Name: the monoiodoacetate model of osteoarthritis pain in the mouse
Uploaded: 2016-05-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 26 s
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JSV è sostenuto da una borsa di collaborazione per MM dalla Commissione europea (GAN 603191-PAINCAGE).

Le procedure che coinvolgono soggetti animali sono stati approvati dal Comitato Etico al King College di Londra e sono conformi al Regno Unito la casa Regolamenti ufficio (Animali procedure scientifiche Act 1986). 1. iniezione intra-articolare del Monoiodoacetate in ginocchio <ol><li> House 8 -. 10 settimane di età topi in gruppi di 5 sotto un ciclo di 12 ore luce / buio (luci sulla alle 7:00 AM) con cibo e acqua ad libitum Lasciate che i topi acclimatarsi per 1 settimana prima di iniziare l&#39;esperimento. </li><li> Randomize e topi gabbia in gruppi di 5. Utilizzare il numero degli animali come codici di accecare lo sperimentatore di trattamenti. Utilizzare pesi corporei come parametri per randomizzazione. </li><li> Il giorno dell&#39;iniezione, appena preparare la soluzione di monoiodoacetate in soluzione fisiologica sterile (0.9% NaCl) alle concentrazioni desiderate. Utilizzare soluzione salina sterile per iniezioni in un gruppo separato di topi di controllo. La dose massima raccomandare di MIA è di 1 mg in 10 ml. Attenzione: Monoiodoacetate è very tossici. Pertanto, si raccomanda di guanti e maschera sono indossati durante la manipolazione della polvere e preparare la soluzione. La soluzione deve essere sterile filtrato con un filtro da 0,22 micron. </li><li> Anestetizzare topo, utilizzando un carrello anestetico prima immissione in una camera di fornitura di 2% isoflurano in O 2 miscela (portata 1,5 L / min) e poi trasferire topi alla sezione cono terminale, che fornisce anche la miscela 2% isoflurano-O 2 , e come tale, mantiene anestesia durante l&#39;iniezione. Mettere veterinario pomata sugli occhi per evitare la loro essiccazione mentre sotto anestesia. Indossare abito chirurgico, guanti e maschera durante l&#39;esecuzione di procedura di iniezione. </li><li> Conferma anestesia controllando mancanza dell&#39;animale di risposta ad uno stimolo pinch sulle zampe posteriori. </li><li> Una volta che l&#39;animale è sotto anestesia, posizionarlo sul dorso. Tagliare e pulire l&#39;area circostante l&#39;articolazione del ginocchio con l&#39;alcol. Povidone iodio o clorexidina può essere utilizzato come pure fo la disinfezione. Il tendine rotuleo (linea bianca muggito la rotula) diventerà visibile. </li><li> Al fine di stabilizzare il sito di iniezione, tenere il ginocchio ancora, in una posizione piegata, mettendo il dito indice sotto del ginocchio e il pollice sopra la superficie anteriore della caviglia. preferenza comune non è necessaria. </li><li> Per trovare il sito preciso dell&#39;iniezione, eseguire un ago 26 G attaccato ad una siringa orizzontalmente lungo il ginocchio (per non perforare la pelle con la punta) finché non trova allo spiraglio della rotula. Applicare una leggera pressione per contrassegnare l&#39;area e quindi sollevare l&#39;ago e la siringa in verticale per l&#39;iniezione. Inserire l&#39;ago nella zona segnata, attraverso il tendine rotuleo, perpendicolarmente alla tibia. Nessuna resistenza deve essere sentito. <ol><li> Utilizzare pollice come guida e iniettare superficiale al sito di ingresso. Dopo l&#39;iniezione, massaggiare il ginocchio per garantire una distribuzione uniforme della soluzione. Gettare l&#39;ago immediatamente la nettas bin. </li><li> Mettere i topi di nuovo in una gabbia casa pulita su una stuoia riscaldata e permettere loro di recuperare. Mantenere una costante vigilanza sugli animali fino a che riprendano conoscenza adeguata, che viene misurata da loro riconquistare decubito sternale. Una volta che gli animali sono recuperati, tornare alla loro gabbia. Nota: Si consiglia per i migliori fare pratica e di formazione che un colorante è utilizzato ed immediata la dissezione post mortem eseguita per confermare la corretta localizzazione di iniezione. </li></ol></li></ol> 2. Misure di ipersensibilità meccanica (Allodinia) Nota: soglie di ritiro meccaniche statiche sono valutati applicando peli von Frey alla superficie plantare del zampa posteriore. <ol><li> Portare i topi nella stanza comportamentale e lasciare che gli animali sfrenato acclimatare in cubicoli acrilici (8 centimetri x 5 cm x 10 cm) in cima a una griglia di rete metallica. <ol><li> topi Train di manipolazione e 2 ore assuefazione alle cabine per due giorni prima di applicare capelli von Frey, al fineper limitare lo stress e deambulazione durante l&#39;applicazione di peli von Frey. Nei giorni di test, habituate animali ai box per un massimo di 