This work was funded by the German Ministry of Defense (Grant No. M-SAB1-6-A009).

הפרוטוקול הבא מתאר טכניקות לחקירה של נדידת תאי אנדותל המוקדמת. הטיפוח הנכון של תאי האנדותל של כלי דם דורש מראש ציפוי של צלוחיות תרבית תאים עם ג&#39;לטין כדי להבטיח שגשוג ותחזוקה נאותים של פנוטיפ האנדותל. 1. טרום ציפוי של צלוחיות תרבית תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ממיסים ג&#39;לטין ב 0.1 M PBS לריכוז סופי של 0.1%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיטוי הפתרון עם פרמטרים למעוקר נוזלי (לפרטים ראו הוראות של החיטוי הספציפי). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף נפח מספיק של פתרון ג&#39;לטין autoclaved לבקבוק תרבות תא סטרילי (למשל, לפחות 5 מיליליטר לבקבוק תרבית תאי T25). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את צלוחיות לחממה (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 אינו נדרש אבל לא מפריע) לפחות 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את פתרון ג&#39;לטין שנותר. השתמש בצלוחיות מצופים מראש לאחר מכן (ראה טיפוח תא) או שלקרע בתנאים סטריליים עד לשימוש. </li></ol> 2. טיפוח תא של תאי האנדותל מוקדמים הערה: תאי האנדותל מוקדמים בתאי גזע עובריים נגזרים (EEC) התקבלו מגופי embryoid עכברי מובחנים על ידי מיון תא מופעל מגנטי של שבריר התא החיובי PECAM-1 כמתואר לעיל 10,11. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות EEC על תרבות מנות תא ג&#39;לטין המצופה DMEM בתוספת 15% FCS, 50 U / פניצילין מיליליטר, 50 U / ml סטרפטומיצין, L-גלוטמין 200 מיקרומטר, SS-mercaptoethanol 100 מיקרומטר ו 1% חומצות אמינו לא חיוניות. לטפל בתאים בתנאים סטריליים. לטפח את התאים עם 5% CO 2 על 37 מעלות צלזיוס ולחות של 95% עד תת-מפגש (מקסימום. 80%). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתת-מפגש, לפצל את התאים ביחס של 1: 5. הערה: הפלוגה של תאי האנדותל היא שלב קריטי. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לקצור את התאים עם Accutase RT. הסר את המדיה, לשטוף עם PBS ולהוסיף 1 מיליליטר של Accutase 25 סנטימטר ל <sup&gt; 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה הבקבוק ב RT עבור 2-10 דקות, עד שהתאים מנותקים. לפזר את התאים ולהעביר אותם ליישום הרצוי. הערה: נטרול כימי של Accutase אינו נדרש כפי שהוא מתרחש כאשר תאי זרע מאוחסנים בחממה על 37 מעלות צלזיוס. עם זאת, Accutase פעילות יכולה גם להיות ירידה על ידי הוספת DMEM FCS המכיל. </li></ol></li></ol> 3. וידן קאמרית הערה: מבחני קאמריים בוידן מבוצעים על ידי השימוש במערכות הכנס terephthalate פוליאתילן אור-אטומה עם גודל נקבובית 8 מיקרומטר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טרום מעיל מוסיף מסנן (נכון שבתוך בארות תרבית תאים ובכך ליצור חדר וידן) על ידי הוספת 500 μl של ג&#39;לטין 0.1% מומס ב0.1 M PBS לפחות 30 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם תאים הם להיחשף לחומרים כימיים רעילים, לחשוף על פי תכנון הניסוי הספציפי לפני קצירת תא. הערה: תאים נחשפו ל12.5 מיקרוגרם כלוראמבוציל / מיליליטר DMEMלמשך 24 שעות. בכל קשור לתכנון הניסוי הספציפי, הוראות עשויות להשתנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר EEC ולקבוע את המספר הסלולרי באמצעות תא תא ספירה. הערה: ניתן להשתמש במכשירי ספירה אוטומטיים, אך יש להשתמש בזהירות: ספירת תאים במדריך היא מדויקת יותר ומומלצת מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 500 בינוני תרבית תאי μl לתוך תא התא התחתון של לשכת וידן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף בדיוק 10 4 EEC ב 500 בינוני תרבית תאי μl להוספת מסנן בתא התא העליון. לחסל את הבועות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה מוסיף מסנן בחממה במשך 8 שעות בדיוק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף עם PBS אחת ולהחליף בינוניים עם paraformaldehyde 0.5 מיליליטר 4% בשני התאים במשך 25 דקות לקיבוע תא. שטוף את המסנן בהרחבה אבל לפחות 3 פעמים עם 0.1 M PBS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלו הקרומים עם אזמל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר הקרום בין שני תלושי כיסוי זכוכית עם הרכבה בינונית מכילים DAPI לstainin הגרעיניז. שים לב לנטייה. ודא כי תאים רק שהגרו לכיוון צד התא התחתון של הקרום נספרים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים שהגרו לכיוון צד התא התחתון של הקרום עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהגדלה 400X. אל תבלבלו את הנקבוביות קרום עם תאים נדדו (איור 1 א, 1 ב &#39;). לחקור מספר סביר של חזרות ביולוגיות (לפחות 3 משכפל ביולוגי למצב). </li></ol> 4. ריפוי פצע Assay <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לציוד זמין, לבחור בקפידה את מנות תרבית תאים או צלחות: בעת השימוש במיקרוסקופ דסק&quot;ש, להימנע ממאכלים המבוססת תרבות משטח פלסטיק או צלחות טובות, אבל להשתמש במכשירים מבוססים זכוכית במקום. הערה: אם באמצעות מיקרוסקופ שלב בניגוד, יכולות לשמש גם צלחות פלסטיק מבוססת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפח EEC במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, צלחת פטרי 4 סנטימטר זכוכית תחתונה מתאים