עבודה זו נתמכה על ידי קרן לב הבריטי (PG/13 60 30406) ואת אוניברסיטת בירמינגהם.

כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על-ידי חיה רווחה אתית סקירה הגוף ואת משרד הפנים בבריטניה (בריטניה, פרוייקט רשיון 40/3745). עכברים על רקע C57BL/6, 8-12 שבוע 19-25 גרם משקל, של שני המינים משמשים.
1. בעלי חיים הרדמה
<ol>
	<li>במקום עכבר לתא אינדוקציה, לגרום הרדמה על ידי תערובת של 5% איזופלוריין 100% חמצן. קצב זרימה של חצי ליטר לדקה חכה עד העכבר לגמרי מפסיקה לנוע ושימוש תדירותו של נשימה הופך נדיר.</li>
	<li>להסיר את העכבר מן החדר ולגלח את הבטן קוצץ חשמלי. הסרת שיער מהבטן יסודי ככל האפשר כדי למנוע זיהום של חלל הבטן.</li>
	<li>הנח את העכבר במצב פרקדן ולמקם את האף של העכבר לתוך קונוס מקושרים למערכת הרדמה. להקטין את אחוז איזופלוריין ל 2-3% (האחוז המדויק אולי מעט שונים חיה חיה). ודא כי החיה שוכבת עם קצב הנשימה שלה להיות נמוך יותר מהרגיל אבל הימנעות מתנשף. אם להשתנק מתרחשת, להקטין את אחוז איזופלוריין ב- 0.5%.
	<ol>
		<li>בדוק את רפלקס פדלים לאשר ההרדמה המתאים ולהתחיל ניתוח רק אם זה שלילי. הוטרינר משחה למרוח את העיניים למניעת יובש.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>להחיל פתרון אנטי-אחרים (1% Hibitane) על העכבר של הבטן, לנגב האזור באמצעות כותנה סטרילי באד בדרך למעט פוטנציאל זיהום מחדש של האתר כירורגית (למשל, מבפנים להוציא בצורה מעגלית). חזור על 3 פעמים.</li>
</ol>
2. יישום של היצרות IVC ושחזור העכבר
הערה: כל הכלים באותה מידה כמו חומרים (צמר גפן, גזה, תמיסת מלח וכו) בא במגע עם אזור הניתוח חייב להיות סטרילי. המפעיל חייב יתנקה לפני הניתוח לבין ללבוש כפפות סטריליות והגלימה במהלך ההליך. מיקרוסקופ ידיות צריך לעטוף בנייר סטרילי.
<ol>
	<li>לתת עכברים טיפול נגד כאבים לפני הניתוח במהלך תקופת הניסוי כולו. לדוגמה, השתמש הבופרנורפין 0.1 מ"ג/ק"ג subcutaneously 30 דקות לפני הניתוח, ואז כל 12 שעות עד החיה היא מורדמים. כמו פקקת בשיטה זו מתפתחת באופן דומה לדלקת סטרילית, למנוע באמצעות תרופות אנטי דלקתיות כמו premedication.</li>
	<li>מכסה את העכבר עם תלוי סטרילי, לעשות בו חור הכיסוי ותאבטחי לחשוף את האתר של הניתוח. בעזרת מספריים, לעשות חתך לאורך האמצע בבטן, 1.5 ס למטה מ בעצם החזה. בעזרת צמר גפן exteriorize המעיים בצד שמאל של העכבר, לכסות אותם עם גזה סטרילית טבולים תמיסת מלח חמים (37 מעלות צלזיוס) כדי למנוע ייבוש.</li>
	<li>לזהות את IVC ואת סניפיה בצד (ייתכנו 0, 1 או 2 מהם) בכיוון סימטרית מהאתר של פיוז'ן של IVC עם הווריד של הכליה השמאלית. מאתרים ומפסיקים את כל הענפים גלוי בצד עם 7-0 התפרים Prolene אינרטי כמו קרוב IVC ככל האפשר.
	<ol>
		<li>לא לנסות להחזיק הענפים בצד עם המלקחיים ישירות אלא למשוך אותם מחזיקות רקמת השומן הסובבים אותם עם מלקחיים ביד אחת ולגרום מנהרה מתחת הענף עם מלקחיים וביד השנייה. לא לסגור סניפים האחורי.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>מחזיק הרקמות הסובבות עם מלקחיים, משוך את IVC למעלה ועזב בהפקת המתח באזור קטן בין של IVC את העורקים בדיוק על הזווית בין IVC את וריד הכליה השמאלית. קח בחשבון שזה כמעט בלתי אפשרי להפריד העורקים IVC אפילו 2-3 מ מ מתחת (לכיוון סימטרית).</li>
	<li>באמצעות תנועות מתפצלים עם מלקחיים טיפים להפוך את יד ימין חור בין העורקים של IVC. יש לזכור כי התנועות יותר עשה, גבוה יותר הסיכוי לגרום נזק את כלי הקיבול. באופן אידיאלי, לנסות לצמצם את מספר תנועות 3-5.</li>
	<li>להכין חלק 7-0 בתפר Prolene אינרטי של 2 ס מ. למקם אותו בתוך חלל הצפק של העכבר בצד שמאל של המפעיל בסביבה IVC.</li>
	<li>משוך את IVC עזבו שוב. הכנס את העצות מלקחיים הנכון לתוך החור בין העורקים של IVC כך הטיפים להופיע בצד השני של IVC. קח את התפר ולמשוך אותו בחזרה דרך החור (איור 3א).</li>
	<li>קשר זמני עם התפר אך אינו סגור. מקום 30G המחט ("כרווח") כפופות בקרס לתוך הקשר עכשיו אותו וסגור (איור 3ב).</li>
	<li>הסר את מרווח (איור 3ג').</li>
	<li>להחזיר המעיים בחזרה אל חלל הצפק עם כותנה באד ולהפיץ אותם באותה מידה בה.</li>
	<li>סגור צפק 6-0 בתפר תפר נספג באמצעות לולאות רציפה. סגור את. לולאות הראשונה והאחרונה בתור קשר.</li>
	<li>קרוב לעור בעזרת סיכות מתכת.</li>
	<li>להחדיר את העכבר 0.5 מיליליטר חמים (37 מעלות צלזיוס) תמיסת גלוקוז subcutaneously כדי לשחזר את האיזון נוזלי של האורגניזם.</li>
	<li>למקם את העכבר הכלוב בודדים חמים (25 ° C) קאמרית או חדר האוכל, ג'ל מים בתוך הכלוב. להתבונן עד העכבר הוא התאושש לחלוטין (בדרך כלל, סביב 1 h).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Heit, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+venous+thromboembolism+in+the+community.">The epidemiology of venous thromboembolism in the community.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 28 (3), 370-372 (2008).</li><li>Huang, W., Goldberg, R. J., Anderson, F. A., Kiefe, C. I., Spencer, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secular+trends+in+occurrence+of+acute+venous+thromboembolism:+the+Worcester+VTE+study+(1985-2009).">Secular trends in occurrence of acute venous thromboembolism: the Worcester VTE study (1985-2009).</a> Am J Med. 127 (9), 829-839 (2014).</li><li>House of Commons Health Care Committee. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Prevention+of+Venous+Thromboembolism+in+Hospitalised+patients.">The Prevention of Venous Thromboembolism in Hospitalised patients.</a> The House of Commons. , (2005).</li><li>Kuipers, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Travel+and+venous+thrombosis:+a+systematic+review.">Travel and venous thrombosis: a systematic review.</a> J Intern Med. 262 (6), 615-634 (2007).</li><li>Lopez, J. A., Chen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+venous+thrombosis.">Pathophysiology of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 123, 30-34 (2009).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=von+Willebrand+factor-mediated+platelet+adhesion+is+critical+for+deep+vein+thrombosis+in+mouse+models.">von Willebrand factor-mediated platelet adhesion is critical for deep vein thrombosis in mouse models.</a> Blood. 117 (4), 1400-1407 (2011).</li><li>Payne, H., Ponomaryov, T., Watson, S. P., Brill, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+with+a+deficiency+in+CLEC-2+are+protected+against+deep+vein+thrombosis.">Mice with a deficiency in CLEC-2 are protected against deep vein thrombosis.</a> Blood. 129 (14), 2013-2020 (2017).