60 minuti prima del test. Indossare camici, guanti e maschere durante tutti gli esperimenti comportamentali. </li></ol></li><li> Applicare calibrate peli von Frey (fibre di nylon flessibili di diametro crescente che esercitano livelli di forza definita come calibrata dalla casa costruttrice ed espressa come grammi (g)) alla superficie plantare della zampa posteriore finché le curve di fibre. Utilizzare 0,008, 0,02, 0,04, 0,07, 0,16, 0,4, 0,6, e 1,0 g di fibre durante la prova. <ol><li> Tenere ogni capelli in posizione per 3 secondi o finché la zampa viene ritirata, quest&#39;ultimo definendo una risposta positiva. Partendo da una forza di stimolo di 0,07 g, applica peli secondo il metodo &quot;up-down&quot; 21: marchio come X risposta ritiro e O un&#39;assenza di risposta. Applicare in ordine crescente di forza, fino a 1 g (forza cut-off), fino al rilevamento di una risposta. </li><li> Ri-testare la zampa ripetendopunto 2.2.1, iniziando con il filamento che esercita una forza inferiore a quello che ha prodotto un prelievo. </li><li> Quindi, applicare le rimanenti filamenti in modo sequenziale, con la forza scendendo, fino a quando non si verifica alcun ritiro. Riapplicare filamenti crescente fino osservata una risposta. Continuare finché una sequenza di sei risposte è ottenuto (ad esempio, OXOXOX), al fine di ottenere il valore &#39;k&#39; facendo riferimento alla tabella valori 21. </li><li> Esprimere i valori di ritiro zampa fino al 50% le soglie di ritiro zampa in grammi. Utilizzare la formula (10 [Xr + K δ]) / 10.000 dove Xr = valore dello scorso filamento von Frey utilizzato nella sequenza (in unità di registro), k = valore tabellare, e δ = differenza media in forze tra le fibre. Quando viene rilevata alcuna risposta, utilizzare la risposta massima di 1 g 21,22. </li></ol></li><li> Seguendo la procedura sopra descritta (2.2.1-2.2.4), valutare soglie meccaniche di entrambe le zampe posteriori prima MIA iniection come valori basali. Dopo l&#39;iniezione, valutare le soglie delle zampe ipsilaterale e controlaterale ad intervalli regolari al giorno per diverse settimane dopo MIA per accertare lo sviluppo di allodinia meccanica. Nota: Per esempio, riportiamo le soglie misurate 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, e 28 giorni dopo l&#39;iniezione MIA. Gli animali vengono considerati allodinia quando si visualizza una risposta a 0,1 go meno. risposte normali rientrano 0.6 - campo di 1 g. </li></ol> 3. Misurazione del peso che porta Deficit Nota: Le variazioni di peso che porta sono misurati con un tester peso incapacitance. <ol><li> Addestrare ogni mouse per entrare in una camera di Plexiglass sull&#39;apparato e sedersi nella casella di partecipazione. Posizionare il mouse nella parte anteriore della scatola holding, sollevare l&#39;ingresso fino a 45 °, e lasciare il mouse per entrare e chiudere la scatola. Consentire agli animali di muoversi liberamente fino a che non adottano una postura seduta. Questa formazione richiede almeno due giorni e garantisce che l&#39;animale è ancora e non lIGNIFICATO su entrambi i lati della camera. Calibrare lo strumento prima dell&#39;uso con un peso di controllo 100 g (o secondo istruzioni apparecchiature). <ol><li> Assicurarsi che ogni zampa posteriore è posizionato sulla rampa di registrazione appropriata 11. La durata di ciascuna misurazione richiede 1 sec, secondo le istruzioni del produttore. </li></ol></li><li> Raccogliere tre misurazioni del peso sopportato su ogni zampa posteriore dal pad di registrazione per ciascuna sessione di registrazione e utilizzare il valore medio per calcolare la differenza di peso carico zampe ipsilaterale e controlaterale. I valori espressi come differenza tra le zampe controlaterale e omolaterale in grammi. </li><li> Valutare i cambiamenti di peso cuscinetto prima dell&#39;iniezione MIA come valori basali. Poi, le valutazioni ripetute ad intervalli regolari per diverse settimane per accertare lo sviluppo di cambiamenti di gate. Ad esempio, si riportano soglie misurate su 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, e 28 giorni dopo l&#39;iniezione MIA. Nota: Un peso normale bil valore earing del 50% rappresenta una distribuzione dei pesi pari attraverso degli arti posteriori ipsilaterale e controlaterale. Animali considerato visualizzazione ipersensibili un cuscinetto di peso cambiamento di circa il 45%. Le misurazioni delle soglie meccanici e deficit di peso cuscinetto possono essere eseguite nello stesso topo, in quanto né punto finale colpisce l&#39;altro. Per la valutazione farmacologica, ogni gruppo di animali deve essere testato a orari prestabiliti dopo la somministrazione in linea con il profilo farmacocinetico del composto utilizzato. </li></ol>