להדמיה תא חי) עד מפגש 80%. חשוב: לא לטפח את התאים כדי להשלים מפגש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגרד את monolayers עם 10 טיפים פיפטה μl סטרילי. דחף את הקצה בעדינות בלי יותר מדי לחץ על פני השטח הצלחת ולהעביר אותו בקו ישר בצורה חלקה מצד אחד לother.Wash התאים פעמיים עם 0.1 M PBS להסיר תאים מנותקים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת נפח מספק של מדיום למנה התרבות. במידת צורך, להוסיף תרכובות שיש לחקור. הערה: 1.5 מיליליטר בינוני מכיל 15 ng / ml אלפא חומצה לינולנית נוסף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר צלחת התרבות תחת מיקרוסקופ מסוגל הדמיה תא חי. ודא 5% CO 2, 37 מעלות צלזיוס ואווירת humidified. הערה: לחות חשוב במיוחד כדי למנוע אידוי בינוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות זמן לשגות מעל 24 שעות ב 10 דקות במרווחים. תכנית לגדלי קבצים גדולים. הערה: רזולוציה של 512 x 512 פיקסלים היא בדרך כלל מספיק; עם זאת, אנו ממליצים להשתמש בתמונות של לפחות 1,024 x 1,024. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מדוד את רוחב הפער בזמן t = 0 שעה ובזמן t = 24 שעות באמצעות כלי האורך של התוכנה המסופק עם מיקרוסקופ או להשתמש בתוכנת קוד פתוח (לדוגמא, ImageJ). הערה: בתוכנת רכישת תמונה וניתוח ספציפית כללית מסופק על ידי היצרן. לכן, לפרטים טכניים בנוגע לשימוש בתוכנה, עיינו במדריך. </li></ol> מעקב 5. סלולארי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בהתאם לציוד זמין, לבחור בקפידה את מנות תרבית תאים או צלחות: בעת השימוש במיקרוסקופ דסק&quot;ש, להימנע ממאכלים המבוססת תרבות משטח פלסטיק או צלחות טובות, אבל להשתמש במכשירים מבוססים זכוכית במקום. הערה: אם באמצעות מיקרוסקופ שלב בניגוד, יכולות לשמש גם צלחות פלסטיק מבוססת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זרע 5 x 10 4 EEC DMEM בתוספת במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, צלחת 24 multiwell) ולטפח את התאים עם 5% CO 2 על 37 מעלות צלזיוס ולחות% 95 במשך 1-2 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר התאים גדלו עד 80מפגש%, להסיר את המדיה ותרבות התאים עם המדיה חדשה בנוכחות חומרי הבדיקה המתאימות (למשל, 12.5 מיקרוגרם כלוראמבוציל / מיליליטר DMEM). תמיד כוללים תאי שליטה (שטופלו בממס, למשל, אתנול) על 37 מעלות צלזיוס למשך פרק זמן מסוים (24 שעות, בהתאם למערכת assay הבודד). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הר צלחת התרבות תחת מיקרוסקופ מסוגל הדמיה לחיות תא (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ולחות של 95%). לרכוש תמונות זמן לשגות מעל 24 שעות במרווחים מוגדרים מראש. לרכוש תמונות במרווחים של 10 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבצע באופן ידני מעקב של השוק האירופי המשותף על ידי השימוש בתוסף ImageJ MTrackJ. בחר 10 תאים באופן אקראי משדה הראייה ולעקוב אחר תנועותיהם על ידי הוספת נקודה לכל נקודת נתונים בזמן באמצעות &quot;הוסף&quot; הפקודה של MTrackJ. </li></ol> הערה: MTrackJ זמין בחינם ובImageJ הוא availab [Meijering, Mtrackj &quot;http://www.imagescience.org/meijering/software/mtrackj/&quot;.]le ב[ Rasband, ImageJ. &quot;http://rsbweb.nih.gov/ij/&quot;]. במדריך מפורט על תוסף MTrackJ זמין ב&quot; http://www.imagescience.org &quot;. 6. הדמיה של תא חי / הערכה של מיטוכונדריאלי ממברנה פוטנציאלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטפח EEC במכשיר תרבית תאים מתאים (למשל, 4 סנטימטר צלחת זכוכית תחתונה פטרי מתאימה להדמיה תא חי) עד מפגש 80%. חשוב: אל לטפח את התאים כדי להשלים מפגש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במידת צורך, לחשוף את התאים לכימיקלים. הערה: תאים נחשפו לכלוראמבוציל / מיליליטר 12.5 מיקרוגרם למשך 24 שעות. בכל קשור לתכנון הניסוי הספציפי, הוראות עשויות להשתנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן פתרון 10 מ&quot;מ מניות של tetramethylrhodamine (TMRM) בDMSO. להגן מפני אור. הערה: פתרון המניות ניתן לאחסן ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את פתרון המניות במדיום תרבית תאים לפתרון עובד עם ריכוז של 10 מיקרומטר (1: 1,000 דילול). להגן מפני אורולהשתמש בהקדם האפשרי. הערה: הפתרון עובד יכול להיות כל הזמן בRT לכמה זמן (HR&gt; 1), לעומת זאת, הכנה של פתרון עובד טרי מומלצת מאוד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 2 μl של הפתרון עובד עד 1 מיליליטר בינוני (פתרון טעינה) תרבית תאים טרי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טען את התאים על ידי החלפה בינוני תרבית תאים עם פתרון הטעינה. דגירה במשך 15 דקות על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 ואווירה humidified (חממה). זהירות: כמעט כל האינדיקטורים הקרינה מיוצאים על ידי תאי חיים לאורך זמן; לכן להימנע מהעמסה ממושכת או ניתוח מתעכב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ללא שטיפה, מניח את הצלחת תחת מיקרוסקופ המתאים להדמיה תא חי. חשובה: מדדי הקרינה הם רגישים מאוד לאור, ולכן, יש להימנע מחשיפה לאור מיותרת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרכוש תמונות מבלי לשנות את הפרמטרים הרכישה כדי להבטיח השוואתיים בין תמונות שונות. </li></ol>

