המטרה הכוללת של טיפול מקדים זה היא ליצור עכברים, כי ערוצי TRPV1 הם רגישות באזורים supraspinal. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הנוירופארמה. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי רגישות סלקטיבית supraspinal TRPV1 יכול להיות המושרה על ידי דרך פשוטה למדי.
כדי להתחיל בהליך זה, הרדמה של עכבר עם נתרן pentobarbital תוך-לידתי ולבדוק אובדן של רפלקס הזכות. לטיפול תת עורי, להזריק RTX ב 20 מיקרוגרם למיליליטר לתוך החלק האחורי של הצוואר בנפח של 0.1 מיליליטר לכל 10 גרם משקל גוף. עבור קבוצת הביקורת, להזריק את הרכב באותו אופן.
להעביר מחט חד פעמית 27 מד דרך צינור מתכת כדי לחשוף 3 עד 3.5 קצה מילימטר של המחט. ואז להחזיק את עצמות squamosal של העכבר בחוזקה עם האצבעות. להזיז את המחט באופן מאוחר על הקרקפת ולמצוא את התפר sagittal כמו קצה המחט מכור על התפר.
להזיז את הקצה על מילימטר אחד ימינה, ולאחר מכן להזיז את הקצה rostrally כדי למצוא את התפר התותח. לאחר מכן, להכניס את המחט לאט ובה אנכית. להזריק את פתרון RTX מעל 10 שניות ולהחזיק אותו עוד 10 שניות לאחר מכן.
לאחר מכן, למשוך את המחט לאט ולהחזיר את העכבר לכלוב הבית שלה. שבוע לאחר הזרקת RTX, לפחות 60 דקות לפני הבדיקה, להעביר את העכבר לחדר הבדיקה. לפחות 30 דקות לפני הבדיקה, מניחים את העכבר בכלוב פרספקס כדי לאפשר לו להתאקלם לסביבה.
ואז 20 דקות לפני הבדיקה, לנהל פרצטמול ב 300 מיליגרם לקילוגרם לעכבר תוך-לידתי. החזק את העכבר באופן רופף בשקית בד קטנה והכנס מחט 30 מד לתוך העקב של הכף האחורית הימנית. לקדם את המחט תת עורית ליד כרית ההליכה ולהזריק 20 microliters של פתרון RTX ב 0.05 מיקרוגרם למיליליטר.
לאחר מכן, למדוד את התקופה של ליקוק והתנהגות נושכת באזור glabrous של הכף המושפעת בכל בלוק חמש דקות. שבוע לאחר הזרקת RTX, להעביר את העכבר לחדר הבדיקה. הנח את העכבר בכלוב פרספקס.
סמן את הנקודות ב-1.5 ו-2.5 ס"מ מבסיס הזנב. לאחר מכן, להחזיק את העכבר באופן רופף בשקית בד קטנה ולהחיל לחץ על כתמים עם בדיקה קהה. שים לב כי לחץ ניתוק של 250 גרם מוטל כדי למנוע נזק לרקמות.
לקבוע את הלחץ הנדרש כדי להפוך את התנהגות הבריחה ולחשב את הסף nociceptive על ידי ממוצע הלחץ שנקבע בשני המקומות. חזור על ההליכים כל 15 דקות. לאחר קבלת הבסיס, לנהל פרצטמול ב 300 מיקרוגרם לקילוגרם לעכבר תוך ניתוחי, ולאחר מכן לחזור על מבחן לחץ הזנב כל 15 דקות עד שהוא מגיע 90 דקות.
שתי דמויות אלה מראות את ההיענות של עכברים שטופלו ב- SC או ICV להזרקה האינטרפלנטרית של RTX. התנהגות הליקוק והנשנוך של עכברים שטופלו ברכב הייתה יוצאת דופן ב-10 הדקות הראשונות. למרות שהעכברים שטופלו מראש SC לא הראו התנהגות מלקקת וננשכת בכלל, העכברים שטופלו מראש ICV הגיבו בדרך כלל להזרקת plantar של RTX.
יתר על כן, ניהול תוך-פרטי של פרצטמול הפחית את התנהגות הליקוק והנשכים של עכברים שטופלו ב- ICV ברכב, אך לא בעכברים שטופלו ב- RTX ICV. גרף זה מראה את ההשפעות משככי כאבים של פרצטמול ב 300 מיקרוגרם לקילוגרם במבחן לחץ הזנב. Acetaminophen הפחית את התגובה nociceptive של עכברים pretreated רכב בשתי הבדיקות, אבל ההשפעות משככי כאבים של פרצטמול היו מעוכבים בעכברים כי היו ICV pretreated עם RTX.
לאחר השליטה, טכניקה זו הזרקת ICV ניתן ליישם עבור תרופות אחרות. אל תשכח כי עבודה עם Resiniferatoxin יכול להיות מסוכן מאוד ולוודא להשתמש כפפות גומי ומשקפיים להגנה בעת הטיפול.