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None of the authors have competing interests or conflicting interests.

Con questa metodologia, si descrive un metodo preferito per indurre il dolore OA-come nel topo da una iniezione intra-articolare di MIA in un ginocchio e la valutazione della sensibilità agli stimoli non nocivi e nocivi agli arti posteriori. iniezione MIA è associata a un comportamento dolore persistente, ovvero alterato il peso degli arti posteriori del cuscinetto e lo sviluppo di ipersensibilità meccanico di cui (allodinia). Tali misure statiche possono essere integrati da analisi del cammino su un tapis roulant o mediante l&#39;analisi passerella in animali liberi di muoversi. Modelli MIA sono sensibili alle terapie convenzionali antidolorifiche 24, che indica che essi possono essere utili per discernere approcci terapeutici. Mentre l&#39;iniezione di MIA non è tecnicamente difficile, la capsula può essere forata durante l&#39;iniezione, con conseguente fuoriuscita di MIA fuori della capsula, e di successivo mancato indurre tossicità dei condrociti. In effetti, l&#39;iniezione sistemica di MIA può essere fatale nei roditori unND possibili effetti di MIA sui tessuti e cellule diverse da condrociti possono confondere i risultati, oltre ad essere indesiderabile. Come tale, va sottolineato che la grande cura deve essere data per l&#39;iniezione del MIA, in quanto è un componente critico del modello, e la fiducia deve essere dato che l&#39;iniezione avviene nello spazio articolare. Questo protocollo consente di raggiungere questo obiettivo. I protocolli descritti qui mirano ad assicurare gli animali forniscono risposte al dolore come costanti per tutto il periodo di prova. Inoltre, essi consentono la regolazione della gravità della malattia, modificando la dose di MIA usato per indurre la patologia 15,23. La rapida induzione della sia stato di malattia e il comportamento del dolore simile a consentire una valutazione tempestiva dei composti dolore modificanti. Questo è vantaggioso rispetto agli attuali chirurgica e spontaneamente lo sviluppo di modelli di OA, che può richiedere un periodo di tempo più lungo per sviluppare ipersensibilità. Inoltre, in particolare per i modelli spontanee, la malattia Pathollogia non si manifesta in tutti gli animali (circa 20 - 80% 7), mentre il modello MIA è associata con una significativa incidenza di responder. Inoltre, i modelli spontanei non sono adatti per le misurazioni di cambiamenti nel cuscinetto di peso, come OA sviluppa in entrambe le ginocchia. Quando si considera le misure comportamentali, gli animali devono essere tenuti calmo e rilassato durante le valutazioni. Questo risultato è ottenuto, come indicato nel protocollo, per la formazione iniziale prima che le misure di registrazione e la movimentazione ripetitiva, che permette gli animali di familiarizzare con lo sperimentatore. Un punto chiave per ridurre lo stress è quello di utilizzare lo stesso sperimentatore per la prova comportamentale tutto, costante cambiamento indurrà i problemi precedentemente menzionati. Come qualsiasi modello, il modello di MIA OA porta limitazioni, come la rapidità di interruzione giunto, che non assomiglia lento sviluppo di OA patologia in pazienti. Un modo per superare questo problema potrebbe essere quella di integrare questo modello con un sumodello rgical di OA. L&#39;uso del modello chimica MIA nello sviluppo compound consente l&#39;uso di protocolli preventivi e terapeutici sullo sviluppo e manutenzione del dolore OA-like. Infine, il modello MIA andrebbe ad integrare gli studi di tratti fenotipici di topi knock-out, aiutando a capire meglio la malattia OA.