<ol>
	<li>Bauer, S. M., Bauer, R. J., Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis,+vasculogenesis,+and+induction+of+healing+in+chronic+wounds.">Angiogenesis, vasculogenesis, and induction of healing in chronic wounds.</a> Vascular and Endovascular Surgery. 39, 293-306 (2005).</li><li>Reinke, J. M., Sorg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> European Surgical Research. Europaische Chirurgische Forschung. Recherches Chirurgicales Europeennes. 49, 35-43 (2012).</li><li>Hart, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation.+1:+Its+role+in+the+healing+of+acute+wounds.">Inflammation. 1: Its role in the healing of acute wounds.</a> Journal of Wound Care. 11, 205-209 (2002).</li><li>Liu, Z. J., Hyperoxia Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=endothelial+progenitor+cell+mobilization,+and+diabetic+wound+healing.">endothelial progenitor cell mobilization, and diabetic wound healing.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 10, 1869-1882 (2008).</li><li>Gallagher, K. A., Goldstein, L. J., Thom, S. R., Velazquez, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperbaric+oxygen+and+bone+marrow-derived+endothelial+progenitor+cells+in+diabetic+wound+healing.">Hyperbaric oxygen and bone marrow-derived endothelial progenitor cells in diabetic wound healing.</a> Vascular. 14, 328-337 (2006).</li><li>Kehe, K., Balszuweit, F., Steinritz, D., Thiermann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+toxicology+of+sulfur+mustard-induced+cutaneous+inflammation+and+blistering.">Molecular toxicology of sulfur mustard-induced cutaneous inflammation and blistering.</a> Toxicology. 263, 12-19 (2009).</li><li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitrogen+mustard+(Chlorambucil)+has+a+negative+influence+on+early+vascular+development.">Nitrogen mustard (Chlorambucil) has a negative influence on early vascular development.</a> Toxicology. 263, 32-40 (2009).</li><li>Steinritz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+N-acetyl+cysteine+and+alpha-linolenic+acid+on+sulfur+mustard+caused+impairment+of+in+vitro+endothelial+tube+formation.">Effect of N-acetyl cysteine and alpha-linolenic acid on sulfur mustard caused impairment of in vitro endothelial tube formation.</a> Toxicological Sciences. 118, 521-529 (2010).</li><li>Steinritz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chlorambucil+(nitrogen+mustard)+induced+impairment+of+early+vascular+endothelial+cell+migration+-+Effects+of+alpha-linolenic+acid+and+N-acetylcysteine.">Chlorambucil (nitrogen mustard) induced impairment of early vascular endothelial cell migration - Effects of alpha-linolenic acid and N-acetylcysteine.</a> Chemico-biological Interactions. 219C, 143-150 (2014).</li><li>Schmidt, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+endostatin+on+embryonic+vasculo-+and+angiogenesis.">Influence of endostatin on embryonic vasculo- and angiogenesis.</a> Developmental Dynamics : an Official Publication of the American Association of Anatomists. 230, 468-480 (2004).</li><li>Dainiak, M. B., Kumar, A., Galaev, I. Y., Mattiasson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+cell+separations.">Methods in cell separations.</a> Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 106, 1-18 (2007).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+VEGF-induced+endothelial+cell+migration+by+mitochondrial+reactive+oxygen+species.">Regulation of VEGF-induced endothelial cell migration by mitochondrial reactive oxygen species.</a> American Journal of Physiology. Cell physiology. 301, C695-C704 (2011).</li><li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li><li>Relou, I. A., Damen, C. A., van der Schaft, D. W., Groenewegen, G., Griffioen, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+culture+conditions+on+endothelial+cell+growth+and+responsiveness.">Effect of culture conditions on endothelial cell growth and responsiveness.</a> Tissue &amp; Cell. 30, 525-530 (1998).</li><li>Smeets, E. F., von Asmuth, E. J., vander Linden, C. J., Leeuwenberg, J. F., Buurman, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+substrates+for+human+umbilical+vein+endothelial+cell+culture.">A comparison of substrates for human umbilical vein endothelial cell culture.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry : Official Publication of the Biological Stain Commission. 67, 241-250 (1992).</li><li>Perry, S. W., Norman, J. P., Barbieri, J., Brown, E. B., Gelbard, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+membrane+potential+probes+and+the+proton+gradient:+a+practical+usage+guide.">Mitochondrial membrane potential probes and the proton gradient: a practical usage guide.</a> BioTechniques. 50, 98-115 (2011).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