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+extracellular+traps+promote+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Neutrophil extracellular traps promote deep vein thrombosis in mice.</a> J Thromb Haemost. 10 (1), 136-144 (2012).</li><li>von Bruhl, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocytes,+neutrophils,+and+platelets+cooperate+to+initiate+and+propagate+venous+thrombosis+in+mice+in+vivo.">Monocytes, neutrophils, and platelets cooperate to initiate and propagate venous thrombosis in mice in vivo.</a> J Exp Med. 209 (4), 819-835 (2012).</li><li>Sevitt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+and+growth+of+valve-pocket+thrombi+in+femoral+veins.">The structure and growth of valve-pocket thrombi in femoral veins.</a> J Clin Pathol. 27 (7), 517-528 (1974).</li><li>Witsch, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+hollow+and+perforated+flexible+wire+allows+the+safe+and+effective+local+application+of+thrombolytic+therapy+in+a+mouse+model+of+deep+vein+thrombosis.">A novel hollow and perforated flexible wire allows the safe and effective local application of thrombolytic therapy in a mouse model of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Thrombolysis. 37 (4), 450-454 (2014).</li><li>Shaya, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+effect+of+dabigatran+and+dalteparin+on+thrombus+stability+in+a+murine+model+of+venous+thromboembolism.">Comparison of the effect of dabigatran and dalteparin on thrombus stability in a murine model of venous thromboembolism.</a> J Thromb Haemost. 14 (1), 143-152 (2016).</li><li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen.">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> J Clin Invest. 106 (3), 385-392 (2000).</li><li>Wrobleski, S. K., Farris, D. M., Diaz, J. A., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+complete+stasis+model+of+inferior+vena+cava+thrombosis.">Mouse complete stasis model of inferior vena cava thrombosis.</a> J Vis Exp. (52), (2011).</li><li>Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+branch+variations+in+C57BL/6+mice+have+an+impact+on+thrombus+size+in+an+IVC+ligation+(stasis)+model.">Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model.</a> J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).</li><li>Siefert, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+venous+thrombus+resolution+in+plasminogen+activator+inhibitor+type-2+deficient+mice.">Enhanced venous thrombus resolution in plasminogen activator inhibitor type-2 deficient mice.</a> J Thromb Haemost. 12 (10), 1706-1716 (2014).</li><li>Schulz, C., Engelmann, B., Massberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossroads+of+coagulation+and+innate+immunity:+the+case+of+deep+vein+thrombosis.">Crossroads of coagulation and innate immunity: the case of deep vein thrombosis.</a> J Thromb Haemost. 11, 233-241 (2013).</li><li>Day, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrovascular+thrombosis+is+driven+by+tissue+factor+derived+primarily+from+the+blood+vessel+wall.">Macrovascular thrombosis is driven by tissue factor derived primarily from the blood vessel wall.</a> Blood. 105 (1), 192-198 (2005).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+fibrinolytic+system+in+ApoE+gene-deleted+mice+with+hyperlipidemia+augments+deep+vein+thrombosis.">Impaired fibrinolytic system in ApoE gene-deleted mice with hyperlipidemia augments deep vein thrombosis.</a> J Vasc Surg. 55 (3), 815-822 (2012).</li><li>Zhou, J., May, L., Liao, P., Gross, P. L., Weitz, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inferior+vena+cava+ligation+rapidly+induces+tissue+factor+expression+and+venous+thrombosis+in+rats.">Inferior vena cava ligation rapidly induces tissue factor expression and venous thrombosis in rats.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 29 (6), 863-869 (2009).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+of+venous+thrombosis.">Electrolytic inferior vena cava model (EIM) of venous thrombosis.</a> J Vis Exp. (53), e2737 (2011).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrolytic+inferior+vena+cava+model+(EIM)+to+study+thrombogenesis+and+thrombus+resolution+with+continuous+blood+flow+in+the+mouse.">The electrolytic inferior vena cava model (EIM) to study thrombogenesis and thrombus resolution with continuous blood flow in the mouse.</a> Thromb Haemost. 109 (6), 1158-1169 (2013).</li><li>Brill, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrahepatic+high-density+lipoprotein+receptor+SR-BI+and+apoA-I+protect+against+deep+vein+thrombosis+in+mice.">Extrahepatic high-density lipoprotein receptor SR-BI and apoA-I protect against deep vein thrombosis in mice.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (8), 1841-1847 (2012).</li><li>Diaz, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+review+of+mouse+models+of+venous+thrombosis.">Critical review of mouse models of venous thrombosis.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).</li><li>Brandt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+vein+thrombus+formation+induced+by+flow+reduction+in+mice+is+determined+by+venous+side+branches.">Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches.</a> Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).</li><li>Geddings, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strengths+and+weaknesses+of+a+new+mouse+model+of+thrombosis+induced+by+inferior+vena+cava+stenosis:+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH.">Strengths and weaknesses of a new mouse model of thrombosis induced by inferior vena cava stenosis: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 12 (4), 571-573 (2014).</li><li>Alvarado, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Male+mice+have+increased+thrombotic+potential:+sex+differences+in+a+mouse+model+of+venous+thrombosis.">Male mice have increased thrombotic potential: sex differences in a mouse model of venous thrombosis.</a> Thromb Res. 127 (5), 478-486 (2011).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