Clinicamente, osteoartrite (OA), o malattia degenerativa delle articolazioni, è una condizione dolorosa e debilitante caratterizzata da una progressiva perdita di cartilagine articolare, lieve infiammazione dei tessuti in ed intorno alle articolazioni, e, talvolta, formazione di osteofiti e cisti ossee. I pazienti con OA riferiscono dolore persistente 1 e il display maggiore sensibilità alla pressione e stimoli nocivi nel artritico giunto 2-4. Allo stato attuale, non vi è alcuna cura per l&#39;OA con approcci terapeutici disponibili e analgesici sono prescritti per alleviare il dolore associato a questa condizione, con un certo grado di successo 5. Tuttavia, il dolore OA rimane una clinica modelli di emissione e di animali di OA sono stati sviluppati per migliorare la nostra comprensione dei meccanismi del dolore OA legati e rivelare nuovi bersagli per la terapia. Ci sono diversi modelli animali di OA disponibili con caratteristiche diverse 6. metodi chirurgici, come anteriorcrociato transezione legamento, può essere utilizzato. Tuttavia, esse comportano l&#39;intervento chirurgico abile e sono principalmente eseguiti nel ratto, mentre destabilizzazione mediale del menisco (DMM) viene utilizzato nel topo. Sviluppo spontaneo di OA si verifica in cavia e degenerazione articolare spontaneo è stato riportato in C57 topi nero da 3 a 16 mesi di 7,8 anni. Modelli OA spontanee non comporta alcun intervento per indurre la condizione, ma hanno variabilità intrinseca, e, come tale, incorrere in numero maggiore e un costo di 9,10. modelli indotto chimicamente, d&#39;altra parte, richiedono meno invasive procedure chirurgiche rispetto ai modelli, e come tali, sono più facili da implementare e permettono lo studio delle lesioni OA in diverse fasi. Questi modelli includono singole iniezioni nel ginocchio di agenti infiammatori, immunotossine, collagenasi, la papaina, o monoiodoacetate, che può essere tossico se fuggono spazio articolare. Di tutti i modelli chimici di OA, MIA è quello più spesso utilizzato, particularly per testare l&#39;efficacia di agenti farmacologici per trattare il dolore, come questo modello genera un fenotipo riproducibile, robusta e rapida del dolore simile che può essere classificato alterando MIA dosaggio 11-15. iniezione intra-articolare di MIA nei roditori riproduce lesioni OA-like e la compromissione funzionale che può essere analizzato e quantificato. MIA è un inibitore della gliceraldeide-3-fosfatasi, interrompendo la glicolisi cellulare e, infine, con conseguente morte delle cellule 16,17. Iniezione intra-articolare di MIA provoca la morte delle cellule di condrociti, che porta a degenerazione della cartilagine e successive modifiche osso subcondrale come aspetto di osso osteofiti 18,19. Poiché l&#39;utilità di MIA nel ratto è stato descritto in precedenza 20, in questo lavoro ci concentriamo sulla metodologia di OA MIA indotta in topi questo modello viene utilizzato sempre con la disponibilità di topi knock-out. Descriviamo una procedura per l &#39;iniezionezione di volumi molto piccoli nel ginocchio e metodi di misurazione sensibilità agli stimoli nocivi e non nocivi agli arti posteriori. La ripartizione della metodologia contribuirà a ridurre la variabilità, e come tale, raffinare il modello e ridurre il numero di animali necessari per lo studio.

<table><tbody><tr><td>Monoiodoacetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-2512-25G</td><td>&amp;#8805; 98% purity</td></tr><tr><td>0.9% Saline</td><td>Mini-Plasco basic</td><td>365 4840</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Merial</td><td>DNI 4090/1</td><td></td></tr><tr><td>26 G Needle</td><td>Fisher Scientific</td><td>12947606</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp;#956;l Hamilton Syringe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20701</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey Hairs</td><td>Linton Instruments</td><td>NC 122775-99</td><td></td></tr><tr><td>Incapacitance tester</td><td>Linton Instruments</td><td></td><td>Delivery on Request</td></tr><tr><td>Testing Cage Rack&amp;nbsp;</td><td>Ugo Basile</td><td>37450</td><td></td></tr><tr><td>Compact Anesthetic system</td><td>Vet-Tech</td><td>AN001B</td><td></td></tr><tr><td>Medical O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>BOC</td><td>101-F</td><td></td></tr><tr><td>Aldasorbers</td><td></td><td>Vet -Tech</td><td>AN006A</td></tr></tbody></table>

