the analysis of different factorial effects on adipose; as well as the beneficial or detrimental role adipose plays in disease and overall health. Isolation and excision of adipose depots allows investigators to look at gross morphological changes as well as histological changes. The adipose isolated can also be used for molecular studies to evaluate transcriptional and translational change or for in vitro experimentation to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to other published techniques due to the design allowing for isolation of multiple depots with simplicity and minimal contamination.

식별 및 서혜부 피하 지방, 견갑골 갈색 지방, 내장 부고환 지방 (그림 1),뿐만 아니라 대동맥 혈관 주위 지방, 흉부 대동맥 지방, 부신 대동맥 지방과 infrarenal 대동맥 지방의 현지화 (그림 2)를 사용하여 성공적으로 달성되었다 설명 수술 방법. BAT와 WAT 샘플 간의 조직 학적 검사와 차별화 긍정적으로 염색 (그림 3) 헤 마톡 실린 및 에오신 (H &amp; E)를 사용하여 ?...

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Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

때문에 비만 및 다른 동반 질환의 급격한 음의 연결, 역할 지방에 대한 연구는 질병에 재생 및 전반적인 건강을 보증합니다. 우리는 고립과 현장에서 사용하여 지방의 연구를 허용 지방 창고의 절제 및 생체 외 방법에 프로토콜을 제시한다.

현지화, 식별 및 절제 쥣과 지방이 종점의

Obesity has increased dramatically in the last few decades and affects over one third of the adult US population. The economic effect of obesity in 2005 ...

localization-identification-and-excision-of-murine-adipose-depots

Research

JoVE Journal

Medicine

40.9K 조회수.  University of Cincinnati College of Medicine.  때문에 비만 및 다른 동반 질환의 급격한 음의 연결, 역할 지방에 대한 연구는 질병에 재생 및 전반적인 건강을 보증합니다. 우리는 고립과 현장에서 사용하여 지방의 연구를 허용 지방 창고의 절제 및 생체 외 방법에 프로토콜을 제시한다. 

비디오: Localization, Identification, and Excision of Murine Adipose Depots

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

위한 간편한 기법<em&gt; 현장에서</em인간 안구 글로브에서 각막 및 망막 조직의 내장 적출의&gt; 절단

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

연구

의학

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

견갑골 갈색 지방 조직의 Cerenkov 발광 이미징

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

분리 및 설치류 대동맥 절제; 심혈관 질환의 연구에 다목적 기술

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Human Brown Adipose Tissue Depots Automatically Segmented by Positron Emission Tomography/Computed Tomography and Registered Magnetic Resonance Images

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in humans. Detecting BAT is typically confirmed by the uptake of the injected radioactive tracer 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) into adipose tissue depots, as measured by positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) scans after exposing the subject to cold stimulus. Fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI) has the ability to distinguish BAT without the use of a radioactive tracer. To date, MRI of BAT in adult humans has not been co-registered with cold-activated PET-CT. Therefore, this protocol uses 18F-FDG PET-CT scans to automatically generate a BAT mask, which is then applied to co-registered MRI scans of the same subject. This approach enables measurement of quantitative MRI properties of BAT without manual segmentation. BAT masks are created from two PET-CT scans: after exposure for 2 hr to either thermoneutral (TN) (24 &#176;C) or cold-activated (CA) (17 &#176;C) conditions. The TN and CA PET-CT scans are registered, and the PET standardized uptake and CT Hounsfield values are used to create a mask containing only BAT. CA and TN MRI scans are also acquired on the same subject and registered to the PET-CT scans in order to establish quantitative MRI properties within the automatically defined BAT mask. An advantage of this approach is that the segmentation is completely automated and is based on widely accepted methods for identification of activated BAT (PET-CT). The quantitative MRI properties of BAT established using this protocol can serve as the basis for an MRI-only BAT examination that avoids the radiation associated with PET-CT.

The method presented here uses 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography/computed tomography (PET-CT) and fat-water separated magnetic resonance imaging (MRI), each scanned following 2 hr exposure to thermoneutral (24 &#176;C) and cold conditions (17 &#176;C) in order to map brown adipose tissue (BAT) in adult human subjects.

인간의 갈색 지방 조직의 종점은 자동으로 양전자 방출 단층 촬영 / 전산화 단층 촬영 분단과 자기 공명 이미지 등록

Reliably differentiating brown adipose tissue (BAT) from other tissues using a non-invasive imaging method is an important step toward studying BAT in ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

지방 조직의 종점에 이식 캡슐화 열 발생 Preadipocytes

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Vessel-sparing Excision and Primary Anastomosis