. הנה, פרוטוקול שישקף היצרות IVC, אשר מחקה עיוות זרימת דם, גורם מפעילה מרכזי עבור DVT, מוצג. היצרות של IVC המניע לפיתוח thrombi 65-100% של C57BL/6 עכברים בתוך 48 שעות ו- 25-50% של עכברים בתוך h 2-66,8,23 (בריל A, שלא פורסמו נתונים, 2016). מגבלה משמעותית של השיטה הוא ההשתנות כגון גודל24 (איור 4), אשר נצפית לאחר היצרות (48 שעות) IVC לטווח ארוך וגם לטווח קצר (6 שעות). הסיבות השתנות כזה (בהתחשב בעובדה זהה תנאים, כגון מרווח, הרדמה וכו ', משמשים) נותרים מעורפלים. אבל אחד יכול לשער אנטומי זה וריאציות בין העכברים (לדוגמה, רוחב של IVC, מספר ומיקום של הן בצד האחורי סניפים) ביסוד התופעה. ההשתנות כגון גודל הופך את שכיחות פקקת (אחוז של עכברים עם כגון) התוצאה העיקרית. פקקת שכיחות ניתן להשוות באמצעות טבלה לשעת חירום, בדיקה מדוקדקת של פישר. באחד הניסויים היה יוצא דופן כאשר מופחתת כגון גודל עם שכיחות פקקת אותו לאחר הזרקת נוגדנים עיכוב podoplanin נצפתה 7
שיטה זו שימושית במיוחד כאשר חניכה פקקת ורידים הוא למד. היא מאפשרת חקירת האירועים בתחילת הקיר כלי, כגון גיוס של תאים, המוביל בסופו של דבר פקקת. Pro - או אנטי - thrombotic השפעות הסמים שניתן להעריך באמצעות מודל זה עם שכיחות פקקת להיות הבדיקה העיקרית. היצרות במשך 48 שעות ישימה לחשוף של פנוטיפ נגד קדחת, ואילו היצרות 6-אייץ ' יכול לשמש אם הפנוטיפ prothrombotic צפוי. ניתן גם לבצע ניתוח היסטולוגית של כגון, IVC החומה המקיפה.
השאלה אם הצד מסתעף צריך להיות מאתרים או שמאלה פטנטים נשאר פתוח. קבוצה אחת הראו כי מצדו בצד סניפים אינה מגדילה כגון גודל, מיקום של ענף צדדי קרוב יותר מאשר 1.5 מ מ לאתר מצדו IVC פוגע באופן דרמטי כגון פיתוח25. סגירת בצד סניפים עלול לגרום לפציעה אנדותל בהם, גם להאריך את הזמן של ניתוח26. בידיים שלנו, חוסר סגירת סניף צד מקטין משמעותית שכיחות פקקת (ל 10-30% לאחר 48 שעות היצרות; בריל, לא פורסם) ולכן אנו מאתרים ומפסיקים את כל גלוי בצד סניפים.
באופן אידיאלי, פקדים littermate אמור לשמש כמו עכברים, אפילו על רקע זהה אך ממקורות שונים, ייתכן השכיחות פקקת שונה במקצת. אם נלמד את ההשפעה של DVT עצמה על כל הפרמטרים (לדוגמה, הביוכימי), חיות המופעלים באמצעות העמדת פנים אמור לשמש. עכברים המופעלים שאם עוברים אותו הנוהל אבל הקשירה בסביבה IVC סגור באופן רופף והשאיר שם בלי לייצר היצרות.
הטעות בתדירות הגבוהה ביותר (שלב קריטי), פרוטוקול זה הוא מאמץ כדי להפריד בין העורקים, IVC לא בדיוק על הזווית בין כלי אבל נמוך במקצת, אשר בדרך כלל התוצאות דימום. כאשר דימום מסיבי מתרחש, התאוששות טובה של העכבר הופך לא סביר, מומלץ להפסיק את הניסוי, להרדימו. בדרך כלל, עכברים לשחזר היטב, לנוע בתוך הכלוב, לא באופן משמעותי במשקל. אנו ממליצים על שימוש בעכברים מעל 20 גרם עבור זכרים ונקבות, לשמור על בעלי חיים (בעיקר גברים) בכלובים בודדים לאחר הניתוח עד תום הניסוי כדי להימנע הלחימה ופציעה. דווח במודל אחר (אלקטרוליטי) של DVT כי עכברים זכרים לייצר thrombi גדולים יותר מאשר הנקבות27. ניתוח של הנתונים שלנו לא חשפה את הפרש משמעותי פקקת השכיחות בין זכר ונקבה עכברים (בריל, לא פורסם). לכן, חוקרים מעודדים לביצוע ניסויים באמצעות מודל היצרות IVC על עכברים של שני המינים.
מגלה הרבה תפרים או סיכות לא ניתן לפסוק כל ניסויים ארוך במיוחד (בשבוע ולא יותר). לפיכך, עכברים צריך להיבדק לפחות פעמיים ביום במיוחד עבור שלמות התפירות, תשומת לב מיוחדת יש לתת הופעת סימני דם על מצעים הכלוב.
יצוין כי, כמו מודל בעל חיים אחר, היצרות של IVC יש המגבלות מבחינת תרגום בני אדם. לדוגמה, IVCs מאתר אין שסתומים, ואילו DVT האנושי מתפתח בתוך שסתומי ורידים. כמו כן, לבני האדם יש אנכי אוריינטציה בעמוד השדרה עם המשאבה שרירים להיות מכניזם חשוב, האצת זרימת הדם בורידים. לעומת זאת, עכברים יש כיוון עמוד השדרה אופקי עם אין תפקיד של המשאבה שריר בתמיכה הדם בחזרה ללב. יש לקחת בחשבון מגבלות אלה בעת תרגום נתונים העכבר כדי המחלה האנושית.