the monoiodoacetate model of osteoarthritis pain in the mouse

Un importante sintomo di pazienti con osteoartrosi (OA) è il dolore che viene attivato da cambiamenti periferici così come centrali all&#39;interno delle vie del dolore. Gli attuali trattamenti per il dolore OA, come FANS o oppiacei non sono né sufficientemente efficace né privo di effetti collaterali dannosi. Modelli animali di OA sono stati sviluppati per migliorare la nostra comprensione dei meccanismi del dolore OA connessi e definire nuovi bersagli farmacologici per la terapia. Attualmente i modelli disponibili di OA nei roditori sono gli interventi chirurgici e chimiche in un ginocchio. Il modello monoiodoacetate (MIA) è diventato uno standard per la modellazione di interruzione comune nel OA in entrambi i ratti e topi. Il modello, che è più facile da eseguire nel ratto, prevede l&#39;iniezione di MIA in un ginocchio che induce risposte rapide dolore come dell&#39;arto omolaterale, il cui livello può essere controllato mediante iniezione di diverse dosi. iniezione intra-articolare di MIA sconvolge condrociti glicolisi inibendo glyceraldeide deidrogenasi-3-fosfatasi e provoca la morte condrociti, neovascolarizzazione, necrosi ossea subcondrale e collasso, così come l&#39;infiammazione. I cambiamenti morfologici della cartilagine articolare e dell&#39;osso interruzione sono riflettenti di alcuni aspetti della patologia del paziente. Insieme a danno articolare, MIA induce iniezione di cui sensibilità meccanica nei omolaterale zampa posteriore e peso deficit portanti che sono misurabili e quantificabili. Questi cambiamenti comportamentali assomigliano alcuni dei sintomi riferiti dal popolazione di pazienti, convalidando così l&#39;iniezione MIA nel ginocchio come un modello preclinico utili e pertinenti del dolore OA. Lo scopo di questo articolo è quello di descrivere la metodologia di iniezioni intra-articolari di Mia et le registrazioni comportamentali dello sviluppo associato di ipersensibilità con una mente per evidenziare i passi necessari per dare registrazioni coerenti e affidabili.

Abbiamo recentemente riportato che l&#39;iniezione di 0,5 - 1 mg MIA nel ginocchio del mouse induce miste di cui ipersensibilità meccanica (allodinia) nella zampa posteriore ipsilaterale e peso che porta il deficit fino a 4 settimane, anche se insorgenze sono dose-dipendenti 23. I dati riportati nella Figura 1 costituiscono un esempio dell&#39;andamento nel tempo di ipersensibilità meccanica MIA indotta nelle zampe posteriori ipsilaterale dopo un intervallo di dosi iniettate nel ginocchio. In particolare, la dose minima di MIA (0,5 mg / topo) ha indotto una diminuzione del 50% delle soglie rispetto alla iniezione di soluzione salina al giorno 10, e soglie scesa al 70% di quelli dei controlli saline dal giorno 28 dopo l&#39;iniezione. La dose intermedia di 0,75 mg di MIA ha determinato una graduale diminuzione delle soglie che erano inferiori di 80% che le soglie di controllo Salina il giorno 10 ed è rimasto basso fino a giorno 28. La più alta dose di 1 mg MIA è stato associato con un segnocalo ificant della soglia il giorno 5 e un ulteriore calo il giorno 10, che è stata sostenuta fino a giorno 28. I dati riportati in figura 2 forniscono esempi di variazioni di peso cuscinetto che sono associati con iniezione MIA delle articolazioni del ginocchio. In questa serie di esperimenti, mentre la dose MIA 0,5 mg non ha indotto variazioni significative del peso recanti per tutta la durata di 28 giorni dello studio, la dose MIA 0,75 mg ha determinato una significativa riduzione del peso carico zampa ipsilaterale dal giorno 10 in poi. In particolare, il peso che porta asimmetria associata a 0,75 mg di MIA può produrre risultati variabili e incoerenti tra studi 23. Invece, la dose di 1 mg MIA induce generalmente peso riproducibile cuscinetto asimmetria ei dati nella Figura 2 dimostrano significativa riduzione del peso sopportato sulla zampa posteriore ipsilaterale dal giorno 3 fino alla fine del periodo di osservazione. Come previsto, Salianimali ne-trattati hanno mostrato alcun peso recanti modifiche. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig1.jpg" /> Figura 1. Sviluppo di Allodinia meccanica Messaggio MIA iniezione. Soglie Paw ritiro delle zampe posteriori ipsilaterale e controlaterale sono stati valutati prima e dopo l&#39;iniezione di MIA (0,5, 0,75 e 1 mg / mouse) e soluzione salina (0,9% NaCl), n = 8 - 10 topi / gruppo. * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01, *** P &lt;0.001 rispetto gruppo salina trattato; A due vie misure ripetute ANOVA seguita da Student Newman-Keuls post hoc test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig1large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="figura 2" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig2.jpg" /> Figura 2. Sviluppo di peso che porta Deficits Messaggio MIA iniezione. Cambiamenti nella distribuzione del peso corporeo tra le due arti posteriori sono stati calcolati come [(peso a carico sulla ipsilaterale zampa / somma del peso sopportato sulle zampe ipsilaterale e controlaterale) * 100] sono stati valutati prima e dopo l&#39;iniezione di MIA ( 0,5, 0,75 e 1 mg / topo) e soluzione salina (0,9% NaCl), n = 8 - 10 topi / gruppo. * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01, *** P &lt;0.001 rispetto gruppo salina-trattata. A due vie misure ripetute ANOVA seguita da Student Newman-Keuls post hoc test. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig2large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