חשיפת עור לחומרים כימיים רעילים לעתים קרובות תוצאות הפרעה בריפוי פצע חמורה. המנגנונים הם במידה רבה לא ידועים. ריפוי פצע הוא תהליך מורכב הכולל שלבים שונים (עצירת דימום, דלקת, שגשוג ושיפוץ). נדידת תאים מעורבת בכל שלב, לעומת זאת, זה הוא בעל חשיבות עליונה ליצירת רקמת פרור. ?...

נדידת תאים היא חשובה בתהליכים פיסיולוגיים רבים וpathophysiological כוללים פיתוח, מחלות שונות, וריפוי פצעים לאחר פציעת עור. בעקבות פציעת עור, דלקת מסירה כונני רקמה ופרור פגומים או נמקי סגירת פצע ראשונית ומאפשרת היווצרות של רשת של נימי דם חדשים באמצעות vasculogenesis (היווצרות רומן) או אנגיוגנזה (הנבטה של שלפוחית ​​הקיימת) 1-3. שני vasculo- ואנגיוגנזה דורשת הגירה של תאי האנדותל. הרשת הולכת והגדלה של כלי דם חיונית להובלת חמצן וחומרים מזינים למתרבה קרטינוציטים שסופו של דבר לעבור קרטיניזציה, יוצר האפיתל חדש ולספק סגירת פצע. הגירה לקויה של תאי האנדותל היא סיבה בסיסית של ריפוי פצע הפרעת 4,5. הגירה כך, שיטות להערכה של תאי האנדותל מוקדמים נדרשות לחקור את pathophysiology של הפרעות נדידת תאים ולזהות אסטרטגיות חדשות להתערבות טיפולית. חשיפת עור לסוכני אלקילציה (למשל, גופרית וחנקן חרדל) גורמת ריפוי פצע הפרעה 6. תרכובות כאלה היו בשימוש כחומרי לחימה כימית במספר עימותים במאה ה -20 ולהישאר סיבה לדאגה חזקה בשל מאגרים קיימים באזורים לא יציבים מבחינה פוליטית וסינתזה פשוטה יחסית. למרות שגז החרדל היה מסונתז ראשון בשנת 1822, פתולוגיה המולקולרית והקלינית של חשיפת SM אינה מובנת בפירוט ולא תרופה לחשיפת SM זוהתה. מספר מחקרים שנערכו להבין ומודל ריפוי פצע לקוי לאחר חשיפת SM ולבדוק לתרכובות מועמד פוטנציאליות מסוגלים להזמין השפעה ש. שמידט ואח &#39;. (2009) בדק את ההשפעה של כלוראמבוציל, מתחם אלקילציה עם מאפיינים דומים לSM בmouדגמי SE גוף embryoid ומצא לפעמים ירידה בהיווצרות כלי 7 דרמטית, יותר מ 99%. השפעה שלילית זו בולטת ביותר בשלב של פיתוח אשר, בתנאים פיסיולוגיים, הוא נשלט על ידי ההתפשטות והנדידה של תאי האנדותל של כלי דם מבשר. כך, תאים אלה זוהו להיות רגישים במיוחד לאלקילציה סוכנים. Steinritz et al. (2010) נבדק אוכלי נבלות של מיני חמצן מגיבים (ROS), ב, N-acetylcysteine ​​מסוים (NAC) וחומצת אלפא לינולנית (ALA) ביכולתם להפחית את רעילות SM במודלי גוף עכבר embryoid ובפרט, ל לשחזר היווצרות כלי 8. השפעות מגנות זמניות נצפו, מצביעה על כך שהיווצרות ROS מוגזמת עשוי לתרום להשפעות השליליות של SM בריפוי פצעים. תופעות אלה לא היו קבועות ותרכובות שני המועמד לא יכולות להיות מסוגלים להחזיר היווצרות כלי וריפוי פצע בטווח הארוך 8. However, ניסויים אלה בוצעו במודל 3D מורכב שעשה יאפשר חקירה של נדידת תאים. לפיכך, אנו לאחר מכן נבדקו NAC וALA להשפעות מועילות על נדידת תאים של השוק האירופי המשותף שיש להם תפקיד מפתח בתהליך של היווצרות כלי 9. יתר על כן, יש ראיות כי קוטביות התא נדרש לנדידת תאים. תפקוד לקוי של המיטוכונדריה המובילה להיווצרות ROS הוצג לפגוע בקוטביות תא ועלול להשפיע לרעה על כך נדידת תאים. לכן, הדמיה תא חי בכל קשור לתפקוד המיטוכונדריה בוצעה ואת ההשפעות של אוכלי נבלות ROS נבדקו. הפרוטוקול הבא מתאר דרישות כלליות לגידול של השוק האירופי המשותף, assay קאמרי בוידן, ריפוי הפצע assay כולל ניתוח מעקב תא והשימוש בTMRM להערכה של תפקוד המיטוכונדריה בפירוט. היבטים חשובים של פרוטוקולי ניסוי לגידול וההגירה EEC מודגשים.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Boyden Chamber&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC)-treated Inserts, 24 well - 3 &#181;m</td>
			<td>Corning Incorporated</td>
			<td>#351151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning FluoroBlok Tissue Culture (TC)-treated Inserts, 24 well - 8 &#181;m</td>
			<td>Life Sciences</td>
			<td>#351152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(for use with Falcon Insert 24 well Companion Plate (353504)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wound&#160; healing assay</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bottom dishes</td>
			<td>Word Precision Instruments, Inc.</td>
			<td>#FD35-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Assessment of mitochondrial potential</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TMRM (tetramethylrhodamine methyl ester)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>#T669</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>PAA, Pasching, Austria</td>
			<td># L11-007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-Linolenic acid</td>
			<td>Fluka (Sigma), Steinheim, Germany</td>
			<td>&#160;# L2376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorambucil</td>
			<td>Fluka (Sigma), Steinheim, Germany</td>
			<td># 23125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany</td>
			<td># G2500-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of endothelial cell migration after exposure to toxic chemicals