פקקת ורידים עמוקה (DVT) היא הפיתוח של thrombi בורידים עמוקים, בדרך כלל (אך לא רק) ברגליים. ב במילות חיבור עם תסחיף ריאתי (PE; איזור ביחד כמו פקיקי ורידי, VTE) זה מתפתח אצל האמריקאים כ 900,000 מדי שנה ומייצג של חמור נושא הבריאות ובעיה חסכוני1,2. PE, סיבוך של DVT, מתרחשת כאשר כגון מקבל תלוש ממקום מושבו ההתחלתי, מגיע אל הריאות, דבר העלול לגרום אי ספיקה נשימתית ומוות. מספר ההרוגים של VTE חורג התמותה לאיידס, השד סרטן ותעבורה תאונות, משולב3.
הגורם שגורם DVT חוץ ידוע סיבות, כמו סרטן או טראומה, הוא חוסר ניידות 4,5. ייתכן שהדבר נובע מכך ניתוח (במיוחד אורטופדיות), שיתוק, טיסות למרחקים ארוכים או סיבות אחרות. זרימת הדם בורידים תלוי משאבת השרירים, לכן האיבר תוצאות הנייח בדם קיפאון לזרום פנימה שסתומי ורידים, מה שמוביל פקקת. מטרת השיטה המתוארת במסמך זה הוא מסכם את הדברים כאלה דם זרימה עיוות6,7. הגבלת זרימת חלקית ב הכלילי התחתון (IVC) מחקה התנאים שנוצרו בשסתומי ורידים האנושי ותוצאות היווצרות כגון דומה למבנה האדם thrombi6. חלק גדול כגון אדום, והיא מורכבת כדוריות דם אדומות, פיברין, התאגדות של טסיות. Thrombi יש קטן "החלק הלבן" מועשרים בטסיות הדם (איור 1), המזכירים פסי זון"המתואר thrombi ורידית אנושי. בשני חלקי כגון מכילים גם נויטרופילים8, אשר הם בין התאים הראשון בכדי להתגייס באתר של עתידיות כגון6,9. נויטרופילים בהחלק האדום לגרש מלכודות חוץ-תאית נויטרופילים (רשתות), ואילו נויטרופילים בהחלק הלבן נראה להיות רשתות8. באופן דומה ל- DVT אנושי, פקקת בעכברים מלווה פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). הפארין (enoxaparin), המשמש עבור טיפול מונע DVT בחולים, מונע גם פקקת בעכברים. יתרון חשוב של שיטה זו הוא היעדר חסיפה אנדותל9, שהוא מאפיין של DVT האנושי10. תכונה זו הופכת היצרות IVC דגם הרלוונטית קלינית יותר של DVT מאשר, למשל, אינדוקציה של קרישי דם על-ידי הברזל ותחמוצת כלוריד, אשר גורם אנדותל חסיפה, כאשר thrombi מכילים בעיקר טסיות11, 12,13. דגם של הקפאה מלאה ב- IVC הוא המועדף על ידי מספר קבוצות14,15,16. בניגוד היצרות, שבו זרימה שיורית נשמר בתוך הכלי, יישום של ההקפאה לחלוטין עצירה של זרימת, מגביל את הנגישות של חומרים מערכתית בניהול האתר פקקת. בנוסף, נראה כי המנגנונים שבבסיס פקקת הנגרם על ידי היצרות ו- stasis הם שונים: היצרות גורמת להתפתחות דלקת מקומית (הפעלה של אנדותל, שחרור של Weibel-Palade גוף תוכן, גיוס של תאים חיסוניים, טסיות הדם לקיר כלי) גורם9,6,"immunothrombosis"17, ואילו stasis נראה לזירוז מעדיף פקקת, בפרט, על בסיס רקמות פקטור קרישה אחרים, מנגנונים הקשורים ופיברינוליזה18,19,20. לפיכך, הדגמים היצרות ו- stasis משקפים שונה מעט היבטים של פיתוח כגון ורידים, למרות המנגנונים שלהם בהחלט לחפוף. דגם IVC electrolytic (EIM) של DVT21,22 גורם כגון באופן חלקי בלבד occluding הקיר כלי. לכן, זה נוח לבדיקת השפעת ניהול מערכתי של תרופות שונות על כגון צמיחה. מודל זה, לעומת זאת, מבוסס על ההנחה שיבוש IVC קיר שלמות (החדרת מחט) אינדוקציה של קרישי דם על ידי זרם חשמלי, שהופך את הרלוונטיות pathophysiological של מנגנון זה לפחות לויכוח.