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The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

Il modello Monoiodoacetate di osteoartrite Pain in the mouse

L&#39;osteoartrite (OA), o malattia degenerativa delle articolazioni, è una condizione debilitante associata a dolore che rimane solo parzialmente controllato da analgesici disponibili. I modelli animali sono state sviluppate per migliorare la nostra comprensione dei meccanismi del dolore OA-related. Qui si descrive la metodologia per il modello monoiodoacetate di dolore OA nel topo.

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

34.9K Views.  King's College London.  L'osteoartrite (OA), o malattia degenerativa delle articolazioni, è una condizione debilitante associata a dolore che rimane solo parzialmente controllato da analgesici disponibili. I modelli animali sono state sviluppate per migliorare la nostra comprensione dei meccanismi del dolore OA-related. Qui si descrive la metodologia per il modello monoiodoacetate di dolore OA nel topo. 

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Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

Aspetti tecnici della fistola aorto-cavale mouse

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Ricerca

Medicina

Inflammatory TMJ Pain Mouse Model: Bite Force and Von Frey Filament Assessments

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms driving diseases-related pain are poorly understood, and current treatments fail to provide effective and long-term therapeutic effects. Additionally, pain assessment in research, particularly orofacial pain, poses several challenges that complicate studies in both clinical and basic science settings. Therefore, we have established an inflammatory TMJ pain mouse model via intra-articular injection of CFA (Complete Freund's Adjuvant) and evaluated pain behaviors by bite force measurement and the von Frey filament test. Mice with CFA injection exhibited orofacial pain behaviors compared to PBS injection, including reduced bite force and head withdrawal threshold in the von Frey filament test. These methods are relatively easy to execute to have reproducible results and can be potentially extended to pain studies for other disease models related to TMJ disorders. Together, bite force, and the von Frey filament tests are reliable in measuring orofacial pain, as demonstrated in CFA injection-induced painful TMJOA mouse models.

This protocol describes how measuring bite force and head withdrawal threshold can capture pain behavior in Complete Freund's Adjuvant (CFA)-induced inflammatory temporomandibular joint (TMJ) pain.

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms ...

Comportamento

Spontaneous and Evoked Measures of Pain in Murine Models of Monoarticular Knee Pain

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are necessary and useful for studying the mechanisms of pain and for evaluating efficacy of arthritis therapies. Measuring pain in animal models of arthritis is challenging. We have developed methods for measuring evoked and spontaneous pain in three models of murine arthritis. We quantitate the evoked pain responses of mice subjected to firm palpation of a painful knee. We also evaluate spontaneous pain by the proportion of weight and the amount of time placed on each of their 4 limbs after induction of arthritis pain in one knee. Joint pain in these mouse models produces a significant increase in evoked pain responses and an alteration in weight bearing. Since mice are quadrupeds, they offload the painful limb to the contralateral limb, to the forelimbs, or some combination. These methods are simple, require minimal equipment, and are reproducible and sensitive for detecting pain. They are useful for studying both disease-modifying arthritis treatments and analgesics in mice.

We have developed an evoked measure of arthritis pain and coupled it with a standardized method for measuring spontaneous pain in different murine models of chemically induced arthritis. These measures are sensitive and reproducible for different types of joint pain.