חשיפה לחומרים כימיים (כוללים חומרי לחימה כימית אלקילציה כמו חרדל גופרית וחנקן) לגרום לשפע של תסמינים קליניים כוללים הפרעת ריפוי פצע. התהליך הפיזיולוגי של ריפוי פצע הוא מורכב ביותר. ההיווצרות של רקמת פרור היא צעד מפתח בתהליך זה וכתוצאה מכך סגירת פצעים ראשונית ומתן רשת של כלי דם נימים חדשים - בין אם באמצעות vasculogenesis (היווצרות רומן) או אנגיוגנזה (הנבטה של ​​כלי קיימים). שני vasculo- ואנגיוגנזה דורשת הגירה פונקציונלית, בבימויו של תאי האנדותל. כך, החקירה של הגירה מוקדם תא האנדותל (EEC) חשובה להבין הפתופיזיולוגיה של פצע כימי הנגרם על ריפוי הפרעות ופוטנציאל לזהות אסטרטגיות חדשות להתערבות טיפולית. חוקרים הערכנו ריפוי פצע לקוי לאחר אלקילציה חשיפת סוכן ונבדקו תרכובות מועמד פוטנציאליות לTReatment. אנחנו השתמשנו בסט של טכניקות שתוארו בפרוטוקול זה. קאמרי בוידן שונה כדי לחקור כמותית chemokinesis של השוק האירופי המשותף מתואר. יתר על כן, השימוש בריפוי הפצע assay בשילוב עם ניתוח מסלול להעריך הגירה איכותית בא לידי ביטוי. לבסוף, אנחנו מדגימים את השימוש בTMRM הצבע פלואורסצנטי לחקירת פוטנציאל קרום המיטוכונדריה לזהות מנגנונים של נדידת תאים מופרעת. הפרוטוקול הבא מתאר טכניקות בסיסיות שהותאמו לחקירת EEC.

חשיפת עור לסוכני אלקילציה מעוררת אודם, היווצרות כיב כיב עורי ושמזוהה עם הפרעת ריפוי פצע. ריפוי פצע דורש vasculogenesis angio- ואשר מבוססים על הגירה של תאי האנדותל. הגירה כמותי יכולה להיות מוערכת על ידי שימוש של assay קאמרי בוידן. כפי שניתן לראות בתרשים 1C חשיפה של השוק האי...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals at JoVE.com

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of certain illnesses and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention. The following protocol describes techniques to assess cell migration that have been adapted for the investigation of EEC.

הערכה של נדידת תאי האנדותל לאחר חשיפה לכימיקלים רעילים

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

assessment-endothelial-cell-migration-after-exposure-to-toxic

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

8.6K Views.  Bundeswehr Institute of Pharmacology and Toxicology. Investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of certain illnesses and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention. The following protocol describes techniques to assess cell migration that have been adapted for the investigation of EEC.