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short bulbar or posterior urethral strictures, urethroplasty by excision and primary anastomosis (EPA) is recommended. As EPA only requires the excision of the narrowed segment and the surrounding spongiofibrosis, a full-thickness transection of the corpus spongiosum, as performed in the traditional transecting EPA (tEPA), is usually unnecessary. Jordan et al. introduced the idea of a vessel-sparing approach in 2007, aiming to reduce surgical trauma, especially to the dual arterial blood supply of the urethra, and, thus, potentially reducing the risk of postoperative erectile dysfunction or glans ischemia. This approach could also be beneficial for subsequent urethral interventions such as redo urethroplasty using a free graft, in which a well-vascularized graft bed is imperative. Nevertheless, these potential benefits are only assumptions as prospective studies comparing the functional outcome of both techniques with validated questionnaires are currently lacking. Moreover, vessel-sparing EPA (vsEPA) should at least be able to provide similar surgical outcomes as tEPA. The aim of this paper is to give an elaborate, step-by-step overview of how to manage patients with isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vsEPA. The main objective of this manuscript is to outline the surgical technique and to report the representative surgical outcome. A total of 117 patients were managed according to the described protocol. The analysis was performed on the entire patient cohort and on the bulbar (n = 91) and posterior (n = 26) vsEPA group separately. Success rates were 93.4% and 88.5% for the bulbar and posterior vsEPA, respectively. To conclude, vsEPA, as outlined in the protocol, provides excellent success rates with low complication rates for isolated short bulbar and posterior urethral strictures.

Here, we present an elaborate and efficient protocol to treat isolated short bulbar or posterior urethral strictures with vessel-sparing excision and primary anastomosis.

선박을 살려주는 절단 및 기본 문 합

Urethroplasty is considered to be the standard treatment for urethral strictures since it provides excellent long-term success rates. For isolated short ...

Electromagnetic Navigation Transthoracic Nodule Localization for Minimally Invasive Thoracic Surgery

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or excision. Many of these nodules are identified and excised via minimally invasive thoracic surgery; however, subcentimeter and subsolid nodules are frequently difficult to identify intra-operatively. This can be mitigated by the use of electromagnetic transthoracic needle localization. This protocol delineates the step-by-step process of electromagnetic localization from the pre-operative period to the postoperative period and is an adaptation of the electromagnetically guided percutaneous biopsy previously described by Arias et al. Pre-operative steps include obtaining a same day CT followed by the generation of a three-dimensional virtual map of the lung. From this map, the target lesion(s) and an entry site are chosen. In the operating room, the virtual reconstruction of the lung is then calibrated with the patient and the electromagnetic navigation platform. The patient is then sedated, intubated, and placed in the lateral decubitus position. Using a sterile technique and visualization from multiple views, the needle is inserted into the chest wall at the prechosen skin entry site and driven down to the target lesion. Dye is then injected into the lesion and, then, continuously during needle withdrawal, creating a tract for visualization intra-operatively. This method has many potential benefits when compared to the CT-guided localization, including a decreased radiation exposure and decreased time between the dye injection and the surgery. Dye diffusion from the pathway occurs over time, thereby limiting intra-operative nodule identification. By decreasing the time to surgery, there is a decrease in wait time for the patient, and less time for dye diffusion to occur, resulting in an improvement in nodule localization. When compared to electromagnetic bronchoscopy, airway architecture is no longer a limitation as the target nodule is accessed via a transparenchymal approach. Details of this procedure are described in a step-by-step fashion.

Presented here is a protocol for lung nodule localization using dye marking via electromagnetically navigated transthoracic needle access. The technique described here can be accomplished in the peri-operative period to optimize nodule localization and to successful resection when performing minimally invasive thoracic surgery.

최소 침습적 흉부 수술을 위한 전자기 네비게이션 흉부 결절 국소화

The increased use of chest computed tomography (CT) has led to an increased detection of pulmonary nodules requiring diagnostic evaluation and/or ...

Isolation and Purification of Murine Cardiac Pericytes

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier integrity. However, their tissue-specific functions in the heart are not well understood. Moreover, there is currently no protocol utilizing readily accessible materials to isolate and purify pericytes of cardiac origin. Our protocol focuses on using the widely used mammalian model, the mouse, as our source of cells. Using the enzymatic digestion and mechanical dissociation of heart tissue, we obtained a crude cell mixture that was further purified by fluorescence activating cell sorting (FACS) by a plethora of markers. Because there is no single unequivocal marker for pericytes, we gated for cells that were CD31-CD34-CD45-CD140b+NG2+CD146+. Following purification, these primary cells were cultured and passaged multiple times without any changes in morphology and marker expression. With the ability to regularly obtain primary murine cardiac pericytes using our protocol, we hope to further understand the role of pericytes in cardiovascular physiology and their therapeutic potential.

We have optimized a protocol to isolate and purify murine cardiac pericytes for basic research and investigation of their biology and therapeutic potential.

뮤린 심장 pericytes의 격리 및 정화

Pericytes, perivascular cells of microvessels and capillaries, are known to play a part in angiogenesis, vessel stabilization, and endothelial barrier ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

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현지화, 식별 및 절제 쥣과 지방이 종점의