Spontanee ed evocate misure di dolore in modelli murini di dolore del ginocchio Monoarticular

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

Modello di dolore da osteoartrite indotto dall'iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nei ratti

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, primarily in the hip and knee joints, which results in significant impacts on patient mobility and quality of life. To date, there are no existing curative therapies for OA able to slow down or inhibit cartilage degeneration. Presently, there is an extensive body of ongoing research to understand OA pathology and discover novel therapeutic approaches or agents that can efficiently slow down, stop, or even reverse OA. Thus, it is crucial to have a quantitative and reproducible approach to accurately evaluate OA-associated pathological changes in the joint cartilage, synovium, and subchondral bone. Currently, OA severity and progression are primarily assessed using the Osteoarthritis Research Society International (OARSI) or Mankin scoring systems. In spite of the importance of these scoring systems, they are semiquantitative and can be influenced by user subjectivity. More importantly, they fail to accurately evaluate subtle, yet important, changes in the cartilage during the early disease states or early treatment phases. The protocol we describe here uses a computerized and semiautomated histomorphometric software system to establish a standardized, rigorous, and reproducible quantitative methodology for the evaluation of joint changes in OA. This protocol presents a powerful addition to the existing systems and allows for more efficient detection of pathological changes in the joint.

The current protocol establishes a rigorous and reproducible method for quantification of morphological joint changes that accompany osteoarthritis. Application of this protocol can be valuable in monitoring disease progression and evaluating therapeutic interventions in osteoarthritis.

Valutazione istomormetrica standardizzata dell'osteoartrite in un modello di topo chirurgico

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent evidence indicates a potential inflammatory component of the disease, with both T-cells and monocytes/macrophages potentially associated with the pathogenesis of OA. Further studies postulated an important role for subsets of both inflammatory cell lineages, such as Th1, Th2, Th17, and T-regulatory lymphocytes, and M1, M2, and synovium-tissue-resident macrophages. However, the interaction between the local synovial and systemic inflammatory cellular response and the structural changes in the joint is unknown. To fully understand how T-cells and monocytes/macrophages contribute towards OA, it is important to be able to quantitively identify these cells and their subsets simultaneously in synovial tissue, secondary lymphatic organs and systemically (the spleen and bone marrow). Nowadays, the different inflammatory cell subsets can be identified by a combination of cell-surface markers making multi-color flow cytometry a powerful technique in investigating these cellular processes. In this protocol, we describe detailed steps regarding the harvest of synovial tissue and secondary lymphatic organs as well as generation of single cell suspensions. Furthermore, we present both an extracellular staining assay to identify monocytes/macrophages and their subsets as well as an extra- and intra-cellular staining assay to identify T-cells and their subsets within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue. Each step of this protocol was optimized and tested, resulting in a highly reproducible assay that can be utilized for other surgical and non-surgical OA mouse models.

Here, we describe a detailed and reproducible flow cytometry protocol to identify monocyte/macrophage and T-cell subsets using both extra- and intracellular staining assays within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue, utilizing an established surgical model of murine osteoarthritis.

Analisi della citometria del flusso di sottoinsiemi di cellule immunitarie all'interno della milza murina, del midollo osseo, dei nodi linfociti e del tessuto sinoviale in un modello di osteoartrite

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Software-Assisted Quantitative Measurement of Osteoarthritic Subchondral Bone Thickness

Subchondral bone thickening and sclerosis are the major hallmarks of osteoarthritis (OA), both in animal models and in humans. Currently, the severity of the histologic subchondral bone thickening is mostly determined by visual estimation based semi-quantitative grading systems. This article presents a reproducible and easily executed protocol to quantitatively measure subchondral bone thickness in a mouse model of knee OA induced by destabilization of the medial meniscus (DMM). This protocol utilized ImageJ software to quantify subchondral bone thickness on histologic images after defining a region of interest in the medial femoral condyle and the medical tibial plateau where subchondral bone thickening usually occurs in DMM-induced knee OA. Histologic images from knee joints with a sham procedure were used as controls. Statistical analysis indicated that the newly developed quantitative subchondral bone measurement system was highly reproducible with low intra- and inter-observer variabilities. The results suggest that the new protocol is more sensitive to subtle or mild subchondral bone thickening than the widely used visual grading systems. This protocol is suitable for detecting both early and progressing osteoarthritic subchondral bone changes and for assessing in vivo efficacy of OA treatments in concert with OA cartilage grading.

This methodology article presents a software-assisted quantitative measurement protocol to quantify histologic subchondral bone thickness in murine osteoarthritic knee joints and normal knee joints as controls. This protocol is highly sensitive to subtle thickening and is suitable for detecting early osteoarthritic subchondral bone changes.

Misurazione quantitativa assistita da software dello spessore osseo subcondrale osteoartritico

Subchondral bone thickening and sclerosis are the major hallmarks of osteoarthritis (OA), both in animal models and in humans. Currently, the severity of ...

