뇌에서 뎅기열 바이러스 감염을 볼 질병 모델의이 프로토콜은 신경 병인과 관련된 바이러스 및 호스트 벡터를 선별하기위한 생체 내 플랫폼이된다. 이전 모델과는 달리, 우리의 모델은 낮은 바이러스 성 titer감염의 도구를 사용, 뇌와 같은 질병 출산 유도에 대한 마우스를 빨아 암 연구의 면역 무능 한 연구소를 감염. 절차를 시연하는 것은 내 실험실에서 박사 후보인 팅징 셴(Ting-Jing Shen)이 될 것입니다.
감염 절차를 시작하기 전에, 비 적응 뎅기열 바이러스 2 주식을 희석, RPMI 1640 중간 농도의 40 마이크로 리터 당 다섯 번째 플라크 형성 단위에 1배 10으로 희석. 다음으로, 희석 바이러스 10 마이크로리터가 장착된 30 게이지 바늘을 장착한 0.3 밀리리터 주사기를 로드합니다. 그리고 동물 당 30 마이크로 리터의 바이러스가있는 30 게이지 바늘이 장착 된 0.3 밀리리터 주사기 1 개.
바이러스의 대뇌 전달을 위해 엄지와 검지 손가락 사이의 오라클을 눌러 7일 된 암 연구소 마우스를 조심스럽게 억제하고, 적목과 람도이드 봉합사의 교차점에 있는 람다 지역에 희석된 바이러스의 10마이크로리터 부피를 주입한다. 간 주사 후 엄지 손가락과 검지 손가락을 사용하여 마우스를 supine 위치에 넣고 부드럽게 회음부로 희석 된 바이러스의 30 마이크로 리터 부피를 뮤린 복부에 주입하십시오. 질병 진행의 점수를 위해, 급성 바이러스 성 뇌염과 같은 질병의 등급에 따라 매일 각 접종 마우스에 0 - 5의 점수를 할당하고, 각 그룹에서 일일 시험 점수의 평균 플러스 및 마이너스 를 사용하여 곡선 기반 그림으로 매일 점수를 플롯.
모의, 배지만 접종된 마우스, 뎅기열 바이러스 접종 동물에서 측정된 체중 변화와 비교하여 시험 기간 동안 매 시점에서 체중이 감소하는 것을 나타낸다. 또한, 뎅기열 바이러스 감염된 동물은 모의 접종 된 동물에 의해 표시되는 증상에 비해 직감 허리 자세, 변연 발작, 변연 약점, 마비 및 죽음에 상당한 증가를 보여줍니다. 실제로, 뎅기열 감염마우스는 모의 접종동물에서 관찰되지 않는 생존율의 시간 의존적 감소를 나타내며, 중추 신경계 내에서 뎅기열 바이러스의 전염성 모델의 확립을 확인하여 마우스에서 급성 바이러스 뇌염과 같은 질병의 진행을 입증한다.
잘못된 부위의 펑크는 머리 외부의 바이러스 용액의 점수 및 오버플로에 의해 바늘 막힘으로 인해 주사가 실패하고 감염이 실패할 수 있다. 절차에 따라 뇌 샘플을 혈액학적 손상, 면역 세포 침투 및 헤마톡시린 및 에신 염색 흐름 세포측정및 플라크 형성 분석에 의한 바이러스 복제 분석을 위해 수확될 수 있다. 우리의 면역 무능한 murine 모형은 뎅기열 바이러스 감염의 병원성 기계장치를 탐구하기 위한 발판을 제공합니다, 뎅기열 바이러스 백신의 발달을 위한, 또는 반대로 뎅기열 바이러스 약.
뎅기열 바이러스는 생물 안전 수준 2 병원체이며, 따라서, 이 바이러스를 가진 모든 실험은 자격을 갖춘 동물 생물 안전 수준 2 실험실에서 완료되어야 합니다.