<table style="border-collapse:collapse;width:536pt" width="715">
	<colgroup>
		<col style="width:162pt" width="216" />
		<col style="width:160pt" width="213" />
		<col style="width:89pt" width="119" />
		<col style="width:125pt" width="167" />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">C57BL/6 mice</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Charles River</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66" style="width:125pt" width="167">8 - 10 weeks old, bothe genders</td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">15922</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Scissors</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">WPI</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">14003</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Dumont 5/45 forceps</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">FST</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">11251-35</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">7-0 Prolene suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W8725</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">6-0 Vicryl suture</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Ethicon</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">W9981</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Cotton buds</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Spar</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Millswabs sterile&#160;</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Millpledge veterinary&#160;</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">611950</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Drapes</td>
			<td class="xl67">Kruuse</td>
			<td align="right" class="xl63" style="width:89pt" width="119">141765</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Glucose Saline-Aqupharm3</td>
			<td class="xl67">Animal Care</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119">XVD589</td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="46" style="height:34.5pt">
			<td class="xl63" height="46" style="width:162pt;height:34.5pt" width="216">Clear H20 HydroGel 98% sterile water&#160;</td>
			<td class="xl67">Clearh2o</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Buprenorphine</td>
			<td class="xl67">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Isoflurane vaporizer</td>
			<td class="xl67">General Anaesthetic Services</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="42" style="height:31.5pt">
			<td class="xl63" height="42" style="width:162pt;height:31.5pt" width="216">IsoFlo 100% W/W inhalation vapour, liquid</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">National Veterinary Supplies</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Sterilizer Steri350</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Inotech</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
		<tr height="21" style="height:15.75pt">
			<td class="xl63" height="21" style="width:162pt;height:15.75pt" width="216">Microscope Olympus SZX10</td>
			<td class="xl63" style="width:160pt" width="213">Olympus</td>
			<td class="xl63" style="width:89pt" width="119"></td>
			<td class="xl66"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stenosis of the inferior vena cava: a murine model of deep vein thrombosis

עמוק הווריד טרומבוזה (פקקת) וסיבוך ההרסניות שלה, תסחיף ריאתי, בעיה בריאותית חמורה עם תמותה גבוהה. מנגנוני היווצרות כגון בורידים נותרים מעורפלים. חוסר ניידות (למשל, לאחר ניתוח או טיסות למרחקים) הוא אחד הגורמים העיקריים שהובילו DVT. התוצאה pathophysiological של חוסר ניידות היא זרימת דם תקיעות שסתומי ורידים. . הנה, מודל מתואר המחקה כזה הפרעות זרימה כגורם נהיגה פקקת. במודל זה, נוצרת זרימה חלקית שהגבלת (היצרות) הכלילי התחתון (IVC). סגירה של-90% של לומן IVC במשך 48 שעות תוצאות התפתחות מבנית דומים לאלה בבני thrombi. הדמיון: i) רוב אמצעי האחסון כגון הוא אדום, קרי, מורכב כדוריות דם אדומות, פיברין, ii) נוכחות של חלק לבן (שורות זון), טפט אנדותל iii) ללא-חשופה רמות מוגברות iv) פלזמה D-דימר, v) אפשרות למנוע פקקת מאת הפארין. מגבלות כוללות גודל משתנה thrombi ואת העובדה כי אחוז מסוים של פראי-סוג עכברים (0 - 35%) לייצר כגון. בנוסף התצפית הויזואלית מדידה, thrombi אולי ניתן לאבחן על ידי טכנולוגיות לא פולשנית, כגון בדיקת אולטרה סאונד, אשר מאפשר ניטור את הדינמיקה של התפתחות כגון. נקודות זמן קצר יותר (h 1-6), מיקרוסקופיה intravital ניתן להחיל ישירות לצפות אירועים (למשל, גיוס של תאים לקיר כלי) מקדים כגון היווצרות. השימוש בשיטה זו על-ידי מספר צוותים ברחבי העולם הפכה אותו ניתן לחשוף מנגנונים בסיסיים של DVT החניכה לזהות מטרות אפשריות שעשוי להיות מועיל עבור מניעת שלו.

במסמך זה, מתואר דגם של DVT הנגרמת על ידי זרימת עיוות IVC. אינדוקציה של היצרות ב- IVC יוזם עיוות ותוצאות סטגנציה של זרימת הדם, לאחר זמן מה (במקרה זה, 48 h) בפיתוח של כגון, DVT מבנית דומה האדם thrombi (איור 1א'). הנוכחות של כגון בפנים IVC היא בקלות לזיהוי חזותי (איור 1B). הדמיון חשוב בין המודל לבין DVT האנושי הוא פלזמה מוגבה רמות D-דיימר (איור 2). D-דיימר הוא תוצר של פיברין השפלה, נוכחותו בדם מרמז כי תהליך קדחת פעיל קורה.
המודל מוצג שלב אחר שלב איור 3A-C. IVC חשוף בקפידה, חור בין העורקים של IVC מורכב ומשך התפר (Prolene 7-0) הוא דרך החור מתחת IVC. ואז IVC זה מאתרים מאת התפר מעל כרווח (30 גרם המחט, איור 3ד'), אחרי אשר מוסר את מרווח. הליך זה מאפשר כ- 90% סגירה של לומן IVC להשאיר 10% הנותרים פטנטים. פעולה זו מבטיחה סטגנציה בזרימת הדם המוביל בסופו של דבר פקקת.
איור 4 מדגים החיסרון העיקרי של המודל, כגון משתנה גודל. כל אלה thrombi התקבלו אצל אותו ניסוי מתבצע על עכברים זכר פראי סוג של מקור אחד, גיל, משקל הגוף דומה. למרות כל העכברים המיוצר thrombi (פקקת השכיחות של 100%), הגודל שלהם משתנה בבירור במגוון רחב.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig1.jpg"> 
איור 1: כגון נציג לאחר 48 שעות ההגבלה/היצרות. היצרות (A) כגון טיפוסי לאחר 48 שעות IVC. שימו לב אדום (שאושרו על-ידי תאי הדם האדומים) וחלקים לבן (מועשר טסיות). IVC (B) (משמאל) עם או בלי (מימין) כגון. גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig2.jpg"> 
איור 2 : פלזמה D-דיימר רמות גבוהות לאחר היישום היצרות IVC. עכברים היו נענשים היצרות IVC. הדם נלקח בנקודות זמן המצוין, 1:9 התייצב עם 3.8% סודיום ציטרט, פלזמה הוכן על ידי צנטריפוגה (2,300 x g, 5 דקות), רמות D-דיימר נקבעו על ידי ערכת דיאגנוסטיקה לפי הנחיות היצרן. חוגים לייעד עכברים המופעלים באמצעות העמדת פנים, צלבים לייעד היצרות IVC. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig3.jpg"> 
איור 3: לזרום הגבלת/היצרות במודל הנבוב נחות (IVC) של DVT בעכברים. שלבים רצופים של המודל מוצגים. (א) עשוי חור בין IVC את העורקים, בתפר עשה דרכו בסביבה IVC. (B) קשר סגורה מעל כרווח (30 גרם מחט). (C) מרווח מוסרת: התצוגה האחרונה המנתח רואה לפני סגירת העכבר. קו מקווקו צהוב demarcates של IVC. אירוו עומד על וריד הכליה השמאלית. גודל ברים = 0.2 מ מ. (ד) מרווח (30 גרם מחט). גודל ברים = 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56697/56697fig4.jpg"> 
איור 4 . השתנות כגון גודל. עכברים היו נענשים היצרות IVC 48 שעות. הציג thrombi מתקבלים על אותו ניסוי. סולם ברים 2 מ מ. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56697/56697fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis at JoVE.com

Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

נתאר כאן היצרות ב הכלילי התחתון כמודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה. מודל זה recapitulates הגבלת זרימת דם, אחד הגורמים המפעילים העיקריים של פקקת ורידים בבני אדם.

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Deep vein thrombosis (DVT) and its devastating complication, pulmonary embolism, are a severe health problem with high mortality. Mechanisms of thrombus ...

stenosis-inferior-vena-cava-murine-model-deep-vein

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

23.8K Views.  University of Birmingham. נתאר כאן היצרות ב הכלילי התחתון כמודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה. מודל זה recapitulates הגבלת זרימת דם, אחד הגורמים המפעילים העיקריים של פקקת ורידים בבני אדם.

Video: Stenosis of the Inferior Vena Cava: A Murine Model of Deep Vein Thrombosis

Murine Model of CD40-activation of B cells

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L), human B cells can be expanded without difficulties from small amounts of peripheral blood within 14 days to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients1-4. CD40-B cells express important lymph node homing molecules and can attract T cells in vitro5. Furthermore they efficiently take up, process and present antigens to T cells6,7. CD40-B cells were shown to not only prime na&iacute;ve, but also expand memory T cells8,9. Therefore CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been studied as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cell-based immunotherapy1,5,10. In order to further study whether CD40-B cells induce effective T cell responses in vivo and to study the underlying mechanism we established a cell culture system for the generation of murine CD40-activated B cells. Using splenocytes or purified B cells from C57BL/6 mice for CD40-activation, optimal conditions were identified as follows: Starting from splenocytes of C57BL/6 mice (haplotype H-2b) lymphocytes are purified by density gradient centrifugation and co-cultured with HeLa cells expressing recombinant murine CD40 ligand (tmuCD40L HeLa)11. Cells are recultured every 3-4 days and key components such as CD40L, interleukin-4, -Mercaptoethanol and cyclosporin A are replenished. In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated murine CD40-B cells (mCD40B) with similar APC-phenotype to human CD40-B cells (Fig 1a,b). CD40-stimulation leads to a rapid outgrowth and expansion of highly pure (&gt;90%) CD19+ B cells within 14 days of cell culture (Fig 1c,d). To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the murine CD40 ligand on the transfectants has to be controlled regularly (Fig 2). Murine CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation and differentiation as well as to investigate their potential to function as APC in vitro and in vivo. Moreover, they represent a promising tool for establishing therapeutic or preventive vaccination against tumors and will help to answer questions regarding safety and immunogenicity of this approach12.

In this video, we demonstrate the procedure of CD40-activation and expansion of murine B cells from splenocytes of C57BL/6 mice, which can be used as a model antigen-presenting cell (APC) to study induction of immunity.

דגם Murine של הפעלת-CD40 בתאי B

Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological deficiencies. GVHD is caused by mature alloreactive T cells present in the bone marrow graft that are infused into the recipient and cause damage to host organs. However, in mice, T cells must be added to the bone marrow inoculum to cause GVHD. Although extensive work has been done to characterize T cell responses post transplant, bioluminescent imaging technology is a non-invasive method to monitor T cell trafficking patterns in vivo. 
Following lethal irradiation, recipient mice are transplanted with bone marrow cells and splenocytes from donor mice. T cell subsets from L2G85.B6 (transgenic mice that constitutively express luciferase) are included in the transplant. By only transplanting certain T cell subsets, one is able to track specific T cell subsets in vivo, and based on their location, develop hypotheses regarding the role of specific T cell subsets in promoting GVHD at various time points. At predetermined intervals post transplant, recipient mice are imaged using a Xenogen IVIS CCD camera. Light intensity can be quantified using Living Image software to generate a pseudo-color image based on photon intensity (red = high intensity, violet = low intensity). 
Between 4-7 days post transplant, recipient mice begin to show clinical signs of GVHD. Cooke et al.1 developed a scoring system to quantitate disease progression based on the recipient mice fur texture, skin integrity, activity, weight loss, and posture. Mice are scored daily, and euthanized when they become moribund. Recipient mice generally become moribund 20-30 days post transplant. 
Murine models are valuable tools for studying the immunology of GVHD. Selectively transplanting particular T cell subsets allows for careful identification of the roles each subset plays. Non-invasively tracking T cell responses in vivo adds another layer of value to murine GVHD models.