Destabilization of the Medial Meniscus and Cartilage Scratch Murine Model of Accelerated Osteoarthritis

Osteoarthritis is the most prevalent musculoskeletal disease in people over 45, leading to an increasing economic and societal cost. Animal models are used to mimic many aspects of the disease. The present protocol describes the destabilization and cartilage scratch model (DCS) of post-traumatic osteoarthritis. Based on the widely used destabilization of the medial meniscus (DMM) model, DCS introduces three scratches on the cartilage surface. The current article highlights the steps to destabilize the knee by transecting the medial meniscotibial ligament followed by three intentional superficial scratches on the articular cartilage. The possible analysis methods by dynamic weight-bearing, microcomputed tomography, and histology are also demonstrated. While the DCS model is not recommended for studies that focus on the effect of osteoarthritis on the cartilage, it enables the study of osteoarthritis development in a shorter time window, with special focus on (1) osteophyte formation, (2) osteoarthritic and injury pain, and (3) the effect of cartilage damage in the whole joint.

The present protocol describes the controlled microblade scratches on the surface of the articular cartilage after destabilizing the mouse knee by cutting the medial miniscotibial ligament. This animal model presents an accelerated form of osteoarthritis (OA) suitable for studying osteophyte formation, osteosclerosis, and early-stage pain.

Destabilizzazione del menisco mediale e del modello murino di graffio cartilagineo di osteoartrite accelerata

Osteoarthritis is the most prevalent musculoskeletal disease in people over 45, leading to an increasing economic and societal cost. Animal models are ...

<meta charset="utf8"></head><body>Doppia iniezione della zampa posteriore per test analgesici avanzati

A Modified Inflammatory Pain Model to Study the Analgesic Effect in Mice

The hot plate test is widely used to evaluate analgesic effects on inflammatory pain in mice. A commonly used model of inflammatory pain was induced with an intraplantar injection of carrageenan in one hind paw. However, the findings from our laboratory showed that mice with a single-hind-paw injection of carrageenan lifted their paws to avoid thermal nociception during the hot plate test. Because of this response,&#160;previous injection method cannot accurately reflect the thermal pain threshold. Thus, we investigated a new method to avoid this issue. In the present study, we modified the previous method by injecting carrageenan into both hind paws to establish the model of inflammatory pain. The results demonstrated that both-hind-paw injection with carrageenan was sensitive and a better method to induce inflammatory pain when using the hot plate test than single-hind-paw injection. On the basis of these findings, we designed further experiments in which mice with either both-hind-paw or single-hind-paw injection of carrageenan were treated intragastrically with celecoxib (30 mg/kg). The results of the hot plate test showed that celecoxib augmented the thermal pain threshold in mice with both-hind-paw injection of carrageenan but not in mice with single-hind-paw injection of carrageenan. In summary, we developed a superior method to induce a model of inflammatory pain to evaluate analgesic effect.

<meta charset="utf8"></head><body>Autore in primo piano: Metodo avanzato per la valutazione degli effetti analgesici - Iniezione di carragenina a doppia zampa posteriore nei topi

Here, we present a modified inflammatory pain model with the both-hind-paw carrageenan injection to evaluate the analgesic effect.

Un modello modificato di dolore infiammatorio per studiare l'effetto analgesico nei topi

The hot plate test is widely used to evaluate analgesic effects on inflammatory pain in mice. A commonly used model of inflammatory pain was induced with ...

Il modello Monoiodoacetate di osteoartrite Pain in the mouse

Riepilogo

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Capitoli in questo video

Aspetti tecnici della fistola aorto-cavale mouse

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

Spontanee ed evocate misure di dolore in modelli murini di dolore del ginocchio Monoarticular

Modello di dolore da osteoartrite indotto dall'iniezione intra-articolare di mono-iodoacetato nei ratti

Valutazione istomormetrica standardizzata dell'osteoartrite in un modello di topo chirurgico

Analisi della citometria del flusso di sottoinsiemi di cellule immunitarie all'interno della milza murina, del midollo osseo, dei nodi linfociti e del tessuto sinoviale in un modello di osteoartrite

Misurazione quantitativa assistita da software dello spessore osseo subcondrale osteoartritico

Destabilizzazione del menisco mediale e del modello murino di graffio cartilagineo di osteoartrite accelerata

Un modello modificato di dolore infiammatorio per studiare l'effetto analgesico nei topi

Un modello modificato di dolore infiammatorio per studiare l'effetto analgesico nei topi