פרוטוקול זה של מודל מחלה אתה רואה זיהום וירוס דנגי במוח להפוך פלטפורמה in vivo להקרנת וקטורים ויראליים מארחים הקשורים נוירופתוגנזה. שלא כמו מודלים קודמים, המודלים שלנו משתמשים בכלים של הזיהום עם טיטר ויראלי נמוך, כדי להדביק את המכון immunocompetent לחקר הסרטן יונק עכברים עבור אינדוקציה של הולדת מחלה דמוית אנצפליטית. הדגמת ההליך תהיה לינג-ג'ינג שן, מועמד לדוקטורט מהמעבדה שלי.
לפני תחילת הליך ההדבקה, לדלל וירוס דנגי לא מותאם שני מלאי, כדי אחד פעמים 10 כדי לוח החמישי להרכיב יחידות לכל 40 microliters של ריכוז בינוני RPMI 1640. לאחר מכן, לטעון מזרק אחד 0.3 מיליליטר מצויד מחט 30 מד עם 10 microliters של וירוס מדולל. ומזרק אחד של 0.3 מיליליטר המצויד במחט 30 מד, עם 30 מיקרוליטרים של וירוס לכל בעל חיים.
למסירה בין-מערכתית של הנגיף, לחצו על הנביאה שבין האגודל לאצבע המורה כדי לרסן בעדינות עכבר בן שבעה ימים של המכון לחקר הסרטן במצב נוטה ולהזריק את נפח ה-10 מיקרוליטר של הנגיף המדולל לאזור למדה, בצומת התפר הסגיטלי והלדואידי. לאחר הזרקת intercerebral, להשתמש באגודל ובאצבע המורה להחזיק את העכבר במצב supine, בעדינות תוך ניתוחית, להזריק את נפח 30 microliter של וירוס מדולל, לתוך הבטן מורין. לקבלת ניקוד של התקדמות המחלה, להקצות ציון של אפס עד חמש לכל עכבר מחוסן מדי יום, על פי הציון של מחלות דלקת המוח נגיפית חריפה, ולתכנן את הציונים עבור כל יום כדמות מבוססת עקומה, באמצעות פלוס הממוצע מינוס סטיית התקן של ציוני המבחן היומי בכל קבוצה.
בהשוואה לשינויים במשקל הגוף שנמדדו בעכברים מחוסנים מדומים ובינוניים בלבד, בעלי חיים מחוסנים של נגיף דנגי מפגינים ירידה במשקל הגוף בכל נקודת זמן במהלך הניסוי. בנוסף, בעלי חיים נגועים בנגיף דנגי מדגימים עלייה משמעותית בתותבות הגב של תחושת הבטן, התקפים לימביים, חולשה לימבית, שיתוק ומוות בהשוואה לתסמינים המוצגים על ידי בעלי חיים מחוסנים מדומים. ואכן, עכברים נגועים דנגי להפגין ירידה תלוית זמן בשיעורי ההישרדות כי הוא לא נצפה בבעלי חיים מחוסנים מדומה, המאשר את הקמתו של מודל זיהומיות של וירוס דנגי בתוך מערכת העצבים המרכזית המדגים את ההתקדמות של מחלות דלקת המוח נגיפית חריפה כמו בעכברים.
לנקב את האתר הלא נכון עלול לגרום חסימת מחט על ידי הציון ואת הצפה של פתרון הנגיף מחוץ לראש, וכתוצאה מכך זריקה נכשלה זיהום נכשל. בעקבות ההליך, דגימות מוח ניתן לקצור עבור נזק פתולוגי, חדירת תאים חיסוניים, וניתוח שכפול ויראלי על ידי המטוקסילין ו אאוסין הכתמת זרימת ציטומטריה, ו assay היווצרות פלאק, בהתאמה. מודל המורין החיסוני שלנו, מספק פלטפורמה לחקר המנגנונים הפתוגניים של הידבקות בנגיף דנגי, לפיתוח חיסונים נגד וירוס דנגי, או תרופות נגד וירוסים דנגי.
וירוס דנגי הוא פתוגן ברמה ביו-בטיחותית 2, וככזה, יש להשלים את כל הניסויים בנגיף זה במעבדה מוסמכת בתחום הביו-בטיחות של בעלי חיים.