Video: Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Zebrafish Keratocyte Explants to Study Collective Cell Migration and Reepithelialization in Cutaneous Wound Healing

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell migration. However, when explants are established, these cells also move collectively, maintaining many of the features which make individual keratocytes an attractive model to study migration: rapid rates of motility, extensive actin-rich lamellae with a perpendicular actin cable, and relatively constant speed and direction of migration. In early explants, the rapid interconversion of cells migrating individually with those migrating collectively allows the study of the role of cell-cell adhesions in determining the mode of migration, and emphasizes the molecular links between the two modes of migration. Cells in later explants lose their ability to migrate rapidly and collectively as an epithelial to mesenchymal transition occurs and genes associated with wound healing and inflammation are differentially expressed. Thus, keratocyte explants can serve as an in vitro model for the reepithelialization that occurs during cutaneous wound healing and can represent a unique system to study mechanisms of collective cell migration in the context of a defined program of gene expression changes. A variety of mutant and transgenic zebrafish lines are available, which allows explants to be established from fish with different genetic backgrounds. This allows the role of different proteins within these processes to be uniquely addressed. The protocols outlined here describe an easy and effective method for establishing these explant cultures for use in a variety of assays related to collective cell migration.

Zebrafish keratocytes migrate in cell sheets from explants and provide an in vitro model for the study of the mechanisms of collective cell migration in the context of epithelial wound healing. These protocols detail an effective way to establish primary explant cultures for use in collective cell migration assays.

Explants Keratocyte דג הזברה לחקר הגירה קולקטיבית סלולארי וReepithelialization בריפוי פצע עורית

Due to their unique motile properties, fish keratocytes dissociated from explant cultures have long been used to study the mechanisms of single cell ...

Optimization of the Wound Scratch Assay to Detect Changes in Murine Mesenchymal Stromal Cell Migration After Damage by Soluble Cigarette Smoke Extract

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and inflammatory responses. Given the current interest in the role of mesenchymal stromal cells in mediating tissue repair, we are interested in quantifying the migratory capacity of these cells, and understanding how migratory capacity may be altered after damage. Optimization of a rigorously quantitative migration assay that is both easy to customize and cost-effective to perform is key to answering questions concerning alterations in cell migration in response to various stimuli. Current methods for quantifying cell migration, including scratch assays, trans-well migration assays (Boyden chambers), micropillar arrays, and cell exclusion zone assays, possess a range of limitations in reproducibility, customizability, quantification, and cost-effectiveness. Despite its prominent use, the scratch assay is confounded by issues with reproducibility related to damage of the cell microenvironment, impediments to cell migration, influence of neighboring senescent cells, and cell proliferation, as well as lack of rigorous quantification. The optimized scratch assay described here demonstrates robust outcomes, quantifiable and image-based analysis capabilities, cost-effectiveness, and adaptability to other applications.

The capacity to migrate is a key function of many different cell types, including mesenchymal stromal cells (MSCs). However, quantifying alterations in migratory capacity after damage is challenging. This protocol describes an easily adaptable migration assay that uses rigorous statistics to quantify changes in MSC migratory capacity after damage.

אופטימיזציה של assay Scratch הפצע כדי לזהות שינויים בנדידת תאי Murine mesenchymal סטרומה לאחר נזק על ידי תמצית עשן סיגריות מסיס

Cell migration is vital to many physiological and pathological processes including tissue development, repair, and regeneration, cancer metastasis, and ...

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing cardiovascular progenitors during development and disease. While a number of factors have been implicated in epicardium-derived cell (EPDC) mobilization, the mechanisms governing their subsequent migration and differentiation are poorly understood. Here, we present in vitro and ex vivo strategies to study EPDC motility and differentiation. First, we describe a method of obtaining primary epicardial cells by outgrowth culture from the embryonic mouse heart. We also introduce a detailed protocol to assess three-dimensional migration of labeled EPDC in an organ culture system. We provide evidence using these techniques that genetic deletion of myocardin-related transcription factors in the epicardium attenuates EPDC migration. This approach serves as a platform to evaluate candidate modifiers of EPDC biology and could be used to develop genetic or chemical screens to identify novel regulators of EPDC mobilization that might be useful for cardiac repair.

Epicardial Outgrowth Culture Assay and Ex Vivo Assessment of Epicardial-derived Cell Migration

Here, we describe methods for isolating primary mouse epicardial cells by an outgrowth culture assay and assessing the functional migration of epicardial-derived cells (EPDC) using an ex vivo heart culture system. These protocols are suitable for identifying genetic and chemical modulators of epicardial epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) and motility.