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Murine bone marrow transplantation is a widely used technique to study immunological mechanisms governing graft-versus-host disease in humans. The ability to monitor T cell trafficking patterns in vivo allows for detailed analysis of the development and perpetuation of T cell responses during graft-versus-host disease.

אינדוקציה של מחלת שתל נגד מארח ו<em&gt; In Vivo</em&gt; ניטור תא T תוך שימוש במודל Murine MHC התאמה

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Murine Model of Allergen Induced Asthma

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, with the prevalence increasing.2 As with other diseases, animal models of allergic airway disease greatly facilitate understanding of the underlying pathophysiology, help identify potential therapeutic targets, and allow preclinical testing of possible new therapies. Models of allergic airway disease have been developed in several animal species, but murine models are particularly attractive due to the low cost, ready availability, and well-characterized immune systems of these animals.3 Availability of a variety of transgenic strains further increases the attractiveness of these models.4 Here we describe two murine models of allergic airway disease, both employing ovalbumin as the antigen. Following initial sensitization by intraperitoneal injection, one model delivers the antigen challenge by nebulization, the other by intratracheal delivery. These two models offer complementary advantages, with each mimicking the major features of human asthma.5
The major features of acute asthma include an exaggerated airway response to stimuli such as methacholine (airway hyperresponsiveness; AHR) and eosinophil-rich airway inflammation. These are also prominent effects of allergen challenge in our murine models,5,6 and we describe techniques for measuring them and thus evaluating the effects of experimental manipulation. Specifically, we describe both invasive7 and non-invasive8 techniques for measuring airway hyperresponsiveness as well as methods for assessing infiltration of inflammatory cells into the airways and the lung. Airway inflammatory cells are collected by bronchoalveolar lavage while lung histopathology is used to assess markers of inflammation throughout the organ. These techniques provide powerful tools for studying asthma in ways that would not be possible in humans.

Experimental mouse models of allergic asthma offer new possibilities for studying disease pathogenesis and developing new therapeutics. These models are well suited to measuring factors governing the allergic immune response, airway inflammation, and pulmonary pathophysiology.

דגם Murine של אסטמה אלרגן מושרה

Asthma is a major cause of morbidity and mortality, affecting some 300 million people throughout the world.1 More than 8% of the US population has asthma, ...

Measurement of Tactile Allodynia in a Murine Model of Bacterial Prostatitis

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently shown that UPEC have an important role in the initiation of chronic pelvic pain2, a feature of Chronic prostatitis/Chronic pelvic pain syndrome (CP/CPPS)3,4. Infection of the prostate by clinically relevant UPEC can initiate and establish chronic pain through mechanisms that may involve tissue damage and the initiation of mechanisms of autoimmunity5.
A challenge to understanding the pathogenesis of UPEC in the prostate is the relative inaccessibility of the prostate gland to manipulation. We utilized a previously described intraurethral infection method6 to deliver a clinical strain of UPEC into male mice thereby establishing an ascending infection of the prostate. Here, we describe our protocols for standardizing the bacterial inoculum7 as well as the procedure for catheterizing anesthetized male mice for instillation of bacteria.
CP/CPPS is primarily characterized by the presence of tactile allodynia4. Behavior testing was based on the concept of cutaneous hyperalgesia resulting from referred visceral pain8-10. An irritable focus in visceral tissues reduces cutaneous pain thresholds allowing for an exaggerated response to normally non-painful stimuli (allodynia). Application of normal force to the skin result in abnormal responses that tend to increase with the intensity of the underlying visceral pain. We describe methodology in NOD/ShiLtJ mice that utilize von Frey fibers to quantify tactile allodynia over time in response to a single infection with UPEC bacteria.

Infection of the prostate may be a contributing factor in mediating pelvic pain in chronic prostatitis. We describe the procedure for preparation of standardized bacterial inoculum, instillation of bacteria into the urethra of male mice and methodology for measuring tactile allodynia in mice over time.

מדידה של Allodynia משושים בדגם Murine של ערמונית קטריאלי

Uropathogenic Escherichia coli (UPEC) are pathogens that play an important role in urinary tract infections and bacterial prostatitis1. We have recently ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of 10 - 30% of adults. In immune-compromised individuals, including neonates, pregnant women, and the elderly, GBS may switch to an invasive pathogen causing sepsis, arthritis, pneumonia, and meningitis. Because GBS is a leading bacterial pathogen of neonates, current prophylaxis is comprised of late gestation screening for GBS vaginal colonization and subsequent peripartum antibiotic treatment of GBS-positive mothers. Heavy GBS vaginal burden is a risk factor for both neonatal disease and colonization. Unfortunately, little is known about the host and bacterial factors that promote or permit GBS vaginal colonization. This protocol describes a technique for establishing persistent GBS vaginal colonization using a single &#946;-estradiol pre-treatment and daily sampling to determine bacterial load. It further details methods to administer additional therapies or reagents of interest and to collect vaginal lavage fluid and reproductive tract tissues. This mouse model will further the understanding of the GBS-host interaction within the vaginal environment, which will lead to potential therapeutic targets to control maternal vaginal colonization during pregnancy and to prevent transmission to the vulnerable newborn. It will also be of interest to increase our understanding of general bacterial-host interactions in the female vaginal tract.

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

The purpose of this protocol is to imitate human group B Streptococcus (GBS) vaginal colonization in a murine model. This method may be used to investigate host immune responses and bacterial factors contributing to GBS vaginal persistence, as well as to test therapeutic strategies.