Epicardial תולדת תרבות Assay ו<em&gt; Ex Vivo</em&gt; הערכה של נדידת תאים שמקורם Epicardial

A single layer of epicardial cells lines the heart, providing paracrine factors that stimulate cardiomyocyte proliferation and directly contributing ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration have been thoroughly analyzed in vitro. However, in vivo cell migration somehow differs from in vitro migration, and has proven more difficult to analyze, being less accessible to direct observation and manipulation. This protocol uses the migration of the prospective prechordal plate in the early zebrafish embryo as a model system to study the function of candidate genes in cell migration. Prechordal plate progenitors form a group of cells which, during gastrulation, undergoes a directed migration from the embryonic organizer to the animal pole of the embryo. The proposed protocol uses cell transplantation to create mosaic embryos. This offers the combined advantages of labeling isolated cells, which is key to good imaging, and of limiting gain/loss of function effects to the observed cells, hence ensuring cell-autonomous effects. We describe here how we assessed the function of the TORC2 component Sin1 in cell migration, but the protocol can be used to analyze the function of any candidate gene in controlling cell migration in vivo.

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Combining cell transplantation, cytoskeletal labeling and loss/gain of function approaches, this protocol describes how the migrating zebrafish prospective prechordal plate can be used to analyze the function of a candidate gene in in vivo cell migration.

ניתוח<em&gt; In vivo</em&gt; נדידת תאים באמצעות השתלות תא והדמיה זמן לשגות עוברי דג הזברה

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Isolation of Murine Embryonic Hemogenic Endothelial Cells

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, and is necessary for the emergence of definitive HSPC from the murine extra embryonic yolk sac, placenta, umbilical vessels, and the embryonic aorta-gonad-mesonephros (AGM) region. The transient nature and small size of this cell population renders its reproducible isolation for careful quantification and experimental applications technically difficult. We have established a fluorescence-activated cell sorting (FACS)-based protocol for simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC during their peak generation times in the yolk sac and AGM. We demonstrate methods for dissection of yolk sac and AGM tissues from mouse embryos, and we present optimized tissue digestion and antibody conjugation conditions for maximal cell survival prior to identification and retrieval via FACS. Representative FACS analysis plots are shown that identify the hemogenic endothelial cell and HSPC phenotypes, and describe a methylcellulose-based assay for evaluating their blood forming potential on a clonal level.

Hematopoietic stem and progenitor cells (HSPC) derive from specialized (hemogenic) endothelial cells during development, yet little is known about the process by which some endothelial cells specify to become blood forming. We demonstrate a flow-cytometry based method allowing simultaneous isolation of hemogenic endothelial cells and HSPC from murine embryonic tissues.

בידוד של Murine העוברי Hemogenic לתאי אנדותל

The specification of hemogenic endothelial cells from embryonic vascular endothelium occurs during brief developmental periods within distinct tissues, ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper vessel development and homeostasis. However, studies on endothelial lineage hierarchy remain elusive due to the lack of tools to gain access as well as to directly evaluate their behavior in vivo. To address this shortcoming, a new tissue model to study angiogenesis using the mammary fat pad has been developed. The mammary gland develops mostly in the postnatal stages, including puberty and pregnancy, during which robust epithelium proliferation is accompanied by extensive vascular remodeling. Mammary fat pads provide space, matrix, and rich angiogenic stimuli from the growing mammary epithelium. Furthermore, mammary fat pads are located outside the peritoneal cavity, making them an easily accessible grafting site for assessing the angiogenic potential of exogenous cells. This work also describes an efficient tracing approach using fluorescent reporter mice to specifically label the targeted population of vascular endothelial stem cells (VESCs) in vivo. This lineage tracing method, coupled with subsequent tissue whole-mount microscopy, enable the direct visualization of targeted cells and their descendants, through which the proliferation capability can be quantified and the differentiation commitment can be fate-mapped. Using these methods, a population of bipotent protein C receptor (Procr) expressing VESCs has recently been identified in multiple vascular systems. Procr+ VESCs, giving rise to both new ECs and pericytes, actively contribute to angiogenesis during development, homeostasis, and injury repair. Overall, this manuscript describes a new mammary fat pad transplantation and in vivo lineage tracing techniques that can be used to evaluate the stem cell properties of VESCs.

This work demonstrates a novel approach to assess the proliferation, differentiation, and vessel-forming potential of vascular endothelial stem cells (VESCs) through mammary fat pad transplantation followed by whole-mount tissue preparation for microscopic observation. A lineage tracing strategy to investigate the behavior of VESCs in vivo is also presented.

רומן חדש פאט שומן טכניקת השתלת לדמיין את כלי השיט הדור של כלי הדם בתאי גזע אנדותל

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Incorporating Pericytes into an Endothelial Cell Bead Sprouting Assay

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including embryogenesis and development, wound healing, tumor growth and metastasis, and ocular and cardiovascular diseases. Effective in vitro models that recapitulate the biology of angiogenesis are needed to appropriately study this process and identify mechanisms of regulation that can be ultimately targeted for novel therapeutic strategies. The bead angiogenesis assay has been previously demonstrated to recapitulate the multiple stages of endothelial sprouting in vitro. However, a limitation of this assay is a lack of endothelial &#8211; mural cell interactions, which are key to the molecular and phenotypic regulation of endothelial cell function in vivo. The protocol given here presents a methodology for the incorporation of mural cells into the bead angiogenesis assay and demonstrates a tight association of endothelial cells and pericytes during sprouting in vitro. The protocol also details a methodology for effective silencing of target genes using siRNA in endothelial cells for mechanistic studies. Altogether, this protocol provides an in vitro assay that more appropriately models the diverse cell types involved in sprouting angiogenesis, and provides a more physiologically-relevant platform for therapeutic assessment and novel discovery of mechanisms of angiogenesis regulation.