מודל Murine של הקבוצה B<em&gt; סטרפטוקוקוס</em&gt; נרתיקי Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death through pulmonary embolism or results in the post-thrombotic syndrome, characterized by chronic leg pain, swelling, and ulceration, or in chronic pulmonary hypertension resulting in significant chronic respiratory compromise. This is the most common cardiovascular disease after myocardial infarction and ischemic stroke and is a clinical challenge for all medical disciplines, as it can complicate the course of other disorders such as cancer, systemic disease, surgery, and major trauma.
Experimental models are necessary to study these mechanisms. The stasis model induces consistent thrombus size and a quantifiable amount of thrombus. However, it is necessary to systematically ligate side branches of the inferior vena cava to avoid variability in thrombus sizes and any erroneous data interpretation. We have developed a non-invasive technique to measure thrombus size using ultrasonography. Using this technique, we can assess thrombus development and resolution over time in the same animal. This approach limits the number of mice required for quantification of venous thrombosis consistent with the principle of replacement, reduction, and refinement of animals in research. We have demonstrated that thrombus weight and histological analysis of thrombus size correlate with measurement obtained with ultrasonography. Therefore, the current study describes how to induce deep vein thrombosis in mice using the inferior vena cava stasis model and how to monitor it using high frequency ultrasound.

The present protocol describes the steps to obtain venous thrombosis using a stasis model. In addition, we are using a non-invasive method to measure thrombus formation and resolution over time.

פקקת ורידים עמוקה שנגזרות Stasis בעכברים המנוטרת על-ידי בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily lead to infections in the dermis which can, in turn, result in the dissemination of pathogens into the bloodstream. Understanding how the immune system fights infections at the very early stage and how the host can eliminate the pathogens is an important step to set the base for future therapeutic interventions. Here we describe a model of Candida albicans infection that can visualize the processes that occur early during an infection, including when the pathogen has passed the epithelial barrier, as well as the immune response elicited by the C. albicans invasion. We used this infection model to perform histological analyses that show the immune cells that infiltrate the skin as well as the presence and localization of the pathogen. Samples collected after the infection can be processed for RNA extraction.

Deep Dermal Injection As a Model of Candida albicans Skin Infection for Histological Analyses

Here we describe a protocol that allows histological and molecular analysis of skin samples after Candida albicans intradermal injection. This protocol maintains the structural integrity of the skin and allows for the localization of tissue-resident or newly recruited immune cells as well as the pathogen distribution.

עמוק עורי הזרקת כמו מודל של קנדידה אלביקנס דלקת עור עבור ניתוחים היסטולוגית

The skin is an extremely extended organ of the body and, due to this large surface, it is continuously exposed to microorganisms. Skin damage can easily ...

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various pathologies such as cancer, atherosclerosis and diabetes. We have previously shown that dysfunction of the Nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (Nrf2)/ Kelch-like erythroid cell-derived protein 1 (Keap1) signaling pathway leads to extreme ROS imbalance during cutaneous wound healing in diabetes. Since ROS levels are an important indicator of progression of wound healing, specific and accurate quantification techniques are valuable. Several in vitro assays to measure ROS in cells and tissues have been described; however, they only provide a single cumulative measurement per sample. More recently, the development of protein-based indicators and imaging modalities have allowed for unique spatiotemporal analyses. L-012 (C13H8ClN4NaO2) is a luminol derivative that can be used for both in vivo and in vitro chemiluminescent detection of ROS generated by NAPDH oxidase. L-012 emits a stronger signal than other fluorescent probes and has been shown to be both sensitive and reliable for detecting ROS. The time lapse applicability of L-012-facilitated imaging provides valuable information about inflammatory processes while reducing the need for sacrifice and overall reducing the number of study animals. Here, we describe a protocol utilizing L-012-facilitated in vivo imaging to quantify oxidative stress in a model of excisional wound healing using diabetic mice with locally dysfunctional Nrf2/Keap1.

In Vivo Imaging of Reactive Oxygen Species in a Murine Wound Model

We describe a non-invasive in vivo imaging protocol that is streamlined and cost-effective, utilizing L-012, a chemiluminescent luminol-analog, to visualize and quantify reactive oxygen species (ROS) generated in a mouse excisional wound model.

אין ויוו הדמיה של מינים חמצן תגובתי ב מאתר פצע מודל

The generation of reactive oxygen species (ROS) is a hallmark of inflammatory processes, but in excess, oxidative stress is widely implicated in various ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the lymph nodes where cellular debris and antigens can be surveyed. We are very interested in understanding how the lymphatic vasculature might be involved in inflammation and immune cell function within the liver. However, very little has been published establishing digestion protocols for the isolation of lymphatic endothelial cells (LECs) from the liver or specific markers that can be used to evaluate liver LECs on a per cell basis. Therefore, we optimized a method for the digestion and staining of the liver in order to evaluate the LEC population in the liver. We are confident that the method outlined here will be useful for the identification and isolation of LECs from the liver and will strengthen our understanding of how LECs respond to the liver microenvironment.

The goal of this protocol is to identify lymphatic endothelial cell populations within the liver using described markers. We utilize collagenase IV and DNase and a gentle mincing of tissue, combined with flow cytometry, to identify a distinct population of lymphatic endothelial cells.

העיכול של הכבד מאתר של ניתוח Cytometric זרימת הלימפה תאי אנדותל

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...

Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically modified strains, the vast number of analyses that can be performed on harvested soft and hard tissues. However, many of these systems are subject to procedural criticisms. As an alternative, the ligature-induced model of periodontal disease, driven by the localized development and retention of a dysbiotic oral microbiome, can be employed, which is rapidly induced and relatively reliable. Unfortunately, the variants of ligature-induced murine periodontitis protocol are isolated to focal regions of the periodontium and subject to premature avulsion of the installed ligature. This minimizes the amount of tissue available for subsequent analyses and increases the number of animals required for study. This protocol describes the precise manipulations required to place extended molar ligatures with improved retention and usage of a novel rinse technique to recover oral neutrophils in mice with an alternative approach that mitigates the aforementioned technical challenges.

This article presents a protocol for establishing a ligature-induced model of murine periodontitis involving multiple maxillary molars, resulting in larger areas of the involved gingival tissue and bone for subsequent analysis as well as reduced animal usage. A technique to assess oral neutrophils in a manner analogous to human subjects is also described.

מודל חזק המושרה לקשירה של חניכיים Murine להערכת הנויטרופילים אוראלי

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

היצרות של הכלילי התחתון: מודל מאתר של פקקת ורידים עמוקה

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video