This protocol presents a novel in vitro bead assay that more appropriately models the process of in vivo sprouting angiogenesis by incorporating pericytes. This modification enables the bead assay to more faithfully recapitulate the heterotypic cellular interactions between endothelial cells and mural cells that are critical for angiogenesis.

שילוב Pericytes חרוז תא אנדותל הלבלוב Assay

Angiogenesis is the growth of new vessels from pre-existing vasculature and is an important component of many biological processes, including ...

Visualization of Tangential Cell Migration in the Developing Chick Optic Tectum

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture can be recorded under video microscopy. For analyzing cell migration in the developing brain, slice culture is commonly used to observe cell migration parallel to the slice section, such as radial cell migration. However, limited information can be obtained from the slice culture method to analyze cell migration perpendicular to the slice section, such as tangential cell migration. Here, we present the protocols for time-lapse imaging to visualize tangential cell migration in the developing chick optic tectum. A combination of cell labeling by electroporation in ovo and a subsequent flat-mount culture on the cell culture insert enables detection of migrating cell movement in the horizontal plane. Moreover, our method facilitates detection of both individual cell behavior and the collective action of a group of cells in the long term. This method can potentially be applied to detect the sequential change of the fluorescent-labeled micro-structure, including the axonal elongation in the neural tissue or cell displacement in the non-neural tissue.

We describe the methods for fluorescent labeling of tangentially migrating cells by electroporation, and for time-lapse imaging of the labeled cell movement in a flat-mount culture in order to visualize migrating cell behavior in the developing chick optic tectum.

ויזואליזציה של נדידת תאים העוסקות ב Tectum אופטיים לפתח הבחורה

Time-lapse imaging is a powerful method to analyze migrating cell behavior. After fluorescent cell labeling, the movement of the labeled cells in culture ...

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells (hiPSC-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected tissues via a well-characterized cascade of pro-adhesive receptors which are upregulated on the leukocyte cell surface upon the inflammatory trigger. Inflammatory responses differ between individuals in the population and the genetic background can contribute to these differences. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) have been shown to be a reliable source of ECs (hiPSC-ECs), thus representing an unlimited source of cells that capture the genetic identity and any genetic variants or mutations of the donor. hiPSC-ECs can therefore be used for modeling inflammatory responses in donor-specific cells. Inflammatory responses can be modeled by determining leukocyte adhesion to the hiPSC-ECs under physiological flow. This step-by-step protocol provides a detailed description of the experimental setup and data analysis for the assessment of inflammatory responses in hiPSC-ECs and the analysis of leukocyte adhesion under physiological flow.

Microfluidic Assay for the Assessment of Leukocyte Adhesion to Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Endothelial Cells hiPSC-ECs

This step-by-step protocol provides a detailed description of the experimental setup and data analysis for the assessment of inflammatory responses in hiPSC-ECs and the analysis of leukocyte adhesion under physiological flow.

Microfluidic Assay עבור הערכה של ליקוציט הדבקה על נגזר אנושיים לתאי גזע Pluripotent המושרה בתאי אנדותל (hiPSC-ECs)

Endothelial cells (ECs) are essential for the regulation of inflammatory responses by either limiting or facilitating leukocyte recruitment into affected ...

In Vitro Assays to Evaluate the Migration, Invasion, and Proliferation of Immortalized Human First-trimester Trophoblast Cell Lines

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration and invasion is demonstrated by pregnancy disorders such as pre-eclampsia and intrauterine growth restriction, which are associated with inadequate trophoblast invasion of the maternal vasculature. Unfortunately, our understanding of the mechanisms by which the placenta develops from migrating trophoblasts is limited. In vitro analysis of cell migration via the scratch assay is a useful tool in identifying factors that regulate trophoblast migratory capacity. However, this assay alone does not define the cellular changes that can result in altered cell migration. This protocol describes three different in vitro assays that are used collectively to evaluate trophoblast cell movement: the scratch assay, the invasion assay, and the proliferation assay. The protocols described here may also be modified for use in other cell lines to quantify cell movement in response to stimuli. These methods allow investigators to identify individual factors that contribute to the cell movement and provide a thorough examination of potential mechanisms underlying apparent changes in cell migration.

Here, we present a highly accessible protocol for evaluating the cell movement in human trophoblast cells using three in vitro assays: the scratch assay, the transwell invasion assay, and the cell proliferation assay.

במבחני חוץ גופית כדי להעריך את ההעברה הפלישה, התפשטות של שורות תאים מונצחים Trophoblast בטרימסטר הראשון אנושי

Cell movement is a critical property of trophoblasts during placental development and early pregnancy. The significance of proper trophoblast migration ...